A kiválasztott flavonoidok CYP3A4 enzimgátlási potenciáljának jellemzése 2. rész

kérem kattintsonoscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

Az előző kísérletekhez hasonlóan az enzimaktivitás legnagyobb csökkenését akkor figyelték meg, ha chrysint alkalmaztak inhibitorként. Az enzim reziduális aktivitása krizinnel végzett inkubáció és dialízis után 0,57 százalék volt, inkubáció és dialízis után kálium-hexacianoferráttal végzett előzetes kezelés után pedig 1,31 százalék (4. ábra).

Közvetlen (reverzibilis) gátlás esetén ez a fajta kísérlet azt mutatná, hogy a dialízis után helyreáll az enzimaktivitás. Pszeudo-irreverzibilis gátlás esetén az enzimaktivitás oxidálószeres kezelés és dialízis után állna helyre. Mivel ezek egyik elemzett esetében sem voltak ígyflavonoidoklevonható, hogy minden flavonoid a citokróm P450 3A4 irreverzibilis gátlását mutatja.

További információért kattintson ide

3. Megbeszélés

Kimutatták, hogy egyes flavonoidok gátolhatják a citokróm P450 enzimek aktivitását. Saric-Mustapic et al. [28] és Kondza et al. [29] kimutatta, hogy az acacetin, apigenin, chrysin és pinocembrin gátolja a CYP3A4 enzimet a tesztoszteron mint marker szubsztrát vizsgálatban. Mivel a CYP3A4 enzim nagy aktív hellyel rendelkezik, amely eltérő módon képes befogadni a szubsztrátokat, ajánlatos aktivitási vizsgálatokat végezni egy másik marker szubsztráttal, például nifedipinnel és midazolámmal [30]. Következésképpen a CYP3A4 aktivitás markerreakciójaként a nifedipin oxidációt alkalmaztuk, és meghatároztuk az inaktivációs kinetikai paramétereket. A nifedipin, mint marker szubsztrát alkalmazásával kapott gátlási hatékonyság értékei azonos nagyságrendűek, ha összehasonlítjuk az apigenin, acacetin és pinocembrin tesztoszteron vizsgálatával. Csak a krizin mutatott négyszer magasabb tesztoszteron értéket 【29】 a nifedipin teszthez képest, azaz 0,108 perc{14}} μM-1 vs. 0,029 perc{18}}uM-1. Az inaktivációs kinetikában megfigyelt hasonlóságok összhangban vannak az irodalmi adatokkal, amelyek megerősítik, hogy a nifedipin éstesztoszteronkülönböző kötőhelyeik vannak, amelyek átfedik egymást [31]. A citokróm P450 3A4 rendelkezik az egyik legnagyobb aktív hellyel, és egyszerre képes befogadni a szubsztrátot és az inhibitort, miközben az egyik befolyásolja a másik kötődését, ami megmagyarázhatja a nifedipin és tesztoszteron tesztek között megfigyelt különbségeket.

A reverzibilis inhibitorok klinikai következményei (azaz élelmiszer-gyógyszer kölcsönhatások) elkerülhetők, ha az inhibitor kezelést abbahagyják. Fontosabbak azok a kölcsönhatások, amelyek visszafordíthatatlanok, míg az inhibitor használatának egyszerű abbahagyása nem oldja meg az interakciós problémákat. Ebben a vizsgálatban a krizin mutatta a legnagyobb gátlási potenciált, a legalacsonyabb IC5n- és K-értékkel; értékeket. A citokróm P4503A4-hez kötődő flavonoidok molekuláris dokkolási vizsgálata a krizin nagyobb kötődési affinitását mutatta ki azáltal, hogy a B-gyűrűt az enzim aktív centrumában lévő vasnak teszik ki [28]. A szerkezet-gátlás összefüggés vizsgálata kimutatta, hogy az A gyűrűben lévő hidroxilcsoportok valószínűleg az ion-ion kölcsönhatások miatt járulnak hozzá a gátló hatáshoz, míg a B gyűrű lehet nem szubsztituált (pinocembrin, chrysin) vagy monoszubsztituált (acacetin, apigenin). gátló hatás figyelhető meg (1. ábra)[28]. A nem szubsztituált flavonoidok (pinocembrin, chrysin) érzékenyebbek az epoxidációra és a CYP3A4 inaktiváló reaktív intermedierek képződésére. A krizinnél megfigyelt erősebb gátló hatás valószínűleg a szerkezet merevségének és a C2=C3 kettős kötés jelenlétének köszönhető, összehasonlítva a pinocembrinnel.

