Öregedésgátló és tirozináz-gátló hatásai a Cassia Fistula virág butanolos kivonatának 1. rész

Absztrakt

Háttér: A növényi eredetű természetes termékeket számos kozmetikai alkalmazásban használták táplálékforrásként és fehérítőszerként. A Fabaceae családba tartozó Cassia fistula L virágait hagyományos gyógyszerként használták bőrbetegségek és sebgyógyulás ellen, és antioxidáns tulajdonságokkal is rendelkeznek. Vizsgálták a C. fistula virágkivonat öregedésgátló hatását az emberi bőr fibroblasztjaira.

A cisztanche glikozidja növelheti az SOD aktivitását a szív- és májszövetekben, és jelentősen csökkentheti az egyes szövetek lipofuscin- és MDA-tartalmát, hatékonyan megkötve a különböző reaktív oxigéngyököket (OH-, H2O₂ stb.) és megvédheti a DNS-károsodást. OH-gyökök által. A Cistanche feniletanoid glikozidok erős szabad gyökfogó képességgel rendelkeznek, nagyobb redukáló képességgel rendelkeznek, mint a C-vitamin, javítják a SOD aktivitását a spermiumszuszpenzióban, csökkentik az MDA-tartalmat, és bizonyos védő hatást fejtenek ki a spermium membrán működésére. A cistanche poliszacharidok fokozhatják a SOD és a GSH-Px aktivitását a D-galaktóz által okozott kísérletileg öregedő egerek eritrocitáiban és tüdőszöveteiben, valamint csökkenthetik a tüdő és a plazma MDA- és kollagéntartalmát, valamint növelhetik az elasztintartalmat. jó eltávolító hatás a DPPH-ra, meghosszabbítja a hipoxia idejét öregedő egerekben, javítja a SOD aktivitását a szérumban, és késlelteti a tüdő fiziológiás degenerációját kísérletileg öregedő egerekben A sejtmorfológiai degenerációval a kísérletek kimutatták, hogy a Cistanche jó antioxidáns képességgel rendelkezik és potenciálisan gyógyszer lehet a bőröregedési betegségek megelőzésére és kezelésére. Ugyanakkor a Cistanche-ban található echinakozid jelentős mértékben képes megkötni a DPPH szabad gyököket, és képes megkötni a reaktív oxigénfajtákat, megakadályozza a szabad gyökök által kiváltott kollagén lebomlását, valamint jó javító hatással van a timin szabad gyökök anionjainak károsodására.

Kattintson a Desert Cistanche előnyeire

【További információ:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Mód: A C. fistula virágok butanollal történő extrakciója befejeződött és a hatóanyagok osztályozása megtörtént. A fibroblasztok citotoxicitását SRB assay-vel értékeltük ki, hogy a további kísérletekhez a nem toxikus dózisokat válasszuk ki. Ezután a kollagén és a hialuronsav (HA) szintézisét a kollagénkészlettel, illetve az ELISA-val mértük. Ezenkívül az enzimaktivitást is értékelték, beleértve a kollagenázt, a mátrixmelloproteinázt-2 (MMP-2) és a tirozinázt.

Eredmények: Azt találták, hogy a virágkivonat nem befolyásolta a bőr fibroblaszt sejtnövekedését (IC50 > 200 ug/ml). Az eredmények azt mutatták, hogy a virágkivonat dózisfüggő módon szignifikánsan növelte a kollagén és a HA szintézist. A virágkivonat (50-200 ug/ml) szintén jelentősen gátolta a kollagenáz és az MMP{5}} aktivitását. Ezenkívül ez a virágkivonat gátolhatja a tirozináz aktivitást, amely hiperpigmentációt okoz, ami a bőr öregedését idézi elő.

Következtetések: A C. fistula virágkivonat megelőző hatást fejtett ki, ha öregedésgátló célokra használták az emberi bőr fibroblasztjaiban, és megfelelő választás lehet olyan kozmetikai termékek esetében, amelyek fehérítő hatást kívánnak nyújtani, és amelyeket öregedésgátló arcbőrápoló termékként jelöltek meg .

