A Cistanche Deserticola poliszacharidok neuroprotektív hatásúak

további információ:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu és mtsai

Absztrakt:

Az iszkémiás stroke magas morbiditású és mortalitású betegség.Cistanchedeserticolapoliszacharidok(CDP) számos jótékony hatást fejt ki, beleértve a májvédelmet és az immunhomeosztázist. Amennyire tudjuk, a CDP védő hatása(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)Az oxigén-glükóz megvonás/reperfúzió (OGD/RP) által sérült neuronokon nem vizsgálták. Ebben a vizsgálatban az OGD/RP megsértett egy PC12 sejtmodellt. Röviden CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)({0}},05, 0,5 és 5 ug/ml) került beadásra a reperfúzió előtt. A CDP védő hatása(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)Ezt követően a sejtek életképessége, a laktát-dehidrogenáz (LDH) szivárgás, a [Ca2 plusz] I, a mitokondriális membránpotenciál (MMP) és a sejt apoptózisa, valamint a reperfúzió utáni andredox állapot alapján értékelték reaktív oxigénfajták (ROS), kataláz ( CAT), glutation-peroxidáz (GSH-Px) és teljes antioxidáns kapacitás. Azon a tényen alapul, hogy a Parkinson-kórhoz kapcsolódó fehérje DJ-1 részt vesz az endogén antioxidációban ésneuroprotektívAz ischamiastroke utáni hatások vizsgálata során a CDP közötti interakciót vizsgáltuk(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)és DJ{{0}}. A DJ-1 expresszióját ELISA és Western blot analízissel, a DJ-1 transzlokációját pedig immunfluoreszcenciával határoztuk meg. Az eredmények azt mutatták, hogy a CDP (0,05, 0,5 és 5 ug/ml) gyengítette a PC12 sejthalált, megőrizte az MMP és a kalcium homeosztázist; gátolja az oxidatív stresszt és csökkenti a sejt apoptózist. Ezenkívül a CDP (5 ug/ml) jelentősen serkentette a DJ{10}} szekrécióját és expresszióját. Összességében az eredmények arra utaltak, hogy a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gyakorol aneuroprotektívhatás az OGD/RP által kiváltott sérülések ellen az oxidatív stressz gátlásával és a DJ-1 útvonal szabályozásával

Kulcsszavak:Cistanche deserticola, poliszacharidok, neuroprotektív, oxigén-glükóz-megvonás/reperfúzió, oxidatív stresszDJ{0}}

Kattintson a Cistanche UK termékekhez

1. Bemutatkozás

Az ischaemiás stroke a második vezető halálok és a tartós rokkantság elsődleges oka világszerte [1]. A stroke miatti halálozások száma 2030-ban várhatóan 7,8 millióra emelkedik [2]. Kínában évente 100-ból 58-142,000 ember hal meg stroke-ban. Ezért hatékony stratégiákat kell kidolgozni az ischaemia-reperfúziós károsodás visszafordítására. Széleskörű bizonyítékok támasztják alá, hogy az oxidatív stressz az egyik fő tényező, amely elősegíti az agyi infarktus kialakulását és progresszióját a reperfúzió során [3,4]. Ezért felfedezni hatékonyneuroprotektívA ROS csökkentésére és az oxidatív stressz visszaszorítására képes szerek jelentős érdeklődést váltottak ki a kutatásban. A Parkinson-kórral összefüggő proteinDJ-1 neuroprotekciót közvetít azáltal, hogy serkenti az anti-apoptotikus és antioxidatív génexpressziót [4,5]. A DJ-1 oxidatív stressz és mitogén stimuláció hatására a mitokondriumokba transzlokálható, és az extracelluláris mátrixba szekretálható patológiás körülmények között, például emlőrák, melanoma és OGD/RP sérülés esetén [6]. Ezenkívül a DJ-1 az antioxidációban betöltött kritikus szerepe miatt hasznos az ischaemiás neurodegeneráció terápiás célzásában [4,7]. Az elmúlt 10 évben több csoport megerősítette, hogy DJ{12}} igenneuroprotektívhatások az in vivofokális agyi ischaemia modellekre és az in vitro OGD/RP modellekre [6–9]. Eközben egyes gyógyszerek, köztük a ciklosporin A és a nátrium-fenil-butirát, megszüntetik a neuronális sejthalált DJ-1 upregulation inischemia stroke révén [9,10] ].

Cistanchedeserticola, az integrált szárított növényCistanchedeserticolaAz YCMa és a Cistanche tubulosa Wight főként Kína északi és északnyugati sivatagos területein készül [11]. A C. deserticola ehető, és a "sivatagok ginzengjeként" tisztelték. Az akupontos felírásban krónikus vesebetegség, szexuális impotencia, női meddőség, leucorrhea, metrorrhagia és időskori székrekedés kezelésére használják [12].C. deserticola poliszacharidok, amelyekből izolált fő hatóanyagCistanche deserticola. A CDP modulálja az immunfunkciót és a lipid egyensúlyt, valamint védelmet nyújt az öregedés, az oxidáció és a májkárosodás ellen.(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)megakadályozza az ischaemia-reperfúziós károsodást a szívben és a májban [13,14]. A legújabb tanulmányok szerint a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)nem mérgezőek[12,15,16], és a C. Deserticola-ból kivont egyéb fitokemikáliák, beleértve az echinakozidot, az izoakteozidot, az akteozidot és a szalidrozidot, mutatnakneuroprotektívhatások [11,12]. Mindazonáltal a CDP potenciális alkalmazásáról az ischaemiás stroke károsodásának enyhítésére eddig nem számoltak be.

