Elülső talamuszmagok: A patkányok nem térbeli párosított memóriájának kritikus szubsztrátja 2. rész

2|ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

2.1|Állatok és tartási feltételek

A hím Long-Evans patkányokat (12 hónaposak; átlagosan 630 g) három-négy fős csoportokban tartották Makrolon ketrecekben (48 28 22 cm) fordított 12-h világos-sötét ciklusban (a világítás este 8 órakor ).

A viselkedési teszteket a fényciklus sötét szakaszában végezték, heti öt alkalommal; a megfigyelések megerősítették, hogy a patkányok viszonylag aktívabbak voltak a sötét fázisban. A patkányokat ad libitum vízzel a szabadon táplált testtömeg 85%-án tartottuk; a táplálékot ad libitum a műtét előtt és után a posztoperatív gyógyulás érdekében.

A sebészet a betegség kezelésének és a testi egészség javításának folyamata. A műtét utáni helyreállítási folyamat különös figyelmet igényel. A jó közérzethez a fizikai felépülés mellett a memória helyreállítására is koncentrálni kell. Erős kapcsolat van a posztoperatív felépülés és a memória között.

A műtét során olyan tényezők, mint a szervezet negatív reakciói és az érzéstelenítő gyógyszerek hatása gyakran befolyásolják az agy memóriafunkcióját. A szervezet felépülése után ügyeljen a helyes táplálkozásra, a mérsékelt testmozgásra és a megfelelő alvásra. A kórházon kívüli felépülési időszak alatt továbbra is kerülnie kell a túlzott tevékenységeket, és meg kell őriznie a test kényelmes állapotát.

Az életvitel mellett az ésszerű pszichológiai alkalmazkodás is hasznos az egészség és a memória helyreállításában. Pihenjen, őrizze meg a békés elmét, és segítsen alkalmazkodni a memória helyreállításához. Ugyanakkor aktívan részt kell vennie a szabadidős tevékenységekben, és kommunikálnia kell rokonaival és barátaival, hogy agya aktív maradjon, és javítsa kognitív és memóriaképességét. Ez a tevékenység fokozatosan növelhető, és alapvetően hetente egyszer végezhető.

Röviden, a műtét utáni felépülési folyamat teljes odafigyelést igényel. A helyes életmód és a pszichológiai alkalmazkodás megőrzése nagyon fontos szerepet játszik a fizikai és a memória helyreállításában. Nézzünk szembe ezzel pozitívan, teljes bizalommal és reménnyel. Javítanunk kell a memóriát, a Cistanche deserticola pedig jelentősen javíthatja a memóriát, mert a Cistanche deserticola szabályozhatja a neurotranszmitterek egyensúlyát is, például növeli az acetilkolin és a növekedési faktorok szintjét. Ezek az anyagok nagyon fontosak a memória és a tanulás szempontjából. Ezen túlmenően a hús javíthatja a véráramlást és elősegítheti az oxigénszállítást, ami biztosítja, hogy az agy elegendő tápanyagot és energiát kapjon, ezáltal javítva az agy vitalitását és állóképességét.

Kattintson az ismerje meg az agyműködés javításának módjait

Minden eljárás megfelelt a Canterbury Egyetem állatetikai bizottságának jóváhagyott irányelveinek. A radiális kar labirintusban (RAM) és a kifutón a műtét előtti ismerkedést követően véletlen besorolással négy patkánycsoportot hoztak létre. A négy csoport kétoldali ATN lézió volt, a szag és a tárgyi ingerek között nyom nélkül vagy nyom nélkül, amikor a páros-asszociált feladatra és a megfelelő két Sham-lézió csoportra oktatták.

A végső mintanagyság a következő volt: (1) Sham-No Trace=7 (azaz egy Sham-lézió csoport, ahol nincs intervallum a páros-asszociált feladatban használt szag- és tárgyingerek között); (2) Sham-Trace=7 (Shamlesion csoport 10-s nyomot kapott a szag megjelenése és a tárgyi ingerek között); (3) ATN-No Trace=8;és (4) ATN-Trace=9. Egy további ATN-léziós patkányt kizártak, mert nem felelt meg a lézió kritériumainak (lásd alább).

