A Piper Cambodianum Cistanche kivonat öregedésgátló hatásai a normál emberi dermális fibroblaszt sejtekre és egy sebgyógyító modellre egerekben Ⅱ

Cistanchekivonja az NHDF sejteket az UV sugárzás hatásaitól

A bőrsejtek gyorsan reagálnak, ha UV-sugárzásnak vagy citokineknek, például interleukinnek (IL)-4 és IL-13-nak vannak kitéve.19UV-sugárzás hatására különböző tényezők stimulálódnak, köztük az EGFR,20,21 TNFR,22mitogén-aktivált protein (MAP) kinázok, ERK és c-Jun amino-terminális kináz (JNK).23Mind a JNK, mind a p38 foszforilálja és aktiválja a c-Jun transzkripciós faktort, ami viszont megemeli a c-Fos-t és növeli a transzkripciós faktor aktivátor fehérje szintjét-1,24amely az MMP-k transzkripciójához szükséges. Ezeket a receptorokat a MAP kináz és más downstream fehérjék foszforilációja aktiválja.25A MAP kinázokat specifikus treonin és tirozin foszforilációja aktiválja.24,26Az UV expozíció a c-Jun és c-Fos heterodimerek, számos citokin és növekedési faktor magas expressziójához vezet, amelyeket a JNK és a p38 foszforilál.27,28Hasonlóképpen, a p53 fehérje szintje megemelkedett, 2,5 órától 24 óráig az UV-sugárzást követően.29Kimutattuk, hogy a 24 órán át UV-sugárzásnak kitett sejtek TNFR1 és EGFR fehérjeszinteket expresszáltak, amelyek dózisfüggő módon csökkentek, amikor a sejteket kezeltékCistanche. Vizsgáltuk az UV sugárzás hatását a p38 (Thr180/Tyr182) foszforilációjára és aktivitására egyaránt. A c-Jun és a p53 fehérjeszintje drámaian lecsökkentCistanche-kezelt sejtekkel (4A. és B. ábra).

Kattintson ide, ha többet szeretne megtudni a Cistanche öregedésgátló kezelésről

A Cistanche kivonat megvédte az UV-sugárzással sugárzott NHDF sejteket a ROS-tól

Az UVB fény serkenti a ROS képződését,30,31és az UV-sugárzás a bőrön ROS-t, például O-t termel2 ⋅−, H2 O2, és1 O2. 32Kezeletlen ésCistancheA kezelt sejteket 24 órán keresztül UV-sugárzásnak vetettük alá, és a ROS képződését fluoreszcenciával aktivált sejtválogatással (FACS) mértük.

3. ábraAz ECM fehérjék szabályozása aCistanche- kezelt sejtek.Megjegyzések: (A) NHDF sejteket kezeltünkCistanche24 órán keresztül. A sejtlizátumokat immunblottal elemeztük anti-kollagén, anti-elasztin, anti-MMP-3 és anti-ERK-2 antitestek felhasználásával. Az eredmények három független kísérletet reprezentálnak. (B) Az immunprecipitátumban lévő aktin, kollagén, elasztin, MMP{0}} és ERK-2 mennyiségét Western blottal határoztuk meg. A rudak magassága a megfelelő átlag± Három független kísérlet SD-i. *P,0.05; **P,0.01. Rövidítések:Konc, koncentráció; ECM, extracelluláris mátrix; ERK, extracelluláris szignál-szabályozott kináz; MMP, mátrix metalloproteináz; NHDF, normál humán dermális fibroblaszt;Cistanche, Piper kambodzsánP. Fourn.; SD-k, szórások.

4. ábraCistanche kivonat gátlása ROS termelés UV-besugárzott sejtekben.Megjegyzések: (A) Az NHDF sejteket 180 másodpercig 40 J-es UV-sugárzásnak tesszük ki, ésCistanche24 órán keresztül. A sejtlizátumokat immunblottal elemeztük anti-TNFR6, anti-c-Jun, anti-c-Fos, anti-pp38 vagy anti-p-JNK antitestek alkalmazásával. Az eredmények három független kísérletet reprezentálnak. (B) A teljes és tirozin-foszforilált p38, JUK, aktin és TNFR6 mennyiségét az immunprecipitátumokban Western-analízissel határoztuk meg. A rudak magassága az átlag± Három független kísérlet SD-je. *P,0.05; **P,0.01. Rövidítések:Konc, koncentráció; EGFR, epidermális növekedési faktor receptor; JNK, c-Jun amino-terminális kináz; JNK, c-Jun N-terminális kináz; NHDF, normál humán dermális fibroblaszt;Cistanche, Piper kambodzsánP. Fourn.; ROS, reaktív oxigénfajták; SD, szórás; TNFR, tumor nekrózis faktor receptor; UV, ultraibolya.