Jelen tanulmányban azt feltételezzük, hogy a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gátolja az oxidatív stresszt a neuroprotekció érdekében. A CDP lehetséges védő hatásai(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)iszkémiás stroke károsodást OGD/RP sérült PC12 sejtek segítségével vizsgáltuk. Ezután feltárták a DJ-vel-1 kapcsolatos interakciókat.

2. Módszerek

2.1. Sejtkultúra és OGD/RP modell

A PC12 sejteket 10% FBS-t tartalmazó RPMI 1640 tápközegben tenyésztettük 37 fokon, 5% CO2-ot tartalmazó normoxikus inkubátorban. A közeget 48 óránként cserélték. OGD/RP modell készült. A PC12 sejteket megmostuk, és kitettük Earle kiegyensúlyozott sóoldatának. Ezután a sejteket átvittük egy anaerob kamrába, amely 5% CO2-t és 95% N2-t tartalmazott 37 °C-on 4 órán át, majd hagytuk újraoxigénezni. Ebben a lépésben azonos térfogatú táptalajt adtunk a sejtekhez. Reoxigénezés után a sejteket normoxiás inkubátorba helyeztük 24 órára.

2.2. Gyógyszer adminisztráció

CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)a Yuanye Biological Technology Co.-tól (Sanghaj, Kína) vásároltuk (C23J7Y18405, >98 százalékos tisztaság). Pozitív kontrollvegyületként a nimodipint, az ischaemia stroke első vonalbeli prevenciós gyógyszerét alkalmazták [17–19]. A nimodipin injekció a Bayer Company cégtől származott. A sejteket véletlenszerűen hat csoportra osztották, nevezetesen a kontroll, a vehicle (OGD/RP), a Nimo (5 ug/ml), a CDP.(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)(0,05 ug/ml), CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)(0,5 ug/ml) és CDP (5 ug/ml). Nimodipin és CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)reperfúzió előtt adták hozzá. A kontrollcsoportot normál tápközegben tenyésztettük, és normoxikus körülmények között inkubáltuk.

2.3. Sejtéletképesség: MTT és NRU vizsgálatok

PC12 sejteket (6 × 103 lyukanként) egy 96-lyukú tenyésztőlemezre oltottunk. A sejteket az egyes csoportok követelményeinek megfelelően kezeltük. MTT-t (Solarbio, Kína) adtunk a sejtekhez 5 mg/ml koncentrációban, és 4 órán át 37 °C-on inkubáltuk. A formazan a szukcinát-dehidrogenáz redukciós terméke élő sejtekben [20]. DMSO-t adtunk hozzá a keletkezett kék formazán feloldásához. A 490 nm-es hullámhosszú abszorbanciát Microplate Reader (Thermo, USA) segítségével detektáltuk, miután a sejteket 10 percig 25 °C-on rázattuk. A sejtek életképességi eredményei a kontrollcsoport százalékában mutatkoztak meg [21].

A semleges vörös-felvétel (NRU) vizsgálatot a korábban közzétett protokoll szerint végeztük [22]. Amikor a reperfúziós periódusok véget értek, semleges vöröset (Solarbio, Kína) adtunk a sejtekhez 50 ug/ml koncentrációban. Az elegyet 3 órán át inkubáltuk. Ezután a sejteket gyorsan lemostuk 0,5% formaldehidet és 1% kalcium-kloridot tartalmazó oldattal. A sejteket ezt követően 1% etilsavat és 50% vízmentes etanolt tartalmazó keverékhez adtuk. A lemezeket 540 nm abszorbancián olvastuk le, miután a sejteket 20 percig 37 fokon ráztuk. A sejtek életképességének eredményei a kontrollcsoport százalékában mutatkoztak meg.

Cistanche deserticola poliszacharidokVan egyNeuroprotektív hatás

2.4. A citotoxicitás értékelése

Az LDH egy citoplazmatikus enzim, amely katalizálja a laktát-topiruvát oxidációját. Az LDH gyorsan felszabadul az extracelluláris folyadékba, ha a sejtmembrán megsérül. Ezért általában az LDH kimutatását végzik a citotoxicitás értékeléséhez. [23]. A kísérleti eljárás az LDH assay kit (Jiancheng, Kína) kereskedelmi készlet utasításait követte. Az egyes minták abszorbanciáját 440 nm-en detektáltuk mikrolemez-leolvasóval. A sejtpusztulás százalékos arányát a következő képlettel számítottuk ki: Életképesség ( százalék )=(OD kezelés – OD kezelés vak)/(OD Max LDH aktivitás – OD Max LDH aktivitás vak) × 100 százalék.

