A botanikai bőrápoló összetevő kiválasztása többet jelent, mint egy vonzó növénytörténet megtalálása. Egy bőrápoló márka, szerződéses gyártó vagy összetevő-forgalmazó számára a hasznosabb kérdések a következők:

Milyen vegyületek vannak jelen a kivonatban?

Milyen következetesen tudja a gyártó szabályozni a koncentrációjukat?

Milyen kísérletek támasztják alá a javasolt alkalmazást?

A bizonyíték a ténylegesen vásárolt összetevőre vonatkozik?

Milyen további tesztelések szükségesek a késztermék forgalomba hozatala előtt?

Az ebben a cikkben vizsgált műszaki dokumentum arra összpontosítverbascoside a Cistanche-ból származikés javasolt alkalmazásai a bőr-lipid termelésben, hidratálásban és a védőgáttal kapcsolatos kutatásokban.

Leír egy tisztítási eljárást és laboratóriumi kísérleteket is, amelyek során a tisztított verbaszkozidot számos Cistanche kivonattal és egyéb összetevőkkel hasonlítják össze.

 

 

16% verbascoside cisztanche kivonat

A központi kereskedelmi tanulság egyértelmű: az általános Cistanche-kivonatot és a nagy tisztaságú Cistanche-származékot nem szabad felcserélhető összetevőként kezelni.

Bizonyítéki megjegyzés:Az alábbi kutatási eredményeket a fordításra szállított kínai szabadalom szövegében közöljük. A mellékelt anyag nem tartalmazza az eredeti ábrákat, a teljes numerikus adatkészleteket, a szabadalmi publikáció részleteit vagy a humán klinikai vizsgálatokat. Ezért ezt műszaki közzétételként kell értelmezni, nem pedig a késztermék hatékonyságának független megerősítéseként vagy hatósági jóváhagyásként.

 

1. Mi az a Verbascoside?

Verbascoside néven is ismertakteozid. Ezek ugyanannak a vegyi anyagnak a nevei, nem pedig két különböző hatóanyagra. Az FDA anyagnyilvántartása mindkét nevet ugyanazon anyagazonosító alatt sorolja fel. (precision.fda.gov)

 

 

A mellékelt leírásban a verbaszkozidot Cistanche fajok szárított, húsos szárából nyert fenil-etanol-glikozidként írják le. A megnevezett főbb botanikai források:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

A dokumentum a verbaszkozidot mint potenciális botanikai hatóanyagot vizsgálja helyi készítményekben, különös tekintettel a lipid-anyagcserére, a hialuronsav-termelésre, a szorosan összekapcsolódó fehérjékre és a sejtmigrációra.

Miért számít a név az összetevők vásárlásakor?

A szállítói árajánlatok összehasonlításakor kérjen megerősítést:

A botanikai faj és növényi rész.

Függetlenül attól, hogy az anyag teljes kivonat, standardizált kivonat vagy tisztított vegyület.

A mért verbascoside tartalom.

Az alkalmazott analitikai módszer és referenciastandard.

A megadott százalék tömeg- vagy kromatográfiás terület százalékos vizsgálatot jelent-e.

A „Cistanche kivonat”-ra vonatkozó idézet önmagában nem ad elegendő információt annak meghatározásához, hogy az megfelel-e az adott kísérletben értékelt anyagnak.

2. Miért összpontosít a közzététel a bőrkorlátra?

A dokumentum több végpontos kutatási koncepciót mutat be, nem pedig egyszerű felület-hidratálási állítást.

A javasolt sorrend a következő:

Epidermális sejtmegújulás → erősebb sejt-sejt kapcsolatok → lipidtámogatás → hialuronsav termelés → javítással kapcsolatos tevékenység

Ennek a koncepciónak a vizsgálatához a kutatók HaCaT sejteket használtak. A HaCaT egy halhatatlanná tett humán keratinocita sejtvonal, amelyet laboratóriumi modellként hoztak létre az epidermális biológia és a keratinizáció tanulmányozására. Ez nem egy sejttípus, amelyet természetesen „HaCaT”-nek neveznek az ember bőrén belül. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Az összetevőket vásárlók számára ez a megkülönböztetés számít:A tenyésztett sejtekben elért eredmények a kutatás kiindulópontját jelentik, nem helyettesítik a késztermék emberi bőrön történő tesztelését.

A jelentett fő végpontok

Kutatási terület	A mellékelt dokumentumban leírt mérések	Gyakorlati értelmezés
Sejtválasz	CCK-8 vizsgálat	Szűrési végpont; további módszerek erősítenék a proliferációs követelést
Lipidekkel kapcsolatos tevékenység	Zsírsav-szintáz aktivitás; ACC , FASN és N-SMase kifejezés	Támogatja a lipidanyagcsere további vizsgálatát, de nem határozza meg közvetlenül a teljes bőr-barrier lipidprofilt
Hialuronsav	HA tartalom; HAS2, HAS3 és CD44 expresszió	Támogatja a HA-val kapcsolatos utak további vizsgálatát
Cellák közötti kapcsolatok	Claudin-1 és occludin szintek	A teljes gát funkció helyett a kiválasztott szoros kapcsolódású fehérjéket méri
Javítással kapcsolatos tevékenység	Sejtkarcolási vizsgálat	In vitro részáró végpont, nem klinikai sebgyógyulási vizsgálat
Nedvesség visszatartás	A készítmény tömegének visszatartása üveglapokon	Egy készítmény szintű laboratóriumi vizsgálat, nem egy bőrön végzett hidratációs vizsgálat

Ezek az értelmezések a mellékelt szövegben leírt kísérleti módszerekből következnek.

 

3. Mitől hasznos ez a kutatás a bőrápoló vállalkozások számára?

A közzététel több anyagot hasonlít össze, nem pedig azt feltételezi, hogy minden Cistanche-eredetű összetevő ugyanazt a választ adja.

A tesztelt anyagok a következők:

Cistanche poliszacharid kivonat.

Számos feniletanoid-glikozid tartalmú kivonat.

Teljes fenil-etanoid glikozid kivonat.

Echinakozid.

Tisztított verbaszkozid.

A mellékelt dokumentum szerint a tisztított verbaszkozid több mért végponton is aktivitást mutatott. Néhány vegyes kivonat bizonyos vizsgálatokban aktivitást mutatott, másokban viszont nem.

A Vásárlás elvihető

Vásárolja meg a fejlesztési céljának megfelelő specifikációt – ne csak a növény nevét.

Például:

Ha a projekt a tisztított-verbaszkozid kísérleteken alapul, kérjen adatokat a tisztított anyaghoz.

Ha készítménye szabványos, teljes kivonatot használ, kérjen vizsgálatot ezen a kivonaton.

Ha egy szállító egy másik extrakciós eljárással kapcsolatos kutatásra hivatkozik, kérdezze meg, hogy a vizsgált összetétel összehasonlítható-e a kínált anyaggal.

Az egyik összetevő minőségére vonatkozó bizonyítékot nem szabad automatikusan átvinni egy másikra.

4. Hogyan készül a Verbascoside a közzétételben?

A leírt folyamat négy fő szakaszból áll:

Botanikai előkészítés:A szárított Cistanche húsos szárakat előkezelje és porítsa fel.

Kitermelés:Használjon 50–80%-os vizes etanolt.

Dúsítás:Válasszuk szét a frakciókat AB-8 makropórusos adszorpciós gyantával.

Tisztítás:Használjunk szilikagél kromatográfiát, majd koncentráljuk és liofilizáljuk.

A megadott végső tisztaság azlegalább 98%, bár a mellékelt szöveg nem tartalmazza a specifikáció független megerősítéséhez szükséges analitikai validálást vagy kötegelt adatokat.

Egy kritikus gyártási kérdés: maradék oldószerek

Az ismertetett kromatográfiás lépésben a következőt használjuk:kloroform és metanol.

Kereskedelmi beszerzési projekt esetén kérje meg a gyártótól a tényleges gyártási oldószerlistát, az oldószereltávolítási ellenőrzéseket és a tételspecifikus maradék oldószer-eredményeket. Az ICH Q3C gyógyszerészeti keretrendszert biztosít a maradék oldószer kockázatának értékeléséhez; nem szabad univerzális kozmetikai elfogadási szabványként ábrázolni. (ema.europa.eu)

Ne feltételezze, hogy a "növényi eredetű" azt jelenti, hogy "csak vízzel és etanollal készült".

 

5. Mit mutat valójában a nedvességmegtartó teszt?

A mellékelt dokumentum a következők összehasonlítását írja le:

Egy szérum, amely tartalmaz2% verbascoside.

Egy szérum, amely tartalmaz2% echinakozid.

Pozitív kontroll szérum, amely tartalmaz5% glicerin.

A mintákat a25 fok és 50% relatív páratartalom, és tömegüket idővel mérték.

A közzététel arról számol be, hogy a verbaszkozidot tartalmazó minta nagyobb tömeget tartott meg ilyen körülmények között.

Ez egy potenciálisan hasznos készítmény-szűrési megfigyelés. A leírt módszer azonban nem állapítja meg:

Kiváló hidratálás az emberi bőrön.

Alacsonyabb transzepidermális vízveszteség.

Klinikai fölény a glicerinnel szemben.

Jobb teljesítmény minden készítményben.

Azt, hogy a megfigyelt különbség csak a megnevezett aktívból adódott, teljesen feltárt illesztett jármű-összehasonlítás nélkül.

