A Ribes Meyeri antocianinok öregedésgátló hatásai az idegi őssejtekre és az öregedő egerekre 2. rész

Kérjük, vegye fel a kapcsolatotoscar.xiao@wecistanche.comTovábbi információk

Nar megmenti a 23M-NSC-k szeneszcens fenotípusait

Az R. Meyer-antocianinok sokféle flavonoidban és bioaktív komponensben gazdagok [1,3-5]. Annak megállapításához, hogy az R. Meyer antocianinok melyik összetevője játszik fontos szerepet az öregedésgátlásban, elvégeztük az R. Meyer antocianinok metabolomikus elemzését. Kiderült, hogy a Nar fontos flavonoid metabolit lehet, mert a flavonoid bioszintézis útvonala erősen gazdagodott R. Meyer antocianinokban (1. kiegészítő táblázat). A Nar szeneszcens hatásának meghatározásához különböző koncentrációkat (0, 1,7,3,4,6,6,8,13,6 és 27,2 μg/ml) alkalmaztunk a 23M-NSC-kre és CCK-8 vizsgálatokat a sejtek életképességének vizsgálatára. Amint azt a 3. kiegészítő ábra mutatja, a Nar kezelés 6,8 μg/ml-rel 150%-kal növelte a sejtek életképességét. A Nar érzékelhárító hatásainak további feltárása érdekében a 23M-NSC-ket Nar-nal kezelték, majd az öregedéssel kapcsolatos mutatókat észlelték.heszperidint használA 6,8 μg/ml Nar-ral kezelt 23M-NSC-kben a p16nk4a mRNS expresszió csökkent (3A ábra). Nar meghosszabbította a tenyésztett mNSC-k telomerjeit és fokozta a DNS-szintézist is (3B,3C ábra). A Nar sejtproliferációra gyakorolt hatásainak további feltárása érdekében elvégeztük a Ki67 immunfluoreszcens festését, amely a mitotikus sejtek nukleáris antigénje, amely a sejtciklus során expresszálódik, kivéve a G0-t [19,27]. A Nar-nal végzett kezelés fokozta a sejtek proliferációját, a Ki67-pozitív sejtek megnövekedett számával mérve (3D, 3E ábra). Ezután kimutattuk az NSC-k neuronokra való differenciálódási potenciálját is. Valójában a 6,8ug /ml Nar kezelés növelte a MAP2-pozitív sejtek számát is (3F,3G ábra). Ezek az eredmények következetesen azt mutatják, hogy a Nar képes megfordítani a 23M-NSC öregedést.

2. ábra. A Ribes Meyer antocianinok javítják az egér memóriáját és tanulási képességeit az idegi őssejtek (NSC-k) növelésével. Vagy Időbe telik megtalálni a platformot. vagy Időbe telik, amíg először elérjük a platformot. (C) A platform megtalálásának átlagos sebessége. És uraim! A távolság úszott, mielőtt megtalálta volna a peront. (E. F) Kezelés R-rel.elveszett birodalom cistancheminden antocianin növelte a neuroszféra számát és méretét a kontrollokhoz képest. (G) Az ot 50-100 um méretű neuroszférák számát növelte az R. Meyer antocianin kezelés egerekben. Az adatok három független kísérlet átlagos ±SD-jeként jelennek meg. *P<><0.01, and=""><0.0001 compared="" with="" untreated="" cells."n"="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" in="" each="" experimental="">

3. ábra. A naringenin(Nar) hatása az egér idegi őssejtjeinek (MNC-k) öregedésére. (A) a p16k4a mRNS expressziót qRT-PCR-rel mértük 23M-NSC-kben, 6,8 ug/ml Nar kezeléssel és anélkül 48 órán keresztül. (C) A 23M-NSC-k relatív telomerhossza jelentősen nőtt a Nar-kezeléssel, (D)Immunfluoreszcencia Ki67 festéssel Nar-nal kezelt izmok 48 órán keresztül, DAPI nukleáris címkézéssel, (E) A (D),(F)A MAP2 reprezentatív mezőinek számszerűsítése és a tenyésztett mNSC-k GFAPimmunofluoreszcencia festése kontroll és Nar kezelés után. G) Az (F) mennyiségi meghatározása. Az adatok három független kísérlet átlag± SD-jeként jelennek meg. *P<>< 0.01,="" and="">< 0.0001="" compared="" with="" untreated="">