2.5. Az intracelluláris Ca2 plusz koncentráció kimutatása

A Ca2 plus intracelluláris koncentrációját Fluo-3/AM-el mértük [15]. A PC12 sejteket PBS-sel háromszor mostuk, majd 2 µM Fluo{5}}/AM-mel (Beyotime, Kína) 30 percig 37 fokon, sötétben inkubáltuk. A sejteket ezután háromszor mostuk PBS-sel az extracelluláris festék eltávolítása céljából. A Fluo-3/AM fluoreszcencia intenzitását lézeres pásztázó konfokális mikroszkóppal (Olympus, Japán) határoztuk meg. A szürkeárnyalatos értékek kiszámításához az Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer és ImageJ szoftvercsomagot használtuk

2.6. MMP mérése

A JC-1 (5,5′,6,6′-tetraklór-1,1′,3,3′-tetraetil-imidakarbocianin; Beyotime, Kína) egy kényelmes feszültségérzékeny szonda, amelyet általában festéshez használnak. sejtek és az MMP kiértékelése [24]. A PC12 sejteket kétszer mostuk hideg PBS-sel, majd 50% tápközeget és 50% munkafolyadékot tartalmazó keverékkel inkubáltuk 15 percig 37 °C-on, sötétben. Ezután a keveréket eldobtuk, és friss tápközeggel helyettesítettük. A vörös és zöld fluoreszcens képeket lézeres pásztázó konfokális mikroszkóppal rögzítettük. Az MMP méréshez a vörös és zöld fluoreszcencia jelek relatív arányát használtuk [25]. A szürkeárnyalatos értékek kiszámításához azOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer és az ImageJ szoftvercsomagot használtuk.

2.7. Apoptózis kimutatási vizsgálat, Hoechest33342 és áramlási citometria analízis

A Hoechst33342 DNS-kötő festéket a sejtapoptózis vizsgálatára használtuk [26]. A reperfúziót követően a PC12 sejteket PBS-sel háromszor mostuk, és Hoechst33342-vel (Beyotime, Kína) inkubáltuk 5 ug/ml koncentrációban 15 percig 37 fokon, sötétben. Ezután a sejteket lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp alatt figyelték meg. Az apoptotikus sejtek intenzív kék fluoreszcenciát és magkondenzációt mutattak. Minden festési kísérlethez három véletlenszerű mezőt rögzítettünk és számszerűsítettünk. A szürkeárnyalatos értékek kiszámításához az Olympus FV{7}}ASW 4.1 Viewert és az ImageJ-t használták. Az apoptotikus sejtek százalékos arányát a következő képlettel számítottuk ki: apoptotikus mennyiség/teljes mennyiség × 100 százalék [27].

2.8. ROS generáció mérése

A fluoreszcens szonda, a 2',7'-diklór-fluoreszcein-diacetát (DCFH-DA; Jiancheng, Kína) képes áthatolni a sejtmembránokon, és nem fluoreszcens DCFH-vá hidrolizálható. A DCFH-t az intracelluláris ROS fluoreszcens DCF-vé oxidálja [29]. A reperfúziót követően a sejteket kétszer mostuk PBS-sel, majd DCFH-DA-val inkubáltuk 10 μM végső koncentrációban 45 percig 37 fokon, sötétben. A fluoreszcenciát 485 nm gerjesztési hullámhosszú és 535 nm emissziós hullámhosszú fluoreszcens spektrofotométerrel figyeltük meg.

Cistanche deserticola poliszacharidokVan egyNeuroprotektív hatás

2.9. Oxidatív stressz indikátorok meghatározása: CAT, GSH-Px és T-AOC szintek

A sejteket lekapartuk és újraszuszpendáltuk PBS-ben. A kapott sejtszuszpenziókat 45-ször ultrahanggal kezeltük jégen, és 1000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig 4 fokon. A felülúszókat megtartottuk, és kimutatásra használtuk [24]. A sejtfelülúszó teljes fehérjetartalmát BCA protein assay reagens kittel (KeyGEN, Kína) mértük. A CAT, GSH-Px és T-AOC szintek aktivitását a gyártó utasításai szerint mértük (Jiancheng, Kína). Az egyes minták abszorbanciáját mikrolemez-leolvasóval detektáltuk.

2.10. Az extracelluláris DJ-1 koncentráció mérése

A PC12 sejteket (6 × 103 lyukanként) 96-lyukú tenyésztőlemezekre oltottuk. A reperfúziót követően a sejtfelülúszót összegyűjtöttük és DJ-1/PARK-7 ELISA Kittel (Raybio, USA) elemeztük. ) a gyártó utasítása szerint [9]. Az egyes minták abszorbanciáját Microplate Reader készülékkel detektáltuk 450 nm vagy 540 nm kettős hullámhosszon.

2.11. Western blot analízis

A sejtfehérjéket jéghideg lízispufferrel extraháltuk a gyártó utasításai szerint (KeyGEN, Kína). A fehérjekoncentrációt BCA protein assay reagens kittel határoztuk meg. Mindegyik csoportból azonos mennyiségű fehérjelizátumot (20 ug) 12%-os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézisben oldottunk fel, majd nitrocellulóz membránra vittük át. A membránt 5% sovány tejet tartalmazó PBS-sel inkubáltuk 2 órán át szobahőmérsékleten, majd anti-PARK7/DJ-1 antitestekkel (ab76008, Abcam; hígítás 1:1000) egy éjszakán át 4 °C-on szondáztuk. Ezután a membránt háromszor mostuk PBST-vel, és inkubáltuk másodlagos antitesttel, kecske anti-nyúl IgG-vel (SA00001-2, Proteintech Group; hígítás 1:5000) szobahőmérsékleten 2 órán át. Az antitest anti- -tubulint (10759-1-AP, Proteintech Group; hígítás 1:1000) tekintettük kontrollnak. A fehérjesávokat fokozott kemilumineszcenciás (ECL) reakcióreagensekkel tettük láthatóvá. A sávsűrűség mérése a QuantityOne Analysis szoftver v.4.6.9 szoftverrel történt.

