Az E-vitamin és az etil-tioszulfanilát komplex hatásának antioxidáns hatása a patkányok májában és veséjében króm(VI) által kiváltott oxidatív stressz esetén
Mar 25, 2022
Bohdan Kotyk1,*, Ruslana Iskra1, Vira Lubunets2
Absztrakt:Vizsgálatunk célja az volt, hogy megvizsgáljuk az E-vitamin és az etil-tioszulfanilát (ETS) komplex hatásának hatékonyságát és előnyeit a máj pro/antioxidáns rendszerének, ill.vesepatkányok Cr(VI)-indukálta oxidatív stressz körülményei között. A patkányokat 8 csoportra osztották.
A csoportok: I (kontroll) - fiziológiás oldat (150 ul) 7 napig; II – olajos oldat (1 ml) 14 napig; III, IV, VII, VIII - K2Cr2O7 (2,5 mg Cr(VI)/testtömeg-kg) 7 (III, IV) és 14 (VII, VIII) esetén; V - E-vitamin (20 mg/ttkg) 14 napig; VI, VII, VIII - E-vitamin komplexben ETS-sel (100 mg/ttkg) 14 napig. Az eredmények szerint a K2Cr2O7 Cr(VI) által kiváltott oxidatív stresszt okozott a lipidperoxidációs (LP) folyamatok aktiválása miatt. A 7 napig tartó Cr(VI) hatás mindkét szövetben az antioxidáns védelmi rendszer (AOS) kompenzációs aktiválását okozta. A Cr(VI) hosszabb hatását azonban az AOS enzimaktivitás és a GSH tartalom kimerülése kísérte. Az E-vitamin és az ETS komplex hatása mindkét patkányszövetben csökkentette a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz intenzitását. Eredményeink az E-vitamin és az ETS pozitív antioxidáns tulajdonságait jelzik Cr(VI) toxicitás mellett.
Kulcsszavak:patkányok; antioxidáns rendszer; oxidatív stressz; E-vitamin; etil-tioszulfanilát; kálium-bikromát; peroxidáció.
Kapcsolatfelvétel:ali.ma@wecistanche.com
Kattintson a tartályba való belépéshezurduvesére
1. Bemutatkozás
A króm aktív ipari és mezőgazdasági felhasználása a krómtartalmú vegyületek jelentős felhalmozódásához vezetett a környezetben [1-3]. A krómvegyületek az egyik leggyakoribb szennyező anyag a vízi és szárazföldi ökoszisztémákban [4-6]. A Cr-tartalmú vegyületek aktív felhasználását igénylő fő iparágak a bőrcserzés, a favédőszerek, a fémek ipari hegesztése, a krómozás, a kromát és a ferro-kromát gyártása [1]. A króm egy természetes fém, többnyire két különböző formában található meg: három vegyértékű króm (Cr(III)) és hat vegyértékű króm (Cr(VI)). A Cr(III) a króm oxidációjának utolsó szakasza. A króm háromértékű formája minden biológiai rendszerben elterjedt, termodinamikailag stabil, és erős koordinációs vegyületeket képez. A hat vegyértékű forma (Cr(VI)) erős toxikus és rákkeltő tulajdonságokat mutat, és általában kromátok (CrO42-) és dikromátok (Cr2O72-) oxigéntartalmú vegyületeiként mutatják be [1,7]. A Cr(VI)-vegyületek nagy toxicitása azzal a képességgel függ össze, hogy könnyen felszívódnak és a szulfátcsatornákon keresztül gyorsan bejutnak a sejtekbe [8,9]. Ezután a Cr(VI) a sejtbe való behatolás után több lépésben Cr(III)-vá redukálódik. A Cr(VI) redukciós folyamata során nagyszámú reaktív oxigénfaj (ROS) keletkezik [10,11]. A ROS képződés aktiválása viszont oxidatív stressz és szövetkárosodás kialakulásához vezet. A Cr(VI) redukciós folyamatokat citotoxicitás, genotoxicitás, karcinogenitás és a p53 szabályozó génmoduláció révén apoptózis is kíséri [12- 15]. Az AOS rendszer a fő akadály a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz elleni küzdelemben [9]. Az AOS rendszer enzimatikus és nem enzimatikus komponensei, mint például a GSH és a NADPH-függő flavoenzimek, serkentik és felgyorsítják a nagyon mérgező Cr(VI) redukcióját sokkal kevésbé toxikus Cr(III)-ra. Az olyan enzimek viszont, mint a SOD, CAT, GP és a nem enzimatikus GSH tripeptid, sok ROS-t semlegesítenek, amely a Cr(VI) redukciója során képződik [16,17]. A hosszan tartó Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz azonban az AOS rendszer erőforrásainak kimerüléséhez vezet, és sejt-, szövet- és oxidatív szervkárosodást vált ki a megnövekedett prooxidáns folyamatok következtében [9,18]. A Cr(VI)-tartalmú vegyületek, mint például a kálium-dikromát (K2Cr2O7) 8 mg/ttkg dózisban akut hepatotoxicitást okoznak patkányokban a fokozódó nekrotikus és gyulladásos folyamatok, valamint az állatok májszövetében az AOS rendszer erőforrásainak kimerülése miatt [19] ]. A K2Cr2O7 egyszeri szubkután injekciója 10 mg/kg dózisban szintén Cr(VI)-indukálta oxidatív stresszt és a patkánymájszövet károsodását eredményezi, amit degeneratív változások követnek a hisztoarchitektúrában és a máj sinusoidjainak kitágulása. Hasonló dózisú Cr(VI) degeneratív elváltozásokat okoz a tubuláris hámsejtekben, a tubulusok cisztás tágulását, az erek torlódását, a hialin gipszeket és a Bowman-tér kitágulását.vesepatkányok [14]. A K2Cr2O7 által okozott hepato- és nefrotoxicitást akut Cr(VI)-indukálta oxidatív stressz kíséri. A Cr(VI) által kiváltott toxicitás különösen serkenti a ROS képződését, a peroxidációs folyamatok hiperaktiválását, az antioxidáns enzimek aktivitásának gátlását, a celluláris GSH csökkentését, valamint a nem fehérje szulfhidril csoportok kimerülését és a Cr(VI) felhalmozódását. máj ésvesepatkányok és egerek [14,20,21]. Úgy gondolják, hogy az antioxidáns állapot fenntartása fontos tényező a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz negatív hatásainak csökkentésében és megelőzésében [14,22,23]. A Cr(VI) semlegesítését enzimes redukcióval Cr(V)-vé, majd ezt követően Cr-tartalmú sókká alakítjuk GR és NADPH részvételével. A nem enzimes antioxidánsok, mint például az E-vitamin, az aszkorbinsav, az N-acetilcisztein, a fokhagymapor és a GSH, képesek csökkenteni a K2Cr2O7 által okozott oxidatív károsodást [24,25]. Az E-vitamint tartják a leghatékonyabb zsírban oldódó, nem enzimes antioxidánsnak, amely megvédi a sejtmembránt a gyökök által kiváltott peroxidációtól, serkenti az antioxidáns enzimek aktiválódását, valamint csökkenti a nehézfémek által kiváltott toxicitás okozta oxidatív stressz intenzitását. Az E-vitamin 100, illetve 125 mg/ttkg dózisban 2, illetve 6 hétig tartó hatása csökkenti a K2Cr2O7- által kiváltott peroxidációs folyamatok szintjét, és helyreállítja a GSH-tartalmat és az SOD-aktivitást a májban, ill.vesepatkányok [14,19,22]. Az E-vitamin 125 mg/ttkg dózisban antioxidáns és gyulladásgátló tulajdonságokkal is rendelkezik, és csökkenti a Cr(VI) által kiváltott toxicitás intenzitását a májban és a májban.vesepatkányok [22].
