A Cistanche Rb1 enyhíti az életkorral összefüggő érkárosodást a Gas6 útvonal modulálásával

Eredmények Az Rb1 enyhítette az öregedést az öregedő egerek aortájában

Az Rb1 antiszenszcencia hatásának azonosítása érdekében először a celluláris öregedést vizsgáltuk, amelyet a sejtciklus-gátlásban és az irreverzibilis növekedési leállásban szerepet játszó fehérjék expressziója jellemez (Yang et al. 2019). Amint az immunhisztokémiai eredmények az 1(A,B) ábrán láthatók, a Young csoport eredményeivel összehasonlítva az Old þ Vehicle csoport egerei azt mutatták, hogy az öregedés felgyorsította a p21Cip1 és p16INK4a felszabályozását a mellkasi aorta sejtekben. Az Rb1-kezelés azonban enyhítette a sejtek öregedését az erekben, különösen az Old þ Rb1-20 csoportban. Ezenkívül a Western blot eredmények összhangban voltak aimmunhisztokémiai eredmények. Amint az 1(C) ábrán látható, a p21Cip1 és p16INK4a fehérje expressziója szignifikánsan, körülbelül 2--szeresére nőtt az idős egerek mellkasi aortájában a fiatal egerekhez képest. A 20 mg/kg Rb1-es kezelést követően a p21Cip1 és p16INK4a fehérjeszintje éppen 41,92 százalékkal, illetve 37,52 százalékkal nőtt a Young-csoporthoz képest, amely jelentősen alacsonyabb volt, mint az Old plus Vehicle csoportban. Ezenkívül nem volt szignifikáns különbség a p21Cip1 vagy p16INK4a expressziójában az Rb1-kezeléssel kezelt és nem kezelt fiatal egerek között.

1. ábra. Az Rb1 hatása a mellkasi aorta öregedésére. Képek a p21Cip1 (A) és p16INK4a (B) immunhisztokémiai festéséről (400 ) egér mellkasi aorta keresztmetszetein. (C) Az egér mellkasi aorta p21Cip1 és p16INK4a expressziójának Western blot analízise. Az adatokat átlag ± SD-ben fejezzük ki. p < 0,01 vs. a Young csoport; # p < 0,05 a Régi Jármű csoporttal szemben.

Az Rb1 javította az érrendszeri reaktivitást idős egerekben

Vaszkuláris gyűrűs kísérletet használtunk az endotél-függő értágulat értékelésére. A 2. ábrán látható módon az Ach beadása az összes egér mellkasi aortagyűrűben érrelaxációt eredményezett. Maximális koncentrációknál (10-5 mol/L) az Ach körülbelül 88,84 ± 1,20 százalékos, illetve 58,35 százalék ± 2,50 százalékos érrelaxációt váltott ki a Young csoportban, illetve az Old Vehicle csoportban, ami azt bizonyítja, hogy az öregedés az érrendszeri reaktivitás csökkenésével jár. A 10 és 20 mg/kg Rb1-kezelés azonban hozzávetőlegesen 70,48 ± 2,20, illetve 80,90 ± 3,24 százalékos relaxációt eredményezett az öregedő egerek mellkasi aortagyűrűiben 10 5 mol/l Ach hatására.

Kattintson ide, és szerezze be a Cistanche-t az öregedésgátlóért

Az Rb1 csökkentette a celluláris adhéziós molekula expresszióját öregedő egerek mellkasi aortájában

Megvizsgáltuk egyes sejtadhéziós molekulák fehérje expresszióját, hogy meghatározzuk agyulladásosésgyulladáscsökkentő hatásokRb1-et idős egereken. Az eredmények azt mutatták, hogy az ICAM-1, VCAM-1 és PAI-1 fehérje expressziója szignifikánsan, körülbelül 2-4-szeresére nőtt az idős egerek mellkasi aortájában, összehasonlítva azokkal. a Young csoportban (3. ábra). Ezzel szemben az Rb1 kezelés szignifikánsan gátolta ezeket a változásokat az idős egerek mellkasi aortájában, de nem volt hatással a Young egércsoportokra. A kvantitatív elemzés azt mutatta, hogy a 20 mg/kg Rb1-kezelés az ICAM-1, VCAM-1 és PAI-1 fehérje expressziójának körülbelül 36,58 százalékos, 46,66 százalékos és 49,34 százalékos csökkenését eredményezte. az öregedő mellkasi aortaszövetben, összehasonlítva az Old plus Vehicle csoport egereivel.