2.12. Immuncitokémiai elemzés

A PC12 sejteket 4%-os paraformaldehidben fixáltuk 15 percig szobahőmérsékleten a reperfúziós kezelés után [9]. A túlzott paraformaldehid eltávolítása után a sejteket 0,3% Triton X-100 PBS-ben inkubáltuk 10 percig szobahőmérsékleten. Ezután a sejteket PBS-sel háromszor mostuk, majd 5% normál kecskeszérummal 1 órán át inkubáltuk. A sejteket ezután nyúl egér monoklonális anti-ATP szintáz lánccal (MABS1304, EMD Millipore, 1:200 hígítás) inkubáltuk a mitokondriumok megfestésére, majd anti-PARK7/DJ{17}} antitesttel inkubáltuk (1. hígítás: 100) a protein DJ-1 vizsgálatához. A sejteket mostuk és kecske anti-nyúl IgG-Alexa 488-cal (zöld; A11034, Invitrogen; hígítás 1:1000) és kecske anti-egér IgG-Alexa 594-gyel (piros; A11032; Invitrogen; hígítás 1:19000) inkubáltuk. min. Végül a sejteket háromszor mostuk PBS-sel, és DAPI-t tartalmazó rögzítőközeggel üveglemezekre szereltük. Az immunfluoreszcens képeket lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp segítségével tettük láthatóvá.

Cistanche deserticola poliszacharidokVan egyNeuroprotektív hatás

2.13. Adat/statisztikai elemzés

Minden értéket átlag ± SD-ként mutattunk be. A szignifikanciát egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) határoztuk meg, majd a Dunnett-féle több-összehasonlító teszttel. p < .{4}}5="" volt="" statisztikai="" szignifikancia.="" a="" kísérleti="" adatokat="" spss="" 17.0="" statisztikai="" szoftverrel="">

3. Eredmények

3.1. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gátolta az OGD/RP-indukált sejtkárosodást

Az OGD/RP-nek kitett PC12 sejtek számának jelentős csökkenése volt megfigyelhető. A sejt alakja megváltozott, és a sejtmembrán megtört. Az MTT vizsgálatban a sejtek életképességét a CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok ({{0}},05, 0,5 és 5 ug/ml) 58,91 százalék ± 5,40 százalék, 61,13 százalék ± 3,81 százalék és 68,57 százalék ± 3,24 százalék, p < 0,05="" (1a.="" ábra)="" ,="" a="" járművel="" 51,68="" ±="" 3,89="" százalék="" volt="" .="" ezek="" az="" értékek="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="">(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)megvédte a sejteket az OGD/RP sérülésektől és csökkentette a sejthalált. Ezenkívül a sejtek életképessége a Nimo csoportban 77,02% ± 5,22% volt, ami majdnem megegyezik az 5 ug/ml CDP-vel.(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)kezelt csoport.

Az NRU vizsgálatban a sejtek életképességét a CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok ({{0}},05, 0,5 és 5 ug/ml) 52,03 százalék ± 4,72 százalék, 58,49 százalék ± 2,50 százalék és 69,17 százalék ± 3,91 százalék (1B. ábra), és hogy járművel 47,14 százalék ± 2,88 százalék volt. Az értékek a CDP koncentrációfüggő védőhatását mutatták.

A vivőanyaggal ellentétben (44,73% ± 3,30%) az LDH-felszabadulás jelentősen csökkent a CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok. A CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportokban ({{0}},05, 0,5 és 5 ug/ml), az LDH szivárgási aránya 32,41 százalék ± 3,70 százalék, 27,13 ± 2,79 százalék és 23,13 százalék ± 4,59 százalék volt, p < ,01="" (ábra="" 1c).="" ezenkívül="" az="" ldh="" szivárgási="" aránya="" a="" nimo="" csoportban="" 21,99%="" ±="" 4,02%="" volt,="" ami="" majdnem="" megegyezett="" az="" 5="" ug/ml="" cdp-vel="" kezelt="">

3.2. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gyengítette az OGD/RP-indukált [Ca2 plus] i

Az intracelluláris Ca2 plusz szint a PC12 sejtekben 4146,60 ± 195,97-re emelkedett OGD/RP sérülés után, ellentétben a kontrollcsoporttal (373,62 ± 75,69). A CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok ({0},05, 0,5 és 5 ug/ml) dózisfüggően csökkenthetik az intracelluláris Ca2 pluszszintet rendre 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53, illetve 1768,43 ± 426,12 A-ra (C 426,12 F.). ). Ezenkívül az 5 ug/ml CDP-vel kezelt csoportban a Ca2 plusz szint a Nimo csoportéhoz hasonló szintre csökkent (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gyengítette az MMP OGD/RP-indukálta disszipációját

A kontrollcsoporttal (1,67 ± 0,89) összehasonlítva a hordozócsoport (0,48 ± 0,10) több zöld FL fluoreszcenciát mutatott, mint a vörös FL fluoreszcencia (2B. és D. ábra). A vörös és zöld FL fluoreszcencia közötti arány 1,11 ± 0,26 és 1,18 ± 0,16 értékre csökkent a 0,5 és 5 ug/ml CDP-ben.(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)kezelt csoportok rendre, p <,01. a="" zöld="" fl="" fluoreszcenciája="" jelentősen="">

3.4. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)megakadályozta az OGD/RP által kiváltott sejtapoptózist

A kondenzált kromatinokat vagy fragmentált sejtmagokat mutató sejteket apoptotikus sejtekként értékeltük [30]. A Hoechst33342 assay eredményei kondenzált magok megjelenését mutatták ki OGD/RP után (3A és C ábra). Magas FL fluoreszcencia intenzitást figyeltünk meg a vivőanyag-csoport sejtmagjaiban. A sejtmagok FL fluoreszcencia intenzitása gyengült az 5 ug/ml CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)kezelt csoport. Elemeztük az apoptotikus arányt a PC12 sejtekben társcitometriával, FITC-Annexin V/PI kettős festéssel (3B. és D. ábra). A kontrollcsoportban 4,16 százalék ± 0,24 százalékos sejt apoptotikus arány volt, míg a hordozó csoportban 22,98 százalék ± 0,66 százalék volt. Az 5 ug/ml CDP-vel kezelt csoportban a sejt apoptózis aránya 7.{14}} százalék ± 1,16 százalék volt.