Az etil-tioszulfanilát a tioszulfonát vegyületek osztályába tartozik. A tioszulfonátok a fokhagymából, hagymából, brokkoliból és karfiolból nyert természetes biológiailag aktív szerves kénvegyületek szintetikus analógjai. A tioszulfonátok stabilabbak, mint természetes analógjaik, biológiai tulajdonságok széles skáláját mutatják, és alacsony toxicitás jellemzi őket. Sok kutató tanulmányozta a tioszulfonátok rákellenes, gyulladáscsökkentő, gombaellenes, antimikrobiális és immunmoduláló tulajdonságait az elmúlt években. A tioszulfonátok antioxidáns tulajdonságairól azonban nem áll rendelkezésre elegendő tanulmány. Ismeretes, hogy a tioszulfonátok képesek módosítani a transzkripciós faktorokat, amelyek részt vesznek az AOS rendszer gének aktiválásában [26,27]. Ezeknek a vegyületeknek az antioxidáns hatása abban nyilvánul meg, hogy képesek csökkenteni a GSH-készlet kimerülésének intenzitását és a tiobarbitursav-reaktív anyagok (TBARS) képződését patkánymájban oxidatív stressz esetén [28]. Nagyon keveset tudunk a tioszulfonátok antioxidáns tulajdonságairól a nehézfémek toxikus hatása alatt. A természetes szerves kénvegyületek azonban pozitív antioxidáns hatást mutattak a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz ellen [23,29-31]. Korábbi vizsgálataink azt is jelzik, hogy az etil-tioszulfanilát antioxidáns tulajdonságokkal rendelkezik, és részben kiküszöböli a K2Cr2O7-indukált oxidatív stressz negatív hatásait patkánymájszövetben [32].
Ezért, tekintettel az E-vitamin, valamint a tioszulfonátok és természetes analógjaik pozitív antioxidáns tulajdonságaira, vizsgálatunk célja az E-vitamin és az etil-tioszulfanilát komplex hatásának a hatékonyságának és előnyeinek vizsgálata volt a máj pro/antioxidáns rendszerének állapotára. ésvesepatkányok Cr(VI)-indukálta oxidatív stressz körülményei között.
2. Anyagok és módszerek
Az „Anyagok és módszerek” részt a korábbi kiadványunkkal [32] analóg módon készítettük el.
2.1. Kísérleti terv.
Munkánk során 40 Wistar hím patkányt használtunk, amelyek súlya 130- 140 g. 8 állatcsoportot (csoportonként 5 patkány) alakítottunk ki: 1 kontrollcsoportot és 7 kísérleti csoportot. Minden patkányt standard körülmények között tartottunk, és ad libitum kaptak standard takarmányt és ivóvizet.
Az ép kontroll patkányok az I. csoportban 7 napon keresztül naponta egyszer fiziológiás sóoldatot (150 µl) kaptak intraperitoneálisan. A III. és IV. kísérleti csoportba tartozó állatokat 150 µl fiziológiás sóoldatban oldott K2Cr2O7-tel (Cr(VI) koncentráció 2,5 mg/ttkg) intraperitoneálisan kezeltük 7, illetve 14 napon keresztül.
A II. csoport intragasztrikusan 1000 µl napraforgóolaj-oldatot (Oleina védjegy; DSTU 4492: ISO 14024) kapott naponta egyszer 14 napon keresztül, majd közvetlenül ezt követően fiziológiás sóoldatot (150 µl) adtunk intraperitoneálisan naponta egyszer 7 napon keresztül.
V. csoport: naponta intragasztrikus injekciót kaptak E-vitamin olajos oldatával 20 mg/ttkg dózisban 14 napon keresztül, majd közvetlenül ezt követően fiziológiás sóoldatot (150 µl) adtunk intraperitoneálisan naponta egyszer 7 napon keresztül.
VI. csoport: naponta intragasztrikus injekciót kaptak E-vitamin [20 mg/ttkg] és etil-tioszulfanilát (ETS) [100 mg/ttkg] olajos oldatának komplexével 14 napig, majd közvetlenül ezt követően naponta intraperitoneálisan 150 µl fiziológiás sóoldatot 7 napig.
VII. csoport/VIII. csoport: E-vitamin [20 mg/ttkg] és ETS [100 mg/ttkg] intragasztrikusan komplex olajos oldatát kapott 14 napig, majd közvetlenül ezt követően naponta 2,5 mg-os K2Cr2O7-et kapott intraperitoneálisan. Cr(VI)/ttkg/nap 7 napon keresztül/14 napon keresztül.
Munkánk során az állatokkal végzett összes manipuláció összhangban volt a kísérleti és egyéb tudományos célokra felhasznált gerinces állatok védelméről szóló európai egyezmény (Strasbourg, 1986) és az „Állatkísérletek közös etikai alapelvei” (Ukrajna, 2001) rendelkezéseivel. A kutatások végzésére engedélyt kaptak a lvivi NAAS Állatbiológiai Intézet Bioetikai Bizottságától (80. számú jegyzőkönyv).