Kulcsszavak: Kollagenáz, Kollagén szintézis, Glikózaminoglikán, Hialuronsav, Mátrix metalloproteináz

Háttér

A bőr öregedése bonyolult biokémiai folyamat, amely számos egyéni belső és külső tényezőből adódik, mint például az életkor, a hormonok és az UV-fénynek való kitettség [1]. A progresszió az epidermális és dermális rétegekben fordul elő, és főként az extracelluláris mátrix (ECM) lebomlásával függ össze [2]. Az ECM lebontásában részt vevő enzimek a mátrix metalloproteinázok (MMP-k), például a zselatinázok (MMP-2) és a kollagenáz [3]. A bőr veszít szakítószilárdságából az MMP-k ECM-lebomlása miatt. Ebben a folyamatban a bőr ráncosodása, érdesség és szárazság is feltűnően fellép bizonyos pigment-rendellenességek mellett, mint például a hipo- vagy hiperpigmentáció [2, 4]. A hiperpigmentáció kezelésére tirozináz inhibitorokat vizsgáltak. A tirozináz egy sebességkorlátozó enzim, amely a tirozint melaninná alakítja [5]. A tirozin-inhibitorok tehát fontos szerepet töltenek be bőrvilágosító szerekként [6], míg a hialuronsav (HA) szintézise szabályozza a bőr hidratáltságát és a ráncok kialakulását. A HA, egy nem szulfatált glikozaminoglikán (GAG), ismétlődő diszacharidegységekből áll, beleértve a D-glükuronsavat és az N-acetil-Dglükózamint [7]. A HA szabályozza a szövetek helyreállítását is, beleértve az immunrendszer válaszának fokozását a gyulladásos sejtek aktiválásával és a fibroblasztok sérülésére adott válaszként [8–10].

A növényi eredetű természetes termékeket, mint például a Glycyrrhiza glabra [11] vagy a zöld tea [12], kozmetikai alkalmazásokban táplálékforrásként és fehérítőszerként használták. Jelentős mennyiségű bizonyíték mutatott rá a növényi kivonatokból származó orálisan vagy helyileg alkalmazott fitokemikáliák jótékony hatásaira, különösen a bőr állapotának javítására. Néhány példa a jótékony hatásokra, hogy csökkenthető a bőr öregedése és a bőrgyulladás. A C. fistula (aranyeső), a Fabaceae család, számos ázsiai országban megtalálható, például Thaiföldön, Kínában, Mianmarban és Indiában. Korábbi vizsgálatokban a C. fistula virágkivonat antioxidáns, rákellenes, antibakteriális, gombaellenes és antidiabetikus tulajdonságokkal rendelkezik [13, 14]. A C. fistula hatása az ájurvédikus gyógyászatban köztudottan részt vesz különféle rendellenességek kezelésében, beleértve a bőrbetegségeket, a leprát, a vérzést, a viszketést és a cukorbetegséget [15, 16]. A C. fistula különböző részei farmakológiai tulajdonságokkal rendelkeznek [17]. Virágokat, magvakat, gyümölcsöket és pépeket használtak bőrbetegségek, köztük a lepra kezelésére [18]. A pép antidiabetikus tulajdonságairól ismert [15], és tonikban használták, amelyet köszvény és reuma kezelésében alkalmaztak [19]. A leveleket és az érett hüvelyeket hagyományosan hashajtóként használták [20, 21]. A C. fistula fenolos és flavonoid fitokemikáliáiról is beszámoltak, hogy hasznosak a bőrbetegségek kezelésében [14]. Ezért ebben a tanulmányban a C. fistula virágkivonat kozmetikai alkalmazásokban betöltött szerepére vagyunk kíváncsiak. Megvizsgálták az ECM lebomlásának megelőző hatásait, valamint a bőröregedési enzimeket, amelyek magukban foglalják a kollagenáz és MMP{13}} aktivitást, valamint a tirozinázt. Ezenkívül meghatározták a kollagén és a HA szintézisét.

Mód

Vegyszerek és reagensek

A Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), DQ zselatint és penicillin-sztreptomicint a Gibco-tól (Grand Island, NY, USA) szállították. A magzati szarvasmarha szérumot (FBS) a Thermo Scientific (USA) szállította. A Sirius Red/Fast Green kollagénfestő készletet a Chondrex, Inc.-től (Redmond, WA, USA) vásároltuk. A Sulforhodamine B reagenst, a hialuronsavat és a gomba tirozinázt a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA) szereztük be.

