Keringő MiRNS-ek 2-es típusú diabéteszes betegekben albuminuriában szenvedő és albuminuria nélkül Malajziában

AbsztraktBevezetés: Diabéteszes vesebetegség(DKD) továbbra is a krónikus vesebetegség vezető oka. A keringő miRNS-ek szabályozási zavaráról számoltak be, ami a DKD-ben betöltött patológiás szerepükre utal. Ennek a vizsgálatnak az volt a célja, hogy megvizsgálja a differenciáltan expresszálódó miRNS-eket 2-es típusú diabetes mellitusban (T2DM) szenvedő betegek szérumában, albuminuriával és anélkül, egy kiválasztott malajziai populációban.Módszer:A közösségi klinikán megfigyelt 41 T2DM-beteget normál (NA), mikro-(MIC) és makroalbuminuria (MAC) csoportokra osztották. A miRNS-ek differenciált szintjét 12 mintában az útvonal-fókuszált (humán fibrózis) miScript miRNA qPCR tömb segítségével határoztuk meg, és 33 mintában a miScript egyedi qPCR tömb (CMIHS02742) (Qiagen GmbH, Hilden, Németország) segítségével validáltuk.Eredmények:A szérum 3 miRNS-ének, nevezetesen miR-874-3p, miR-101-3p és miR-145-5p miR-145-5p-ének növekedési trendjei a MAC-ban szenvedő T2DM-es betegeknél az NA-s betegekhez képest. A miR- 874-3p statisztikailag szignifikáns felszabályozása (p= 0.04) és miR-101-3p (p= 0.01) volt látható az ellenőrzési kohorszban. Szignifikáns negatív korreláció a becsült glomeruláris filtrációs ráta (eGFR) és a miR-874-3p (p= 0.05), miR-101-3p (p= 0.03), és miR-145-5p (p= 0.05), valamint pozitív korreláció a miR-874-3p és az életkor között (p= 0,03) Pearson-féle korrelációs együttható elemzése mutatta ki.Következtetés:Ebben a vizsgálatban a korábban ismert miRNS, nevezetesen a miR-145-5p és esetleg az újak, nevezetesen a miR-874-3p és miR-101-3p felszabályozását találták a T2DM-betegek szérumában. . Szignifikáns korreláció volt az eGFR és ezen miRNS-ek között. A tanulmány eredményei biztató bizonyítékot szolgáltattak e differenciálisan expresszált miRNS-ek feltételezett szerepének további vizsgálatáraDKD.

Kattintson ide a vesebetegségben szenvedő herba-cistanche-hez

Bevezetés

A diabéteszes vesebetegség (DKD) a végstádiumú vesebetegségek 39%-áért felelős az Egyesült Államokban [1]. Hasonlóképpen, a DKD továbbra is a krónikus vesebetegség (CKD) vezető okozója Malajziában, amely 2018-ban az új dialízises betegek 69%-ához járult hozzá [2]. Úgy gondolják, hogy a DKD patológiáját főként a hiperglikémia okozza, ami az intracelluláris jelátviteli útvonalak aktiválódásához és végső soron vesefibrózishoz vezet [3]. A kezelés előrehaladása ellenére a jelenlegi biomarkerek és terápiák nem akadályozzák meg a vesebetegség végstádiumúvá történő progresszióját [3]. Ezért sürgősen szükség van a DKD közvetítőinek és mechanizmusainak jobb megértésére.

A mikroribonukleinsav (miRNS) kisméretű, nem kódoló RNS-ek családja, amely a génexpresszió fontos poszt-transzkripciós szabályozójaként jelent meg [4]. Megfigyelték a miRNS-ek aberrant expresszióját és a DKD sejtmechanizmusában való részvételüket [3]. Ennek a vizsgálatnak az volt a célja, hogy azonosítsa a kiválasztott miRNS-ek expressziós mintázatát 2-es típusú diabetes mellitusban (T2DM) szenvedő és albuminuriás betegek szérumában. Világszerte végeztek hasonló vizsgálatokat különböző populációkban, amint azt korábban áttekintettük [5–7]. Célunk volt, hogy megvizsgáljuk a fibrotikus útvonalakkal kapcsolatos miRNS-ek differenciális expressziójának mintázatát T2DM-es betegekben, amelyek közül néhányat korábban DKD-ben tanulmányoztak. Korábbi tanulmányok etnikai eredetű különbségekre utaltak a miRNS expressziójában [8, 9]. Ezért amellett, hogy megerősítheti a korábbi megállapításokat, ez a tanulmány potenciálisan új miRNS-eket tárhat fel, amelyek talán egyedülállóan expresszálódnak a malajziai populációban.