A munka az újonnan szintetizált ETS (etil-4- aminobenzol-tioszulfonát) vegyület E-vitaminnal komplexben történő hatásait vizsgálta a patkány testére. Az ETS-t a "Lviv Polytechnic" Nemzeti Egyetem biológiailag aktív vegyületek technológiai, gyógyszerészeti és biotechnológiai tanszékén szintetizálták a cikkben részletesen leírt protokoll szerint [33, 34].
Az állatok tiopentális érzéstelenítésben történt lefejezése után aveseösszegyűjtötték. Minden eljárás bekapcsolvavese4 fokon végezték. A kutatási anyag patkányok vesehomogenizátumai voltak, amelyeket 0,05 M Tris-HCl pufferen (pH 7,4) 1 g szövet és 9 ml puffer (1:9, tömeg/térfogat) arányában készítettem. ), majd 15 percig 1000 g-vel centrifugáltuk. A kapott felülúszókban centrifugálás után meghatároztuk a GSH-tartalmat, a peroxidációs termékek szintjét és az antioxidáns enzimaktivitást.
2.1.1. Állatcsoportok.
Az állatcsoportokat a következő séma szerint hasonlítottuk össze (1. ábra). Az I. csoport ép kontroll a III. és IV. kísérleti csoporthoz képest, amelyek nem kaptak olajos oldatot. A II. csoport kontrolljai az V., VI., VII. és VIII. kísérleti csoporthoz képest, amelyek olajos oldatot kaptak. A III. és IV. kísérleti csoport indikátorainak százalékos ( százalékos ) változását rögzítettük az I. csoporthoz (ép kontroll) viszonyítva. Az V., VI., VII. és VIII. kísérleti csoport indikátorainak százalékos változását is rögzítettük a II. csoporthoz (olajkontroll) viszonyítva. A végső szakaszban a III/IV-es kísérleti csoportok indikátorainak százalékos változását elemeztük az I. csoporthoz (ép kontroll) képest, és összehasonlítottuk a VII/VIII-as kísérleti csoportok indikátorainak százalékos változásával a II. csoporthoz (olajkontroll) viszonyítva.
2.2. Feldolgozás.
2.1.1. Az LHP koncentrációja.
Az LHP (lipid-hidroperoxidok) szint mérése nem konzisztens a triklór-ecetsav által kiváltott fehérjekicsapás és az etanollal indukált lipid módszereivel.
kitermelés [35]. Az ammónium-tiocianát kölcsönhatásba lép a lipid etanol kivonatokkal, és elindítja a színes reakciót. A színes termék abszorbanciafelvételét spektrofotometriásan (λ 480 nm) végeztük. Az LHP szintet (SU/g szövet) a kontroll és a kísérleti minták különbségeként számítottuk ki.
2.2.2 A TBARS koncentrációja.
A TBARS (tiobarbitursav reaktív anyagok) koncentrációjának értékelése a malondialdehid és a tiobarbitursav kölcsönhatás elvén alapul, savas körülmények között és magas hőmérsékleten [35]. A malondialdehid és a tiobarbitursav kölcsönhatás eredménye a színreakció. A színes termék abszorbancia felvételét spektrofotometriásan végeztük (λ 535 nm és λ 580 nm), és a TBARS szintet nmol MDA/g szövetben számítottuk ki.
2.2.3. A háziorvos tevékenysége.
A GP (glutation-peroxidáz) enzimaktivitás mérését GSH jelenlétében végezzük tercier butil-hidroperoxid hozzáadása előtt és után [35]. Értékelő
a GP tevékenység a GSH oxidációs sebesség elvén alapul. A GSH-molekula SH-csoportjai 2-nitrobenzoesav jelenlétében oxidálódnak. A dinitrofenil-anion a GSH oxidációja következtében képződik. A színes termék abszorbancia felvételét spektrofotometriásan (λ 412 nm) végeztük, és a GP aktivitást nmol GSH/perc értékben számítottuk ki. × mg fehérje.
2.2.4. GR tevékenysége.
A GR (glutation-reduktáz) enzimaktivitás mérését oxidált glutation és NADPH jelenlétében végeztük [35]. A GR aktivitás értékelése az oxidált glutation redukciós sebesség elvén alapul. Az abszorbancia felvételt spektrofotometriásan (λ 340 nm) végeztük 1 percig 37 °C-on. Az extinkciós csökkenés mértéke a reakció intenzitásának mutatója. A GR aktivitást µmol NADPH/perc egységben számítottuk ki. × mg fehérje.
2.2.5. A GSH koncentrációja.
A GSH (redukált glutation) szintjének értékelése a dinitrofenil-anion képződés (színes termék) elvén alapul, miután a 2-nitrobenzoesav a GSH-molekula SH-csoportjához kötődik [36]. A GSH koncentráció értéke a színreakció intenzitásától függ. A színes termék abszorbancia felvételét spektrofotometriásan (λ 412 nm) végeztük, és a GSH-tartalmat mmol GSH/g szövetben számítottuk.
2.2.6. SOD tevékenysége.
A SOD (szuperoxid-diszmutáz) enzimaktivitás mérését NADH és fenazin-metoszulfát jelenlétében végeztük [36]. Az SOD aktivitás értékelése a nitrokék tetrazólium redukció elvén alapul. A nitroblue tetrazólium redukciós folyamatának gátlásának intenzitása az enzimaktivitás intenzitását jelzi. Az abszorbancia felvételt spektrofotometriásan végeztük (λ 540 nm), és az SOD aktivitást standard egységekben számoltuk ki 1 mg fehérjére vonatkoztatva.
2.2.7. A CAT tevékenysége.
A CAT (kataláz) enzimaktivitás mérését molibdénsók jelenlétében végeztük, amelyek kölcsönhatásba lépnek a hidrogén-peroxiddal [36]. A reakció eredményeként színes termék képződik. A színes termék abszorbancia rögzítését spektrofotometriásan végeztük (λ 410 nm), és a CAT aktivitást mmol/perc × 1 mg fehérje egységben számítottuk ki.
2.2.8. Fehérje koncentráció.
Az összfehérje koncentrációját a szöveti homogenizátumokban Lowry-módszerrel [37] mértük a "Simko LTD" (Ukrajna, Lviv) kittel. Az összes abszorbanciaérték mérését "Unico" 1205 (USA) spektrofotométeren végeztük.