Ha egy márka összehasonlító állítást tervez, tesztelje a kész készítményeket egy megfelelően megtervezett tanulmány segítségével.

 

6. Gyakorlati Cistanche összetevő-beszerzési ellenőrzőlista

Használja a következő kérdéseket a Cistanche kivonat szállítójának vagy a tisztított verbaszkozid gyártójának értékelésekor.

Vásárlási kérdés	Dokumentáció kérésre
Mi a botanikai forrás?	A fajok azonosítása, a növényi részekre vonatkozó nyilatkozat és a nyomon követhetőségi információk
Pontosan mit szállítanak?	Teljes összetétel, beleértve a hordozóanyagokat, feldolgozási segédanyagokat és adott esetben segédanyagokat
Mennyi verbascoside van jelen?	Tétel-specifikus elemzési és vizsgálati módszertanúsítvány
Hogyan történik a személyazonosság megerősítése?	Kromatográfiás azonosítás és referencia-standard információk
Milyen oldószereket használnak?	A tényleges gyártási oldószer nyilatkozat és a maradék oldószer vizsgálati eredmények
Mennyire egységes a termelés?	Reprezentatív eredmények több tételből
Az anyag alkalmas a tervezett felhasználásra?	Rendeltetésszerű felhasználási dokumentáció és megfelelő biztonsági dokumentáció
Működni fog a kiválasztott képletben?	Oldhatósági, kompatibilitási, stabilitási és csomagolás-fejlesztési adatok
Mi támasztja alá a javasolt állításokat?	Vizsgálati jelentések ugyanarra az összetevő minőségére és lehetőleg a kész készítményre vonatkozóan

 

Ne használja a „természetes” kifejezést biztonsági következtetésként

A mellékelt szabadalmi szöveg kedvező biztonsági nyilatkozatot tesz az összetevő botanikai eredete alapján. Ez a nyilatkozat kereskedelmi kiadói képesítést igényel.

Az FDA kifejti, hogy egy összetevő forrása nem határozza meg a biztonságát: a növényi eredetű anyagok mérgező vagy allergén anyagokat is tartalmazhatnak. A biztonságot a tervezett felhasználási feltételekhez kell mérni. (fda.gov)

Emiatt kérjen biztonsági igazolást ahelyett, hogy a „természetes”, „növényi” vagy „nagy tisztaságú” termékekre hagyatkozna önálló biztosítékként.

 

7. Hogyan kell egy márkának megvitatnia a kutatást?

Tartsa külön a három réteget:

Amit a közzététel állít.

Amit a közölt kísérletek mértek.

Mit mutattak be a kész termékről.

Például a „HaCaT sejtekben lipidekkel kapcsolatos aktivitást vizsgálva” lényegesen különbözik a „klinikailag bizonyítottan javítja a bőrgátot” kifejezéstől.

Hasonlóképpen, az ekcéma kezelésére, az atópiás dermatitisz kezelésére vagy a sebek gyógyulására vonatkozó hivatkozásokat nem szabad közvetlenül a kozmetikai termékekre vonatkozó állításokba másolni. Az Egyesült Államokban a betegségek kezelésére vagy a szervezet szerkezetének vagy funkcióinak befolyásolására vonatkozó állítások azt eredményezhetik, hogy a terméket gyógyszerként szabályozzák. (fda.gov)

Egy kutatási cikk vagy szabadalmi hivatkozás önmagában nem jogosít fel terápiás marketing állításra.

8. Ajánlott fejlesztési út

A Cistanche-eredetű verbaszkozidot fontolóra vevő vállalkozások számára egy hasznos fejlesztési sorrend a következő:

Határozza meg a tervezett termékkategóriát és célpiacot.

Válassza ki az összetevő minőségét és az analitikai specifikációt.

Tekintse át az összetételt, a szennyeződéseket, a maradék oldószereket és a biztonsági dokumentációt.

Készítsen prototípust és értékelje az összetevők kompatibilitását.

Értékelje a készítmény és a csomagolás stabilitását.

Végezze el a megfelelő mikrobiológiai és biztonsági értékeléseket.

Tesztelje a készterméket a tervezett teljesítményre vonatkozó állításokkal.

Indítás előtt tekintse át a végső webhelyet, címkét és hirdetési nyelvet.

A közleményben szereplő koncentráció-tartomány0.01%–5.0%- nyilvánosságra hozott tartományként kell kezelni, nem pedig univerzálisan érvényesített formulázási ajánlásként.

 

Alsó sor az összetevőket vásárlóknak

A benyújtott kutatás a Cistanche-eredetű verbaszkozidot jelölte a bőrápolás további fejlesztésére, különösen a hidratálást és a gátolással kapcsolatos laboratóriumi végpontokat vizsgáló projektek esetében.

 

Cistanche akteozid tartalomjegyzék

 

Kattintson az Acteoside cistanche kivonat lista különböző tartalmának megtekintéséhez

 

 

 

A leghasznosabb tanulsága nem egyszerűen az, hogy "A Cistanche jót tesz a bőrnek." Ez azAz extrakciós módszer, a hatóanyag-tartalom, az összetevő azonosítása és a bizonyíték minősége mind befolyásolja, hogy egy botanikai összetevő alkalmas-e egy adott kereskedelmi projektre.

Amikor egy Cistanche gyártóhoz fordul, kezdje egy pontos kéréssel:

"Kérjük, adja meg a botanikai azonosítót, a verbascoside specifikációt, az analitikai módszert, a reprezentatív elemzési bizonyítványokat, a maradék oldószer eredményeket, a biztonsági dokumentációt és a készítményre vonatkozó útmutatást a projektünkhöz javasolt összetevő minőségéhez."

Ez a kérés sokkal erősebb alapot teremt a termékfejlesztéshez, mint a gyógynövénykivonat-porra vonatkozó általános megkeresés.

 

(54) A találmány címe

Módszer a verbaszkozid előállítására és alkalmazásának módja a bőr lipidtermelésének elősegítésére

(57) Absztrakt

A találmány tárgya eljárás verbaszkozid előállítására, valamint eljárás bőrlipidtermelés elősegítésére, amely a bőrápoló és topikális termékek műszaki területéhez tartozik.

A módszer a következő lépésekből áll:

Az Orobanchaceae növények szárított húsos szárának kiválasztásaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, vagyCistanche salsa; a szárak porítása előkezelés után; visszafolyató hűtő alatt 50–80 %-os vizes etanollal kétszer-négyszer extraháljuk egy-három órán keresztül; a kivonatok kombinálása; és csökkentett nyomáson bepároljuk, amíg etanolszag nem marad, így tömény oldatot kapunk.

A koncentrált oldat átvezetése egy AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlopon; egymást követő eluálás ionmentesített vízzel és 30–50%-os vizes etanollal a szennyeződések eltávolítása érdekében; majd a célösszetevőket 60–90%-os vizes etanolos oldattal eluáljuk; az eluátumot összegyűjtjük és csökkentett nyomáson betöményítjük; szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk, eluensként kloroform–metanol 5:1 és 2:1 közötti térfogatarányban; a célfrakciók összegyűjtése; és csökkentett nyomáson betöményítjük, majd fagyasztva szárítjuk, így tisztított verbaszkozidot kapunk.

A találmány szerinti jótékony hatások az, hogy a verbaszkozid védi a bőrt, és javított bőrápoló hatást fejt ki, ha termékekbe kerül.

 

Követelések

1. állítás

1. Eljárás verbaszkozid előállítására, amely a következő lépésekből áll:

Az Orobanchaceae növények szárított húsos szárának kiválasztásaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, vagyCistanche salsa; porításuk előkezelés után; visszafolyató hűtő alatt 50–80 %-os vizes etanollal kétszer-négyszer extraháljuk egy-három órán keresztül; a kivonatok kombinálása; és csökkentett nyomáson bepároljuk, amíg etanolszag nem marad, így tömény oldatot kapunk.

A koncentrált oldat átvezetése egy AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlopon; egymást követő eluálás ionmentesített vízzel és 30–50%-os vizes etanollal a szennyeződések eltávolítása érdekében; majd a célösszetevőket 60–90%-os vizes etanolos oldattal eluáljuk; az eluátumot összegyűjtjük és csökkentett nyomáson betöményítjük; szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk, eluensként kloroform–metanol 5:1 és 2:1 közötti térfogatarányban; a célfrakciók összegyűjtése; csökkentett nyomáson koncentráljuk; és fagyasztva szárítjuk, hogy legalább 98%-os tisztaságú, tisztított verbaszkozidot kapjunk.

 

2. állítás

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás verbaszkozid előállítására, ahol az anyag/oldószer arány a refluxos extrakció során 1:10 és 1:20 között van, és az extrakciós hőmérséklet 60° és 80° között van.

 

3. állítás

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás verbaszkozid előállítására, ahol a AB-8 makropórusos adszorpciós gyantaoszlop átmérő/magasság aránya 1:8 és 1:15 között van, és az elúciós áramlási sebesség 1 és 3 BV/h között van.

 

4. állítás

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás verbaszkozid előállítására, ahol a fagyasztva szárítás körülményei közé tartozik a -40 °C és -50 °C közötti hőmérséklet, a 10 és 30 Pa közötti vákuumnyomás és a 12 és 24 óra közötti szárítási idő.