Növényi anyagok

A C. fistula virágait a thaiföldi Lampang tartományból származó Lampang Herb Conservationtől szereztük be. Az utalványminta számát (023197) Wannaree Charoensup, a thaiföldi Chiang Mai Egyetem Gyógyszerészeti Karának botanikusa, a thaiföldi növényvilág botanikusa hitelesítette.

Cassia fistula virág kivonat készítése

A C. fistula virágait szellős helyiségben szárítottuk, majd 500 g szárított virágot finomra őröltünk porrá. Ezt követően a port 50%-os etanolba áztattuk, majd 24 órán át 70 fordulat/perc sebességgel rázattuk. 24 óra elteltével a mintákat szűrőpapíron átszűrtük a maradék elválasztása érdekében. A maradékot 50%-os etanolba áztatjuk, és 70 fordulat/perc sebességgel 24 órán át rázatjuk, majd ezt a lépést kétszer megismételjük. A szűrt mintákat egyesítettük, és rotációs vákuum-bepárlóban (BUCHI, Svájc) bepároltuk, így megkaptuk a vízfrakciókat. A vizes frakcióhoz hexánt adtunk 2:1 hexán arányban. A mintákat összeráztuk, és 30 percen keresztül hagytuk szétválni. A mintákat két frakcióra osztottuk, ezek a hexán és a víz frakciói voltak. Ezután a vizes frakciót összegyűjtöttük, és enyhe keverés közben szobahőmérsékleten 30 percre 10%-os szenet adtunk hozzá. A mintákat szűrőpapíron és celiten átszűrtük a szén elválasztására. A mintákat telített butanollal kevertük 2:1 arányban telített butanollal, és hagytuk a mintákat 12 órán keresztül elválni, és ezt a lépést háromszor megismételtük. A mintákat két frakcióra bontottuk, amelyek víz- és butanolfrakciót tartalmaztak. A butanolfrakciókhoz egyenlő térfogatban vizet adunk, és ezeket a frakciókat rotációs vákuumbepárló segítségével hagyjuk elpárologni. A bepárolt mintákat fagyasztva szárítottuk, hogy megkapjuk a C. fistula virágkivonat port.

A C. fistula virágkivonat teljes fenoltartalmának mennyiségi meghatározása UV-látható spektrofotométerrel

A C. fistula virágkivonat teljes fenoltartalmát Folin-Ciocalteu assay segítségével határoztuk meg. Röviden: 0,4 ml C. fistula virágkivonatot összekevertünk 0,3 ml 10 százalékos Folin-Ciocalteau reagenssel, és sötétben, szobahőmérsékleten 3 percig inkubáltuk. . Ezután 0,3 ml nátrium-karbonát oldatot adtunk hozzá, és az oldatot tovább inkubáltuk sötétben, szobahőmérsékleten 30 percig. Az abszorbanciát 765 nm-en értékeltük UV-látható spektrofotométerrel. A teljes fenoltartalom koncentrációját kiszámítottuk, és összehasonlítottuk a galluszsav (GA) standard görbéjével 0-20 ug/ml-nél. A teljes fenoltartalom milligramm GA-ekvivalens per gramm C. fistula. virágkivonat (mg GAE/g kivonat).

Fenolvegyületek mennyiségi meghatározása C. fistula virágkivonatban HPLC analízissel

A C. fistula virágkivonatokban lévő különböző típusú fenolos vegyületeket HPLC analízissel elemezték, majd összehasonlították standard galluszsavval, katekinekkel, protokatekuinsavval, vanillinsawal, klorogénsavval, ferulsavval és kumársavval. A virágkivonatokat 5 0 százalékos etanolban feloldottuk, és HPLC-vel (Agilent Technologies, CA, USA) tovább értékeltük, fordított fázisú C18 oszlopon (WATER, MA, USA). A mozgó fázis metanolból (A) és 0,1 százalékos trifluor-ecetsavból (TFA) vízben (B) állt gradiens körülmények között. Az áramlási sebességet 1,0 ml/perc értékre állítottuk be, és a detektálási hullámhosszt 280 °C-on rögzítettük UV-detektorral. A fenolos vegyületek koncentrációszintjeit kiszámítottuk és összehasonlítottuk a standard görbével, figyelembe véve a standard koncentrációkat és a csúcsterületeket (mg/g kivonat).