2.3. Statisztikai analízis.
Minden kísérleti adatot statisztikailag elemeztünk Microsoft Excel szoftverrel, egyutas varianciaanalízis (ANOVA) és Tukey-Kramer teszt segítségével. Minden kísérleti értéket átlagértékként (M) ± standard hiba (SEM) számítottunk, és statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, ha P <>
3. Eredmények és megbeszélés
Az „Eredmények és megbeszélések” részt korábbi kiadványunkkal [32] analóg módon készítettük el.
3.1. Oxidatív stressz markerek.
Megállapítottuk, hogy a kálium-dikromát 7 és 14 napig tartó intraperitoneális adagolása az oxidatív stressz markerek tartalmának növekedéséhez vezet hím patkányok máj- és veseszövetében. A K2Cr2O7 expozíció 2,5 mg Cr(VI)/ttkg dózisban 7 (III csoport) és 14 napig (IV csoport) az állatok májában jelentős TBARS-tartalom növekedést okozott az I. csoporthoz (kontroll) képest. 69, illetve 75 százalék (1. táblázat). A III. és IV. kísérleti csoportba tartozó patkányok veseszövetében is szignifikánsan megemelkedett a TBARS szint a kontrollhoz képest, 41, illetve 46 százalékkal. Hasonló dózisú Cr(VI) az LHP koncentráció szignifikáns, 112, illetve 127%-os növekedését eredményezte a III. és IV. kísérleti csoport patkánymájában az I. csoporthoz képest. Az LHP szint is szignifikánsan megemelkedett patkány veseszövetében 7 (III csoport) és 14 napos (IV csoport) Cr(VI) hatás után a kontrollcsoporthoz képest 39, illetve 56 százalékkal.
A patkányok májában és veséjében a peroxidációs folyamat intenzitásának növekedésének oka a Cr(VI) által kiváltott hidroxil- és szuperoxid gyökök képződésének hiperaktivációja. A Cr(VI)-indukált ROS képződés károsítja a sejtmembrán lipid komponenseinek szerkezetét, és ennek következtében a TBARS-tartalom növekedését idézi elő [19,20,38]. A Cr(VI) redukció közbenső termékei Fenton-szerű reakciókba lépnek, kölcsönhatásba lépnek a hidrogén-peroxiddal, és hidroxilgyököket indítanak el [19]. A szakirodalom szerint a Cr(VI) a NADPH-oxidáz [39] és a xantin-xantin-oxidáz enzimkomplexek [40] aktiválásával fokozza a szuperoxid gyökök képződésének intenzitását.
Az E-vitamin (V csoport) és az E-vitamin komplexben ETS-sel (VI. csoport) 14 napon keresztül történő intragasztrikus beadása a TBARS-tartalom jelentős csökkenését eredményezte az állatok májában a II. csoporthoz képest, rendre 13, illetve 16 százalékkal (táblázat). 1). Az V. és VI. kísérleti csoport patkányainak veseszövetében a TBARS szintjének enyhe csökkenése is megfigyelhető volt a II. csoporthoz képest, 5, illetve 3 százalékkal. Az LHP-tartalom szignifikánsan csökkent az V. és VI. kísérleti csoportban patkánymájban a II. csoporthoz képest, rendre 12, illetve 16 százalékkal. Hasonló kísérleti csoportok patkányveseszövetében is szignifikáns, 10, illetve 8 százalékkal csökkent az LHP szint a II. csoporthoz képest.
A patkánymáj TBARS-tartalma a II. csoport indikátorainak szintjén maradt 14 napos, a Cr(VI) következő aktinjával végzett komplex E-vitamin és ETS előkezelés után 7 napig (VII. csoport). Az E-vitamin és az ETS korábbi komplex hatása a Cr(VI) következő, 14 napon át tartó hatásával a VIII. csoport májszövetében 23 százalékkal megnövekedett TBARS-szintet eredményezett a II. csoporthoz képest. Azonban a VIII. csoportba tartozó állatok májszövetében a TBARS-tartalom növekedése (23 százalék) a II. csoporthoz képest 52 százalékkal alacsonyabb volt, mint a IV. csoportba tartozó patkánymáj TBARS-tartalmának százalékos növekedése (75 százalék) az I. csoporthoz képest. .
A TBARS koncentrációja a patkány veseszövetében 14 napos komplex E-vitamin és ETS előkezelés után a Cr(VI) következő hatására 7 (VII csoport) és 14 napig (VIII csoport) nőtt a II csoporthoz képest 21 és 31 százalék, ill. Ugyanakkor a VII (21 százalék) és VIII (31 százalék) csoportba tartozó patkányok veséjében a TBARS-tartalom növekedésének intenzitása a II. csoporthoz képest 25 és 21 százalékkal alacsonyabb volt, mint a TBARS-szint százalékos növekedése a csoportok vesehomogenizátumaiban. III (46 százalék ) és IV (52 százalék ) az I. csoporthoz képest.
A Cr(VI) következő aktinjával 7 napig (VII. csoport) és 14 napig (VIII. csoport) végzett komplex előkezelés E-vitaminnal és ETS-sel a patkányok májszövetében 17 és 52 százalékkal növelte az LHP-tartalmat a II. csoporthoz képest. , ill. Ugyanakkor a VII (17 százalék) és VIII (52 százalék) csoportba tartozó patkánymáj LHP-szintjének növekedése a II. csoporthoz képest 97 és 75 százalékkal alacsonyabb volt, mint a III. csoportba tartozó máj homogenizátumok LHP-tartalmának százalékos növekedése (114 százalék). ) és IV (127 százalék ) az I. csoporthoz képest.
Az LHP koncentrációja a VII. és VIII. csoportba tartozó állatok veséjében a II. csoporthoz képest 16, illetve 31 százalékkal emelkedett.
Azonban a VII (16 százalék) és VIII (31 százalék) csoportba tartozó patkányvesékben az LHP-tartalom növekedése a II. csoporthoz képest 23 és 25 százalékkal alacsonyabb volt, mint a III. csoport veseszövetének LHP-szintjének százalékos növekedése (39 százalék). ) és IV (56 százalék) az I. csoporthoz képest.