2.2|Sebészet

A patkányokat izofluránnal érzéstelenítettük (indukció 4%; karbantartás 2,5%), és atraumatikus fülrúddal ellátott sztereotaxiás készülékbe helyeztük (Kopf, Tujunga, CA). A metszőrudat 7,5 mm-rel az interaurális vonal alá állítottuk, hogy minimalizáljuk a fornix sérülését.

Mindegyik féltekén két infúziót irányítottak az anteroventralis magra (AV; felső és alsó), egy infúzió pedig a theanteromedial nucleus (AM) felé irányult. Minden műtét egy hivatalos anterior-posterior (AP) koordinátát használt az egyedek Bregma-Lambda távolságához viszonyítva (minden érték mm-ben). AV-léziók esetén az AP koordináták a következők voltak: 2,20 B–L 6,9–7,2; 2,25 a B–L esetében 7,3–7,6; 2,30 B–L esetén Nagyobb vagy egyenlő, mint 7,7. Az AV-infúziókat a dura alatt 5,68 és 5,73, valamint a középvonaltól 1,52-rel laterálisan végeztük.

Az AM infúziót {{0}},1 mm-rel előrébb adták, mint az AV koordináta, 5,76-kal a dura alatt és 1,16-ra laterálisan; az első AM-léziót az összes AV-infúzió befejezése után hozták létre, és az utolsó AV-lézió helyével ellentétes irányban kezdődött. 0,15 M N-metil-d-aszpartátot (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) 0,1 M foszfátpufferben (pH 7,20) infundáltunk minden helyre 0,04 ul/perc sebességgel 2.{18}}ulHamilton fecskendő (Reno, NV, USA) mikroinfúziós pumpával (Stoelting, Wood Dale, IL).

Az AV sitesper félteke {{0}}.12 és 0.10 ul a dorsaland ventrális helyekre, rendre; 0,06 ul-t használtunk minden AM-helyre. A fecskendő tűje oldalanként 3 percig in situ maradt, az infúzió után.
Az ál-léziós műtétek ugyanezt az eljárást alkalmazták, de a tűt 1 mm-rel leengedték a felső AV és az AM lézió helyei fölé, és noinfúziót adtak.

2,3|Viselkedési feladatok

Egy nyolc karból álló RAM megerősítette a térbeli memória károsodását az ATN-sérüléses patkányokban a műtétet követően. A patkányokat minden nem térbeli feladatra, azaz az egyszerű szag- és egyszerű objektum megkülönböztetésre, valamint a szag–tárgy és szag–nyom–tárgy páros-társított feladatokra egy kifutókészüléket használtunk.

A műtét előtt a táplálékkorlátozott patkányokat az alábbiakban ismertetett nyolckarú RAM-hoz szoktattuk, hogy 0,1 g csokoládédarabokat (Foodfirst LTD Auckland, NZ) gyűjtsenek, és alkalmazkodjanak a karajtók nyitásához és zárásához. Egy piros Perspex kifutón (1. ábra) a patkányokat úgy alakították ki, hogy orrukat egy 2- cm-es kör alakú fehér műanyag sapkát szúrjanak ki, amely 10 cm-rel a padlószint felett volt, és egy vékony szivacs közepén egy átlátszó Perspex betéten, amely a a végfal.

Úgy is alakították őket, hogy (orr vagy mancs segítségével) egy, az alapja hátulján csuklósan rögzített tárgyat egy 5 x 8,5 3 cm-es fahasáb közepébe süllyesztett élelmezési kút tetejére tolják. Az étel csokoládédarabokat tartalmazott (és hozzáférhetetlen élelmiszert tartott a mélyedés alatt). Az előképzéshez használt tárgyat nem használták újra. A műtétet követően a felépülő patkányokat újra megismertették a RAM-mal és a kifutópályával is.

2,4|Térbeli munkamemória a RAM-ban

A műtét után a térbeli munkamemóriát egy ablaktalan szoba (3 3 m) közepén elhelyezett RAM segítségével teszteltük. A labirintusnak szürkére festett, 35 cm széles, fából készült központi agya volt nyolc alumínium karral (65 cm hosszú, 8,6 cm széles, 4,5 cm magas szegélyekkel), 67,5 cm-rel a szoba padlója fölé emelve. Átlátszó Perspex falak (19 cm hosszú és 25 cm magas) mindkét kar egyik oldalán nyúltak ki a kerékagytól, hogy megakadályozzák a patkányok karok közötti ugrását.