A C. fistula virágkivonat teljes flavonoid tartalmának mennyiségi meghatározása kolorimetriás vizsgálattal

A teljes flavonoid-tartalmat módosított alumínium-klorid (AlCl3) kolorimetriás vizsgálattal határoztuk meg a korábban leírtak szerint [22]. Röviden, 0,25 ml virágkivonatot kevertünk össze 0,125 ml 5 százalékos nátrium-nitrittel (NaNO2), és az oldatot 5 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezután 0,125 ml 10%-os AlCl3-ot kevertünk az elegyhez, és 5 percig sötétben tartottuk. Ezután 1 ml nátrium-hidroxidot (NaOH) adtunk hozzá, és az oldatot 15 percig szobahőmérsékleten, sötétben inkubáltuk. Az abszorbanciát 510 nm-en mértük UV-látható spektrofotométerrel. A teljes flavonoid tartalmat kiszámítottuk és összehasonlítottuk a standard katechin értékekkel, és mg katechin ekvivalens per gramm kivonatban (mg CE/g kivonat) fejeztük ki.

Sejttenyészetek

A Chiang Mai Egyetem (Chiang Mai, Thaiföld) CM Maharaj Kórházának sebészeti osztályán császármetszéssel járó sebészeti beavatkozást követően az elsődleges emberi bőrfibroblasztokat aszeptikusan izolálták egy hasi hegből (Tanulmánykód: BIO{0}}, a Medical által jóváhagyott Kutatásetikai Bizottság, Chiang Mai Egyetem). A kiindulási anyagról eltávolítottuk a zsírt, és anti-penicillint és sztreptomicint tartalmazó DMEM-be áztattuk. Ezt követően a bőrt 1% proteázt tartalmazó DMEM-be merítettük (Dispase, Gibco, Grand Island, NY, USA) 48 órára 4 °C-on. Az epidermális rétegeket eltávolítottuk, és a normál fibroblasztokat izoláltuk a dermiszből. A fibroblasztokat 10% FBS-sel, 2 mM L-glutaminnal, 50 U/ml penicillinnel és 50 ug/ml sztreptomicinnel kiegészített DMEM-ben tenyésztettük. A sejteket 5 százalékos CO2 párásítású inkubátorban tartottuk 37 fokon.

Sejtéletképességi vizsgálat

A C. fistula virágkivonat sejtéletképességi vizsgálatát a bőr fibroblaszt sejtjeivel szemben szulforodamin B (SRB) assay segítségével mérték, amint azt korábban leírtuk [23]. Röviden, a sejteket (8x1{8}}3 sejt/lyuk) egy 96-lyukú lemezre oltottuk, és 37 °C-on, 5 százalékos CO2 mellett 24 órán át inkubáltuk. Ezt követően a sejteket különböző koncentrációjú (0–200 ug/mL) C. fistula virágkivonattal vagy anélkül kezeltük 48 órán keresztül. 48 óra elteltével 10 tömegszázalékos (w/v) triklór-ecetsavat (TCA) adtunk a sejtekhez, majd a sejteket 4 fokon 1 órán át inkubáltuk. A táptalajt eltávolítottuk, és a sejteket lassan folyó csapvízzel öblítettük. 0,057%-os (w/v) SRB-oldatot (100 µl) adtunk minden egyes lyukhoz, és a sejteket 30 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Az SRB-oldatot eltávolítottuk, majd a sejteket 4-szer mostuk 1%-os (v/v) ecetsavval, és hagytuk szobahőmérsékleten megszáradni. A festéket 10 mM Tris bázis oldatban (pH 10,5) oldottuk, és az abszorbanciát 510 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval.