 

5. állítás

5. Eljárás verbaszkozid alkalmazására a bőr lipidtermelésének elősegítésére, az 1-4. igénypontok bármelyike ​​szerint előállított verbaszkozid felhasználásával, azzal jellemezve, hogy az alkalmazási eljárás a következőket tartalmazza:

Verbaszkozid hozzáadása a helyi termékalaphoz előre meghatározott tömegarányban, és egyenletes keverés a késztermék előállításához; a késztermék felvitele a bőrfelületre naponta egyszer vagy kétszer; lehetővé téve a verbaszkozid behatolását és az epidermális HaCaT sejtekre ható hatást, hogy fokozza az ACC, FASN és N-SMáz gén- és fehérjeexpresszióját, és növelje a zsírsav-szintáz aktivitást; és folyamatos használat 1-4 hétig a bőr lipidszintézisének fokozására.

A verbascoside elősegíti a HaCaT-sejtek proliferációját, a sebgyógyulást, a szoros kapcsolódású fehérje expressziót, valamint a lipid- és hialuronsav-termelést, ezáltal több célpontot biztosító gát-javító funkciókat biztosít.

Az egész bőr-barrier fenntartó láncban alkalmazzák, amely magában foglalja az epidermális sejtmegújítást, a fokozott sejtközi kapcsolatokat, a lipidmátrix feltöltését és a hialuronsav szintézisét, mint természetes hidratáló faktort.

 

6. állítás

6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazási eljárás, ahol a verbaszkozid tömeghányada a helyi termékben 0,01% és 5,0% között van.

 

7. állítás

6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazási eljárás, ahol 0,1-0,5 g készterméket alkalmazunk alkalmazásonként, majd egy-három percig enyhe masszírozást végzünk a felszívódás elősegítésére.

 

8. állítás

6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazási eljárás, ahol a topikális termék egy orvosi kötszer, egy eljárás utáni javító termék, egy atópiás dermatitisz kiegészítő kezelési terméke, egy kifejezetten érzékeny bőrre szánt bőrápoló termék vagy egy intenzív hidratáló és helyreállító bőrápoló termék.

 

9. állítás

6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazási eljárás, azzal jellemezve, hogy a verbaszkozid alkalmazása során segédanyagokat is alkalmazhatunk.

 

10. állítás

10. A 9. igénypont szerinti alkalmazási eljárás, ahol a segédanyag egy nedvesítőszer, egy emulgeálószer, egy tartósítószer, egy illatanyag vagy egy nyugtatószer, és a segédanyag-tartalmú készítmény adagolási formája egy lotion, egy krém, egy gél, egy szérum vagy egy lapos maszk oldat.

 

Módszer a verbaszkozid előállítására és alkalmazásának módja a bőr lipidtermelésének elősegítésére

 

Műszaki terület

[0001]A találmány a bőrápoló és helyi termékek műszaki területéhez tartozik. Közelebbről, a találmány egy eljárásra vonatkozik verbaszkozid előállítására és egy eljárásra annak alkalmazására a bőr lipidtermelésének elősegítésére.

Pontosabban a verbaszkozid előkészítési módszerére vonatkozik, amelynek célja, hogy az epidermális sejtmegújulás teljes bőrbarrier-javító szekvenciáján fejtsen ki hatást → fokozott intercelluláris szoros csomópontok → lipidmátrix feltöltése → hialuronsav szintézis → sebgyógyulás, a bőr védelmére.

 

Háttér Art

[0002]Az epidermális sejtmegújulás, a fokozott intercelluláris szoros csomópontok, a lipid-mátrix feltöltődés, a hialuronsav szintézis és a sebgyógyulás egyaránt nélkülözhetetlen szerepet játszik a bőr-barrier homeosztázis fenntartásában.

Az epidermális sejtmegújulás a gátépítés alapja. A bazális keratinociták proliferációjának és differenciálódásának felgyorsításával biztosítja, hogy megfelelő számú sejt rendezett módon mozogjon felfelé, megfelelő sejtanyagot biztosítva a gátképzéshez.

Az intercelluláris junkciós struktúrák, beleértve a szoros kapcsolódási pontokat és a dezmoszómákat, az újonnan képződött sejteket egymáshoz rögzítik, így sűrű, folyamatos fizikai gátat hoznak létre, amely hatékonyan ellenáll a külső irritáló anyagok bejutásának.

A sejtek közötti tereket kitöltő lipidmátrix rendezett lamelláris szerkezetet alkot, és a vízveszteség utak lezárásának fő eszköze.

Az epidermiszben és a dermiszben szintetizált hialuronsav erős vízmegtartó hálózatot alkot, nedvességgel látja el a stratum corneumot, és fenntartja a sejt homeosztázist. Megfelelő nedves környezetet is biztosíthat ezekhez a fiziológiai folyamatokhoz, és sejtjeleket továbbíthat.

A sebgyógyulás nagymértékben függ ettől a négy folyamattól. Először is, a hialuronsav ideiglenes mátrixot és jelzőfunkciókat biztosít. Ekkor a seb befedéséhez epidermális sejtmegújulás szükséges. Az újonnan képződött sejteknek újra szoros kapcsolódási pontokat kell létrehozniuk, és fel kell tölteniük a lipidmátrixot, hogy befejezzék a barrier funkció helyreállítását.

Ez az öt folyamat egymás után indul be a sebgyógyulás során. Összekapcsolt, összehangolt tevékenységeik – a sejtmegújulástól és a szerkezeti megerősítéstől a mátrixfeltöltésig és a víztárolásig – együttesen egy teljesen stabilizált bőrgáthoz vezetnek.

Nemcsak a külső irritáló hatásokkal szembeni ellenálláshoz szükséges fizikai erőt biztosítják, hanem a belső vízvesztés megakadályozásához szükséges nedvességmegtartó képességet is, lehetővé téve a bőr hosszú távú egészségének megőrzését dinamikus egyensúlyi állapotban.

Ennek megfelelően a többdimenziós, szisztematikus rekonstrukció alapvetőbb, mint pusztán a felületi nedvesség javítása. Javíthatja a bőr ellenálló képességét és nedvességmegtartását a forrásnál, így tartósabb és stabilabb egészséges állapotot biztosít.

[0003]A bőr saját lipid- és hialuronsavtermelése alapvető fontosságú a bőr egészségének megőrzésében, a környezeti irritációval szembeni ellenállásban és a fiatalos állapot megőrzésében.

A nedvesség megtartása és a mikroorganizmusok és szennyező anyagok elleni védekezés révén ezek az anyagok hozzájárulnak a bőr normál élettani működéséhez.

A külső táplálékkiegészítéshez képest a bőr saját lipid- és hialuronsavtermelésének elősegítését alapvetőbb és tartósabb stratégiaként írják le, amely közvetlenül erősíti a bőr „önjavító képességét” és „rezisztenciáját”.

Az olyan bőrbetegségek esetében, mint az atópiás dermatitisz és az ekcéma, a lipid- és hialuronsavtermelés erősítésének központi prevenciós és terápiás jelentősége van.

A forrás elmagyarázza, hogy ezek az állapotok gyakran olyan genetikai hibákkal járnak, amelyek gyengítik a bőr „tégla és habarcs” szerkezetét, lehetővé téve az allergének és irritáló anyagok könnyebb behatolását, és tartós immun-gyulladásos ciklust indítanak el.

Ezért az olyan hatóanyagok azonosítása, amelyek aktiválják a kulcsfontosságú lipidszintézis enzimeket, mint például a FASN és az ACC, vagy közvetlenül indukálják a hialuronsav termelését, proaktívan fenntarthatják és javíthatják a sejt lipid- és hialuronsavtermelését.

A közzététel szerint ez a stratégia enyhítheti a szárazságot, a viszketést és a gyulladásos epizódokat, miközben csökkenti a külső kiváltó okokat azok forrásánál, csökkenti a kiújulás gyakoriságát és súlyosságát, és elősegíti a betegség kezelésének a passzív kezelésről az aktív megelőzésre való áthelyezését.

 

[0004]A verbaszkozid egy fenil-etanol-glikozid, és az Orobanchaceae növények egyik fő összetevője:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisIntés; és

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

A kutatások kimutatták, hogy a verbaszkozid erős antioxidáns, és farmakológiai hatásokkal rendelkezik, beleértve a gyulladásgátló, neuroprotektív, májvédő és öregedésgátló hatásokat.

A számos növényből származó bőrvédő szerek szűrése során a feltalálók azt találták, hogy a verbaszkozid nemcsak elősegíti a HaCaT-sejtek proliferációját és a szoros kapcsolódású fehérje expresszióját, hanem szabályozza a zsírsav-szintáz aktivitását is, ezáltal fokozza a bőr lipidszintézisét.

Ezenkívül aktiválja a hialuronsav termelésében részt vevő útvonalakat, és ezt követően elősegíti a sebgyógyulást.

Ezek a tevékenységek magukban foglalják az epidermális sejtmegújulás teljes bőrgát karbantartását és javítási folyamatát → fokozott sejtközi kapcsolatokat → lipid-mátrix feltöltést → hialuronsav szintézist → sebgyógyulást.

A Verbascoside ezért többcélú bőrvédő és hidratáló szerként használható funkcionális bőrápoló és helyi termékekben.

Ilyenek például az orvosi kötszerek és az eljárás utáni javítási termékek; kiegészítő termékek atópiás dermatitisz vagy ekcéma kezelésére; kifejezetten érzékeny bőrre vagy rosaceára szánt bőrápoló termékek; valamint intenzív hidratáló és javító termékek mindennapi használatra.