Az UV besugárzás növelte a ROS termelést, mígCistanche kivonat csökkentette a ROS termelést az NHDF sejtekben. A H ROS szintjei2 O2 sejtpermeánsok segítségével mértük 2′,7′-diklór-dihidrofluoreszcein-diacetát (CM-H2 DCFDA) (5A. ábra). Az UV-sugárzás növelte a H ROS szintjét2 O2 , míg a ROS szint csökkentCistanche dózisfüggő módon extraháljuk (5B. ábra). Ezek az eredmények azt mutattákCistancheA kivonat védi a bőr fibroblasztjait az UV-sugárzástól azáltal, hogy csökkenti a ROS képződését.

A sebgyógyulás makroszkópos megfigyelése egerekben

Sebeket hoztak létre az egerek hátán, majd kezeltékCistanchekivonat (0, 1, 10 és 50µg/ml); a sebterületeket minden nap mértük 4 napon keresztül. A 4. napon a sebeket körülvevő területek beCistanche-kezelt egerek csökkent bőrpírt mutattak dózisfüggő módon a kezeletlen sebterületekhez képest (5. ábra). A kivonattal kezelt sebterületek kisebbek voltak, mint a kezeletlen sebterületek, ami dózisfüggő mintát mutat. A 4. napon a sebterületeket 50-nel kezeltékµg/mlCistancheteljesen új hám borította őket. Egy sebterület sem volt fertőzött (6A és B ábra). Kiszámoltuk a sebterületek arányát a 0. és a 4. napon (6C. ábra).

Vita

A növényi anyagok és a különböző növényi részek használata a fitoterápia egyidejű fejlődésével növekszik. A növényi anyagokat különféle formákban használták, például mono- vagy poliherbális gyógyszereket, étrend-kiegészítőket és étrend-összetevőket, és sokuk jól ismert és biztonságos kereskedelmi árucikké vált.33Különféle növények, köztükCistanche, potenciális farmakológiai tulajdonságaikat vizsgálták, de korábban nem végeztek összehasonlító vizsgálatot velükCistanche kivonat. Ezt a vizsgálatot annak meghatározására végeztékhatásaitCistanche kivonat a sebgyógyító tevékenységekről egereken végzett metszéses sebmodellek alkalmazásával. A sebgyógyulás magában foglalja a szövetek integritásának helyreállítását a gyulladással, a proliferációval és az átépüléssel kapcsolatos folyamatokon keresztül.34 A bőr átalakítási szakaszát a kollagén rostkomponensek újraformálódása és újraképzése jellemzi, amelyek javítják a szakítószilárdságot.35A gyógyulási folyamatot leginkább az új kollagén bioszintézise és lerakódása, valamint az azt követő érlelés szabályozza.36Sebvizsgálatunk soránCistanche A kivonat fokozott sebgyógyító hatást mutatott a kontrollhoz képest (1C. és 6. ábra). Ez a gyógyulás a megnövekedett kollagénkoncentrációnak és a rostok stabilizálásának köszönhető. A szöveti helyreállítási folyamatban a gyulladásos sejtek fokozzák az endothel sejtek migrációját és proliferációját, ami az extracelluláris mátrixokat szintetizáló kötőszöveti sejtek neovaszkularizációjához vezet, beleértve a kollagént és a keratinocitákat, ami a sebzett szövetek reepitelializációjához vezet.37A gyorsabb sebösszehúzódási sebesség növelheti a rés junctionális intracelluláris kommunikációját a fibroblasztokban és fokozhatja a granulációs szövet gyorsabb érését.38A bemetszéses seb modelljében a kezelt egerekCistanchekivonat gyorsabb sebgyógyulást mutatott a kontrollokhoz képest (6. ábra). Számos tanulmány kimutatta, hogy a p38 kináz útvonal leszabályozása megvédi a különböző vad típusú p53--expresszáló sejtvonalakat a genotoxikus stressztől.39,40Adataink azt mutatták, hogy a p38 expresszióját UV-besugárzott sejtekben csökkentette aCistanche kezelés. Ebből adódóan,Cistanche A levelekből és szárakból nyert kivonat hatékony kezelést mutatott be a sebgyógyulásban.CistancheAz extraktum csökkentette az UV-sugárzásból származó ROS-termelést azáltal, hogy megköti a ROS-t az NHDF sejtekben (5A és B ábra). Ráadásul,CistancheA kivonat felgyorsította a sebgyógyulást bőrbesugárzás után ((6A–C. ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogyCistanche A kivonat védi a bőrt az UV-sugárzás káros hatásaitól, és új alapanyagként hasznos lehet a kozmetikai alkalmazásokban.