Kollagén szintézis vizsgálat

A fibroblaszt sejtekben a teljes intracelluláris kollagént a Sirius Red/Fast Green Collagen Staining Kit (Chondrex, Inc, Redmond, WA, USA) segítségével határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. Röviden, bőrfibroblaszt sejteket oltottunk be 24 lyukú lemezekre 24 órán át 37 °C-on, 5 százalékos CO2 mellett. Ezt követően a sejteket szérummentes DMEM tápközeggel előkezeltük 24 órán át. A táptalajt eltávolítottuk, és a sejteket C. fistula virágkivonattal (0-150 ug/ml) vagy anélkül inkubáltuk 48 órán keresztül. 48 óra elteltével a tenyésztést eltávolítottuk. Ezután a sejteket PBS-sel mostuk, és Kahle fixálóval fixáltuk 10 percig. A fixálószert eltávolítottuk, és a sejteket PBS-sel mostuk. A Sirius Red/Fast Green festékoldatot mindegyik lyukba adtuk, és a mintákat 30 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. A festéket eltávolítottuk, és a sejteket négyszer mostuk DE vízzel, vagy amíg a folyadék színtelenné nem vált. Végül hozzáadtuk az extrakciós puffert, és az abszorbanciát 540 nm-en és 605 nm-en UV-látható spektrofotométerrel mértük.

Kollagenáz aktivitási vizsgálat

A kollagenáz aktivitást módosított fluorogén DQ™-zselatin teszttel mértük, a korábban leírtak szerint [24]. Röviden, különböző koncentrációjú C. fistula virágkivonatot (0–200 ug/ml) adtunk 96 lyukú lemezekre. Minden lyukba 1 U/ml kollagenázt adtunk (100 µl/lyuk). Ezt követően 15 ug/ml zselatint (DQ zselatint) adtunk hozzá, és az elegyeket 10 percig inkubáltuk. A proteolízis sebességét úgy határoztuk meg, hogy az abszorbanciát 2 percenként 20 percig mértük mikrolemez-leolvasóval 485 nm gerjesztési hullámhosszon és 528 nm emissziós hullámhosszon. Az enzimaktivitást az idő és az abszorbancia közötti lineáris regresszió meredekségének vizsgálatával becsülték meg egy 2-6 perces időtartam alatt.

MMP{0}} aktivitási vizsgálat

Az MMP{{0}} aktivitását zselatin zimográfiával határoztuk meg, a korábban leírtak szerint [25]. A fibroblaszt sejteket DMEM szérummentes tápközegben tenyésztettük 24 órán át. Ezt követően a tenyészet felülúszóját összegyűjtöttük. A tenyészet felülúszóját 1 0 százalékos poliakrilamid gélekkel kezeltük, amelyek 0,1 tömeg/térfogat százalék zselatint tartalmaztak, nem redukáló körülmények között. A géleket kétszer mossuk 2,5 térfogatszázalékos Triton X-100 oldattal 30 percig szobahőmérsékleten az SDS eltávolítása érdekében. A géllapot a sávoknak megfelelő szeletekre vágtuk, majd a szeleteket különböző tartályokba helyeztük, és különböző koncentrációjú C-t tartalmazó aktiváló pufferrel (50 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 10 mM CaCl2, pH 7,4) inkubáltuk. sipolyvirág kivonat (0-200 ug/ml) 37 fokon 18 órán keresztül. Ezt követően a gélek egy csíkját mostuk és Coomassie Brillant Blue R-rel (0,1 tömeg/térfogat%) megfestettük, majd 30 százalékos metanolban és 10 százalékos ecetsavban megfestettük. Az MMP-2 aktivitás tiszta sávként jelent meg a kék háttér előtt. Az emésztési sávokat az Image J programmal határoztuk meg.

Hialuronsav (HA) szintézis vizsgálata ELISA-val

A C. fistula virágkivonat HA-szintézisre gyakorolt ​​hatását ELISA kittel határoztuk meg a korábban leírtak szerint [26]. A fibroblaszt sejteket (50 × 104 sejt/lyuk) 24-lyukú lemezekre oltottuk 24 órán át 37 fokos hőmérsékleten, 5 százalékos CO2-tartalom mellett. A sejteket szérummentes tápközegben 6 órán át előkezeltük, majd különböző koncentrációjú C. fistula virágkivonattal (0-200 ug/ml) vagy anélkül kezeltük 48 órán keresztül. A tenyésztett táptalajt összegyűjtöttük, és a HA-szintézist ELISA-val mértük. Az abszorbanciát 450 és 570 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval. A kezelt fibroblaszt sejtekből nyert tenyésztett felülúszó HA-koncentrációját kiszámítottuk, és összehasonlítottuk a HA standard görbéjével.