 

A találmány összefoglalása

[0005]A találmány tárgya eljárás verbaszkozid előállítására, valamint eljárás annak alkalmazására a bőr lipidtermelésének elősegítésére.

Az elkészítési módszer a verbaszkozidra vonatkozik, amely az epidermális sejtmegújulás teljes bőrbarrier-javító szekvenciáját támogatja → fokozott intercelluláris kapcsolatok → lipid-mátrix feltöltődés → hialuronsav szintézis → sebgyógyulás.

Azzal a technikai problémával foglalkozik, hogy egy új, többcélú hatóanyagot tartalmazó hatóanyagot biztosítson bőrápoló vagy helyi termékek számára.

A Verbascoside a leírások szerint az az előnye, hogy a teljes bőrgát-javító láncon keresztül hat, és a meglévő egyetlen célpontú bőrápoló összetevőknél jobb hatást fejt ki, mint például az olyan összetevők, amelyek csak a hialuronsav szintézisét segítik elő, csak a sejtburjánzást, vagy önmagukban biztosítják a hidratálást.

[0006]A fenti célok elérése érdekében a találmány a következő műszaki megoldást alkalmazza.

[0007]A verbaszkozid előállítására szolgáló eljárás a következő lépéseket tartalmazza.

[0008]Válassza ki az Orobanchaceae növények szárított húsos szárátCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, vagyCistanche salsa.

Blansírozás, szárítás és porítás után az anyagot visszafolyató hűtő alatt 50–80%-os vizes etanollal kétszer-négyszer, egy-három órán keresztül extraháljuk.

A kivonatokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson addig töményítjük, amíg etanolszag nem marad, így tömény oldatot kapunk.

[0009]Engedje át a koncentrált oldatot egy AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlopon.

Egymás után ionmentesített vízzel és 30–50%-os vizes etanolos oldattal eluáljuk a szennyeződések eltávolítására, majd 60–90%-os vizes etanolos oldattal a célösszetevők eluálásához.

Az eluátumot összegyűjtjük és csökkentett nyomáson koncentráljuk.

Tisztítsa meg a koncentrátumot szilikagél oszlopkromatográfiával, eluensként kloroform–metanol 5:1 és 2:1 közötti térfogatarányban.

Gyűjtsük össze a célfrakciókat, koncentráljuk csökkentett nyomáson, és liofilizáljuk, hogy legalább 98%-os tisztaságú tisztított verbaszkozidot kapjunk.

[0010]Adott esetben az anyag/oldószer arány a refluxos extrakció során 1:10 és 1:20 között van, g/ml-ben kifejezve, és az extrakciós hőmérséklet 60 és 80 fok között van.

A fordító megjegyzése: A forrás azt is kijelenti, hogy ez az arány azt jelenti, hogy "1 g nyersanyagot adunk 1 ml oldószerhez". Ez az állítás nem felel meg a megadott 1:10–1:20 tartománynak, amely grammonként 10–20 ml oldószernek felel meg.

[0011]Opcionálisan a AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlop átmérő/magasság aránya 1:8 és 1:15 között van, ahol az arány az oszlop átmérője (d) és az oszlop magassága (h). Az elúciós áramlási sebesség 1 és 3 BV/h között van.

[0012]Adott esetben a fagyasztva szárítás körülményei közé tartozik a -40 fok és -50 fok közötti hőmérséklet, a 10 és 30 Pa közötti vákuumnyomás és a 12 és 24 óra közötti szárítási idő.

[0013]Az alábbiakban ismertetjük a verbaszkozid alkalmazásának módszerét a bőr lipidtermelésének elősegítésére.

[0014]Adjon verbaszkozidot a helyi termékalaphoz egy előre meghatározott tömegarányban, és egyenletesen keverje össze, hogy készterméket kapjon.

A kész terméket naponta egyszer vagy kétszer vigye fel a bőrfelületre.

A behatolás révén a verbaszkozid az epidermális HaCaT sejtekre hat, elősegítve a sejtproliferációt és megerősítve a szoros kapcsolatokat.

Ugyanakkor fokozza az ACC, FASN és N-SMase gén- és fehérjeexpresszióját, növeli a zsírsav-szintáz aktivitást, szabályozza a HAS2-t, a HAS3-at és a CD44-et, valamint növeli a hialuronsav-tartalmat.

Folytassa a használatát 1-4 hétig, hogy elérje a bőrgát általános javulását.

[0015]Adott esetben a verbaszkozid tömeghányada a helyi termékben 0,01% és 5,0% között van.

[0016]Opcionálisan használjon 0,1–0,5 g készterméket alkalmazásonként, és az alkalmazás után 1-3 percig gyengéden masszírozza be, hogy elősegítse a felszívódást.

[0017]Opcionálisan a helyi készítmény lehet orvosi kötszer, műtét utáni javító termék, atópiás dermatitisz kiegészítő kezelési terméke, kifejezetten érzékeny bőrre szánt bőrápoló termék vagy intenzív hidratáló és helyreállító bőrápoló termék.

[0018]Adott esetben segédanyagok is hozzáadhatók a verbaszkozid alkalmazása során.

[0019]Ezenkívül a segédanyagot nedvesítőszer, emulgeálószer, tartósítószer, illatanyag vagy nyugtató anyag közül választjuk ki.

A segédanyagot tartalmazó készítmény adagolási formája egy lotion, egy krém, egy gél, egy szérum vagy egy lapos maszk oldat.

 

A találmány jótékony hatásai

[0020]A találmány előnyös hatásai a következők.

[0021]A találmány bizonyítja, hogy a verbaszkozid alapvető tevékenysége a bőr lipid- és hialuronsav-termelésének elősegítése.

Elősegítheti a bőrsejtek proliferációját, erősítheti a sejtek közötti szoros csomópontokat és felgyorsíthatja a sebgyógyulást, egy zárt hurkú mechanizmust alkotva, amely "elősegíti a sejtburjánzást → stabilizálja az intercelluláris kapcsolatokat → fokozza a lipid- és hialuronsavtermelést → gyorsítja a helyreállítást és gyógyulást".

A technika állásához képest a találmány a következő előnyökkel rendelkezik.

[0022]A verbascoside egy természetes növényi eredetű hatóanyag, amely magas szintű biztonsággal és egyértelműen meghatározott farmakológiai aktivitással rendelkezik, elkerülve a kémiailag szintetizált összetevőkkel kapcsolatos esetleges bőrirritáció kockázatát.

Szerkesztői minősítés: Ez a forrás biztonsági állítása, nem pusztán botanikai eredetű következtetés.

[0023]Javul a verbaszkozid előkészítési hatékonysága és hozama.

[0024]A verbascoside a célpontok széles skálájára hat, és egyszerre több kulcsfontosságú folyamatot szabályoz, beleértve a sejtproliferációt, a szoros kapcsolódási pontú fehérje expressziót, a lipidszintézist, a hialuronsav termelését és a sebgyógyulást.

Ezáltal integrált módon javítja a bőrvédő funkciót, és a hatások jobbak, mint az egycélú összetevők.

[0025]Alkalmazása széles körű, beleértve az orvosi javítást, a bőrbetegségek kiegészítő kezelését, az érzékeny bőr ápolását, valamint a napi hidratálást és helyreállítást, kielégítve a különböző populációk bőregészségügyi igényeit.

 

A rajzok rövid leírása

[0026]A találmány vagy a technika állása szerinti kiviteli alakok műszaki megoldásainak pontosabb ismertetése érdekében az alábbiakban röviden bemutatjuk a kiviteli alakok vagy a technika állása szerinti leírásához szükséges rajzokat.

Az alábbiakban ismertetett rajzok a találmánynak csak bizonyos kiviteli alakjait mutatják be. A szakterületen átlagosan képzett személy kreatív erőfeszítés nélkül más rajzokat is készíthet belőlük.

[0027]Az 1. ábra a találmány szerinti előállítási eljárás sematikus folyamatábrája.

[0028]A 2. ábra a HaCaT sejtek életképességi adatait mutatja be.

[0029]A 3. ábra zsírsav-szintáz aktivitási adatokat mutat be.

[0030]A 4. ábra a hialuronsav-tartalom adatait mutatja be.

[0031]Az 5. ábra a találmány szerinti HaCaT sejtek életképességi adatait mutatja be.

[0032]A 6. ábra a találmány szerinti zsírsav-szintáz aktivitási adatokat mutatja be.

[0033]A 7. ábra a zsírsavszintézissel kapcsolatos gének expresszióját mutatja be.

[0034]A 8. ábra a zsírsavszintézissel kapcsolatos fehérjék expresszióját mutatja be.

[0035]A 9. ábra a zsírsavszintézissel kapcsolatos Western blot eredményeket mutatja be.

[0036]A 10. ábra a hialuronsav-tartalom adatait mutatja be.

[0037]A 11. ábra a hialuronsav szintézissel kapcsolatos gének expresszióját mutatja be.

[0038]A 12. ábra a hialuronsav szintéziséhez kapcsolódó fehérjék expresszióját mutatja be.

[0039]A 13. ábra a hialuronsavval kapcsolatos Western blot eredményeket mutatja be.

[0040]A 14. ábra a claudin-1 expressziós szinteket mutatja be.