Az irodalmi adatok arról számolnak be, hogy az E-vitamint hatékony antioxidáns tulajdonságok jellemzik, gátolja a lipidperoxidációs folyamatokat, valamint csökkenti a ROS-szintet in vitro és in vivo [22]. Az E-vitamin orális adagolása csökkenti a Cr(VI) által kiváltott hepatotoxicitást és csökkenti a TBARS-tartalmat a patkányok májában [19]. A patkánymáj szövetében a peroxidációs folyamatok intenzitásának csökkenésének oka az ETS molekula szerkezeti komponensének számító szulf másik csoport antioxidáns tulajdonsága is lehet [32,42,43]. Ez a funkcionális csoport olyan tulajdonságokkal rendelkezik, hogy csökkenti az LHP-tartalmat [41]. Az S-alkil-tioszulfonátok, amelyek az ETS szintetikus szerkezeti analógjai, gátolják a xantin-xantin-oxidáz rendszer aktivitását és a ROS képződését [27]. Az E-vitamin a citoplazma és a sejtmembrán fontos alkotóeleme. Az E-vitamin antioxidáns hatása megakadályozza a lipid autooxidáció láncreakcióinak aktiválódását a peroxil és alkoxid gyökök semlegesítése miatt. A peroxilgyökök az E-vitaminnal is gyorsabban reagálnak, mint a sejtmembrán lipidekkel [14].
Így a Cr(VI) toxikus hatása az állatok máj- és veseszövetében a TBARS- és LHP-tartalom növekedéséhez vezet. Azonban az E-vitamin korábbi hatása az ETS-re csökkenti a peroxidációs folyamatok intenzitását patkányok májában és veséjében a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz hatására.
3.2. Glutation antioxidáns rendszer.
A GP aktivitása patkányok májszövetében a Cr(VI) hatására 7 (III csoport) és 14 napig (IV csoport) az I. csoporthoz képest 55, illetve 15 százalékkal nőtt (táblázat). 2).
A kálium-dikromát 7 napig tartó intraperitoneális adagolása (III. csoport) 12%-kal növelte a sejtes GSH-tartalmat a patkánymájszövetben a kontrollhoz (I. csoport) képest. A GSH szint nem tért el a kontroll értékektől a III. csoportba tartozó állatok veséjében (K2Cr2O7 14 nap). A patkányok májában és veséjében azonban 14 napos Cr(VI)-hatás után (IV. csoport) a GSH-készlet 34%-kal, illetve 36%-kal csökkent az I. csoporthoz képest. A veseszövet Cr(VI) által kiváltott toxicitással szembeni nagy érzékenysége lehet az oka annak, hogy a háziorvos inaktiválja a IV. csoportba tartozó állatok veséjét [1, 16].
A szerzők azt is javasolják, hogy a GP inaktiválásának mechanizmusa Cr(VI) toxicitás esetén úgy valósul meg, hogy a Cr(VI)-t az enzim aktív helyéhez kötjük, és a kofaktorok-fémeket közvetlenül kiszorítják az aktív helyről [25].
A GR aktivitása nem változott a III. csoportba tartozó állatok májában a kontrollhoz képest. A 14 napos Cr(VI) expozíció azonban az I. csoporthoz képest 17 százalékkal csökkentette a GR-aktivitást állatok patkánymájszövetében. 14 (IV csoport) nap K2Cr2O7 injekció az I. csoporthoz képest 45, illetve 43 százalékkal.
Feltételezzük, hogy a Cr(VI) által kiváltott GSH-tartalom csökkenés oka lehet a GR-szuppresszió a patkányok mindkét szövetében [44-46]. A GSH molekulák közvetlenül közömbösítik a szabad gyököket, kulcsszerepet játszanak a sejtek antioxidáns védelmének mechanizmusában [47], és részt vesznek a Cr(VI) redukciós folyamatokban [19]. Ezért a Cr(VI) által érintett patkányok májában a GSH tartalom csökkenése a GSH molekulák intenzív felhasználásának következménye lehet a ROS és a szabad gyökök semlegesítési folyamataiban K2Cr2O7- által kiváltott oxidatív stressz körülményei között.
A szakirodalmi adatok leírják a GR-aktivitás gátlásának közvetlen mechanizmusát is a nehézfém tiol/tiolát redox párhoz való specifikus kötődése és az enzim redukált formájának katalitikus centrumában lévő hisztidin maradék miatt. Ekkor a megkötött fémion megváltoztatja a FAD izoalloxazin gyűrűjének hajlítását és mikrokörnyezetének hidrofóbságát. Ennek eredményeként a GR enzimatikus aktivitása gátolt [48].
Az E-vitamin (V csoport) és az E-vitamin komplex ETS-sel (VI. csoport) történő beadása a patkányok májában a GSH szintjét 15, illetve 21 százalékkal növelte a II. csoporthoz képest. Az E-vitamin és az ETS korábbi komplex hatása a Cr(VI) következő hatására 7 (VII. csoport) és 14 napig (VIII. csoport) a májszövet GSH-tartalmának 21 és 23 százalékos emelkedését eredményezte a II. csoporthoz képest. , ill.
Nem találtunk statisztikailag szignifikáns különbséget az állati szövetek GSH-tartalmának változásában az E-vitamin és az E-vitamin ETS-sel komplexben történő alkalmazása után. Az állatok veséiben csak a GSH-szint emelkedésének tendenciáját figyeltük meg 14 napos E-vitaminnal és ETS-vel kombinált E-vitaminnal végzett kezelés után.
A szakirodalom szerint az E-vitamin máj- és nefroprotektív tulajdonságokkal rendelkezik a Cr(VI) által kiváltott toxicitás ellen, helyreállítja a GSH-tartalmat, és támogatja az AOS enzimek aktivitását [14, 19]. A szerzők arról is beszámolnak, hogy a tioszulfonátok felelősek az antioxidánsokra reagáló elemek (ARE) Nrf2- függő aktiválásáért, amelyek indukálják az antioxidáns védelmi rendszer enzimjeit és a szabad gyökök megkötését. A tioszulfonát által közvetített ARE aktiválás serkenti a -GCS-t kódoló gének aktivitását. Valószínűleg hasonló mechanizmusok játszanak szerepet a GSH-tartalom növelésében az ETS hatására [26]. Az irodalmi adatok azt is jelzik, hogy az ARE stimuláció indukálja a GR és GS génexpressziót. Ezek az enzimek kulcsszerepet játszanak a GSH-molekulák szintézisében és redukciójában [49].
A tioszulfonát molekulák képesek mono-, di- és triszulfidokká átalakulni. Lehetséges, hogy a tioszulfonátok kéntartalmú átalakulási termékei részt vehetnek az új GSH molekulák bioszintézisében [29].