Tirozináz gátlási vizsgálat

A tirozináz gátlási vizsgálatot a korábban leírtak szerint határoztuk meg [27]. Különféle koncentrációjú C. fistula virágkivonatot adtunk egy 96-lyuklemezre. A reakciót nátrium-pufferben (pH 6,4) hajtottuk végre, amely 100 U/ml gomba tirozinázt tartalmazott. L-DOPA szubsztrátot (1 mM) adtunk a reakcióelegyhez, majd 10 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Az abszorbancia változását 490 nm-en 15 percig 1,5 percenként mértük mikrolemez-leolvasóval. A tirozináz százalékos gátlását a következő képlettel számítottuk ki:

Antioxidáns aktivitási vizsgálat

A C. fistula virágkivonat antioxidáns aktivitását 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)-szabadgyök aktivitással határoztuk meg, a korábban leírtak szerint [28]. A virágkivonat különböző koncentrációit (0–100 ug/ml) állítottuk elő metanolban. 1 ml 0,002%-os DPPH-t adtunk 1 ml virágkivonat-oldathoz, és az elegyet 30 percig sötétben tartottuk. Az abszorbanciát 517 nm-en mértük spektrofotométerrel. A százalékos gátlást a következő képlet alapján számítottuk ki, és hasonlítottuk össze a standard E-vitaminnal (1-100 ug/ml):

A C. fistula virágkivonatok antioxidáns aktivitását ABTS vizsgálattal igazoltuk, amint azt korábban leírtuk [29]. Az ABTS [2,2'-azino-bisz(etilbenztiazolin-6-szulfonsav)] gyökkationt 7 mM ABTS törzsoldat 2,45 mM kálium-perszulfát (K2S2O8) (1/1, v/v) összekeverésével állítottuk elő. Az elegyet sötétben inkubáltuk 12-16 órán át, amíg a reakció befejeződött. A vizsgálatot 990 μl ABTS-oldattal és 10 μl virágkivonattal (0-4 ug/ml) végeztük. 6 perc elteltével az abszorbanciát azonnal feljegyeztük 734 nm-en spektrofotométerrel. A virágkivonat ABTS aktivitásának százalékos gátlását a következő egyenlettel számítottuk ki:

Statisztikai analízis

Minden adat átlag ± standard deviáció (SD) értékként jelenik meg. A statisztikai elemzést a Prism 6.{1}} szoftverrel elemeztük, egyutas ANOVA-t használva Dunnett-teszttel. A statisztikai szignifikancia meghatározása: * p < 0.05, ** p < 0.01, ***p < 0,001 vagy **** p < 0,0001.

Eredmények

A C. fistula virágkivonat fitokémiai jellemzése

A minták fagyasztva szárításával járó lépés után a C. fistula virágkivonatot lemértük, majd fitokémiai és biológiai vizsgálatoknak vetettük alá. 18.0500 g nyersanyagból 8 g C. fistula virágkivonatot kaptunk, a virágkivonat százalékos hozama 3,62 volt. A C. fistula virágkivonat HPLC ujjlenyomatát HPLC analízissel határoztuk meg (1. ábra). A fenolos vegyületek csúcsát mutató HPLC profilt az egyes retenciós időkben az egyes komponensek tekintetében jelöltük. A C. fistula virágkivonat fenolos vegyületeinek jellemzését az 1. táblázat tartalmazza. A virágkivonat összes fenoltartalma 275,32 ± 14,21 mg GAE/g kivonat volt. A hidroxi-benzoesav-származékok, köztük a vanillinsav és a protokatekuinsav, {{20}},95 ± 0.09 és 2,56 ± 0. 42 mg/g kivonat, míg a galluszsav értéke {{30}},60 ± 0,02 mg/g kivonat volt. A hidroxi-fahéjsav-származékok, köztük a kumársav, a ferulasav és a klorogénsav, 0,39 ± 0,08, 0,80 ± 0,09 és 0,83 ± 0,03 mg/g kivonatnál voltak kimutathatók. A flavonoid tartalom 27,62 ± 3,56 mg CE/g kivonat volt. A katechint, mint flavonol származékot 1,10 ± 0.{43}} mg/g kivonatban mértük.

【További információ:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】