Az Rb1 gátolta az életkorral összefüggő vaszkuláris meszesedést és fibrózist

HE festést és alizarin vörös S festést végeztünk az aortaszövet szerkezetének és az érrendszeri mediális meszesedésének felmérésére idősödő egerekben. A HE festés azt mutatta, hogy a mellkasi aorta öregedés okozta megvastagodott falai és az aorta extracelluláris mátrixának dezorganizációja enyhíthető Rb1 kezeléssel (4(A) ábra). Amint a 4(B) ábrán látható, az öregedő egerekben súlyosabb mediális meszesedés (vörösen festett terület) alakult ki, mint a fiatal egereknél, míg az Rb1 beavatkozás csökkentette ezt a kóros elváltozást. Ezután a mellkasi aorta keresztmetszetét Masson-féle trikróm festéssel vizsgáltuk, hogy értékeljük a vaszkuláris mediális fibrózist idősödő egerekben. Az eredmények azt mutatták, hogy a kollagén lerakódásban (kékre festett terület) észrevehető növekedés volt tapasztalható az Old þ Vehicle csoportban a Young csoporthoz képest (4(C) ábra), és ezt a hatást jelentősen gátolta az Rb1 beavatkozás. Ezenkívül a Western-blot azt mutatta, hogy a kollagén I és kollagén III expressziója szignifikánsan, 4{11}} és 262-szeresére nőtt az Old þ Vehicle csoport egereiben a fiatal egerekhez képest; azonban az Rb1 kezelés csökkentette a kollagén I és kollagén III expresszióját idős egerekben (4(D) ábra). Ezenkívül az Rb1-kezelés nem befolyásolta a mellkasi aorta meszesedésének és fibrózisának mértékét fiatal egerekben (4. ábra (A–D)).

Az Rb1 szabályozta a Gas6 jelátviteli útvonalat

Tovább vizsgáltuk, hogy az Rb1 a Gas6/Axl jelátviteli útvonalon keresztül működött-e az életkorral összefüggő mellkasi aorta károsodásának enyhítésére egerekben. A Gas6 fehérje expressziójának 41,72%-os és az mRNS expressziójának 52,73%-os csökkenését idős egerekben a fiatal egerekhez képest az Rb1-kezelés megszüntette (5(A,B) ábra). Az Axl fehérje expresszióját Western blottal is meghatároztuk. Érdekes módon nem volt szignifikáns különbség az Axl fehérje expressziójában az öt kísérleti csoport között (5(A) ábra). Az Axl mRNS-szintjében sem észleltünk szignifikáns különbséget a csoportok között (5(B) ábra).

2. ábra. Az Rb1-kezelés gyengítette az életkorral összefüggő endothelium-dependens vazorelaxációs károsodást a mellkasi aorta érgyűrűiben. Az elemzési eredményeket bemutató ábrák. Az adatokat átlag ± SD-ben fejezzük ki. p < 0.05, p < 0.01 vs. a Young csoport; # p < 0,05, ##p < 0,01 a Régi þ Jármű csoporttal szemben.

3. ábra: Az Rb1 csökkentette a celluláris adhéziós molekula expresszióját idős egér mellkasi aortában. Az ICAM-1, VCAM-1 és PAI-1 expressziójának Western blot analízise mellkasi aorta szövetekben. Az adatokat átlag ± SD-ben fejezzük ki. p < 0.01 vs. a Young csoport; # p < 0,05, ##p < 0,01 a Régi jármű csoporttal szemben.