Anyagok és metódusok

Tanulmányi populáció

Ebben a keresztmetszeti vizsgálatban 41 meglévő T2DM-beteg vett részt, akiket 2019 januárja és áprilisa között követtek nyomon egy közösségi klinikán. Ez a vizsgálat egy 2-lépéses eljárást tartalmazott: (1) miRNS-ek 12 beteg szérumában (szűrési kohorsz). ) profilt készítettünk, és (2) a legrelevánsabb miRNS-eket 33 beteg szérumával validáltuk (ezt validációs kohorsznak nevezzük). Ez 4 beteget tartalmazott a szűrési csoportból. Az egyes betegek írásos beleegyezését kérték. A tanulmány etikai jóváhagyását a malajziai Egészségügyi Minisztérium Orvosi Kutatási és Etikai Bizottsága (MREC) szerezte meg. A felvételi kritériumok a T2DM betegek és a rendelkezésre álló klinikai és laboratóriumi információk voltak. 1-es típusú DM-ben szenvedő betegek; nem DKD-k; társbetegségek, például rák, akut lázas betegség vagy közelmúltbeli fertőzések; terhesség; és a szülés utáni időszakot kizárták.

A páciens egészségügyi feljegyzéseiből a következőkre vonatkozó információkat nyertük ki: (1) demográfiai adatok, beleértve az életkort és a nemet; (2) klinikai adatok, például vérnyomás, testsúly, T2DM időtartama, kezelés és egyéb diabéteszes szövődmények; (3) laboratóriumi adatok, beleértve az éhomi plazma glükózt, a glikált hemoglobin A1c-t (HbA1c), az albumin-kreatinin arányt és a szérum kreatinint. A betegeket 3 csoportra osztották albuminuria szintjük szerint, normoalbuminuria (NA), mikroalbuminuria (MIC) és makroalbuminuria (MAC) szerint.

Meghatározás

Ebben a tanulmányban,

Az NA, MIC és MAC az albumin-kreatinin arányt jelenti<30, between 30 and 300 and >300 mg/g kreatinin 3-ból legalább 2-ben [10]. A becsült glomeruláris filtrációs rátát (eGFR) a krónikus vesebetegség-epidemiológia kreatinin egyenlet alapján számítottuk ki.

Szérum előkészítés

Vacutainer Az éhgyomri (kevesebb, mint 8 óra) teljes vérből vett mintákat 10- ml BD ®SSTTM csövekben (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) szobahőmérsékleten hagytuk 30- percig. alvadás 10- perc centrifugálás előtt 1,900 g-vel. A felső fázist összegyűjtöttük, 0,{7}} μm-es Minisart®PES szűrővel (Sartorius, Gottingen, Németország) szűrtük, majd mikrocentrifuga csövekbe osztották, hogy az elemzésig -80 fokon tárolják.

Teljes miRNS

Izolálás A teljes miRNS-t a miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen GmbH) segítségével izoláltuk a gyártó protokollja szerint. Röviden, a Qiazol Lysis Reagenst a szérum 200 μl-es aliquot részéhez adtuk denaturálás céljából, majd miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control C. elegans miR-39 miRNS-utánzót (Qiagen GmbH) az RNS visszanyerésének és visszafordításának nyomon követésére. transzkripció hatékonysága. Kloroformot adtunk a fáziselválasztáshoz, majd 100%-os etanolt adtunk a felső vizes fázishoz. Az öblítési lépéseket RWT pufferrel, RPE pufferrel és 80%-os etanollal végeztük. Az RNS-t 14 μL RNáz-mentes víz hozzáadásával eluáltuk az RNeasy MinElute spin oszlop membránjához. Az RNS mennyiségét és minőségét NanoDrop 1000 spektrofotométerrel (Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, DE, USA) határoztuk meg, mielőtt felhasználásig -80 fokon tároltuk. A miRNS fordított transzkripcióját (RT) cDNS-vé és az előamplifikációt a miScript RTII készlettel (Qiagen GmbH) és a miScript PreAMP PCR Kittel (Qiagen GmbH) végeztük, a gyártó protokollja szerint, 6 μL templát RNS és 5 μL hígított oldat felhasználásával. cDNS, ill

Kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakció elemzés

A szűrési kohorsz szérumában keringő miRNS-eket az útvonal-fókuszált (humán fibrózis) miScript miRNA qPCR array (Qiagen GmbH) azonosította, majd a kiválasztott miRNS-eket később egy egyedi miScript miRNA qPCR array-vel (CMIHS02742) validáltuk a validációs kohorszban. Qiagen GmbH) a gyártó utasítása szerint. Mindegyik reakció tartalmazott egy cDNS-sablont, 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix-et, 10x miScript Universal Primer-t, 10x miScript Primer Assay-t és RNáz-mentes vizet, valamint hígított templát cDNS-t, hogy a teljes térfogat 25 μl legyen. A kvantitatív valós idejű PCR-t Eppendorf Mastercycler ep realplex 4-en végeztük, amely a következőképpen volt programozva: 15 perc 95 fokon, 15 s 94 fokon, 30 s 55 fokon és 30 s 70 fokon 40 ciklussal.