3.5. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)gyengített OGD/RP-indukált intracelluláris ROS-felhalmozódás és megőrzött redox állapot

A CDP hatásai(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)Az oxidatív stresszt a ROS képződés, a GSH-Px, a CAT aktivitás és a T-AOC szintek alapján mutatták ki. Az OGD/RP-sérült PC12 sejtekben a ROS szint emelkedett, és szignifikánsan magasabb lett, mint a kontrollcsoportban (p < 0,01).="" eközben="" a="" ros="" szintje="" a="">(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok ({{0}},05, 0,5 és 5 ug/ml) dózisfüggő módon csökkentek (p < 0,01;="" 4a.="" ábra).="" ezenkívül="" a="" cdp="" jelentősen="" növelte="" a="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" 4b="" ábra),="" a="" cat="" (p="">< 0,05;="" 4c="" ábra)="" és="" a="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" 4d="" ábra)="" szintet="" a="" hordozóhoz="" képest="" csoport.="" az="" endogén="" antioxidánsok="" aktivitása="" a="">(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)csoportok növekedtek.

3.6. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)serkentette a DJ-1 kiválasztását és fokozta a DJ kifejeződését-1

A DJ-1 koncentráció változásait a sejtfelülúszóban észlelték, és feltárták a lehetséges kapcsolatot a DJ-1 és a CDP között(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok). DJ-1 felszabadulását figyelték meg az OGD/RP-vel sérült PC12 sejtekből (5. ábra). A DJ-1 jelentősen felülszabályozott az 5 ug/ml CDP-ben(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)-kezelt csoportban (38,66 ± 8,44 pg/ml), és szignifikánsan megnőtt, mint a hordozó csoportban (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) és a kontrollcsoportban (9,67 ± 3,96 pg/ml, p <,01) .

A CDP hatásainak vizsgálata(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)a DJ-1 intracelluláris expressziójára vonatkozóan Western blottal mértük a DJ-1 fehérjeszinteket. A DJ-1 fehérje expressziós szintje szignifikánsan megemelkedett 24 órával a reperfúzió után. Ezzel szemben az 5 ug/ml-es CDP utókezelés szignifikánsan fokozta a DJ-1 túlzott expresszióját a hordozó csoporthoz képest (p < 0,01,="" 6.="">

3.7. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)fokozott DJ{0}} transzlokáció a mitokondriumokba

A PC12 sejteket anti-PARK7/DJ-1 és anti-ATP szintáz-lánc antitestekkel festettük (7. és 8. ábra). Az anti-ATP szintáz - lánc antitestek a mitokondriális komplex I-hez kapcsolódnak, és a kötő antigén a mitokondriális belső membránban lokalizálódott. Az eredmények azt mutatták, hogy a DJ{10}} az OGD/RP sértést követően a mitokondriális belső membránba transzlokálódott (8. ábra). Eközben a DJ-1 és a mitokondrium kettős festési eredményei azt mutatták, hogy a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)megkönnyítette a DJ{0}} mitokondriális transzlokációt és társlokalizációt (8. ábra). Ezek az eredmények közvetlen interakciót jeleztek DJ-1 ésneuroprotektívCDP hatása(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)(9. ábra).

4. Megbeszélés

Ebben a tanulmányban első kézből számoltunk be arról, hogy a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)hatékonyan csökkenti az OGD/RP által indukált PC12 sejtkárosodást a DJ-1 fehérje fokozása révén. CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)javítja a sejtek életképességét, csökkenti a sejtmembrán károsodást, fenntartja az intracelluláris Ca2 plusz homeosztázist, megakadályozza az MMP elvesztését, csökkenti a sejt apoptózist, elnyomja az oxidatív stresszt, elősegíti a DJ-1 expresszióját és fokozott DJ-1 transzlokációt a mitokondriumokba. DJ-1 nemrégiben érintett a szabályozásábanneuroprotektívhatás és a mitokondriális integritás. Ezek az eredmények meggyőző bizonyítékot szolgáltattak aneuroprotektíva CDP hatásai(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)ischaemia ellen. Továbbá a CDP és DJ{0}} közötti interakció aneuroprotektívszerepet játszik az OGD/RP által kiváltott PC12 sejtkárosodásban. A fenti eredmények fejleszthetik a CDP jótékony hatásának megértését, és hasznos információkkal szolgálhatnak a jövőben a stroke terápiájához.