A Cistanche javíthatja az immunitást

Ezeknek a leírt enzimkinetikáknak a jelentősége az élelmiszer-gyógyszer kölcsönhatások összefüggésében figyelhető meg, ahol a krizin (20-100 uM) beadása szignifikánsan megnövelte a nitrofurantoin AUC-jét és szérum csúcskoncentrációját (Cmax) patkányokban [32]. . Például a CYP3A4/5 enzim viszonylag gyenge mechanizmuson alapuló inhibitora,eritromicin[33], arról számoltak be, hogy mérsékelt kölcsönhatást okoz a cerivasztatinnal egészséges önkéntesekben (a cerivasztatin AUC 21%-os növekedése)[34]. A Chrysinnek nagyobb a gátlási potenciálja is, mint a mibefradilnál, egy vérnyomáscsökkentő gyógyszernél, amelyet más gyógyszerekkel való jelentős kölcsönhatások miatt visszavontak. A tanulmány eredményei arra utalnak, hogy a krizin erős inhibitor lehet, és kölcsönhatásba léphet más alkalmazott gyógyszerekkel, megváltoztatva ezen gyógyszerek AUC- és Cmax-értékét. A krizin nagy mennyiségben található a propoliszban (28 g/l), és ez a harmadik fő flavonoid a mézben 5,3 mg/kg [35]; ezért az ezekben az élelmiszerekben gazdag étrend kölcsönhatásba léphet olyan gyógyszerekkel, amelyek a CYP3A4 szubsztrátjai.

A pinocembrin, a CYP3A4 enzim bizonyítottan irreverzibilis inhibitora a legalacsonyabb 0.04 ± 0,01 perc kineértéket mutatta. Inaktivációs hatékonysága hasonló volt az acetinhez és az apigeninhez (0,01 perc{9}}uM-). A pinocembrin leginkább olyan élelmiszerekben található meg, mint a méz és az italok (tea és vörösbor), és gazdag forrása ennek a flavonoidnak [29]. Ezeknek a kinetikai paramétereknek megfelelően óvatosan kell eljárni ezen pinocembrin források és a CYP3A4 szubsztrátként működő gyógyszerekkel együtt történő fogyasztásakor.

Az acetin háromszor magasabb IC50-értéket mutatott, mint a krizin, és ötször magasabb K-értéket mutatott; értéket, miközben fenntartja a többi flavonoidhoz hasonló hatásértéket, ami alacsonyabb gátló hatást jelez. Az acetin főként olyan növényfajokban található meg, mint a Turnera diffusa, a Robinia pseudoacacia és a Betula pendula [36], de bizonyos élelmiszerek is e flavonoid forrását jelentik. Például a kumquat lé gazdag acetinforrás, és az acetin 0,1 mg/100 g friss gyümölcslében található [37]. Az acetin kiindulási vegyülete, az apigenin mutatta a legmagasabb IC50-értéket és a legmagasabb K-értéket; értéke a négy vizsgált flavonoid között. Az apigenin gátló hatását in vivo igazolták, amikor az apigenin és paklitaxel kombinációs kezelése a paklitaxel orális biohasznosulásának növekedéséhez vezetett, ami főként a P-glikoprotein gátlása és a first-pass csökkentése révén a gyomor-bél traktusban történő fokozott felszívódásnak tulajdonítható. a paklitaxel metabolizmusa a vékonybélben és/vagy a májban a CYP3A alcsalád apigenin általi gátlásán keresztül [38]. Az apigenin egy domináns flavonoid a zellerben, a petrezselyemben és a kamillában. A szárított petrezselyemről számoltak be, hogy az apigenin maximális mennyisége 45035 ug/g. Az apigenin további forrásai olyan gyógynövényekben találhatók, mint a szárított kamillavirág, amely 3000-5000 ug/g-ot tartalmaz, és a zellermag, amely 786,5 ug/g 【39】.

A citokróm P450 3A4 reverzibilis gátlása a citokróm P450 katalitikus ciklusának első lépéséhez kapcsolódik (5. ábra). Leggyakrabban a szubsztrát és az inhibitor közötti versengés figyelhető meg az aktív helyhez (vas-vashoz) való kötődésben. Ebben az esetben tanácsos kötési kísérleteket végezni (enzimtitrálások) és egynél több szubsztráttal tesztelni, mivel a CYP3A4 nagy aktív hellyel rendelkezik, amely egynél több szubsztrát/inhibitor molekulát képes befogadni [26,30]. Ebben a vizsgálatban nifedipint használtunk szubsztrátként, és a gátlási hatékonyság eredményei hasonló nagyságrendűek voltak, mint a korábban közölt tesztoszteron mint marker szubsztrát vizsgálati eredmények (1. táblázat).