[0041]A 15. ábra az okkludin expressziós szintjeit mutatja be.

[0042]A 16. ábra a sebzáródási arányokat mutatja be.

[0043]A 17. ábra a sejtkarcolási vizsgálatból származó képeket mutatja be.

[0044]A 18. ábra a különböző minták hidratáló teljesítményének értékelését mutatja be.

 

A kiviteli alakok részletes leírása

[0045]Az alkalmazás kiviteli alakjait az alábbiakban részletesen ismertetjük a mellékelt rajzokra hivatkozva.

1. példa: Tisztított verbaszkozid előállítása

[0046]1. példa

[0047]Amint az 1. ábrán látható, ez a példa egy módszert mutat be a verbaszkozid (rövidítve Ver) előállítására, amely a következő lépéseket tartalmazza.

[0048]Válassza ki a szárított húsos szárátCistanche deserticolavagyCistanche tubulosa, mindkettő az Orobanchaceae családjába tartozik.

Szeleteljük fel az anyagot, blansírozzuk 10-25 percig forrásban lévő vízben, majd 40-60 fokos sütőben szárítjuk, így a verbaszkozid tartalma több mint négyszeresére nő.

 

 

Jegyzet:* vs. üres kontrollcsoport, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Porítás után az anyagot visszafolyató hűtő alatt 50–80%-os vizes etanollal kétszer-négyszer, egy-három órán keresztül extraháljuk.

A kivonatokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson addig töményítjük, amíg etanolszag nem marad, így tömény oldatot kapunk.

 

[0049]Engedje át a koncentrált oldatot egy AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlopon.

Egymás után ionmentesített vízzel és 30–50%-os vizes etanolos oldattal eluáljuk a szennyeződések eltávolítására, majd 60–90%-os vizes etanolos oldattal a célösszetevők eluálásához.

Az eluátumot összegyűjtjük és csökkentett nyomáson koncentráljuk.

Tisztítsa meg szilikagél oszlopkromatográfiával, eluensként kloroform–metanol 5:1 és 2:1 közötti térfogatarányban.

Gyűjtsük össze a célfrakciókat, koncentráljuk csökkentett nyomáson, és liofilizáljuk, hogy legalább 98%-os tisztaságú tisztított verbaszkozidot kapjunk.

[0050]Pontosabban, az anyag/oldószer arány a refluxos extrakció során 1:10 és 1:20 között, az extrakciós hőmérséklet pedig 60 és 80 fok között van.

[0051]A AB-8 makropórusos adszorpciós gyanta oszlop átmérő-magasság aránya 1:8 és 1:15 között van, az elúciós áramlási sebesség pedig 1 és 3 BV/h között van.

[0052]A fagyasztva szárítás körülményei közé tartozik a -40 és -50 fok közötti hőmérséklet, a 10 és 30 Pa közötti vákuumnyomás és a 12 és 24 óra közötti szárítási idő.

 

2. táblázat Különböző minták bioaktivitásának összefoglalása

Index	Üres vezérlő	Pozitív kontroll	CTE	Ech	Ver
A sejtek életképessége (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS aktivitás (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
HA-tartalom (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Claudin-1 expresszió (pg/ml)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Occludin expresszió (pg/ml)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 órás sebgyógyulási arány (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 órás sebgyógyulási arány (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Jegyzet:* vs. üres kontrollcsoport, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

2. példa: Cistanche poliszacharid kivonat előállítása

[0053]2. példa

[0054]A Cistanche-t kétszer extraháljuk melegített visszafolyató hűtő alatt 20-szoros, illetve 15-szörös mennyiségű vízzel három órán keresztül, illetve két órán keresztül.

Szűrjük le, egyesítsük a szűrleteket, és 80-90 fokon koncentráljuk.

Adjunk hozzá 215 ml 95%-os etanolt, hogy 80%-os végső etanolkoncentrációt érjünk el, és hagyjuk egy éjszakán át 4 °C-on.

Gyűjtsük össze a csapadékot szűréssel, a szűrőlepény megtartásával, vagy centrifugálással 4000 fordulat/perc mellett 10 percig.

A csapadékot háromszor mossuk abszolút etanollal, és szárítsuk meg 50 fokon, így POL-nak nevezett Cistanche poliszacharid kivonatot kapunk.

 

3. példa: Fenil-etanol-glikozid-kivonat előállítása

[0055]3. példa

[0056]A Cistanche-t kétszer extraháljuk melegített visszafolyató hűtő alatt 20-szoros, illetve 15-szörös mennyiségű vízzel három órán keresztül, illetve két órán keresztül.

Szűrjük le, egyesítsük a szűrleteket, és 80-90 fokon koncentráljuk.

Adjunk hozzá 215 ml 95%-os etanolt, hogy 80%-os végső etanolkoncentrációt érjünk el, és hagyjuk egy éjszakán át 4 °C-on.

Gyűjtsük össze a szűrletet szűréssel vagy a felülúszót centrifugálással 4000 fordulat/perc mellett 10 percig.

Töményítse és szárítsa meg, hogy megkapja a Cistanche fenil-etanol-glikozid-kivonatot, amelyet POLS-nek nevezünk.

A tesztelés 21,8%-os echinakozid- és 1,2%-os verbaszkozid-tartalmat mutatott ki.

 

4. példa: RE1 kivonat elkészítése

[0057]4. példa

[0058]ÁztatásCistanche deserticolahatszoros mennyiségben, 52%-os etanolban szobahőmérsékleten 10 napig.

Szűrje le és tartsa vissza a növényi maradékot.

Szárítás után a maradékot egyszer extraháljuk visszafolyató hűtő alatt, hatszoros mennyiségű 95%-os etanollal két órán át.

Szűrjük le, egyesítsük a szűrleteket, 60 °C-on töményítsük be, és szárítsuk meg, hogy megkapjuk a Cistanche fenil-etanol-glikozidok és származékaik RE1 jelzésű kivonatát.

A kivonat olyan összetevőket tartalmaz, mint az echinacoside, a verbascoside, az izoverbascoside és a 2′-acetilverbaszkozid.

 

5. példa: RE2 kivonat előállítása

[0059]5. példa

[0060]KivonatCistanche tubulosakétszer 75%-os etanollal, minden alkalommal egy órán át.

Szűrje le és tartsa vissza a maradékot.

Szárítás után a maradékot egyszer extraháljuk visszafolyató hűtő alatt, hatszoros mennyiségű 95%-os etanollal két órán át.

Szűrjük le, egyesítsük a szűrleteket, 60 °C-on töményítsük be, és szárítsuk meg, hogy megkapjuk a Cistanche feniletanoid-glikozidok és származékaik RE2 jelzésű kivonatát.

A kivonat olyan összetevőket tartalmaz, mint az echinacoside, a verbascoside, az izoverbascoside és a 2′-acetilverbaszkozid.

 

6. példa: Összes fenil-etanol-glikozid kivonat előállítása

[0061]6. példa.

[0062]Szeletelje fel a Cistanche-t, és kétszer extrahálja 75%-os etanollal 1,5 órán keresztül.

A kivonatokat egyesítjük, töményítjük és szárítjuk, hogy CTE-nek nevezett Cistanche feniletanoid-glikozid kivonatot kapjunk.

A tesztelés 22,6%-os echinakozid- és 4,5%-os verbaszkozid-tartalmat mutatott ki.

 

7. példa: Alkalmazási mód

[0063]7. példa.

[0064]Az 1. példa alapján ez a példa egy alkalmazási módszert mutat be, amelyen keresztül a verbaszkozid hatást fejt ki az epidermális sejtmegújulás → fokozott intercelluláris kapcsolatok → lipidmátrix feltöltése → hialuronsav szintézis → sebgyógyulás teljes bőrbarrier-javító szekvenciáján.

A konkrét alkalmazási mód a következő.

[0065]Adjon verbaszkozidot a helyi termékalaphoz egy előre meghatározott tömegarányban, és egyenletesen keverje össze, hogy készterméket kapjon.

A kész terméket naponta egyszer vagy kétszer vigye fel a bőrfelületre.

A behatolás révén a verbaszkozid az epidermális HaCaT sejtekre hat, elősegítve a sejtproliferációt és megerősítve a szoros kapcsolatokat.

Ugyanakkor fokozza az ACC, FASN és N-SMase gén- és fehérjeexpresszióját, növeli a zsírsav-szintáz aktivitást, szabályozza a HAS2-t, a HAS3-at és a CD44-et, valamint növeli a hialuronsav-tartalmat.

Folytassa a használatát 1-4 hétig, hogy elérje a bőrgát általános javulását.

[0066]Pontosabban, a verbaszkozid tömeghányada a helyi termékben 0,01% és 5,0% között van.

[0067]Alkalmazásonként 0,1–0,5 g készterméket használjon, és az alkalmazás után 1-3 percig gyengéden masszírozza be, hogy elősegítse a felszívódást.

[0068]A helyileg alkalmazható termék egy orvosi kötszer, egy műtét utáni javító termék, az atópiás dermatitisz kiegészítő kezelési készítménye, egy kifejezetten érzékeny bőrre szánt bőrápoló, vagy egy intenzív hidratáló és helyreállító bőrápoló termék.

[0069]A verbaszkozid alkalmazása során segédanyagok is hozzáadhatók.

Ezenkívül a segédanyagot nedvesítőszer, emulgeálószer, tartósítószer, illatanyag vagy nyugtató anyag közül választjuk ki.