5. ábraCistanche-ROS termelés közvetített gátlása UV-sugárzással besugárzott sejtekben.Megjegyzések: (A) A sejteket UVB besugárzással (40 J) kezeltük a jelzett ideig, majd 2′,7′-diklór-dihidrofluoreszcein-diacetát 30 percig. A ROS keletkezését FACS mérte. (B) A sejteket UVB (40 J) sugárzásnak tesszük ki 180 másodpercig, és a jelzett koncentrációjúCistanche24 órán keresztül. A ROS-termelést 2-es festéssel becsültük′,7′- diklór-dihidrofluoreszcein-diacetátot, és FACS-el analizáltuk.Rövidítések:FACS, fluoreszcenciával aktivált sejtválogatás; FITC, fluoreszcein-izotiocianát; NHDF, normál humán dermális fibroblaszt;Cistanche, Piper kambodzsánP. Fourn.; ROS, reaktív oxigénfajták; UV, ultraibolya; UVB, ultraibolya B.

6. ábraSebgyógyító hatások károsodott egérbőrre.Megjegyzések: (A) 5-mm átmérőjű sebeket hoztak létre 7-hetes hím C57Bl/6 egerek háti bőrén (n=3). A sebek gyógyulását -val értékeltékCistanchekezelés különböző koncentrációkban (negatív kontroll és seb utáni kezelésCistanche1-nél, 10-nél és 50-nélµg/ml). (B) A seb területét a nyílt sebek átmérőjének mérésével határoztuk meg. (C) A seb területét a nyílt sebek mérete alapján számítottuk ki; *P,0.05; **P,0.01. Rövidítések:Cistanche, Piper kambodzsánP. Fourn; Koncentráció, koncentráció.

Következtetés

Ez a tanulmány azt vizsgáltaa Cistanche szár- és levélkivonat potenciális öregedésgátló és sebgyógyító hatásaNHDF sejtekbenés a sebgyógyulás egérmodellje. ANHDF sejtek kezelése Cistanche-val kivonatokelősegíti a karcolt terület helyreállításátdózisfüggő módon, valamint az ECM génexpresszió fokozása. Ezen kívül Cistanchekivonatokképesek voltakvédi a sejtet az UV-sugárzástól a ROS termelés csökkentésével. Végül ezeket a megfigyeléseket tovább értékelik és megerősítik az in vivo sebgyógyulási modell egereken. Ebből adódóan,A Cistanche kivonat ígéretes új terápiás szer az öregedésgátló és sebgyógyító kezelésben.

Köszönetnyilvánítás:Ezt a tanulmányt a Koreai Nemzeti Kutatási Alapítványon (NRF) keresztül az Alapvető Tudományos Kutatási Program támogatta, amelyet az Oktatási Minisztérium finanszírozott (NRF{0}}R1A1A3050752). A szerzők szeretnének köszönetet mondani a Koreai Biotudományi és Biotechnológiai Kutatóintézetnek (KRIBB) azért, hogyCistanchekivonatok.

Közzététel A szerzők nem számolnak be összeférhetetlenségről ebben a munkában.

Hivatkozások

1. Slominski AT, Zmijewski MA, Semak I, et al. A citokrómok p450 és a bőrrák: a helyi endokrin utak szerepe.Cancer Agents Med Chem. 2014;14(1):77–96. 

2. Gilchrest BA. A bőr öregedése és fotoöregedés.Dermatol Nurs. 1990; 2(2):79–82. 

3. Ha TY. Az egészséges életet szolgáló funkcionális élelmiszer-anyagok fejlesztése.Koreai J Crop Sci. 2006;51:26–39.

4. Makrantonaki E, Zouboulis CC. A bőr öregedésének molekuláris mechanizmusai: a technika legkorszerűbb módja.Ann NY Acad Sci. 2007;1119:40–50. 

5. Seo MY, Chung SY, Choi WK és társai. A rizsbor öregedésgátló hatása tenyésztett humán fibroblasztokban és keratinocitákban.J Biosci Bioeng. 2009; 107(3):266–271. 

6. Kligman AM. A napfény korai pusztító hatása az emberi bőrre.JAMA. 1969;210(13):2377–2380. 

7. Oikarinen A, Karvonen J, Uitto J, Hannuksela M. Kötőszöveti elváltozások természetes és terápiás UV-sugárzásnak kitett bőrben.Photodermatol. 1985;2(1):15–26. 

8. Bech-Thomsen N, Wulf HC. Egy szűrt fémhalogenid UVA-forrás és egy cső alakú, fluoreszcens UVA barnítóforrás rákkeltő és melanogén hatása további napszimulált UV-sugárzással vagy anélkül szőrtelen egerekben.Photochem Photobiol. 1995;62(4):773–779.

9. De MS, Lahiri SC. Vizsgálatok a Piper betle leveleiről.Bull Calcutta Sch Trop Med. 1971;19(3):69–72.

10. Ferreres F, Oliveira AP, Gil-Izquierdo A, Valentão P, Andrade PB. Piper béta levelek: fenolos vegyületek profilozása HPLC/DAD-ESI/MS(n) segítségével és anti-kolinészteráz aktivitás.Phytochem. Anal. 2014;25(5): 453–460.