5. ábra. A citokróm P450 katalitikus ciklus kilenc lépésből áll. Az első lépés a szubsztrát megkötését és a reverzibilis inhibitorokkal való kölcsönhatási pontot jelenti. A második lépésben a hem vas vastartalmú formává redukálódik, amelyhez pszeudo-irreverzibilis inhibitorok kötődnek. Ha visszafordíthatatlan gátlást észlelünk, az általában a szubsztrát (a 7. lépésben képződik) és/vagy a termék (a 8. lépésben keletkezett) gyökös formájával kapcsolatos.ciszta a nadrágodbanA hiábavaló citokróm P450 ciklusban (3a és 5a lépés) képződő reaktív oxigénfajták enzimpusztulást okozhatnak, amely SOD és CAT hozzáadásával megelőzhető. A gátlással nem kapcsolatos lépések leírását elhagyjuk. A [26] hivatkozás szerint készült.

Azonban, amint azt korábban bemutattuk [28,29] és itt is megerősítettük az elvégzett kísérleteinkben, minden vizsgált flavonoid visszafordíthatatlan gátlást mutat. Függetlenül az irreverzibilis gátlás típusától (az intermedier pszeudo-irreverzibilis vagy kovalens kötődése hemhez vagy apoproteinhez), a gátlás akkor lesz a legszembetűnőbb, ha az előinkubációt a marker szubsztrát hozzáadása előtt végezzük [26]. Az előinkubáció során a katalitikus ciklus aktiválódik a koenzim (NADPH) termelésére szolgáló generáló rendszer hozzáadásával, és elegendő idő áll rendelkezésre az enziminaktiváció megfigyelésére. Így a gátlás összes irreverzibilis típusa megkívánja az enzim redukcióját vastartalmú formává (5. ábra).

Mivel a citokrómok P450 hemoproteinek, tanulmányoztuk a flavonoidok kötődését az aktív hely vas formájához, valamint egy lehetséges reaktív intermedier kötődését a hemhez [26]. A lehetséges hem addukt képződésének felmérésére hemokromopiridin vizsgálatot végeztünk. Az összes vizsgált flavonoid jelentősen, több mint 50 százalékkal csökkentette a hem koncentrációját mindkét vizsgálatban. A Chrysin ismét a legerősebb inhibitor volt, amely megfelel a vizsgálatban megfigyelt gátlási kinetikai értékeknek. A hem koncentrációja pinocembrinnél ötször, apigeninnél közel tízszerese volt a krizinnél (25,3±0,4, illetve 45,1±1,7%). A hem koncentrációjának ez a csökkenése azt jelzi, hogy a CYP3A4 irreverzibilis gátlása a vizsgált flavonoidok által egy reaktív intermedier kovalens kötődésének tulajdonítható a hemhez. Meg kell jegyezni, hogy a hemeket a reaktív oxigénfajták elpusztíthatják, ami csökkenti a hemokromopiridin vizsgálat eredményeit. Ennek a lehetőségnek a kiküszöbölésére az inkubációkat SOD és CAT (2. táblázat) jelenlétében végeztük, megerősítve a fent említett következtetést.

A citokróm P450 enzim katalitikus ciklusának első lépése a szubsztrát vas-ionhoz való kötődése. Ha az inhibitor kompetitív gátlást mutat a szubsztráttal szemben, az enzimaktivitás dialízissel visszanyerhető, mivel az inhibitor eliminációja lehetővé teszi az enzimaktivitás teljes helyreállítását [26]. Ha azonban az inhibitor kötődik a vashoz, oxidálószer, például PCF alkalmazása szükséges a dialízist megelőzően az enzimaktivitás visszanyeréséhez. Ha az enzimaktivitás helyreáll, a gátlást pszeudo-irreverzibilisnek minősítik [26]. Mivel az enzimaktivitást nem lehetett visszaállítani PCF-fel vagy anélkül végzett dialízis után, a vizsgált flavonoidok egyike sem (25 uM koncentrációban) nem működik a CYP3A4 enzim reverzibilis vagy pszeudo-irreverzibilis inhibitoraként. Ez is megerősíti, hogy a hemhez vagy az apoproteinhez való kovalens kötődés visszafordíthatatlan gátlása az enziminaktiváció valószínű oka.