Az ischaemiás stroke-ot biokémiai és molekuláris mechanizmusok összetett sorozatának tulajdonítják, beleértve az excitotoxicitást, a kalcium túlterhelést és az oxidatív stresszt [31]. Az OGD/RP-t széles körben használják az ischaemia-reperfúzió in vitro modelljeként, és használják neurológiai és biokémiai változások feltárására. A PC12 sejtvonal érzékeny az OGD/RP károsodásra [2]. Számos szimpatikus neuron tulajdonságot és jellemzőt mutat [32], így széles körben használt neuronális sejtvonalakat a stroke okozta neurológiai károsodások mechanizmusaival kapcsolatos kutatásokhoz [33,34]. Számos tanulmány kimutatta, hogy az oxidatív stressz létfontosságú szerepet játszik a stroke és az agy ischaemia károsodásában [35–37]. A Parkinson-kórral összefüggő fehérje DJ-1 gátolja az ischaemiás neurodegenerációt és a viselkedési zavarokat azáltal, hogy csökkenti a ROS által közvetített neuronális károsodást [7]. Ezért az OGD/RP-sérüléses PC12 sejtmodellt használtuk aneuroprotektívCDP hatása(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok).

A PC12 sejtekben az OGD/RP által indukált sérülés mértékét MTT, NRU és LDH felszabadulási tesztekkel értékeltük. CDP adminisztrációja(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)({0}},05, 0,5 és 5 ug/ml) javította a sejtek túlélését és csökkentette az LDH felszabadulását. A CDP kezelés jótékony hatásai közé tartozott az intracelluláris kalcium túlterhelés csökkentése és az MMP megőrzése is. Az intracelluláris Ca2 plusz koncentráció eltérései, különösen a mitokondriális kalcium-túlterhelés összefüggésbe hozható a neuronális apoptózissal és az ischaemia stroke által kiváltott halállal [38]. Az MMP tükrözheti az elektrontranszport lánc hatékonyságát, és ennek a rendszernek a patológiás rendellenesség indexeként szerepel [39]. Mind az intracelluláris Ca2 plusz koncentráció emelkedése, mind az MMP elvesztése a neuron szerkezetének destabilizálódásához vezethet, és végül sejtkárosodáshoz vagy sejthalálhoz vezethet [21,40]. Ebben a vizsgálatban az eredmények azt mutatták, hogy a CDP szignifikánsan gátolta az intracelluláris Ca2 plusz túlterhelést és növelte az MMP szintet az OGD/RP-sérüléses PC12 sejtekben. Az apoptózis létfontosságú szerepet játszik az agyi ischaemia-reperfúziós sérülés összetett patofiziológiájában. Egyre több adat utal arra, hogy az apoptózis szerepet játszik a mitokondriális diszfunkcióban; az MMP disszipációja egy korai esemény, ami sejtapoptózist eredményez [8,39]. Az apoptózis egy energiafüggő programozott sejthalál folyamata a redundáns sejtek eltávolítására. Az ischaemiás stroke számos neuronja apoptózison megy keresztül [41]. Ebben a vizsgálatban Hoechst33342 és Annexin V-FITC/PI festést végeztünk, hogy megvizsgáljuk a CDP apoptózisra gyakorolt ​​hatását [23,28]. Az eredmények azt mutatták, hogy a CDP megőrzi a sejtmag integritását és csökkenti a sejt apoptózis sebességét. Mindezek az eredmények azt mutatták, hogy a CDP anti-apoptotikus aktivitása hozzájárult a PC12 sejtekben a neuronális sérülések kedvező hatásához.

A túlzott ROS-felhalmozódás következtében ischaemiás károsodást szenvedő sejtek, amelyek lipidperoxidációhoz, sejtmembrán-károsodáshoz, kalcium-túlterheléshez és mitokondriális diszfunkcióhoz vezethetnek, ami végső soron sejtapoptózishoz és sejthalálhoz vezethet [42]. Az endogén antioxidánsok, például a SOD, a CAT és a GSH-Px fogyasztása is jelezte az előfordulást. 9. ábra A CDP védő hatásának lehetséges mechanizmusai(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)OGD/RP által kiváltott PC12 sejtkárosodás ellen. A CDP kezelése elnyomja az oxidatív stresszt, stabilizálja a Ca2 plusz koncentrációt és az MMP-t, fokozza a DJ-1 expresszióját és lokalizációját a mitokondriumokban. Y. Liu és mtsai. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678az ischaemia-reperfúzió során jelentkező oxidatív stressz. Ebben a vizsgálatban az OGD/RP csoportban a ROS szignifikáns növekedése és a CAT, GSH-Px és T-AOC csökkenése mutatkozott az 5 ug/ml CDP-vel kezelt csoporthoz képest. Ugyanakkor jelentős csökkenést figyeltünk meg a ROS képződésének és az endogén antioxidánsok (CAT, GSH-Px és T-AOC) fogyasztásának arányában a CDP csoportokban. A jótékony hatások az 5 ug/ml CDP-csoportban közel voltak a Nimo csoportéhoz. Az eredmények arra utalnak, hogy a CDP gátolja a ROS képződését és helyreállítja az enzimatikus antioxidáns védelmet.

DJ-1 egy kulcsfontosságú redox-reaktívneuroprotektívfehérje, amely szerepet játszik a stroke oxidatív stresszének szabályozásában. A DJ-1 túlzott expressziójának jótékony hatásai közé tartozik az ischaemia-reperfúzióból származó sejtek túlélése, valamint a mitokondriális funkció és morfológia megőrzése, például a mitokondriumok permeabilitásának átmeneti pórusok megnyitása [39,43]. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a DJ-1 védő hatása az OGD/RP-nek kitett sejtekben antioxidáns tulajdonságaival és a mitokondriumok transzlokációjával függ össze [43–45]. A DJ-1 hatékony endogén neuroprotekciót végez a mitokondriális defektusok transzlokáció révén történő enyhítésében [46]. Számos tanulmány kimutatta, hogy a DJ{10}} transzlokációja hatással lehet a mitokondriális mozgásra, fokozhatja a sejt-sejt kölcsönhatást, és elősegítheti a sejt túlélést elősegítő egyéb folyamatait.