Vita

Jelen tanulmányban kimutattuk, hogy az Rb1 javultéletkorral összefüggő érrendszeri károsodása meszesedés és fibrózis elnyomásával a Gas6 expresszió szabályozásán keresztül, de nem az Axl expresszió szabályozásán keresztül, ami potenciális terápiás stratégia az életkorral összefüggő érbetegségek megelőzésére. Jól elfogadott tény, hogy a vaszkuláris sejtek öregedése, amelyet az endothel diszfunkció és a simaizomsejtek fenotípusos átmenete jellemez, megnövekedett érmerevséget és az érfalak vastagságát eredményezheti (Liu et al. 2019). A vaszkuláris sejtek öregedése gyakori jellemzője a különféle összetett, életkorral összefüggő betegségeknek, különösen a szív- és érrendszeri betegségeknek (O'Rourke et al. 2010). A vaszkuláris sejtek öregedésének kialakulásával az érműködés károsodik (Gong et al. 2014). Az életkorral összefüggő vaszkuláris diszfunkciót kórélettani változások példázzák, beleértve az endothelium-dependens értágulat fokozatos csökkenését (Herrera et al. 2010; Gong et al. 2014). Vizsgálatunkban sejtes öregedést igazoltunk idős egerek mellkasi aortájában, amit a p21Cip1 és p16INK4a korral összefüggő fehérjék fokozott expressziója, valamint az endothel-függő értágulat csökkenése jelez. Eredményeink és a fent említett vizsgálatokkal való összhangja arra utal, hogy az érsejtek patofiziológiájában az öregedés során bekövetkező változásokhoz néhány fontos molekuláris mechanizmus társult. Az ezekre a mechanizmusokra ható szerek valószínűleg nagymértékben csökkentik és késleltetik az érsejtek öregedését.

4. ábra. Az Rb1 kezelés javította az öregedés által kiváltott vaszkuláris meszesedést és fibrózist. (A) Hematoxilin és eozin (HE) festés (400 ), (B) Alizarin vörös S festés (400 ) és (C) Masson-féle trikróm festés (400) ) reprezentatív mellkasi aorta szakaszok mindegyikében. (D) A kollagén I és kollagén III expressziójának Western blot analízise mellkasi aorta szövetekben. Az adatokat átlag ± SD-ben fejezzük ki. p < 0,01 vs. a Young csoport; # p < 0,05, ##p < 0,01 a régi járműcsoporthoz képest

5. ábra. Az Rb1 hatása a Gas6/Axl jelátviteli útvonalra. (A) Western blottingot végeztünk a Gas6 és az Axl fehérje expressziójának vizsgálatára. (B) qPCR-t végeztünk a Gas6 és az Axl mRNS expressziójának vizsgálatára. Az adatokat átlag ± SD-ben fejezzük ki. p < 0.05, p < 0.01 vs. a Young csoport; # p < 0,05 a Régi þ Jármű csoporttal szemben.

A felhalmozódó bizonyítékok feltárták, hogy az Rb1 ígéretes gyógyszernek számít az érkárosodás megelőzésében (Zhou et al. 2017, 2019a, 2019b; Zheng et al. 2020). Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy az Rb1 megakadályozza az érsejtek öregedését és gátolja az erek meszesedését (Nanao-Hamai et al. 2019; Zhou et al. 2019b; Zheng et al. 2020). Még mindig bizonytalan azonban, hogy az Rb1 meg tudja-e védeni az artériás funkciókat az öregedés ellen és a megfelelő molekuláris mechanizmust. Itt azt találtuk, hogy az Rb1 csökkentette és késleltette az artériás öregedést idős egerekben, amint azt a rokon fehérjék csökkent expressziója és a jobb vaszkuláris értágulat bizonyítja, ami azt jelzi, hogy az Rb1 hatékonyan képes blokkolni a túlzott öregedést az öregedő egér mellkasi aortájában, és hatékony szerként használható az életkorral összefüggő artériás károsodás kezelésére vagy megelőzésére.