Meg kell jegyezni, hogy a chrysin a hem szinte teljes csökkenését okozta az inkubáció során: 97,1 százalék nélkül SOD és 94,5 százalék (2. táblázat); míg a reziduális enzimaktivitás eredményei hasonló körülmények között az enzimaktivitás megközelítőleg 99 százalékos csökkenését mutatták (4. ábra). A hemochromopyridine assay az inkubáció során minden forrásból származó hemeket regisztrál, azaz a citokróm P450-et, valamint a citokróm bs-t. A krizinre vonatkozó eredmények azt mutatják, hogy a citokróm P450 által generált reaktív intermedier reagált a citokróm P450 hemével, valamint a citokróm b5-tel.

További LC-MS analízist végeztünk a lehetséges reaktív flavonoid intermedierek meghatározására, akár hem-addukt formájában, akár glutation gyökfogóként csapdázott formában (az adatokat nem mutatjuk be). Azonban nem tudtuk izolálni egyik előre jelzett adduktot sem, valószínűleg a reaktív flavonoid intermedier és/vagy hem/glutation adduktum instabilitása miatt. Hasonló viselkedést figyeltek meg a gyógyszer/gyógyszer kölcsönhatások miatt a forgalomból kivont mibefradil, vérnyomáscsökkentő esetében. Bár a mibefradil csökkentette a hem mennyiségét, reaktív intermediert nem sikerült megállapítani [40].

4. Anyagok és módszerek

4.1.Anyagok

Ebben a vizsgálatban négy flavonoidot (acacetint, apigenint, krizint és pinocembrint) használtak (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). A nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát (NADPH) reduktázzal és citokróm bs-vel együtt expresszált P450 3A4 rekombináns citokrómokat autoszómákban a Thermo Fisher Scientific-től (Waltham, MA, USA) vásároltuk.

A citokróm P450 szén-monoxid vizsgálat[41] alapján a gyártó által megadott CYP3A4 enzim tartalma 1 uM. Glükóz-6-foszfát (G6P)glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz (G6PDH) és a -ninkotinamid-dinukleotid-foszfát-dinátriumsót (NADP plusz) a Sigma-Aldrich cégtől vásároltuk. A kálium-foszfátot (pa) és a diklór-metánt (pa) a Kemika dd-től (Zágráb, Horvátország), a hangyasavat (85 százalékos, pa) a Semikem doo-tól (Szarajevó, Bosznia és Hercegovina), a reagensoldáshoz és kromatográfiához használt metanolt pedig a cégtől vásárolták. Merck KGaA (Darmstadt, Németország). Ultratiszta vizet használtunk az inkubációs elegyekhez és a kromatográfiához. Kálium-dihidrogén-foszfátot (Kemika dd) használtunk a kálium-foszfát puffer előállításához, pH 7,85; A pH-t a Semikem doo-tól vásárolt nátrium-hidroxiddal állítottuk be. A nifedipint (Sigma-Aldrich) és az oxidált nifedipint (European Directorate for Medicines Quality, Pharmacopoeia, 10. kiadás, Strasbourg, Franciaország) használtuk a maradék enzimaktivitás vizsgálatára, valamint inaktivációs kinetika. A tesztoszteront (Sigma-Aldrich) és a 6 -hidroxi-tesztoszteront (Cayman Europe, Tallinn, Észtország) használták a pszeudo-irreverzibilis gátlási vizsgálatokhoz. A troleandomicint és a diltiazemet a Gyógyszerészeti és Orvosi Eszközök Ügynökségétől szerezték be (Zágráb, Horvátország). Piridint (pa) (Semikem doo), szarvasmarha hemint (Sigma-Aldrich) és dimetil-szulfoxidot (Semikem doo) használtak a hemokromopiridin vizsgálatban. Kálium-hexacianoferrátot (Siegfried AG, Zofingen, Svájc) használtunk a reverzibilis és pszeudo-reverzibilis gátlás vizsgálatára. Szuperoxid-diszmutázt (SOD) (Sigma-Aldrich), katalázt (CAT) (Sigma-Aldrich) és sósavat (36 százalék, pa) (Semikem doo) használtunk a kötésspecifitási vizsgálatban. Az enziminkubációkat vízfürdőben végeztük (Inkolab, Zágráb, Horvátország). A maradék enzimaktivitás és a flavonoid inaktivációs kinetika vizsgálatát nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával, UV-Vis detektálással párosítva (HPLC UV-Vis, Agi-lent 1100, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) végeztük. A maradékaktivitás-számításokat és a gátlási kinetikai paramétereket az R (The R Project for Statistical Computing, Bécs, Ausztria) és a Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA) programmal végeztük.