A Cr(VI) következő aktinjával 7 napig (VII. csoport) és 14 napig (VIII. csoport) végzett komplex előkezelés E-vitaminnal és ETS-sel csak a GP és GR aktivitás helyreállítására mutatott tendenciát patkánymájban. Statisztikailag szignifikáns különbséget azonban ebben az esetben nem találtunk.
Különösen az E-vitamin (V. csoport) és ETS-sel (VI. csoport) 14 napon át tartó hatása a GP 19, illetve 22%-os aktiválásához vezetett az állatok veseszövetében a II. csoporthoz képest. Az E-vitamin és az ETS korábbi komplex hatása a Cr(VI) következő, 7 napos hatásával a GP aktivitásának 38%-os növekedését okozta a VII. csoport patkányveséjében a II. csoporthoz képest (2. táblázat). Azonban a VII. csoport patkányveséjében a GP aktivitásának növekedése (38 százalék) a II. csoporthoz képest 47 százalékkal alacsonyabb volt, mint a GP százalékos hiperaktivációja a III. csoport patkányveseszövetében (85 százalék) az I. csoporthoz képest.
A patkányok veseszövetében viszont a GP aktivitását 16 százalékkal csökkentette az E-vitamin ETS-komplexben 14 napon át tartó következő hatása a Cr(VI) következő 14 napos hatására (VIII. csoport) a II. csoporthoz képest. Azonban a VIII. csoportba tartozó állatok veseszövetében a GP-aktivitás csökkenése (16 százalék) a II. csoporthoz képest 11 százalékkal alacsonyabb volt, mint a III. csoportba tartozó patkányok veséjében a GP-inaktiváció százalékos aránya (27 százalék) az I. csoporthoz viszonyítva. a GR-aktivitás növekedését (8 százalék) figyelték meg 14 napos komplex E-vitamin és ETS expozíció után a VI. csoportba tartozó állatok veseszövetében a II. csoporthoz képest.
Az E-vitamin és az ETS korábbi komplex hatása a Cr(VI) következő hatására 7 (VII. csoport) és 14 napig (VIII. csoport) a GR-aktivitás csökkenését okozta patkányvesékben a II. csoporthoz képest 17 és 36 százalékkal. illetőleg.
Ugyanakkor a GR-aktivitás csökkenésének intenzitása a VII (17 százalék) és VIII (36 százalék) patkány veseszövetben a II. csoporthoz képest 28 és 7 százalékkal alacsonyabb volt, mint a GR-aktivitás százalékos inaktivációja a III. csoportba tartozó vesehomogenizátumokban. (45 százalék ) és IV (43 százalék ) az I. csoporthoz képest.
Feltételezzük, hogy a GP aktivitás részleges stabilizálódását és a GR-szuppresszió intenzitásának csökkenését patkányvesékben a Cr(VI) hatására az E-vitamin és az ETS komplex antioxidáns hatása közvetíti. A fent leírt vizsgálatok eredményei azt mutatták, hogy a korábbi E-vitamin- és ETS-expozíció csökkentette a Cr(VI)-indukálta LP-folyamatok intenzitását patkányok veséjében. A szakirodalom szerint a TBARS, LHP és fehérje-peroxidációs termék tartalom meredek növekedése a GSH-val rokon AOS enzimek aktivitásának zavarával jár [50]. Lehetséges, hogy az E-vitamin és az ETS komplex antioxidáns hatása stabilizálja a GP és GR enzimatikus aktivitását azáltal, hogy csökkenti az LHP és TBARS tartalmat az állatok veseszövetében.
Így a K2Cr2O7 intraperitoneális injekciója 7 napig a GP enyhe kompenzációs aktiválásához és a GSH-tartalom növekedéséhez vezet patkányok májában. Enyhe GP-stimuláció is megfigyelhető 14 napos Cr(VI) hatás után. Azonban a 14 napos K2Cr2O7 expozíció a máj GSH-készletének kimerülését és a GR-aktivitás gátlását okozza. A Cr(VI) által kiváltott GSH tartalom kimerülése eliminálódik a májszövetben az E-vitamin és az ETS komplex intragasztrikus előkezelésével. A Cr(VI) 7 napig tartó hatása a GP kompenzáló aktiválásához és a GR szuppressziójához vezet patkányok veséjében. A 14 napos K2Cr2O7 expozíció viszont a GP, GR inaktivációját és a vese GSH tartalmának kimerülését okozza. Az E-vitamin és az ETS korábbi komplex hatása csökkenti a GR inaktiváció intenzitását és stabilizálja a GP aktivitását patkány veseszövetben K2Cr2O7-indukálta oxidatív stressz körülményei között.
3.3. Antioxidáns enzimek.
A kálium-dikromát intraperitoneális injekciója 7 és 14 napig a SOD aktivitásának 17, illetve 33%-os csökkenéséhez vezetett a III. és IV. csoportba tartozó állatok májszövetében az I. csoporthoz képest (3. táblázat). SOD aktivációt figyeltek meg 7 napos Cr(VI) kezelés után a III. csoportba tartozó patkányok veseszövetében (21 százalék), de a 14 napos Cr(VI) hatás a IV. csoportba tartozó állatok veséjében a SOD enzimaktivitás elnyomását okozta (18 százalék). ) az I. csoporthoz képest.
A CAT aktivitása 11 százalékkal nőtt 7 nap Cr(VI) expozíció után, de 14 napos K2Cr2O7 beadás után a CAT aktivitás 13 százalékkal csökkent a IV. csoportba tartozó patkánymájszövetben az I. csoporthoz képest. Cr(VI) ) 7 napon át tartó toxicitás a CAT aktiválásához vezetett (15 százalékkal), de a K2Cr2O7 toxicitás 14 napig csökkentette a CAT enzimaktivitást a IV. csoportba tartozó állatok veseszövetében az I. csoporthoz képest.
A szerzők arról számolnak be, hogy a III. csoportba tartozó patkányszövetekben az SOD (máj és vese) és CAT (máj) aktiválódásának oka az antioxidáns gén túlzott expressziója vagy az AOS rendszer kompenzációs mechanizmusa lehet a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz ellen [51]. ,52].