Korábbi bizonyítékok igazolták a krónikus, alacsony fokú artériás gyulladás felhalmozódását az életkor előrehaladtával, ami hozzájárul az életkorral összefüggő vaszkuláris szerkezeti és funkcionális változásokhoz (Wang et al. 2014). További vizsgálatok kimutatták, hogy a gyulladásos profilokban dúsított mikrokörnyezet fenotípusos eltolódást indukál a VSMC-ben a kontraktilis típusról a szintetikus típusra. Ezt a fenotípusos eltolódást az SMC-specifikus kontraktilis fehérjék gyengített expressziója és további proinflammatorikus citokinek, kemokinek, ECM fehérjék és sejtadhéziós molekulák, például kollagén, ICAM-1, VCAM-1 szekréciója jellemzi. és PAI-1 (Wang et al. 2011; Lacolley et al. 2018). Ezenkívül az adhéziós molekulák hozzájárulnak az artériák gyulladás által kiváltott átalakulásához, különösen az ECM-VSMC kölcsönhatások átszervezésével és a VSMC-k fenotípusos modulációjának befolyásolásával (Intengan et al. 1999). Ezenkívül a vizsgálatok kimutatták, hogy az Rb1 gyulladásgátló hatással bír in vivo és in vitro (Miao et al. 2017; Zhou et al. 2017). Jelen tanulmányunkban azt találtuk, hogy az Rb1 kezelés jelentősen csökkentheti a gyulladásos folyamatokhoz kapcsolódó sejtadhéziós molekulák expressziós szintjét idős egerekben, ami arra utal, hogy az Rb1 gyulladáscsökkentő gyógyszerként hathat, és védi az érrendszert az öregedés során.

A gyulladásos károsodás mellett, az artériák falának meszesedéssel és fibrózissal jellemezhető átalakulása a másik fő patofiziológiai változás az életkorral összefüggő érrendszeri módosulásokban, és vaszkuláris merevséget okoz, amely hozzájárul az értágulat csökkenéséhez (McEniery et al. 2005; Iyemere et al. 2006; Kovacic et al. . 2011). Nagyszabású vizsgálatok kimutatták, hogy a koronária atheroscleroticus meszesedése az életkorral növekszik (Tesauro et al. 2017). Más kutatások is kimutatták az öregedéssel járó fokozott meszesedés jelenlétét a nyaki verőér régióban (Wendorff et al. 2015). Hasonlóképpen, eredményeink azt mutatták, hogy az idős egerekben súlyosabb vaszkuláris mediális meszesedés alakult ki, mint a fiatal egereknél. Az Rb1 beavatkozás lényegesen gátolta ezeket a változásokat. Ez az eredmény arra utalt, hogy az Rb1 beadása csökkentette az életkorral összefüggő vaszkuláris meszesedés mértékét in vivo. Elegendő bizonyíték igazolta, hogy a vaszkuláris meszesedés számos patobiológiai folyamatot foglal magában, nem pedig egyszerű kalciumlerakódást, amelyek között a VSMC oszteoblasztszerű sejtekké történő átváltása kritikus szerepet játszik (Zhou et al. 2019b). Vizsgálatunk egyik korlátja, hogy annak ellenére, hogy kiderült, hogy az Rb1 beavatkozás szignifikánsan gátolta a vaszkuláris meszesedést öregedő egerek mellkasi aortáiban, kontraktilis VSMC markerek (például A-simaizom aktin és calponin) és osteogén VSMC markerek (mint például a futáshoz kapcsolódó 2-es transzkripciós faktor) ) további feltárást igényelnek.

Ezen túlmenően, jelen tanulmányban csökkent intersticiális kollagénszintet és csökkent rokon fehérje-expressziót is megfigyeltünk Rb1--kezelt idős egerekben a vivőanyaggal kezelt idős egerekhez képest, ami arra utal, hogy az Rb1 jótékony hatással lehet az érrendszeri működésre. öregedő mellkasi aortában az életkor által kiváltott vaszkuláris fibrózis enyhítésével. Harvey és mtsai. (2016) arról számoltak be, hogy a túlzott fibrózis és a fokozott kollagénlerakódás okozta artériás merevedés megnövekedett vazomotoros tónust és megváltozott szöveti perfúziót eredményezhet. A fibrózist gyengítő szerek védenek az életkorral összefüggő érbetegségekkel szemben (Kim et al. 2018).