4.2.Módszerek

4.2.1. Az enzimkinetika és a maradékaktivitás meghatározása

Az enziminkubálást három párhuzamosban végeztük, mechanikus keverés közben 378 °C-os vízfürdőben. A flavonoidok 1 μM végkoncentrációjú alikvotjait metanolban feloldottuk, üvegcsövekbe vittük át, és szárazra pároltuk, kivéve az inhibitor (flavonoid) nélküli kontroll mintákat. Az oldószer elpárologtatása után 100 µl térfogatú inkubációs keveréket készítettünk, amely 5 pmol CYP3A4 enzimből, 50 mM kálium-foszfát pufferből (pH 7,4) és ultratiszta vízből állt. Közvetlenül használat előtt készítettünk egy NADPH-generáló rendszert, amely 0,1 M G6P∶10mg/ml NADP plusz ∶1000 IU/mL G6PDH=50∶25∶1（v/v/ø）. Ez a generáló rendszer glükóz-6-foszfát-dehidrogenázt tartalmaz, amely a NADP-t NADPH-vá regenerálja, állandó szinten tartja a citokróm P450 koenzim (NADPH) koncentrációját az inkubáció során. A generáló rendszer hozzáadása (a végső inkubáció térfogatának 15%-a, v/ø) elindította a reakciót. Nifedipint használtunk a maradék enzimaktivitás tesztelésére 200 uM végkoncentrációnál. A reakciót 1 ml jéghideg, 1%-os diklór-metános hangyasavoldattal leállítjuk. A mintákat összekevertük, majd 10 percig centrifugáltuk 1900g-n (Rotofix32, Westfalia, Németország). Centrifugálás után két réteg képződik (víz és szerves réteg) A szerves rétegből 0,850 μl küvettákba töltöttünk és bepároltuk. Az analitot ezután 30 µl metanolban oldottuk Egy Agilent Zorbax SBC18 oszlop (4,6×250 mm,3 μm, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), a minták HPLC-vel történő elemzéséhez használtuk. A mozgófázis metanolból és vízből állt 64:36 arányban. Az analízis izokratikus volt. Az áramlást 1,0 ml-re állítottuk be. perc A nifedipin retenciós ideje 7,1 perc, az oxidált nifedipiné 10,8 perc [42]. Mindkét esetben a kapott termék mennyiségét a görbe alatti terület (AUC) mennyiségeként figyeltük meg a kontrollmintához viszonyítva. az összes flavonoid, fele-maximális gátló koncentráció (IC5), állandó a gátlás (K;), az inaktivációs sebesség állandója (Kinect) és az inaktiválási hatékonyság (Kinect/K;) meghatározása történt. Pozitív kontrollként a troleandomicint használták – a citokróm P450 3A4,25 μM irreverzibilis inhibitora a troleandomicin koncentrációja 35±5 százalékra csökkentette az enzimaktivitást.

4.2.2. Hemochromopyridine Assay

A hemokromopiridin vizsgálatot a citokróm P450 ciklus reaktív intermedier formája általi lehetséges hempusztulás értékelésére használták, és Flink és Watson [43], valamint Paul és munkatársai által leírt módszer szerint végezték. [44], némi módosítással. A kalibrációs görbét dimetil-szulfoxidban oldott hemin (0,6 - 0,1 μM）) felhasználásával állítottuk fel. A spektrumokat 500 és 600 nm közötti hullámhosszon vettük fel. Inkubációs keverékek 25 µM inhibitorokat (flavonoid) állítottunk elő 200 µl térfogatra. A reakciót NADPH-generáló rendszer hozzáadásával indítottuk el (az összetételt lásd a 4.2.1. szakaszban), és az inkubáció 30 percig tartott. A reakciót leállítottuk fél óra elteltével piridin (végső koncentráció 0,83 M) és nátrium-hidroxid (végső koncentráció 0,06 M) hozzáadásával A mintákat spektrofotométerrel (UV-1280, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japán) rögzítettük 1 percen belül. lúgos oldat hozzáadása, a piridin hemokromogén bázikus körülmények közötti instabilitása miatt [44] Az elkészített kalibrációs görbe alapján számítottuk a minták hemkoncentrációját Ezt a vizsgálatot három párhuzamosban végeztük el Az inkubációkat katalázzal, ill. szuperoxid-diszmutáz (egyenként 5 NE) t az inkubációs keveréket, hogy megakadályozzák a hidrogén-peroxid képződését a hiábavaló katalitikus ciklus során.