Kérjük, kattintson ide, ha többet szeretne megtudni

Nar javítja a memóriát és a megismerést az öregedő egerekben

A kognitív szintek az öregedéssel csökkennek, és az öregedésgátló kezelések javíthatják a kognitív szintet [11, 28]. A Nar in Vivo öregedésgátló hatásainak ellenőrzése érdekében 20 mg/kg Nar-t fecskendeztünk be az öregedő C57BL/6 egerekbe (12 hónapos korig) a farokvénán keresztül. Az MWM tesztet az egerek térbeli memóriájának és kognitív képességeinek vizsgálatára használták.mikronizált tisztított flavonoid frakció 1000 mg felhasználásAz 5 napos ismételt edzés során a Nar-val kezelt öregedő egerek platformjának megtalálásához szükséges idő fokozatosan csökkent a kontrollcsoporthoz képest (4A ábra). A vizsgálati eredmények azt mutatták, hogy a platform első eléréséhez szükséges idő csökkent (4B ábra), míg a peronzónában töltött idő nőtt (4C ábra). Ezenkívül Nar-val kezelt öregedő egereket figyeltek meg a platformzónában nagyobb gyakorisággal, mint a kontrollcsoport (4D ábra). Ezek az eredmények együttesen arra utalnak, hogy a Nar javíthatja a térbeli memóriát és a kognitív képességeket az öregedő egerekben.

Öregedő egerek nar-nal kezelt vérének RNS-szekvenálási elemzése

A Nar-specifikus öregedésgátló mechanizmusok vizsgálatához elemeztük az öregedő egerek nar-kezelt vérének génexpressziós profilját RNS-szekvenálással (RNS-seq). Az eredmények 1,961 differenciálisan expresszálódó gént (DEG) mutattak ki. Általában a Nar lejjebb vitte a génexpressziót, és csak néhány gént szabályoztak felfelé a kezeletlen kontrollcsoporthoz képest (5A, 5B ábra). Ezenkívül az öregedéssel kapcsolatos fontos jelátviteli útvonal géneket lefelé szabályozták, különösen a TNF jelátviteli útvonalon (5C ábra).oteflavonoidEzek az eredmények azt sugallják, hogy a Nar befolyásolja a TNF jelátviteli útvonalát, ezáltal mélyen befolyásolja a TNF-a működését, amely részt vesz az öregedéssel kapcsolatos kognitív károsodásban [29,30]. Ezért megvizsgáltuk a TNF-α szinteket az egerek plazmájában. Az immunszkopbens vizsgálatok (ELISA) enzimhez kötött vizsgálatainak eredményei

4. ábra. A Naringenin (Nar) javítja az öregedő egerek memória- és tanulási képességeit. Vagy A Nar-nal kezelt öregedő egerek menekülési késleltetése rövidebb volt a kontrollcsoporthoz képest. (B) A platform első eléréséhez szükséges idő rövidebb volt a Nar-val kezelt öregedő egerekben, mint a kontrollcsoportban. (C) A peronzónában eltöltött idő időtartama. (D) A Nar-nal kezelt öregedő egerek platformzónájában a kontrollcsoporthoz viszonyított megfigyelés gyakorisága. Az adatok három független kísérlet átlagos ±SD-jeként jelennek meg.*P<>< 0.01,=""><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group.“n”="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" used="" for="" each="" experimental="" group.="" revealed="" that="" nar="" treatment="" led="" to="" the="" downregulation="" of="" plasma="" tnf-a="" levels="" (figure="" 5d).="" we="" also="" examined="" pl6ink4agene="" expression="" in="" the="" hippocampus="" of="" mice="" and="" demonstrated="" that="" nar="" treatment="" downregulates="" pl6ink4amrna="" expression(figure="">