Ebből arra lehet következtetniéletkorral összefüggő érrendszeri károsodásegy összetett folyamat, amely különféle kóros elváltozásokkal jár, beleértve a gyulladást, a meszesedést és a fibrózist. Ennél is fontosabb, hogy azt találtuk, hogy az Rb1 képes gátolni ezeket az ismert abnormális változásokat idős egerek mellkasi aortájában. A mögöttes mechanizmus azonban még mindig ismeretlen. A Gas6-ot azonosították a lig és a TAM receptorcsalád, különösen az Axl tirozin kináz receptorok esetében (Rothlin et al. 2015). Egy korábbi tanulmány kimutatta a Gas6/Axl szerepét több sejtfunkció szabályozásában (Chen et al. 2019). Egy nemrégiben készült tanulmány szerint a Gas6/Axl döntő szerepet játszik a vaszkuláris meszesedésben (Son et al. 2010; Kaesler et al. 2016; Nanao-Hamai et al. 2019), és szerepet játszhat a kollagén szintézis kezelés által kiváltott leszabályozásában is. VSMC-k és öregedő szívszövet (Chen et al. 2016; 2019). Ezenkívül korábbi tanulmányok kimutatták, hogy az Rb1 aktiválta a Gas6 transzkripciót a promoter régió specifikus ARE helyén (Son és mtsai 2010; Nanao-Hamai és mtsai 2019). Itt kimutattuk, hogy a Gas6 fehérje expressziója csökkent idősödő egerekben, de az Rb1-kezelés megfordította, ami azt jelzi, hogy a Gas6 részt vehet az Rb1-közvetített artériás károsodás szabályozásában idős egerekben. Eredményeink azonban azt mutatják, hogy nem történt változás az Axl fehérje és az mRNS expressziójában, ami nem volt összhangban egy korábbi vizsgálattal (Chen et al. 2019). A TAM receptorcsaládba a Tyro3, ​​az Axl és a MerTK tartoznak. Bár a három tag közül a Gas6 mutatja a legerősebb affinitást az Axl iránt (Rothlin et al. 2015), Sun et al. (2019) azt találták, hogy a Gas6 aktiválása mérsékelte a gyulladásos sérüléseket és az apoptózist egerekben, de az Axl aktiválásában nem történt változás a kísérleti csoportok között. Más kutatások azt sugallták, hogy az Axl expressziója, amely gátolja az apoptózist és ezáltal a vaszkuláris meszesedést, szintén változatlan maradt Gas6–/– egerekben (Kaesler et al. 2016). Eredményeink egyértelműen azt mutatták, hogy az Rb1 specifikusan csillapította az életkorral összefüggő Gas6 downregulációt, de nem volt hatással az Axl expressziójára, amely a jelentések szerint a vaszkuláris meszesedésért és fibrózisért felelős elsődleges esemény, az életkorral összefüggő vaszkuláris gyulladás és az endotélium-függő értágulat javítása érdekében. . Az Axl stabil expressziója a Gas6 aktiválása előtti elegendő mennyiség eredménye lehet, vagy arra utalhat, hogy a Gas6 más receptorokon keresztül működik. További vizsgálatokra van szükség az Rb1 más, a Gas6 által szintén aktiválható TAM-okra, például a Tyro3-ra és a MerTK-ra gyakorolt ​​​​hatásának feltárására.

Következtetések

Jelen tanulmányban megerősítettük, hogy az Rb1 gátolta a vaszkuláris meszesedést és a fibrózist, és csökkentette a celluláris adhéziós molekulák expresszióját, amelyek mindegyike javította az életkorral összefüggő vaszkuláris endotélium-függő értágulatot, legalább részben a Gas6 expresszió szabályozásával, de nem az Axl expressziójával. A kontrollálhatatlan öregedés mellett nagyon fontos olyan szerek megtalálása, amelyek megelőzhetik vagy kezelhetik az időskori érsejt-károsodást. Tanulmányunk bizonyítékot szolgáltat az Rb1 hatásának megerősítésére az öregedő egerek érrendszeri sérüléseinek enyhítésére.

Közzétételi nyilatkozat

A szerző(k) nem számoltak be potenciális összeférhetetlenségről.

Finanszírozás Ezt a munkát a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány [81370447], a kínai Guangdong tartomány tudományos és technológiai tervezési projektje [2016A050502014], a Shenzhen Key Medical Discipline Construction Fund [SZXK002] és az Orvostudományi Kutatási Alap támogatásai támogatták. Kína Guangdong tartományának megalapítása [A2019079].

Az adatok rendelkezésre állásáról szóló nyilatkozat

Az adatok és anyagok kérésre a megfelelő szerző rendelkezésére állnak.

Szerzői hozzájárulások

A SYK, a DHL és az XXQ közreműködött ennek a munkának az ötletében és megtervezésében. LW, GYS és MW járult hozzá az adatok elemzéséhez. SYK, LW és JMZ írta a kéziratot. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges változatot.