Mindegyik kar végére egy fekete fából készült élelmiszer-kutat (5 x 8,5 x 3 cm) helyeztek el, alatta hozzáférhetetlen élelmiszerrel. A tesztelés során 2 0,1 g csokoládédarab volt minden élelmiszer-lyuk elején, mindegyik kar végén. próba. Az átlátszó perspexguillotine ajtók, amelyeket egy tárcsarendszerrel fel lehetett emelni az agy alól, szabályozták a hozzáférést az agykarokhoz.

Tíz egymást követő napos formális képzést használtak a RAM-ban a térbeli munkamemória tesztelésére. A patkányt a központi kerékagyba helyeztük, és 10 másodperccel később mind a nyolc kart kinyitottuk, és a patkány választhat, hogy mindkét hátsó láb egy kar küszöb felett van. Miután a patkány belépett egy karba, az összes ajtó bezárult, és 15 másodpercig a karhoz volt szorítva, függetlenül attól, hogy helyesen döntött-e.

A patkányt ezután visszaengedték a központi kerékagyba, és ott tartották 10 másodpercig, mielőtt az összes ajtót újra kinyitották, hogy egy másik kar választását lehetővé tegyék. A vizsgálat akkor ért véget, amikor a rathad mind a nyolc kart meglátogatta, 20 karválasztás történt, vagy 10 perc telt el.

2,5|Nem térbeli feladatok: Egyszerű diszkrimináció és páros-asszociált tanulás

Mind az egyszerű megkülönböztetés, mind a páros-asszociált feladatok ugyanazt a piros Perspex kifutópályát (93 26 26 cm) használták egy 75- cm magas asztalon (1. ábra). A kifutópályát három függőlegesen kivehető ajtó (redPerspex, 26 26 cm) oszthatta fel, amelyeket az adott viselkedési feladat alapján választottak ki. Ami az ismerkedést illeti, a 6,5-ös, 6 8 mm-es vékony szivacs kupakkal a közepén csokoládé ételjutalmat tartott (1. ábra).

A szivacsot egy kivehető ajtóhoz rögzítették a kifutón (a páros-társult feladatokhoz) vagy a kifutó végfalához (egyszerű megkülönböztetési feladathoz). Minden szaghoz más ajtó plusz szivacsot használtak, amelyet az edény mellé fújtak be 5 ml napraforgóolajjal, amely 20 ul Essential Oils of New Zealand anyaggal volt összekeverve.

Az illatok citrom és szegfűszeg voltak a páros-társult feladatoknál, fahéj és lime pedig az egyszerű diszkriminációs feladatoknál, vagy fordítva a kiegyensúlyozott csoportokban. A könnyű és vizuálisan jól megkülönböztethető tárgyakat (1. ábra) egy csuklópánttal rögzítették az alapja hátulján az edény tetejéhez, így a patkány könnyen vissza tudta tolni a tárgyat (akár az orrát, akár a mancsát), hogy a kútban élelmiszerjutalmat keressen.

A fából készült keret (1,8 m magas a padlótól 1,3 m széles), fekete függönnyel letakarta a vizsgálati terület minden oldalát, hogy csökkentse a térbeli jelzéseket a tesztelés során.

Az egyszerű megkülönböztetések (csak szag; csak tárgy) és a páros-asszociált feladatok „go/no-go” eljárást alkalmaztak.

Az egyes szakaszok első kísérlete azzal kezdődött, hogy a patkányt a kezdőterületen 120 másodpercig visszatartották, hogy újra akklimatizálódjon a labirintushoz; a következő kísérletek 20 másodpercet használtak ezen a rajtterületen. Az allrátok napi munkamenetenként 12 tömeges próbát kaptak, hat go (jutalmazott) és hat no-gos (nem jutalmazott) vizsgálatban, apseudorandomizált sorrendben. Legfeljebb három go vagy három no-go próba futott le egymás után egy munkamenetben.

A négy különböző szag-tárgy ingerpár közül egyik sem ismétlődött meg egymást követő vizsgálatok során. A helyes tételek az egyszerű diszkriminációs feladatokban és a helyes ingerpárok a páros-asszociált feladatokban ellensúlyozottak voltak.