Cistanche öregedésgátló lehet

MEGBESZÉLÉS

Az öregedés a kognitív hanyatlás fokozott kockázatával, valamint a tanulási és memóriaképesség elvesztésével jár [22,23]. A neuronális veszteség és a károsodott neurogenezis szorosan összefügg az életkorral összefüggő agyi diszfunkcióval [11-13]. Így a neuronok számának növelése és a neurogenezis javítása döntő fontosságú az öregedésgátló kezelés szempontjából. R. Meyer, a flavonoidokban és más bioaktív anyagokban gazdag növény [1, 3-6], számos olyan funkcióval rendelkezik, amelyeket még nem írtak le. Ebben a tanulmányban R. Meyer antocianinok elősegítették az NSC proliferációját és fokozták a neuroszférák kialakulását egységes morfológiával. Az R. Meyer antocianin kezelés javította a sejtes öregedési fenotípust is, csökkent ROS és öregedéssel kapcsolatos P16nk4 génexpressziós szinttel, megnövekedett DNS-szintézis fázissal és hosszabb telomerekkel.puritánok c-vitaminEzenkívül az immunfluoreszcencia festési eredmények azt mutatták, hogy az R Meyer antocianinok stimulálták a neuronok képződését. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az R. Meyer antocianinok öregedésgátló hatással vannak az mNSC-kre, és közvetlenül elősegíthetik a neuronok in vitro kialakulását is. Ezenkívül a kognitív hanyatlás szorosan összefügg az öregedéssel [22, 23]. MWM eredményeink azt mutatták, hogy az R. Meyer antocianinok intragasztrikus beadása javította a térbeli memóriát és a tanulási képességeket az öregedő egerekben, valamint növelte a növekedést

5. ábra. A tumor nekrózis faktor (TNF) - a alapvető szerepet játszik a naringenin (Nar) által közvetített öregedésgátló hatásokban. (A) Az egérvérben lévő génexpressziók összefoglalása, az RNS-seq által meghatározottak szerint. vagy Hőtérkép, amely differenciálisan expresszálódó géneket (DEG) mutat a vérben a kontrollált és a Nar-nal kezelt egerek között. A DEG-ket >2,0-s vagy<0.5. (c)bar="" graph="" showing="" the="" major="" correlated="" signaling="" pathways.="" (d)="" heatmap="" showing="" degs="" in="" the="" tnf="" signaling="" pathway="" (e)="" plasma="" tnf-a="" levels="" determined="" by="" enzyme-linked="" immunosorbent="" assay.="" (e)="" p16hka="" gene="" expression="" levels,="" as="" determined="" by="" qrt-pcr.="" data="" are="" presented="" as="" the="" mean="" ±="" sd="" of="" three="" independent=""><><><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group.="" nsc="" and="" neuronal="" numbers="" in="" the="" hippocampus="" of="" aging="" mice.="" these="" results="" suggest="" that="" r.="" meyer="" anthocyanins="" may="" enhance="" cognitive="" function="" by="" increasing="" nsc="" proliferation="" and="">

A metabolomikus elemzés alkalmazása az R. Meyer-antocianinok specifikus összetételének vizsgálatára azt mutatta, hogy a Nar fontos flavonoid metabolit lehet. Korábban arról számoltak be, hogy a Nar enyhíti a szívizomsejtek öregedését [31], javítja a bélrendszer metabolikus kapacitását [32], és gyulladáscsökkentő [33] és rákellenes [34] hatásokat fejt ki. A Nar hatása azonban az NSC-kre az öregedés során továbbra sem ismert. Az R. Meyer antocianinok öregedésgátló hatásainak feltárásához további tanulmányokat végeztünk a Nar használatával. A 6,8 ug/ml Nar-lal végzett kezelés növelte a sejtek életképességét, csökkent a P16ink4a génexpresszió, meghosszabbította a telomereket és elősegítette az NSC differenciálódását neuronokká in vitro. A Nar sejtproliferációra gyakorolt hatásának további értékelése érdekében immunfluoreszcens vizsgálatokat végeztünk. Az eredmények azt mutatták, hogy a Nar-kezelés növelte mind a Ki67-pozitív sejtek számát, mind a MAP2-pozitív sejtek arányát, ami arra utal, hogy a Nar elősegítheti a neurogenezist. Ezenkívül a Nar tanulásra és memóriára gyakorolt hatásait öregedő egerekben is értékelték. Az MWM teszt eredményei következetesen kimutatták, hogy a Nar kezelés fokozza a térbeli leumingot az öregedő egerekben. Érdekes módon az RNS-seq elemzés kimutatta, hogy a Nar befolyásolhatja az öregedést a TNF jelátviteli útvonalon keresztül, különösen azáltal, hogy az öregedő egerek vérében a TNF-a expressziót szabályozza. Az ELISA vizsgálatok azt is jelezték, hogy a Nar kezelés csökkentette a plazma TNF-a szintjét a kontroll öregedő egerekhez képest. A TNF-a kulcsfontosságú tényező a TNF jelátviteli útvonalában, és szorosan kapcsolódik a kognitív öregedéshez. Funkciói közé tartozik a hippokampális szinapszisok patológiás változásainak elősegítése [29] és a prekurzor sejtek proliferációjának gátlása [35]. A megváltozott TNF-szint a depresszió, a skizofrénia, a bipoláris zavar és az Alzheimer-kór kognitív károsodásával jár [30,36,37]. Pontosabban, a TNF-a-t az Alzheimer-kórban szenvedő betegeknél szabályozzák [38].