Az irodalmi adatok elemzése azt is jelzi, hogy a Cr(VI) erősen gátolja az SOD enzimaktivitást. Talán ez az adat magyarázhatja a SOD aktivitás gátlását a Cr(VI) hosszabb toxikus aktinja után IV. csoportba tartozó patkányszövetekben (Cr(VI) 14 napig). A Cr(VI) toxikus hatása a SOD enzimaktivitás gátlásához és a SOD molekulaszerkezetének károsodásához vezet a peroxidációs folyamatok felerősödése miatt [53]. A nehézfémek, köztük a Cr(VI), képesek inaktiválni az AOS enzimeket, miután közvetlenül kötődnek a megfelelő enzimek aktív helyéhez [54]. Miután az SOD inaktiválását elnyomtuk, a dismutáció az O2--t H2O2-vé alakítja. Következésképpen az O2- képződés Cr(VI) által kiváltott stimulálása és az O2- hasznosulási folyamatok gátlása lehet az AOS enzim inaktiváció oka, beleértve a CAT-t is [55].
Különösen az E-vitamin (V. csoport) és az ETS-sel kombinálva (VI. csoport) 15, illetve 33%-kal serkentette a CAT aktivitást az állatok májszövetében az I. csoporthoz képest. Valószínűleg 23, illetve 28%-kal aktiválódott a CAT V. és VI. kísérleti csoport patkányveséjében a II. csoporthoz képest (3. táblázat).
A Cr(VI) következő aktinjával 7 napig (VII. csoport) és 14 napig (VIII. csoport) végzett komplex előkezelés E-vitaminnal és ETS-sel 17 és 9 százalékkal növelte a CAT-aktivitást patkány májszövetében a II. csoporthoz képest. illetőleg. CAT aktivációt figyeltek meg a VII. csoport patkányveséjében is (13 százalék) a II. csoporthoz képest. A CAT enzimaktivitása azonban a VIII. csoportba tartozó állatok veseszövetében a II. csoport indikátorainak szintjén maradt.
Irodalmi adatok szerint az E-vitamin megakadályozza az SOD, CAT és más AOS enzimek enzimaktivitásának kimerülését egerek és patkányok szöveteiben oxidatív stressz esetén [56,57]. Az E-vitamin a patkány herékben a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stresszt is gyengíti, mivel helyreállítja az SOD és CAT aktivitást, és csökkenti az LP folyamatok intenzitását [58].
A tioszulfonátok részt vesznek az AOS génstimuláció Nrf{0}}függő aktiválásában [26]. Az Nrf2 stimulációja a CAT-t kódoló gének fokozott expressziójához vezet [59]. Az allicin, a tioszulfonátok egyik természetes analógja, részt vesz a SOD, CAT és Nrf2 expressziójáért felelős gének aktiválásában [60]. Lehetséges, hogy az E-vitamin, a tioszulfonátok és természetes analógjaik fenti antioxidáns tulajdonságai okozhatják a CAT enzimaktivitás helyreállítását a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz hatására.
4. Konklúziók
Kevéssé ismert a tioszulfonátok antioxidáns tulajdonságairól. Ugyancsak elegendő információ áll rendelkezésre a tioszulfonátok védő tulajdonságairól az állati szervezet szöveteiben a nehézfémek által kiváltott toxicitás ellen. Korábbi tanulmányaink azt mutatják, hogy az ETS előkezelés hatékony lehet a Cr(VI) által kiváltott májtoxicitás korrigálására patkányszervezetekben. Feltételezzük, hogy az ETS antioxidáns tulajdonságainak további vizsgálata antioxidáns vegyületekkel és celluláris redukálószerekkel kombinálva fontos a tioszulfonátok szerepének jobb megértéséhez a nehézfémek által kiváltott oxidatív stressz megelőzésének mechanizmusaiban.
A kapott eredmények általánosítása azt mutatja, hogy a K2Cr2O7 hatás Cr(VI) által kiváltott hepato- és nefrotoxicitáshoz vezet az LP folyamatok felerősödése és az LHP és TBARS képződés fokozódása miatt mindkét állati szövetben. Az AOS rendszer kompenzációs mechanizmusokat foglal magában a Cr(VI) által kiváltott oxidatív stressz ellensúlyozására. Ezeket a mechanizmusokat a SOD, CAT és GP aktiválása kíséri a veseszövetben, valamint a CAT, GP stimulációja és a GSH felhalmozódása patkányok májában 7 napos Cr(VI) expozíció után. A Cr(VI) hosszabb, 14 napig tartó hatása azonban az AOS rendszer erőforrásainak kimerüléséhez vezet az antioxidáns enzimek (SOD, CAT, GR, GP) inaktiválódása és a GSH-készlet kimerülése miatt az állatok máj- és veseszövetében. Az E-vitamin és az ETS komplex antioxidáns hatást fejt ki a Cr(VI) által kiváltott toxicitás ellen. Ennek a komplexnek a 14 napos intragasztrikus előkezelése a Cr(VI)-indukálta LP folyamatok csökkenésében nyilvánult meg patkányok májában és veséjében. Az E-vitamin és az ETS korábbi hatása megakadályozza a CAT és GSH kiürülését a májban, valamint megszünteti a CAT inaktiváció intenzitását, stabilizálja a GP és GR aktivitást az állatok veseszövetében K2Cr2O7-indukált oxidatív körülmények között. feszültség. Az E-vitamin különösen és az ETS-sel komplexben elnyomja az LHP emelkedését és stimulálja a CAT-t mindkét patkányszövetben. Ezen vegyületek antioxidáns hatása a máj GSH felhalmozódásához és a vese GP aktiválásához is vezet.
A kapott eredmények azt mutatják, hogy az E-vitamin és az ETS előkezelés részlegesen stabilizálta a Cr(VI) által kiváltott zavarokat az antioxidáns védekező rendszer működési mechanizmusában patkányvesékben. Ezen túlmenően, vizsgálatunk eredményei a háttér részévé válhatnak a Сr(VI) által kiváltott oxidatív stressz hatásától érintett vesék antioxidáns és prooxidáns állapotának hatékony megelőzésének és korrekciójának hatékony módszereinek kidolgozásához.
1 Biokémiai Adaptációs és Ontogenezis Az Animals Tanszék; A NAAS Állatbiológiai Intézete; Lviv; Ukrajna
2 Biológiailag Aktív Vegyületek Technológiai Tanszéke; Gyógyszerészet és biotechnológia a Lvivi Műszaki Nemzeti Egyetemen; Ukrajna
Hivatkozások
1. Sahar, HO; Sherif, MS A szőlőmagolaj javító hatása a króm által kiváltott nefrotoxicitásra és az oxidatív stresszre patkányokban. Szlovén Veterinary Zbornik Research 2020, 57, 123- 131.