A miRNS relatív mennyiségi meghatározása

A valós idejű PCR adatelemzést a Qiagen Gene Globe Data Analysis Center szoftverrel (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/) végeztük. A relatív expressziót (RE) a 2−∆Ct módszerrel származtattuk, ahol minden miRNS expresszióját a SNORD95 housekeeping gén vagy Global Ct Mean expressziójára normalizáltuk. A hajtásváltozást az egyes csoportok normalizált miRNS-expressziójának (MIC vagy MAC) és a kontrollcsoport normalizált miRNS-expressziójának (NA) osztva számítottuk ki. A p értékeket független minták t-tesztje alapján számítottuk ki az ismétlődő RE (2−∆Ct) értékek mindegyikére a kontrollcsoportban és a tesztcsoportokban. A qPCR adatelemzés további ellenőrzése manuálisan történt a Microsoft Excel és az IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp, Ar monk, NY, USA) 25. kiadása Microsoft Windows szoftverhez segítségével.

A miRNS-ek kiválasztása az érvényesítési szűrési kohorszban

Initially, the relative quantification of miRNAs in the screening cohort was based on the global Ct mean normalization method, and Ct >A 30 negatív kifejezésnek minősült, amint azt a Qiagen GeneGlobe Data Analysis Center (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/) ajánlja. Az online kiegészítő 1. táblázat (az összes online beszerzési anyaghoz lásd: www.karger.com/doi/10.1159/000518866) 84 miRNS RE-értékét mutatja a szűrési kohorszban, a globális Ct átlagra normalizálva. A szignifikáns ±2.{7}}szeres változást mutató és jó minőségű MiRNS-eket választottuk ki a szoftver által meghatározottak szerint. Ezenkívül más miRNS-eket választottak ki p-értékeik rangsorolása és a DKD-vel és a DKD-vel kapcsolatos útvonalakkal kapcsolatos korábbi vizsgálatokban való részvételük alapján, amelyek során a legtöbb feltételezett messenger RNS célpontot tartalmazó miRNS-eket választották. Az online kiegészítő 2. táblázat bemutatja a miRNS-ek validálásra történő kiválasztásához használt további kritériumokat. A validációs analízis során a miRNS expresszióját SNORD95-re normalizáltuk, mivel a globális Ct átlag módszer nem volt megfelelő, és a Ct > 35 negatív expressziónak minősült. A standardizálás érdekében újra elemeztük a kiválasztott miRNS RE értékét a szűrési kohorszban a SNORD95 normalizálása alapján, és ezt használtuk fel a későbbi elemzésekhez a validációs kohorszhoz képest.

Statisztikai analízis

Normality check of continuous variables was done using both statistical tests (Shapiro-Wilk, Kolmogrov-Smimov, skewness, and kurtosis) and visual inspection of plots (histogram, normal Q-Q, and detrended normal Q-Q). Continuous data were presented as either mean ± standard deviation or median (interquartile range). A comparison of 2 independent groups was done using an independent samples t-test (Tables 2–4). Comparison of >2 független csoportot a független minták Kruskal-Wallis teszttel végeztünk (1. táblázat). A kategorikus változók összehasonlítása a kontingenciák χ2 tesztjével vagy a Fisher-féle egzakt teszttel történt (1. táblázat). A kiválasztott miRNS RE és a folytonos változók (demográfiai és klinikai adatok) közötti korrelációt Pearson korrelációs koefficiensével végeztük. Többszörös regressziós tesztet alkalmaztunk a kiválasztott miRNS RE és szignifikáns prediktorai közötti lineáris kapcsolat elemzésére. A statisztikai számításokat az IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp) Microsoft Windows 25-ös kiadásával és a Prism 8 statisztikai szoftvercsomaggal (GraphPad, San Diego, CA, USA) végeztük. A statisztikai szignifikancia meghatározása: p < 0,05.

A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszterna exportőre:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Vásároljon további specifikációkért:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

SZEREZZE MEG TERMÉSZETES SZERVES CINCÁK KIVONATOT 25% ECHINACOSIDES ÉS 9% AKTEOZID tartalommal vesefertőzés ellen