A segédanyagot tartalmazó készítmény adagolási formája egy lotion, egy krém, egy gél, egy szérum vagy egy lapos maszk oldat.

 

8. példa: Kísérleti anyagok és berendezések

[0070]8. példa.

[0071]Az 1. és 7. példák alapján a találmányban használt kísérleti anyagok a következők.

[0072]A kísérleti sejtek a Shanghai Yaji Biotechnology cégtől vásárolt emberi epidermális HaCaT sejtek voltak.

A sejteket magas glükóztartalmú DMEM-ben tenyésztettük 10% borjúmagzati szérummal és 1% penicillin-sztreptomicinnel 37 fokon, 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában, telített páratartalom mellett.

[0073]A kísérleti anyagok a következők voltak:

Echinacoside, rövidítve Ech, a National Institutes for Food and Drug Control, Kína.

Magzati szarvasmarha szérum, FBS, az EXCELL-től.

Magas glükóztartalmú DMEM a Gibco-tól.

0,25% tripszin-EDTA a Gibco-tól.

Foszfáttal pufferolt sóoldat a Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology cégtől.

CCK-8 Sejtszaporodási/citotoxicitási vizsgálati készlet a TransGen Biotech cégtől.

Human Occludin, OCLN, ELISA Kit a Wuhan CUSABIO-tól.

Humán Claudin-1, CLDN1, ELISA Kit a Wuhan CUSABIO-tól.

Zsírsav-szintáz, FAS, Activity Assay Kit a Solarbio-tól.

Humán hialuronsav ELISA készlet a Wuhan CUSABIO-tól.

Rekombináns humán EGF fehérje, hordozómentes, az R&D Systemstől.

DEPC az Amresco-tól.

M5 HiClear DL2000 DNS marker a Mei5 Biotechnology cégtől.

TRIzol reagens az Ambiontól.

5X All-In-One RT MasterMix az abm-től.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX az abm-től.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, a TransGen Biotech.

RIPA lízispuffer a Bostertől.

Proteáz inhibitor a Bostertől.

Goat Anti-Rabbit IgG H&L, HRP, az Abcam.

Goat Anti-Mouse IgG H&L, HRP, az Abcam-tól.

Előrefestett fehérje marker a Solarbio-tól.

-Merkaptoetanol az Amresco-tól.

PVDF transzfer membrán, 0,45 μm, a Millipore-tól.

A Sangon Biotech-től származó glicin.

A Sangon Biotech glicerinje.

SuperSignal West Pico PLUS a Thermo Fishertől.

Beta-actin Loading Control Antitest, Mouse Monoclonal, Sino Biological.

ACC1 antitest az affinitásból.

FASN antitest az Affinity-től.

SMPD2 antitest az affinitástól.

Hyaluronan Synthase 2 Antibody, HAS2, az Affinity-től.

HAS3 antitest az affinitásból.

CD44 antitest az affinitásból.

[0074]A kísérleti berendezések a következőket tartalmazták:

SmartCell HF-90 szén-dioxid sejtkultúra inkubátor, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC biológiai biztonsági szekrény ugyanattól a gyártótól.

DK-80 asztali alacsony sebességű centrifuga, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R nagy sebességű hűtött centrifuga, Thermo Fisher Scientific.

xMark mikrolemezes spektrofotométer, Bio-Rad.

GL-88B vortex mixer, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Model 2500 gél képalkotó rendszer, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR műszer, Bio-Rad.

7500 Fast Real-Time PCR műszer, ABI.

Chemiscope 3000 kemilumineszcens képalkotó rendszer, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra rendszerű fehérjetranszfer készülék, Bio-Rad.

DYCZ-24DN elektroforézis készülék, Beijing Liuyi.

A fordító megjegyzése: A gyártó és a műszer fenti leírása a mellékelt forrást követi; a katalógus részleteit nem ellenőrizték függetlenül.

 

 

 

9. példa: Kísérleti módszerek

[0075]9. példa.

[0076]Az 1-8. példák alapján a találmányban alkalmazott kísérleti módszerek a következők voltak.

CCK-8 Sejtszaporodási vizsgálat

[0077]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10^45 × 104 sejt/ml sűrűséggel.

Ültesse be a sejteket egy 96 lyukú lemezre 100 μl/lyuk mennyiségben.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat. Vegyen fel egy üres vezérlőcsoportot n=5n=5n=5.

48 órás kezelés után dobja ki a táptalajt, és adjon 100 μL frissen készített 10%-os CCK-8 oldatot minden lyukba.

Folytassa az inkubálást a sejttenyésztő inkubátorban egy órán keresztül, majd mérje meg az optikai sűrűséget 450 nm-en mikrolemez-leolvasóval.

Zsírsav-szintáz aktivitási vizsgálat

[0078]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 sejt/ml sűrűségben, és oltsa be a sejteket tenyésztő lombikba.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat.

Tartalmazzon egy üres kontrollcsoportot és egy pozitív kontrollcsoportot, amelyet rekombináns humán epidermális növekedési faktorral (rhEGF) kezeltek 20 ng/ml koncentrációban, n=3n=3n=3.

48 órás kezelés után gyűjtsük össze a sejteket, és mérjük meg a zsírsav-szintáz aktivitást az assay kit utasításai szerint.

Hialuronsavtartalom vizsgálat

[0079]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 sejt/ml sűrűségben, és oltsa be a sejteket tenyésztő lombikba.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat.

Tartalmazzon egy üres kontrollcsoportot és egy pozitív kontrollcsoportot, amelyet 20 ng/ml-es rhEGF-fel kezeltek, n=3n=3n=3.

48 órás kezelés után gyűjtse össze a sejttenyészet felülúszóit, és mérje meg a hialuronsav tartalmát az assay kit utasításai szerint.

Kvantitatív reverz transzkripciós PCR

[0080]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 sejt/ml sűrűségben, és oltsa be a sejteket hatlyukú lemezekre.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat.

Tartalmazzon egy üres kontrollcsoportot és egy pozitív kontrollcsoportot, amelyet 20 ng/ml-es rhEGF-fel kezeltek, n=3n=3n=3.

48 órás kezelés után dobja ki a felülúszót, és adjon 1 ml TRIzolt minden egyes lyukhoz a sejtek leválása és lizálása érdekében, biztosítva, hogy a reagens befedje a sejtréteget.

Ismételten rázza meg a tenyészedényt, amíg a sejtek felszabadulnak, majd vigye át az anyagot egy 1,5 ml-es mikrocentrifugacsőbe.

Kivonja a teljes RNS-t, és qRT-PCR segítségével határozza meg az ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 és CD44 expresszióját.

Western blottolás

[0081]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 sejt/ml sűrűségben, és oltsa be a sejteket tenyésztő lombikba.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat.

Tartalmazzon egy üres kontrollcsoportot és egy pozitív kontrollcsoportot, amelyet 20 ng/ml-es rhEGF-fel kezeltek, n=3n=3n=3.

48 órás kezelés után gyűjtsük össze a sejteket.

Kivonja a teljes fehérjét, és Western-blot módszerrel határozza meg az ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 és CD44 expresszióját.

A Tight-Junction Protein Expresszió értékelése

[0082]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 sejt/ml sűrűségben, és oltsa be a sejteket tenyésztő lombikba.

Miután a sejteket 24 órán át 37 °C-on, 5% szén-dioxid alatt hagytuk megtapadni, dobjuk ki a táptalajt, és adjuk be a különböző vizsgálandó anyagokat.

Vegyen fel egy üres vezérlőcsoportot n=3n ​​= 3n=3.

48 órás kezelés után gyűjtsük össze a sejtlizátumokat, és mérjük meg az occludint és a claudin-1-et ELISA-val a kit utasításai szerint.

Cell Scratch Assay

[0083]Készítse elő a HaCaT-sejtek egysejtű szuszpenzióját komplett tápközegben 5 × 1055 × 10^55 × 105 sejt/ml sűrűséggel.

Mélyedésenként 500 μL-t oltson be egy 24 lyukú lemezre.

A sejttapadás után adja be a kezeléseket, osztva a sejteket egy vak kontrollcsoportra, egy pozitív kontrollcsoportra, amelyet szarvasmarhamagzati szérummal kezeltek, és a tesztanyag-csoportokra.

48 órán keresztül kezeljük.

A kezelés után finoman hozzon létre egy egyenes karcolást egy pipetta hegyével.

Cserélje ki a tápközeget szérummentes tápközeggel minden csoportban, kivéve a pozitív kontrollcsoportot.

Fényképezze le a karcos területeket 0, 24 és 48 óránál.

Használja az ImageJ-t a karcolási terület kiszámításához és a sejtvándorlási kapacitás felméréséhez.

 

10. példa: Nedvesség-visszatartás értékelése

[0084]10. példa.

[0085]In vitro gravimetriás módszerrel értékelték a Ver, Ech vagy glicerint tartalmazó szérumok hidratáló hatását.

Mérjünk le meghatározott mennyiségű előkezelt 1. mintát, amely 2% Ver-t tartalmaz; 2. minta, amely 2% Ech-t tartalmaz; és a pozitív kontroll, amely 5% glicerint tartalmaz.

Tárolja a mintákat állandó hőmérsékletű, állandó páratartalmú kamrában 25 fokos és 50%-os relatív páratartalom mellett.

Mérjük le a mintákat különböző időpontokban, és rajzoljunk nedvesség-visszatartási görbéket.