2. Husain, N.; Mahmood, R. A taurin csillapítja a Cr(VI) által kiváltott sejt- és DNS-károsodást: in vitro vizsgálat humán eritrociták és limfociták felhasználásával. Amino Acids2020, 52, 35-53.
3. Tian-Guang, Z.; Ya-Li, Z.; Lei, Li.; Dong-Hai, Z. A nanoszelén antagonisztikus hatásai a brojlerek Cr(VI) mérgezésével kiváltott májkárosodásra AMPK útvonalon. Environmental Science and Pollution Research International, 2020, 27, 41585-41595.
4. Farag, AI; El-Sherry, ES Króm által kiváltott hepatotoxicitás és a szelén potenciális védő hatása felnőtt hím albínó patkányban: szövettani, immunhisztokémiai és molekuláris vizsgálat. Med. J. Cairo Univ 2020, 88, 187- 196.
5. Shih-Chang, F.; Jui-Ming, L.; Kuan-I, L.; Feng-Cheng, T.; Kai-Min, F.; Ching-Yao, Y.; Chin-Chuan, S.; Hsin-Hung, C.; Ren-Jun, H.; Ya-Wen, C.Cr(VI) ROS-mediált mitokondriális függő apoptózist indukál idegsejtekben az Akt/ERK/AMPK jelátviteli útvonal aktiválásával. Toxicology In Vitro 2020, 65, 1- 16.
6. Fedala, A.; Adjroud, O.; Abid-Essefi, S.; Timoumi, R. A szelén és a cink védő hatása a kálium-dikromát által kiváltott pajzsmirigy-megszakítás, oxidatív stressz és DNS-károsodás ellen terhes Wistar patkányokban. Environ Sci Pollut Res Int 2021
7. Ő, X.; Li, P. Felszíni vízszennyezés a Közép-Kínai löszfennsíkon, különös tekintettel a hat vegyértékű krómra (Cr6 plus ): Előfordulás, források és egészségügyi kockázatok. Exposure and Health 2020, 12, 1- 17, https://doi.org/10.1007/s12403-020-00344-x.
8. Chen, YQ; Murphy, A.; Sun H.; Costa M. A Cr(VI) által kiváltott karcinogenezis molekuláris és epigenetikai mechanizmusai. Toxicology and Applied Pharmacology, 2019, 377, 1-9,
https://doi.org/10.1016/j.taap.2019.114636.
9. Machado, AB; Caprara, JF; Diehl de Franceschi, I.; Linden, R.; Berlese, DB; Feksa, LR A vízben lévő hat vegyértékű króm krónikus expozíciójának hatásai az oxidatív stressz paramétereire Wistar patkányokban. Acta Scientiarum Biological Sciences 2019, 41, 1- 10.
10. Fatma, M.; Raghda, A.; Mohamed, M. A Rosmarinus officinalis illóolaj hepatoprotektív hatása a hat vegyértékű króm által kiváltott hematotoxicitás, biokémiai, szövettani és immunhisztokémiai változások ellen hím patkányokban. Környezettudományi és környezetszennyezési kutatások 2021, 28, 17445–17456.
11. Wang, Y.; Wang, X.; Wang, L.; Cheng, G.; Zhang, M.; Xing, Y.; Zhao, X.; Liu, Y.; Liu, J. Mitokondriális funkciókárosodás által kiváltott mitofágia Cr(VI-nek kitett csirkevesében). Biological Trace Element Research 2021, 199, 703-711.
12. Zheng, X.; Li, S.; Li, J.; Lv, Y.; Wang, X.; Wu, P.; Yang, Q.; Tang, Y.; Liu, Y.; Zhang, Z. A hat vegyértékű króm vese apoptózist és autofágiát indukál a mitokondriális dinamika egyensúlyának megzavarásával patkányokban. Ökotoxikológia és környezetbiztonság, 2020, 204, 1-9.
13. Yang, D.; Yang, Q.; Fu, N.; Li, S.; Han, B.; Liu, Y.; Tang, Y.; Guo, X.; Lv, Z.; Zhang, Z. Hexavalens króm által kiváltott szívműködési zavar a Sesn2-közvetített mitokondriális funkció és energiaellátás károsodása révén. Chemosphere 2021, 264, 1- 10.
14. Balakrishnan, R.; Satish Kumar, CS; Rani, MU; Srikanth, MK; Boobalan, G.; Reddy, AG A -tokoferol védő szerepének értékelése a krómnak a szabad gyökök által kiváltott hepatotoxicitással és nefrotoxicitással szemben patkányokban. Indian Journal of Pharmacology 2013, 45, 490-495.
15. Zhang, Y.; Bian, H.; Lehet.; Xiao, Y.; Xiao, F. A Cr(VI) által kiváltott túlaktív mitofágia hozzájárul a mitokondriális veszteséghez és a citotoxicitáshoz az L02 hepatocitákban. Biochemical Journal 2020, 477, 2607-2619.
16. Saidi, M.; Aouacheri, O.; Saka, S.; Tebboub, I.; Ailene, L. A kurkuma nefronvédő hatásai az oxidatív károsodásra és az oxidatív stresszre patkányban, króm szubkrónikus mérgezése alatt. Int. J. Biosci 2019, 15, 241-250.
17. Li, J.; Zheng, X.; Ma, X.; Xu, X.; Du, Y.; Lv, Q.; Li, X.; Wu, Y.; Sun, H.; Yu, L.; Zhang, Z. A melatonin az AMPK/Nrf2 útvonal aktiválásával védelmet nyújt a króm(VI) által kiváltott szívkárosodás ellen. folyóirata
Inorganic Biochemistry 2019, 197, 1- 10.
18. Science Direct.
19. Shati, AA Az E-vitamin javító hatása a kálium-dikromát által kiváltott hepatotoxicitásra patkányokban.Journal of King Saud University - Science2014, 6, 181- 189.
20. Khalaf, AA; Hassanen, EI; Ibrahim, MA; Tohamy, AF; Aboseada, MA; Hassan, HM; Zaki, AR
A rozmarinsav gyengíti a króm által kiváltott máj- és vese-oxidatív károsodást és DNS-károsodást patkányokban. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2020, 34, 1- 12.