Az egyszerű szagmegkülönböztetés érdekében a reakciót úgy határozták meg, mint egy orrbökést a sapkába a szagosított szivacs közepén; csak a szivacs szippantását tiltó válasznak tekintették. Az étel mindig jelen volt a sapkában a szivacs közepén a szag-tárgypáros-asszociált feladatokhoz; a go/no-go aspektus itt arra vonatkozik, hogy az objektumot megtolták-e, hogy felfedje, van-e ételjutalom alatta, a kifutópálya végén.

Objektumok esetében a válasz úgy volt definiálva, mint az orr-mancs bármely lökés, amely az objektumot hátrafelé billenti. A késleltetés az utolsó ajtó felemelésétől és a patkány szaggal való interakciójától (orrbökés a sapkába; az egyszerű szagok megkülönböztetésére) vagy a tárggyal (a zsanéron hátratolva, egyszerű tárgymegkülönböztetés és párosított feladatok esetén) csendes stopperrel mérve (Dick Smith, Új-Zéland).

A megfigyelő a függönyök között és a kifutópálya mellett ült, hogy kezelje az ajtókat és rögzítse a viselkedést. Egy kísérletet „helyesnek” minősítettek, ha a patkány 8 másodpercnél rövidebb időn belül reagált, vagy 8 másodperc előtt nem reagált a nem induló kísérletekre.

2,6|Egyszerű diszkriminációk

A patkányok fele kapott oktatást az egyszerű szagmegkülönböztetési feladatra, majd az egyszerű tárgyi megkülönböztetésre, a másik fele pedig fordítva. Feljegyeztük az X ajtó (1a. ábra) közötti késleltetést és a kifutópálya végén lévő szag-orobjektumgal való interakciót. A patkányokat az egyszerű szag- és egyszerű tárgymegkülönböztetési feladatra oktatták, amíg el nem érték a kritériumot (2 egymást követő napon keresztül 80% helyes).

Az egyszerű szagmegkülönböztetési feladathoz minden kísérletben egyetlen szagot mutattak be. A rathad megkülönböztetni, hogy a két szag közül melyik párosul a B rekesz végén lévő szivacsban található ételjutalommal (1a. ábra).

Az egyszerű tárgymegkülönböztetési feladatban minden próba során egyetlen tárgyat mutattak be a B rekesz végén (az 1. ábrán nem látható). Therat meg kellett tanulnia, hogy a két tárgy közül melyik párosul a tárgy alatt bemutatott ételjutalommal.

2,7|Páros-társított feladatok (nyomkövetés és nyomkövetés nélkül) Ezek a feladatok a függőlegesen eltávolítható ajtók új elrendezését használták (1. ábra). A patkányok megtudták, hogy a két szag-tárgy párosítás közül melyiket jutalmazzák (pl. Odor 1 + ObjectA és Szag 2 + Object B), és melyik párosítást nem jutalmazták (azaz Szag 1 + Object B és Szag 2 + A) objektum).

A párosítástól függetlenül a patkányok mindig jutalmat kaptak a szag megjelenéséért, amikor beengedték őket a kifutópálya második részébe. Ez volt a C rekesz a „nyomtalanság” állapotért, amelyben az A rekeszt nem használták, és a B rekesz volt a rajtrekesz. A szag a B rekesz végén volt a „nyomkövetési” állapothoz, amelyhez az A rekeszt használták rajtdobozként.

A nyomkövetési állapotban lévő patkányokat 10- másodperces késleltetésnek tették ki a szag megjelenése és a tárgyi ingerek között úgy, hogy a C rekeszben tartották őket, míg a nyom nélküli patkányokat közvetlenül a szaggal való kölcsönhatásuk után (a szaggal való kölcsönhatás után) tették ki a tárgynak. a jutalom elfogyasztása). Nyomkövetési és nyom nélküli körülmények között is feljegyeztük a D rekesz áthaladásának késleltetését, attól az időponttól kezdve, amikor a DoorZ-t felemelték, egészen addig, amíg a patkány interakcióba nem került a tárggyal, vagy 8 másodpercig tartózkodott attól, hogy kölcsönhatásba lépjen vele.