[0086]A nedvességmegtartás mértékét a következőképpen számítjuk ki:

Nedvességmegtartási arány (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Nedvességmegtartási arány (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Nedvességmegtartási arány (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]Ahol:

[0088]M0M_0M0 az üres lemez tömege grammban.

[0089]M1M_1M1 az üveglap tömege a minta hozzáadása után, grammban.

[0090]M2M_2M2 az exszikkátorban több órás tárolás utáni tömeg grammban.

A fordító megjegyzése: A [0085] bekezdés szabályozott hőmérsékletű, szabályozott páratartalmú kamrában való tárolást ír le, míg a [0090] exszikkátorra vonatkozik. Mindkét leírás a forrásból származik.

 

Kísérleti eredmények

[0091]A példa kísérleti eredményei a következők.

A HaCaT sejtszaporodásra gyakorolt ​​hatás

[0092]Amint a 2. ábrán látható, a különböző Cistanche-kivonatok eltérő hatással voltak a HaCaT-sejtek életképességére.

A Ver és a POL jelentősen növelte a sejtek életképességét, a P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Hatások a zsírsav-szintáz aktivitásra

[0093]Amint a 3. ábrán látható, a stratum corneumban lévő intercelluláris lipidek a bőr „tégla és habarcs” szerkezetének alapvető „habarcs” komponensei.

A ceramidok, koleszterin és szabad zsírsavak meghatározott arányban sűrű lamelláris kettősrétegű szerkezetet alkotnak.

A normál lipidszintézis fenntartása megerősítheti ezt a szerkezetet, megakadályozhatja a vízveszteséget, ellenáll a külső károsodásoknak, fenntarthatja a bőr mikrobióma egyensúlyát és elősegítheti az öngyógyítást.

Ezáltal kezelheti a kiszáradást, az érzékenységet és a bőr csökkent védelmi képességét a forrásnál.

[0094]A zsírsav-szintázt a sebességet korlátozó magenzimnek és a bőr lipidszintézisét szabályozó központi ellátó motornak nevezik.

Fő funkciója a palmitinsav (C16:0) szintézisének katalizálása acetil-CoA-ból és malonil-CoA-ból. A palmitinsavat a bőr fő endogén hosszú szénláncú telített zsírsavjaként írják le.

A palmitinsavnak két funkciója van.

Először is, mint alapvető szerkezeti építőelem, közvetlenül felhasználják a stratum-corneum barrier lipidek szintézisében, beleértve a ceramidokat és a szabad zsírsavakat, amelyek anyagi alapot biztosítanak a lamelláris kettősréteg kialakulásához.

Másodszor, mint fontos prekurzor és jelzőmolekula, tovább feldolgozható a downstream elongázokkal, például az ELOVL1-gyel, nagyon hosszú láncú zsírsavakká. Ezek a jellegzetes zsírsavak szükségesek a gát integritásához.

Ennek megfelelően a zsírsav-szintáz aktivitása közvetlenül meghatározza a bőr saját védőlipid-termeléséhez rendelkezésre álló nyersanyagellátást.

Működésének felszabályozása a kezdeti és kritikus lépés az epidermális lipidszintézis elősegítésében, és ezáltal a bőr fizikai gátjának helyreállításában és megerősítésében, végső soron a nedvességmegtartás és a védekezés támogatásában.

[0095]Az adatok azt mutatták, hogy a pozitív kontroll rhEGF és Ver szignifikánsan növelte a zsírsav-szintáz aktivitást, a P<0.05P < 0.05P<0.05.

A POL, POLS, RE1 és RE2 nem növelte a zsírsav-szintáz aktivitást.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

A fordító megjegyzése: A forrás először az RE2-t tartalmazza azon anyagok között, amelyek nem növelték az aktivitást, majd az RE2 esetében nem szignifikáns növekedésről számol be. Ez az ellentmondás megmarad.

 

Hatások a hialuronsavtartalomra

[0096]A 4. ábrán látható módon a hialuronsav a bőrben természetesen előforduló poliszacharid, amely erős vízmegkötő képességgel rendelkezik, és a forrás szerint főként a dermisben és a stratum corneumban van jelen.

A hialuronsav tartalom növelése mélyebben megtartja a nedvességet, fenntartja az egészséges bőrszerkezetet, antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatást fejt ki, elősegíti a sebek gyógyulását és helyreállítását, valamint javítja a stratum-corneum működését.

Ezeket a hatásokat úgy írják le, mint amelyek belülről hidratálnak, telítettek és rugalmasak.

[0097]Az adatok azt mutatták, hogy a pozitív kontroll rhEGF, Ver és RE2 szignifikánsan növelte a hialuronsav-tartalmat, P-vel.<0.05P < 0.05P<0.05.

A POL, POLS és RE1 nem növelte a hialuronsav tartalmát.

 

A kivonatosztályok és a tisztított verbaskozid összehasonlítása

[0098]A Cistanche főként fenil-etanol-glikozidokat és poliszacharidokat tartalmaz.

A poliszacharid kivonat (POL) aktivitása; fenil-etanol-glikozid-kivonatok, POLS, RE1 és RE2; és verbascoside, Ver, ezért hasonlították össze.

A 2-4. ábrákon látható eredmények azt mutatják, hogy a különböző módszerekkel előállított Cistanche feniletanoid-glikozid-kivonatok és az egyes vegyületek eltérő aktivitást mutattak a HaCaT sejtproliferáció elősegítésében, a zsírsav-szintáz aktivitás növelésében és a hialuronsavtartalom növelésében.

Csak a Ver mutatott ki tevékenységet mindhárom területen, amint azt az 1. táblázat foglalja össze.

[0099]–[0101] Ezek a bekezdésszámok és az 1. táblázat tartalma nem szerepelt a mellékelt forrásban. A hiányzó anyag fordítása vagy rekonstrukciója nem lehetséges.

1. táblázat Különböző minták bioaktivitásának összefoglalása

Index	Üres vezérlő	Pozitív kontroll	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
A sejtek életképessége (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS aktivitás (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
HA-tartalom (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

A CTE, az Echinacoside és a Verbascoside további összehasonlítása

[0102]Amint az 5. ábrán látható, a fő fenil-etanol-glikozidok Cistanche-ban az echinakozid és a verbaszkozid.

A 22,6% echinakozidot és 4,5% verbaszkozidot tartalmazó Cistanche teljes fenil-etanol-glikozid kivonat, CTE hatásai; echinakozid, Ech; és verbaszkozidot, Ver, a HaCaT sejtproliferációra, ezért tovább hasonlították össze.

[0103]Az adatok azt mutatták, hogy a CTE, az Ech és a Ver mind elősegítették a HaCaT sejtproliferációt.

A CTE és a Ver produkálta a legerősebb hatást, ami arra utal, hogy védő hatást gyakorol a bőrsejtekre.

További hatások a zsírsav-szintáz aktivitásra

[0104]Amint a 6. ábrán látható, a zsírsav-szintáz aktivitásra gyakorolt ​​hatások a következők voltak.

[0105]Az adatok azt mutatták, hogy a pozitív kontroll rhEGF, Ech és Ver szignifikánsan növelte a zsírsav-szintáz aktivitást, a P-vel<0.05P < 0.05P<0.05.

A CTE nem növelte a zsírsav-szintáz aktivitást.

 

A zsírsavszintézissel kapcsolatos gének és fehérjék expressziója

[0106]A 7–9. ábrák a zsírsavszintézissel kapcsolatos gének és fehérjék expressziójára gyakorolt ​​hatásokat mutatják be.

[0107]Az ACC-t és a FASN-t a lipidanabolizmus sebességkorlátozó enzimjeként és központi motorjaként írják le.

Együtt katalizálják a hosszú szénláncú zsírsavak, köztük a palmitinsav képződését, amelyek nélkülözhetetlen nyersanyagokat biztosítanak a kulcsfontosságú gátló lipidek, például a ceramidok szintéziséhez.

Az N-SMase a lipidlebontás és a stresszjelzés kulcsfontosságú elindítója, kettős szereppel.

Sérülés közben aktiválódik, és hidrolizálja a szfingomielint, hogy jelátviteli ceramidokat hozzon létre, gyulladást és apoptózist váltva ki, és elnyomja a normál lipidszintézist.

Normális sejtekben azonban szabályozó szerepe van a lipidanyagcserében.

[0108]A 7–9. ábrákon látható, hogy a qPCR és Western blot eredmények azt mutatták, hogy a Ver, az rhEGF-hez hasonlóan, jelentősen megnövelte az ACC, FASN és N-SMase gén- és fehérjeexpresszióját P-vel.<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Az eredmények azt mutatják, hogy a Ver felfelé szabályozza az ACC-t és a FASN-t, hogy szabályozza a sejt lipidszintézisét a membránépítés, az energiatárolás vagy a szekréció érdekében.

Ugyanakkor az N-SMáz fokozódása aktiválhatja a szfingolipid metabolikus ciklust.

Az előállított ceramidok nemcsak stresszjelek. Normál fiziológiás körülmények között fontos prekurzorok más komplex szfingolipidek, például glikoszfingolipidek szintézisében vagy a dinamikus membrán-átalakításban.

Így e három gén és fehérje összehangolt felszabályozása fokozza a sejtszintű anabolikus aktivitást és a membrán-átalakítási kapacitást.