A DJ-1 számos folyamatot, például sejtmigrációt és sejtadhéziót, kemotaxist, proliferációt és apoptózist befolyásol mind in vitro, mind in vivo modellekben [6,9,47,48]. Az OGD/RP sérült PC12 sejtek stroke modelljét használva feltártuk a CDP közötti lehetséges kapcsolatot(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)és DJ-1. A DJ- 1 túlzott expresszióját ELISA és Western blot módszerrel azonosították. Ezzel a funkcióval együtt a kísérletek egyik fő megállapítása azt mutatta be, hogy a DJ-1 jelentős túlzott kifejeződése akkor következett be, amikor a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)(5 ug/ml) adtuk be a reperfúzió előtt. Ez egy lehetségesre utaltneuroprotektívhatás CDP és DJ kapcsolatában-1. Ezenkívül megfigyeltük, hogy a mitokondriumban található DJ-1 OGD/RP körülményei között és a DJ-1 bőséges expressziója csökkentette a sejtek ROS-ra való érzékenységét és gátolta az oxidatív stresszt [45]. Az eredmények azt sugallták, hogy a CDP szabályozza és fokozza a DJ-t-1, amely molekuláris kapcsolatként működik a mitokondriumok diszfunkciója és az oxidatív stressz között, és elősegíti a stroke-ban rejlő másodlagos sejthalál előrehaladását [5,47,49–51]. A mitokondriumban a DJ-1 stabilizálásával párhuzamosan a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)A kezelés növelte a sejtek túlélését, stabilizálta a Ca2 plusz homeosztázist, javította az MMP disszipációt és megakadályozta a mitokondriális apoptózist [43]. Összességében eredményeink azt mutatták, hogy a CDP újszerűneuroprotektívmechanizmus az ischaemiás stroke kezelésében.

5. Következtetés

Eredményeink azt mutatták, hogy a CDP(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)megvédi a PC12 sejteket az OGD/RP által kiváltott sérülésektől antioxidáns hatásai révén, amelyek részben a DJ-1 által közvetített útvonalnak tulajdoníthatók. Ezek a hatások közé tartozik a sejtmembrán károsodás mértékének csökkenése, a [Ca2 plusz] I homeosztázis megőrzése, az MMP disszipáció javulása, a sejt apoptózis gátlása, az intracelluláris ROS gyengülése és a DJ-1 szintek modulálása. Az eredmények azt is jelezték, hogy a CDP és a DJ-1 közötti kölcsönhatások erősítik a neuroprotektív hatást és fenntartják a mitokondriális integritást. Ezért a sebezhető neuronokat meg lehet védeni a CDP-vel(Sírüreganchedeserticolapoliszacharidok)a DJ{0}} expressziójának fokozása révén az ischaemia stroke során.

Köszönetnyilvánítás

Ezt a tanulmányt a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81360649 támogatás), a Nemzeti Tudományos és Technológiai Kulcsprogram (2015BAK45B01 támogatás) és a Ningxia Hui Autonóm Régió Tudományos és Technológiai Támogatási Programja (2016BZ07 támogatás) támogatta.