A patkányok két csoportját (Sham-lézió és ATN-lézió) képezték ki a szag-objektum-páros-asszociált feladatokra (Nincs nyomcsoportok), és két megfelelő csoportot a szag-nyom-objektum páros-társított feladatra (Trace-csoportok) képeztek. elérte a feltételt (80%-os helyes kísérletek 3 napon keresztül), vagy legfeljebb 50 napig.

2,8|Megszerzés utáni megtartási teszt

A páros-társult feladat megtartása bármely patkány esetében a kritérium elérése után 5 nappal vagy 50 napos edzés után történt. Ez a munkamenet 12 tömeges jutalmazott/nem jutalmazott kísérletet használt egyetlen napon, ugyanúgy, mint korábban az adott patkány esetében.

2,9|Szövettan

2.9.1|Perfúzió és szövetgyűjtés

A retenciós teszt előtti 3 napon az egyedülálló patkányokat egy üres, tiszta ketrecben 90 percig egy sötét, csendes szobában ismerkedtük meg. Közvetlenül a retenciós teszt utolsó kísérletét követően a patkányt a ketrecébe helyeztük az ismerős, sötét, csendes helyiségbe 90 perccel a perfúzió előtt.

A patkányokat nátrium-pentobarbitállal (125 mg/kg) mélyen érzéstelenítettük, majd transzkardiálisan perfundáltuk sóoldattal, majd paraformaldehiddel [4% PFA 0,1 M foszfátpufferben (PB)] az agy rögzítésére. Az agyakat utólag fixáltuk 4%-os PFA-ban, ezt követte legalább 48 óra hosszú távú oldatban (20% glicerin 0,1 M PB-ben). A koronális 40-μm-es metszeteket fagyasztó mikrotommal (Thermo Fisher, Egyesült Királyság) gyűjtöttük össze, és kriovédő oldatban (30% glicerin, 30% etilénglikol 0,1 M PB-ben) tároltuk 20 C-on az immunhisztokémiai feldolgozásig.

A koronális metszeteket két külön sorozatban gyűjtöttük össze. Az első sorozat egymást követő metszeteket rögzített öt krioviálisban immunhisztokémiai vizsgálat céljából (azaz ötből egyet). Ez a sorozat egy elülső blokkot tartalmazott a prefrontális kéregtől a septum területéig (körülbelül {{0}},7-0,6 mm-re Bregmától) és egy hátsó blokkot a mediodorsalis thalamustól (kb. 3,5 mm-re a Bregmától) a caudalisig retrospleniális kéreg.

A második sorozat egymást követő szakaszokat rögzített a léziók ellenőrzéséhez. Ezeket a metszeteket négy mélyhűtőben gyűjtötték össze, közvetlenül az ATN-től a hátsó mediodorsalis thalamusig (körülbelül 0,6-3,5 mm-re Bregmától).

2.9.2|Neu-N festés és ATN-lézióellenőrzés

Az ATN régióban szabadon lebegő metszeteket mostuk (3 10 perc) 0,1 M foszfáttal pufferolt sóoldatban Triton-X-szel (0,2%; PBSTx), mielőtt endogén peroxidáz blokkoló pufferben 30 percig inkubáltuk. min [1% hidrogén-peroxid (H2O2), 50% metanol (CH3OH) 2% PBSTx-ben].

A metszeteket egy éjszakán át inkubáltuk 4 C inanti-NeuN primer antitesten (1:5000; monoklonális-MouseCat# MAB377; Millipore, California USA) 1% normál kecskeszérumot tartalmazó PBSTx-ben (NGS; Life Technologies, NZ).

A felesleges antitestpuffert PBSTx-szel eltávolítottuk, majd biotinilált kecske anti-egér másodlagos antitestben (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) inkubáltuk egy éjszakán át 4 °C-on PBSTx-ben és 1% NGS-ben. A metszeteket ExtrAvidinbe (peroxidázzal konjugált; 1:1000; Sigma, NSW Australia), PBSTx-be és 1% NGS-be helyeztük 2 órára szobahőmérsékleten.

A felesleges ExtrAvidin és Triton X{{0}} eltávolítása érdekében a metszeteket PBS-ben, PB-ben, majd Tris pufferben mostuk (pH 7,4 desztillált H2-ben0), hogy a metszeteket frissen készített diaminobenzidinnel ( DAB 0,05%; Sigma, 0,01% H2O2-ban Tris pufferben).