 

További hatások a hialuronsavtartalomra

[0109]Ahogy a 10. ábrán látható, az adatok azt mutatták, hogy az rhEGF, a CTE, az Ech és a Ver szignifikánsan növelte a hialuronsav-tartalmat, P-vel.<0.05P < 0.05P<0.05.

A hatás sorrendje a CTE volt, ezt követte a Ver, majd az Ech.

 

A hialuronsav szintézisével kapcsolatos gének és fehérjék kifejeződése

[0110]A 11–13. ábrákon látható módon a HAS2, HAS3 és CD44 "szintézis-érzékelő-válasz" visszacsatolási hurkot képez a HaCaT-sejtek hialuronsav-anyagcseréjében.

A HAS2 és a HAS3 a fő katalitikus szintézis enzimek.

A HAS2 főként nagy molekulatömegű hialuronsavat termel, és a bőr homeosztázisának fenntartásához és gyulladáscsökkentő hatásához kapcsolódik.

A HAS3 hajlamos kisebb molekulatömegű hialuronsavat termelni, és közvetlenebbül vesz részt a folyamatokban, beleértve a sejtmigrációt és a sejtproliferációt.

A CD44 a hialuronsav fő sejtfelszíni receptora.

Nemcsak az intracelluláris és extracelluláris jelátvitelt közvetíti a hialuronsav bevonásával, hanem dinamikusan szabályozza a hialuronsavat is az endocitózison és az újrahasznosításon keresztül, valamint szabályozza a HAS2 és HAS3 expresszióját és aktivitását.

[0111]A 11–13. ábrákon látható, hogy a qPCR és Western blot eredmények azt mutatták, hogy a Ver, az rhEGF-hez hasonlóan, jelentősen megnövelte a HAS2, HAS3 és CD44 gén- és fehérjeexpresszióját P-val.<0.05P < 0.05P<0.05.

A Ver szabályozó hatása a HAS2, HAS3 és CD44 génexpresszióra nagyobb volt, mint az rhEGF-é.

Az eredmények azt mutatják, hogy a Ver szabályozza a HAS2-t, HAS3-at és CD44-et, hogy szabályozza a teljes hialuronsav "szintézis-összeállítás-jelátvitel" folyamatát, hozzájárulva az epidermisz hidratálásához, helyreállításához és a barrier funkcióhoz.

Hatások a Tight-Junction fehérjeexpresszióra

[0112]A bőr lipid- és hialuronsav-termelésének fenntartása a leírás szerint alapvető, szinergikus támogatást és stabilizálást biztosít a HaCaT-sejtek közötti szorosan összekapcsolódó fehérjék számára.

A megfelelő lipidek lehetővé teszik a keratinociták számára, hogy teljes, szervezett intercelluláris lipid kettős rétegeket alkossanak.

Ezeket a struktúrákat nemcsak a gát fizikai kereteként írják le, hanem stabil, hidrofób szerkezeti környezetként is a szoros kapcsolódású fehérjék összeállításához és rögzítéséhez.

Ugyanakkor a hialuronsav által fenntartott kedvező hidratációs állapot hozzájárul a keratinocita normál anyagcseréjének és jelátvitelének biztosításához.

A receptorokat, például a CD44-et érintő útvonalakon keresztül a hialuronsav közvetve szabályozza a szoros kapcsolódású fehérje expresszióját és eloszlását is.

A lipidek és a hialuronsav együttesen biztosítják azokat a fizikai és biokémiai alapokat, amelyek szükségesek a szoros csomópontok kialakításához és fenntartásához a szerkezeti stabilitás és a mikrokörnyezeti homeosztázis szempontjából.

Ezáltal erősítik a fizikai intercelluláris kapcsolatokat és az általános gát integritását.

[0113]A fenti eredmények azt mutatták, hogy a Ver mutatta a legerősebb aktivitást a bőr lipid- és hialuronsavtermelésének elősegítésében.

Az intercelluláris szoros kapcsolatokra kifejtett hatásának további vizsgálata azt mutatta, hogy a CTE, az Ech és a Ver mind jelentősen elősegítették a szoros kapcsolódási pontú claudin-1 fehérje expresszióját P-val.<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

A 15. ábrán látható módon csak az Ech és a Ver fokozta szignifikánsan az okkludin expresszióját.

A Ver hatása lényegesen nagyobb volt, mint az Ech-é, P<0.05P < 0.05P<0.05.

Ez összhangban volt a Vernek tulajdonított legerősebb aktivitással a bőr lipid- és hialuronsavtermelésének elősegítésében.

 

Hatások a sebgyógyulásra

[0114]A 16–17. ábrákon látható módon a HAS3 közvetlenül részt vesz a folyamatokban, beleértve a sejtmigrációt és a sejtproliferációt.

A CD44 információt továbbít a hialuronsavból a sejtekbe, és végső soron szabályozza a sejtmigrációt, proliferációt és hidratációt, központi szerepet játszik a sebgyógyulásban, a bőr hidratálásában és a barrier homeosztázisban.

Az előző kísérletek azt mutatták, hogy a verbaszkozid jelentősen elősegítette a HAS3 és CD44 expresszióját.

Ezért tovább vizsgálták a sebgyógyulást elősegítő képességét.

[0115]Ahogy a 16–17. ábrákon látható, az eredmények azt mutatták, hogy a CTE, az Ech és a Ver mind elősegítette a sebgyógyulást.

Azonban csak a Ver mutatott jelentős elősegítő hatást 24 órán belül.

A legerősebb sebgyógyulást elősegítő aktivitást mutatta, ami összhangban van a HAS3 gén és fehérje expressziójának jelentős előmozdításával.

Szerkesztői minősítés: Az eredményhez mellékelt kísérleti módszer egy sejtkarcolási vizsgálat. A "sebgyógyulás" a forrásban használt terminológia, és itt nem szabad bizonyított klinikai eredményként értelmezni.

 

A készítmények nedvességmegtartó teljesítménye

[0116]Amint a 18. ábrán látható, a minta nedvességmegtartó képességét a nedvességmegtartási görbék tendenciái alapján értékeltük, hogy értékeljük a bőr hidratáló teljesítményét.

Az adatok azt mutatták, hogy az 1. minta nedvesség-visszatartási görbéje a 2. minta és a pozitív kontrollé felett volt.

25 fokos és 50%-os relatív páratartalom mellett az 1. minta jobb hidratáló teljesítményt mutatott, mint a 2. minta és az 5%-os glicerin kontroll, ami a legerősebb hidratáló teljesítményt jelzi.

Az 1. minta Ver-t, a 2. minta Ech-t tartalmazott.

A forrás szerint ezek az eredmények azt mutatják, hogy a termékekbe beépítve a Ver homogenitása és hidratáló hatása jobb, mint az Ech, amint azt a 2. táblázat foglalja össze.

[0117]2. táblázat Különböző minták tevékenységének összefoglalása.

A táblázat tartalma nem szerepelt a mellékelt forrásban.

[0118]Megjegyzés: [A szignifikancia szimbólum nem szerepel a mellékelt szövegben.] Az üres kontrollcsoporthoz képest P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

A közzétételben bemutatott átfogó értelmezés

[0119]A fenti eredmények azt mutatják, hogy a verbaszkozid kiemelkedő hidratáló aktivitást mutat azáltal, hogy pontosan aktiválja a teljes, zárt hurkú bőrgát-javító mechanizmust.

Először a bazális rétegre hat, hogy jelentősen felgyorsítja az epidermális sejtmegújulást és a rendezett differenciálódást, elegendő sejtes építőelemet biztosítva a gát felépítéséhez.

Ezután elősegíti a keratinociták közötti szoros csomópontok és desmoszomális struktúrák megerősödését, megerősítve a sejtek közötti fizikai lehorgonyzást és növelve a gát sűrűségét és mechanikai szilárdságát.

Ugyanakkor hatékonyan aktiválja a lipidanyagcsere kulcsenzimeit, és feltölti a sejtközi lipidmátrixot, kitöltve a "téglák" közötti "habarcs" tereket, hogy megakadályozza a vízveszteséget.

Végül a hialuronsav-szintáz expressziójának fokozásával egyidejűleg növeli a hialuronsav tartalmát a dermiszben és a felhámban, jelentős mennyiségű vizet megfogva és visszatartva.

Ez egy teljes funkcionális hurkot képez, amely magában foglalja a forrás megújítását, a szerkezeti megerősítést, a mátrix-utánpótlást és a víztárolást.

Ezáltal egy zárt hurkú sorozatot érhet el: "elősegíti a sejtproliferációt → erősíti a fizikai intercelluláris kapcsolatokat → elősegíti a lipid- és hialuronsavtermelést → elősegíti a sebgyógyulást".

A forrás arra a következtetésre jutott, hogy jobb hatást fejt ki, mint a Cistanche-ból származó echinakozid és az általánosan használt nedvesítő glicerin, és bőrvédő szerként használható funkcionális bőrápolókban és helyi termékekben.

[0120]Az előző leírások csak a találmány specifikus kiviteli alakjai.

A találmány oltalmi köre nem korlátozódik ezekre a kiviteli alakokra.

Bármilyen változtatás vagy helyettesítés, amelyet a szakember könnyen elképzelhet a találmányban feltárt műszaki oltalmi körön belül, a találmány oltalmi körébe tartozik.

Ennek megfelelően a találmány oltalmi körét az igénypontok határozzák meg.