Hivatkozások

Acosta JC, O'Loghlen A, Banito A, Guijarro MV, Augert A, Raguz S, Fumagalli M, Da Costa M, Brown C, Popov N és mások. 2008. A kemokin jelátvitel a CXCR2 receptoron keresztül erősíti az öregedést. Sejt. 133(6): 1006–1018.

Brandes RP, Fleming I, Busse R. 2005. Endothel aging. Cardiovasc Res. 66(2):286–294.

Chen FF, Song FQ, Chen YQ, Wang ZH, Li YH, Liu MH, Li Y, Song M, Zhang W, Zhao J és mások. 2019. Az exogén tesztoszteron enyhíti a szívfibrózist és az apoptózist a Gas6/Axl útvonalon keresztül öregedő egerekben. Exp Gerontol. 119:128–137.

Chen YQ, Zhao J, Jin CW, Li YH, Tang MX, Wang ZH, Zhang W, Zhang Y, Li L, Zhong M. 2016. A tesztoszteron késlelteti a vaszkuláris simaizomsejtek öregedését és gátolja a kollagén szintézisét a Gas6/Axl jelátviteli útvonalon keresztül . Kor. 38. (3):60.

Fridell YW, Villa J, Attar EC, Liu ET. 1998. A GAS6 a vaszkuláris simaizomsejtek Axl-közvetítette kemotaxisát indukálja. J Biol Chem. 273(12): 7123–7126.

Gong X, Ma Y, Ruan Y, Fu G, Wu S. 2014. A hosszú távú atorvasztatin javítja az életkorral összefüggő endoteliális diszfunkciót az oxidatív stressz enyhítésével és az eNOS/iNOS egyensúlyhiány normalizálásával patkány aortában. Exp Gerontol. 52:9–17.

Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. 2016. Vaszkuláris fibrózis az öregedésben és a magas vérnyomásban: molekuláris mechanizmusok és klinikai következmények. Can J Cardiol. 32(5):659–668.

Herrera MD, Mingorance C, Rodriguez-Rodriguez R, Alvarez de Sotomayor M. 2010. Endothel dysfunction and aging: an update. Aging Res. Rev. 9(2):142–152.

Hsu JJ, Lu J, Umar S, Lee JT, Kulkarni RP, Ding Y, Chang CC, Hsiai TK, Hokugo A, Gkouveris I, Tetradis S és mások. 2018. A teriparatid hatása az aorta meszesedésének morfológiájára idős hiperlipidémiás egerekben. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314(6): H1203–H1213.

Hurtado B, Abasolo N, Munoz X, Garcia N, Benavente Y, Rubio F, Garcia de Frutos P, Krupinski J, Sala N. 2010. Asszociációs vizsgálat a GAS6-TAM gének polimorfjai és a carotis atherosclerosis között. Thromb Haemost. 104(3):592–598.

Intengan HD, Thibault G, Li JS, Schiffrin EL. 1999. Rezisztencia artériák mechanikája, szerkezete és extracelluláris komponensei spontán hipertóniás patkányokban: az angiotenzin receptor antagonizmus és a konvertáló enzim gátlás hatásai. Keringés. 100(22):2267–2275.

Iyemere alelnök, Proudfoot D, Weissberg PL, Shanahan CM. 2006. A vaszkuláris simaizomsejtek fenotípusos plaszticitása és a vaszkuláris meszesedés szabályozása. J Intern Med. 260(3):192–210.

Kaesler N, Immendorf S, Ouyang C, Herfs M, Drummen N, Carmeliet P, Vermeer C, Floege J, Kruger T, Schlieper G. 2016. Gas6 protein: its role in cardiovascular calcification. BMC Nephrol. 17. (1):52. Kim EN, Kim MY, Lim JH, Kim Y, Shin SJ, Park CW, Kim YS, Chang YS, Yoon HE, Choi BS. 2018. A resveratrol védő hatása az érrendszeri öregedésre a renin-angiotenzin rendszer modulálásával. Érelmeszesedés. 270: 123–131. Korshunov VA, Mohan AM, Georger MA, Berk BC. 2006. Az Axl, egy receptor tirozin kináz, közvetíti az áramlás által kiváltott vaszkuláris remodellinget. Circ Res. 98(11):1446–1452.