A DAB-reakciót (körülbelül 5 perc) Tris-pufferrel (1x10 perces mosás) leállítottuk, és a metszeteket PB-be helyeztük 4 C-on egy éjszakán át, mielőtt zselatinizált tárgylemezekre szereltük volna, és hagytuk megszáradni. A tárgylemezeket dehidratáltuk az alkoholon keresztül (70–100%), majd inxilénből tisztították, és DPX-szel (06522; Sigma-Aldrich) és fedőlemezzel rögzítették.

Az ATN-ben lévő Neu-N-pozitív sejtek számát használtuk a lézió mértékének meghatározására. Ez mind a bal, mind a jobb féltekéből származó metszeteket használt az ATN négy{2}}μm-es szakaszához, és az ImageJ (NIH, USA) segítségével számszerűsített területet. A NeuN-pozitív sejtfestést 5 objektíven fényképeztük le LeicaDM6 B álló mikroszkóppal és DFC7000T kamerával (Leica Microsystems, Németország).

A sejtek automatikus megszámlálását az ImageJ (képelemző szoftver, National Institute of Health, NIH, USA) segítségével végeztük. Az ATN régió neuronjait körülvevő területet manuálisan választottuk ki, és a képeket {{0}}bitszürke skálává alakítottuk, a hátteret kivontuk (gördülő=40), maszkká alakítottuk, és a vízválasztó függvényt alkalmaztuk, és az összes küszöbérték feletti idegsejtet ('MaxEntropy' küszöb, cirkularitás 0,5–1,0) megszámoltuk.

A detektálási küszöb minden metszetben azonos volt. Kilenc álpatkányban (ötben a Sham-Trace csoportban és négyben a Sham-No Trace csoportban) megszámoltuk az automatizált NeuN-festett sejtmagokat, hogy kifejezzék a sejtszámot az ATN-ben.

Az összes ATN-sérüléses patkányban megkímélt sejtek NeuN-festett sejtmagjainak automatizált számát összehasonlítottuk az álpatkányokban megfigyelt NeuN-sejtek átlagos számával. Elfogadható léziókként határozták meg az ATN-ben lévő sejtek 50%-os elvesztésének kritériumát, és féltekénként legalább 25%-ot. Ez összhangban van a korábbi tanulmányok ATN-lézió kritériumaival (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|Zif268 immunhisztokémia

A szabadon lebegő metszeteket a NeuN-hez hasonló módon dolgoztuk fel, de nyúl poliklonális Zif268 elsődleges antitestben (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, USA) inkubáltuk 72 órán keresztül 4 C-on PBSTx-ben 1% NGS-sel, majd inkubálás biotinilált kecske antinyúl szekunder antitestben (1:1000: Vector LaboratoriesBA{11}}) egy éjszakán át PBSTx-ben és 1% NGS-ben.

A DAB vizualizációt követően (18 perc) a Zif268-pozitív sejtfestődést minden egyes érdeklődésre számot tartó régióban 10 objektívvel fényképeztük le fénymikroszkóppal (Leica, Németország). A sejtek automatikus megszámlálását az ImageJ ( NIH, USA) ugyanúgy, mint a NeuNpositive sejteknél, azzal a különbséggel, hogy a cirkularitást 0,65–1,0 értékre állítottuk be.

A Zif{0}}pozitív sejtek száma minden régióban ugyanazt a küszöb-algoritmust használta, és minden egyes patkányban érdeklődésre számot tartó régiónként két és hat szakasz közötti mennyiséget határoztak meg. Az átlagos Zif268-pozitív sejtszám mm2-re vonatkoztatva (mindkét féltekéről) egy adott régión belül.

2.10|Adatelemzés

Az ANOVA-t Statistica (v13; Dell Inc.) alkalmazásával végeztük, hogy megvizsgáljuk az átlagos különbségeket a négy patkánycsoport között (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace és ATNTrace). Ismételt mérési tényezőket adtunk hozzá a napokhoz (RAM és egyszerű megkülönböztetés), a próbablokkokhoz (páros-társult feladatok), valamint a Zif268 számlálásához a kapcsolódó régiókban vagy alrégiókban.