4.2.3. Pszeudo-irreverzibilis gátlási vizsgálat

Ennek az esszének a célja, hogy tesztelje a kovalens komplexek képződését vasvassal (Fe2 plusz) az enzimaktivitás visszanyerésének felmérésével dialízis után, oxidálószer hozzáadásával vagy anélkül. Mindegyik flavonoidra háromféle kísérletet végeztünk: flavonoid nélküli inkubációs keverék (kontroll), inkubációs keverék flavonoiddal és inkubációs keverék flavonoiddal, amelyhez az inkubálás után oxidálószert adtunk. Minden egyes inkubációt az inhibitorral 30 percig végeztünk a fent leírt kísérleti beállításokkal (4.2.1. szakasz). Inkubálás után a mintákat dializáló kazettákba vittük át. Aa oxidálószer – 20 mM kálium-hexaciano-ferrát oldatot adtunk az egyik inkubációhoz a dialízis előtt [45]. A kazettákat (Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 50 mM kálium-foszfát pufferoldatba (pH 7,4) merítettük 30 percre (a dializáló oldatot háromszor cseréltük). Dialízis után a mintákat visszavittük a kazettából az üvegcsőbe, és a maradék enzimaktivitást tesztoszteron mint marker szubsztrát (200 μM végső koncentráció) alkalmazásával értékeltük. Mivel a NADPH-képző rendszert is dializáltuk, ismét hozzáadtuk az inkubációhoz, hogy beindítsuk az enzimreakciókat. A mintákat 30 percig ugyanazokkal a beállításokkal inkubáltuk (lásd a 4.2.1. szakaszban). A reakciót hangyasav diklór-metánnal készült jéghideg oldatának hozzáadásával állítottuk le. A mintákat HPLC-vel elemeztük. A diltiazemet, a citokróm P450 3A4 ismert pszeudo-irreverzibilis inhibitorát pozitív kontrollként használták a vas(III) formává történő oxidáció értékelésére (teljes enzimaktivitás helyreállítást figyeltek meg).

4.2.4. Eredmények feldolgozása

A minták és a kontrollok közötti különbségek statisztikai szignifikanciájának felmérésére egyoldalú t-próbát alkalmaznának a reziduális aktivitás mérése alapján. Az IC50 érték kiszámításához nemlineáris egyenletet használtunk. A Michaelis-Menten egyenletet használtuk az inhibitor inaktivációs állandójának és inaktivációs sebességének meghatározására. A statisztikai feldolgozást és a grafikonok elkészítését a Program R (The R Project for Statistical Computing, Bécs, Ausztria) és a Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA) segítségével végeztük.

5. Következtetések

Az acetin, apigenin, krizin és pinocembrin gátolják a CYP3A4 enzimaktivitást in vitro. A krizin a legerősebb enziminhibitor, a legalacsonyabb IC50-értékkel, K; Kinect értékek és a legmagasabb inaktiválási hatékonyság. Az összes flavonoid csökkentette az enzim hem koncentrációját, megerősítve, hogy ez a reaktív intermedier visszafordíthatatlan gátlása, amelyet SOD és CAT hozzáadásával nem lehet megakadályozni. A vizsgált flavonoidok egyike sem működik a CYP3A4 enzim reverzibilis vagy pszeudo-irreverzibilis inhibitoraként 25 uM koncentrációban, mivel az enzimaktivitást nem lehetett visszaállítani dialízissel kálium-hexacianoferrát hozzáadásával vagy anélkül. Mivel ezek a flavonoidok bőségesen megtalálhatók különféle élelmiszerekben, például gyümölcsökben, zöldségekben, fűszerekben, teákban és vörösborban, fennáll annak a lehetősége, hogy megzavarják a CYP3A4 szubsztrátjainak számító különféle xenobiotikumokat. További in vivo vizsgálatok szükségesek az ilyen élelmiszer-gyógyszer kölcsönhatások lehetőségeinek, valamint más enzimek és transzporterek kölcsönhatásokhoz való lehetséges hozzájárulásának teljes körű vizsgálatához.

Ez a cikk a Molecules 2021, 26, 3018-ból származik