Cistanche deserticola poliszacharidokVan egy Neuroprotektív hatás

Hivatkozások

[1] A HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans megvédi a kérgi neuronokat a hipoxia által kiváltott toxicitástól a HDAC1/6, Neuromol leszabályozásával. Med. 18. (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: gyors reagálási program stroke-ra Kínában, Lancet Neurol. 16. (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Novel stroke therapys: unraveling stroke pathophysiology and it impact on klinikai kezelések, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH-oxidázzal kapcsolatos patofiziológia kísérleti stroke-modellekben, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} határozzák meg a sejt sorsát a 4-hpr által kiváltott oxidatív stressz hatására: autofágia vagy apoptózis? Antioxid redox jel. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 javítja az ischaemiás sejthalált in vitro, esetleg a mitokondriális útvonalon keresztül, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira és társai, DJ{{ 1}} védelmet nyújt a fokális agyi ischaemia és reperfúzió által okozott neurodegeneráció ellen patkányokban, J. Cereb. Véráram. Találkozott. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Oxigén-glükóz-deprived patkány primer idegsejtjei DJ{3}} transzlokációt mutatnak az egészséges mitokondriumokba: egy erős stroke terápiás célpont, CNS Neurosci. Ott. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, A ciklosporin A kezelés megszünteti az ischaemia által kiváltott neuronális sejthalált azáltal, hogy megőrzi a mitokondriális integritást a Parkinson-kórral összefüggő fehérje DJ-1, CNS Neurosci fokozásával. Ott. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu és munkatársai, Előkezelés nátrium-fenil-butiráttal Alleviates cerebralis ischaemia/ reperfúziós sérülés a DJ-1 fehérje felszabályozása miatt, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Egy neurofarmakológiai áttekintés, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): A hagyományos kínai orvoslás egyik legjobb gyógyszerészeti ajándéka, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Effects and mechanizmusok a kínai gyógynövénygyógyászatról a szívizom iszkémia-reperfúziós sérülésének javításában, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Sivatagi ginseng": áttekintés, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolafőzet enyhíti a hidroxi-karbamid által kiváltott heretoxicitást hím egerekben, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of theneuroprotektívnimodipin hatása a Neuro2a sejtekre műtétszerű stresszmodell segítségével, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektíva noscapin hatása az agyi oxigén-glükóz-megvonási károsodásra, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A védelmet nyújt az ischaemiás károsodás ellen patkánykérgi neuronok elsődleges tenyészetében oxigén-glükóz megvonás után reperfúzióval, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, transz-fahéjaldehid védte a PC12 sejteket oxigén- és glükózmegvonás ellen /reperfúzió (OGD/R) által kiváltott károsodás anti-apoptosis és antioxidatív stressz révén, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Protective effects of aloin on oxigén és glükózmegvonás által kiváltott sérülés PC12 sejtekben, Brain Res. Bika. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, a transz-rezveratrol megvédi az ischaemiás PC12 sejteket azáltal, hogy gátolja a hipoxiával kapcsolatos transzkripciós faktorokat és növeli az antioxidáns védekező enzimek (ACS) szintjét Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B megvédi a PC12 sejteket az oxigén-glükóz-megvonás által kiváltott neuronhaláltól azáltal, hogy fenntartja a mitokondriális homeosztázist az ubiquitin-függő indukción keresztül p53 fehérje degradáció, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu és munkatársai, Protective effffects of aloperine on neonatal rat primer tenyésztett hippocampalis neuronok, amelyek oxigén-glükóz megvonás és reperfúzió következtében sérültek, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, a Parecoxib megvédi az egérkérgi neuronokat az OGD/R által kiváltott neurotoxicitástól a Bcl-2 fokozásával, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabilizálja a HER2 expressziót és fenntartja a rákos őssejt populációt petefészekrák sejtekben, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Védi az RGC-5 sejteket a H(2)O( 2) a PI3K/Akt/eNOS jelátviteli útvonal aktiválásával kiváltott oxidatív stressz inzultusok, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, A propolisz diklór-metán kivonatai megvédik a sejtet az oxigén-glükóz-megvonás által kiváltott oxidatív stressztől Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679az apoptózis csökkentésén keresztül, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektívneuroserpin hatása oxigén-glükóz-megvonással és reoxigenációval kezelt patkány asztrocitákban in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, A lítium-ionok az Akt/FoxO1 jelátvitel szabályozásán keresztül gyengítik a szérummegvonás által kiváltott apoptózist PC12 sejtekben útvonalak, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan és társai, Vezetői összefoglaló szívbetegségek és stroke statisztikák 2016. évi frissítése. Az American Heart Association jelentése, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Muszkarin ligandumkötő helyek szabályozása idegnövekedési faktor által PC12 phaeochromocytoma sejtekben, Nature 297 (1982), 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, A neuroszteroid allopregnanolone csökkenti a magas glükóz által kiváltott apoptózist és megakadályozza a kísérleti diabéteszes neuropátiás fájdalmat: in vitro és in vivo vizsgálatok, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, a Resveratrol védi a PC12 sejteket az OGD/R-indukált apoptózis ellen a mitokondriális közvetített jelátviteli útvonalon keresztül, az Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH-oxidázok, mint az oxidatív stressz forrása és a molekuláris célpont ischaemiában/reperfúzióban sérülés, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, A vörösbor-kivonat, a rezveratrol szervvédő hatásai oxidatív stressz által közvetített reperfúziós sérülésben, Oxid. Med. Longev sejt. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, V. V. Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Különleges mPTP aktivációs mechanizmusok ischaemia-reperfúzióban: Ca2 plus plus, ROS, pH és szervetlen polifoszfát hozzájárulása, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Az alacsony dózisú etanolos előkondicionálás a nagy vezetőképesség aktiválásával véd az oxigén-glükóz megvonástól/Reoxigenáció által kiváltott neuronális sérülésektől , Ca2 plus plus -aktivált K plus plus Channels In Vitro, Neurosci. Bika. 33. (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effect of inhibitoring mitochondrial fission on energy metabolis in patkány hippocampalis neurons during ischaemia/reperfusion damage, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun és társai, Protective effffects of Lycium barbarum poliszacharid újszülött patkány primer tenyésztett hippocampalis neuronokon, amelyek oxigén-glükóz megvonás és reperfúzió következtében sérültek, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotikus mechanizmusok agyi ischaemia után, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, a Relaxin in vitro védi az asztrocitákat a hipoxiától, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, a kalcium/kalmodulin-függő protein kináz szabályozza a PINK1/Parkin és a DJ{3} } mitofágia útjai szepszis alatt, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ A PARK7 a hipoxia által kiváltott sejtes válaszok fontos közvetítője, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Kalcium/kalmodulin-függő protein kináz szabályozza a PINK1/ A mitofagia Parkin és DJ-1 útjai szepszis alatt, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3., RC Liddington, SA Lipton, A transznitroziláció DJ-ről-1 PTEN-re csökkenti az idegsejtek halálát Parkinson-kór modellekben, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 védelmet nyújt a sejthalál ellen akut szív ischaemia-reperfúziós sérülést követően Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ Az {1}} egy megbízható szérum biomarker a magas kockázatú méhnyálkahártyarák megkülönböztetésére, a Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan és társai, DJ-1 védi a nigrostriatálist tengelyből az MPTP neurotoxinból az AKT útvonal modulálásával, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, a Parkinson-kór fehérje DJ-1neuroprotektívcisztein-szulfinsav által vezérelt mitokondriális lokalizáció miatt, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, A DJ hiperglikémia által kiváltott gátlása-1 expressziója veszélyeztette az ischaemiás posztkondicionáló kardioprotekció hatékonyságát patkányokban, Oxid. Med. Longev sejt. (2013) (2013) 564902.