Az ANOVA mind a RAM, mind az egyszerű megkülönböztetési feladatok esetében négy csoportot hasonlított össze annak megerősítésére, hogy a két Sham-lézió és két ATN-lézió csoport konzisztens egymással, de megjegyezzük, hogy a RAM-ban vagy az egyszerű megkülönböztetési feladatokban nem volt nyomelem. Mind az egyszerű megkülönböztetés, mind a kifutópályán végzett párosított feladatok esetében a késleltetési adatok kölcsönös transzformációját alkalmazták az egyes kísérletekben a variancia homogenitásának biztosítására.

Bármely tesztnapon a transzformált késleltetések átlagos késleltetést generáltak mind a hat nem jutalmazott próba és a hat jutalmazott próba esetében. Az egyszerű diszkriminációs feladatoknál az átlagos késleltetési különbség pontszámát elemeztük (a jutalmazott próbák átlaga mínusz a nem jutalmazott próbák átlaga), de az adattárolási hiba miatt nem külön-külön a jutalmazott és nem jutalmazott próbákat.

Mindhárom késleltetési mérőszám elérhető volt a páros-asszociált memóriafeladatokhoz (nem jutalmazott kísérletek, jutalommal járó kísérletek és késleltetési különbség). A többszörös összehasonlítások figyelembe vétele, valamint az I. és II. típusú hibák kiegyensúlyozása érdekében a p < 0,02 szignifikanciaszintet alkalmaztuk a viselkedéselemzésekhez, mivel a páros-társult feladatban három kapcsolódó mérőszám volt (nem jutalmazott kísérletek, jutalommal járó kísérletek). és az átlagos késleltetési különbség).

Hat elsődleges analízist végeztek a Zif268 expressziója szempontjából érdekes régiókra, ezekben az elemzésekben a szignifikancia értéke p < 0,01. A Posthoc Newman–Keuls (NK) tesztek a páronkénti csoportkülönbségeket értékelték. Az egyszerű főhatáselemzést akkor alkalmaztuk, ha jelentős kölcsönhatások voltak, amelyek ismételt intézkedési tényezőket tartalmaztak.

3|EREDMÉNYEK

3.1|A sérülések ellenőrzése

A 18 ATN-lézióban szenvedő patkány egy kivételével mindegyik megfelelt az ATN 50%-os kétoldali károsodásának apriori kritériumának, és féltekénként legalább 25%-os. A medián kétoldali károsodás 76% volt mindkét ATN-léziós csoportban (tartomány: ATN-Nincs nyom, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; 2. ábra). A kizárt patkánynak csak az egyik féltekén volt kielégítő elváltozása (összesen 48%, bal oldalon 75%, jobb oldalon 20%).

A 2d. ábra azt mutatja, hogy az ATN neuronok NeuN-száma az ATN-sérüléses patkányokban (M=3388, SD=2024) jóval alatta maradt az ál-léziós patkányokban talált értékeknek (M=15, 339, SD=1065; ez a szám hasonló volt a Frost és munkatársai által közölthez, 2020). A 17 léziós patkány közül nyolc (négy a Trace csoportban és négy a No-Trace csoportban) nem károsodott sem a mediodorsalis thalamusban (MD), sem a reunions/romboid (Re/Rh) magokban, és viszonylag csekély volt a károsodás ezek a struktúrák a fennmaradó kilenc léziós patkányban.

Amikor az MD károsodás bekövetkezett, az elülső aspektusokban volt az ATN mellett. Tehát az MD károsodást körülbelül {{0}},72 és +2,10 mm közötti távolságra értékelték Bregmától, ahol a sejtveszteség 0-41% között volt az egészben. csoport (medián=21%). Amikor a Re/Rh károsodás bekövetkezett, az az ATN régióval is szomszédos volt, így körülbelül 1,08–2,04 mm-re Bregmától, ahol 0% és 33% között volt (medián=6%). Megjegyezzük, hogy ezek a százalékos sérülésértékek nem reprezentálják a teljes MD és Re/Rhrégiót, mivel mindkét sejtmag hátsó része érintetlen volt minden ATN-sérüléses patkányban.

For more information:1950477648nn@gmail.com