Összefoglalva, tanulmányunk azt mutatja, hogy az R. Meyer antocianinok javítják az öregedés hatásait az NSC-kben a Nar-n keresztül, amely in vivo csökkenti a TNF-a szintet és javítja az öregedő egerek megismerését. Eredményeink együttesen új stratégiát nyújtanak a klinikai kezelések fejlesztésére, amelynek célja az R.Meyer antocianinok gyógyászati értékének nagyobb mértékű megvalósítása.

ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK

Kísérleti állatok

Ezt a tanulmányt a Tongji Egyetem Állatgondozó Bizottsága hagyta jóvá, és az intézményi iránymutatásoknak megfelelően végezték el. Az R. Meyer antocianinokat 2 hónapig intragasztrikusan kezelték, a 12 hónapos egereket pedig c57BL/6 alapon tartották karban. Nart a caudalis vénába fecskendezték 1 hónapos 12 hónapos egerek számára, amelyeket a C57BL/6 háttéren tartottak. A kontroll egereknek azonos térfogatú foszfátpufferes sóoldatot (PBS) kaptunk.

R. Meyer antocianinok és Nar előkészítése

Az R. Meyer gyümölcsöt (500 g) szövethomogenizátor segítségével homogenizáltuk, és 0,1% hvdroklórsavat tartalmazó 1 literes metanolban szuszpendáltuk. Az ultrahangos extrakciót háromszor végeztük 30 percig szobahőmérsékleten. A kivonatokat egyesítettük, és a metanolt csökkentett nyomás alatt koncentráltuk, hogy R Meyer kivonatokat kapjunk. A kivonatot tovább tisztítottuk AB-8 makroporózus gyantával, hogy növeljük az antocianintartalmat.

Naringenin(C15H1205; MW:272,25; tisztaság: ≥98%; HPLC minőségű) a Chengdu Push Biotechnology Co. Ltd.-től (Szecsuán, Kína) vásárolták, és 2°C-8°C-on tárolták száraz környezetben, fény nélkül. A törzsoldat koncentrációja 100 mM volt dimetil-szulfoxidban (DMSO). A végső DMSO-koncentráció nem haladta meg a 0,1%-ot a táptalajban.

Neuroszféra és differenciálódási vizsgálatok

Az NSC-k az egér SVZ-ből származnak. Az egereket érzéstelenítés után áldozták fel, és az SVZ-t gondosan szétvágták és egyetlen sejtté bontották 0,4 U / ml papainnal (Imogen, Alexandria, VA, USA; Macskaszám: LS003126). Az NSC-ket 10 cm-es edényekben tálaltuk, amelyek 10 ml NSC bazális közeget tartalmaztak 10 ng/ml EGF-vel (PeproTech,Cranbury,NJ, USA; Macskaszám:AF-100-15) és 10 ng/ml FGF (PeproTech, Cranbury, NJ, USA; Macskaszám:AF-100-18B). A neuroszférákat 5 naponta átmenték. A frissen disszociált pass-2 neuroszférákból származó NSC-ket lamininra vetették(Gibco, Gaithersburg, MD, USA; Macskaszám:23017015)és poli-L-ornitin-hidrobromid (Poly-L; Sigma Aldrich, St Louis, MO, EGYESÜLT Államok; Macskaszám: P3655) bevont üvegcsúszdák NSCBasalMediumban differenciálódási kiegészítők nélkül. A differenciált sejteket immunfolináltuk Tu1(béta-tubulin II; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Egyesült Államok; Macskaszám:480011), MAP2 (Thermo Fisher Scientific, Macskaszám: MA5-12826) és gliafibrilláris savas fehérje (GFAP; Thermo Fisher Scientific, Macskaszám. PA5-16291), majd 4'6-diamidino-2-fenilindollal (DAPI; Thermo Fisher Scientific, Macskaszám: D1306). A diákat Olympus BX53 mikroszkóppal (Olympus, Madison, WI, USA) vizsgáltuk. A TuJ1- és MAP2-pozitív sejtek kvantifikációját három független kísérletből származó címkézett sejtek megszámlálásával végeztük. A statisztikai elemzést páratlan t-teszttel végeztük.

Ez a cikk a www.aging-us.com AGING 2020, Vol. 12, No. 17 című könyvből származik.