A Cistanche–Vaccariae sperma mechanizmusa patkányok krónikus, nem bakteriális prosztatagyulladásának kezelésében a hálózati farmakológia alapján
Nov 14, 2025
Absztrakt
A Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS) gyógynövénypár gyulladásos sérülésekre gyakorolt védő hatásának vizsgálata krónikus nem bakteriális prosztatagyulladásban (CNP). Ebben a vizsgálatban 41 hatóanyagot és 156 megfelelő célfehérjét vizsgáltak meg TCMSP és irodalmi bányászat segítségével. Az OMIM és a GeneCards adatbázisokat a CNP 9848 betegséggel kapcsolatos célpontjának azonosítására használták. A Cytoscape-et és a STRING-t alkalmazták a protein-protein interakció (PPI) hálózat és a hatóanyag-betegség cél-útvonal hálózatának létrehozására. A PPI-eredmények főként olyan kulcsfontosságú fehérjékre vonatkoztak, mint az interleukin-6 (IL-6), tumor nekrózis faktor (TNF-), interleukin-1 béta (IL-1), tumorprotein p53 (TP53) és RAC-alfa szerin/treonin-protein kináz (AKT1). A GO és KEGG útvonal-dúsítási elemzéseket a Metascape platform segítségével végeztük; a dúsított KEGG útvonalak közé tartozott a PI3K-AKT, a lipid- és érelmeszesedés, a prosztatarák és a MAPK jelátviteli útvonalak. Molekuláris dokkolást végeztünk az aktív komponensek és a magcélpontok között. A fenti adatok igazolására állatkísérletekben megmérték az IL-1, az interleukin-18 (IL-18) és a TNF- szérumszintjét. A prosztataszövet kóros elváltozásait H&E festéssel figyelték meg. Az IL-6, TNF-, IL-1 és az útvonalhoz kapcsolódó fehérjéket Western-blottal mutatták ki. Állatkísérletek azt mutatták, hogy a gyulladásos faktorok szabályozása és a gyulladással kapcsolatos fehérjék expressziója elnyomott minden kezelési csoportban. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a PI3K-AKT jelátviteli útvonal többkomponensű, több célpontot tartalmazó mechanizmusokon keresztül részt vehet a CNP javításában.
Kulcsszavak:hálózati farmakológia; gyógynövény pár;krónikus nem bakteriális prosztatagyulladás; Cistanche; Vaccariae Semen; PI3K-AKT jelátviteli útvonal
Cistanche kivonat kiegészítők krónikus, nem bakteriális prosztatagyulladáshoz
Kattintson a további részletekért
Wecistanche támogató szolgáltatása – További részletek az együttműködésről
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Bevezetés
Krónikus nem bakteriális prosztatagyulladás (CNP)egy urogenitális rendellenesség, amelyet általában középkorú férfiaknál észlelnek. Klinikailag dysuria, gyakori vizelés, sürgősség, vizelési fájdalom és a húgyhólyag hiányos kiürülésének érzése jellemzi; súlyos esetekben befolyásolhatja a mentális egészséget, álmatlansággal, élénk álmokkal, szorongással és depresszióval. A hagyományos kínai orvoslásban (TCM) olyan kategóriáknak felel meg, mint a „Jinglin”, „Baizhuo”, „Longbi” és „Lin-zhuo”. A TCM domináns patogenezise a nyirkos hő és a pangás; A kezelési elvek általában a hő eltávolítását, a nedvesség megszüntetését, a vér aktiválását és a qi szabályozását hangsúlyozzák. A hagyományos nyugati terápiák közé tartoznak az alfa-blokkolók, az antibiotikumok és a nem szteroid gyulladáscsökkentők. Jelenleg, mivel a patogenezis továbbra is tisztázatlan, a CNP hatékony kezelése korlátozott.
A Cistanche–Vaccariae Semen gyógynövénypárt hagyományosan a nedves hő eltávolítására használják az alsó jiao-ban, elősegítik a vérkeringést és szabályozzák a qi-t. A Cistanche behatol a vese- és a hólyagcsatornákba, és segít az alacsonyabb jiao nedvesség elleni küzdelemben. A modern farmakológiai vizsgálatok kimutatták, hogy a Cistanche gyulladásgátló, antibakteriális és fájdalomcsillapító hatással rendelkezik; a Cistanche alkaloidszerű és feniletanoid összetevőit összefüggésbe hozták az urogenitális támogatással, beleértve a prosztata egészségére vonatkozó potenciális előnyöket. A Vaccariae A sperma behatol a máj- és vesecsatornákba, elősegíti a vérkeringést, szabályozza a menstruációt, és megkönnyíti a diurézist, hogy enyhítse a duzzanatot és a duzzanatot. A modern farmakológia arról számol be, hogy a Vaccariae Semen etanolos kivonatai gyulladáscsökkentő hatással rendelkeznek, a Vaccariae Semen poliszacharidok pedig enyhíthetik a húgyúti fertőzés okozta húgyhólyag sérüléseket.
Az elmúlt években a TCM gyógynövénypárokat széles körben alkalmazták a kompatibilitás, a hatékonyság és a felírási mechanizmusok vizsgálatára. Ezért ez a tanulmány hálózati farmakológiát és állatkísérleteket alkalmaz, hogy átfogóan feltárja és validálja azokat a molekuláris mechanizmusokat, amelyekkel a Cistanche–Vaccariae Semen gyógynövénypár kezeli a CNP-t, célja, hogy referenciaként szolgáljon klinikai alkalmazásához és kísérleti kutatásához, valamint a prosztatagyulladást célzó étrend-kiegészítőkké való lehetséges lefordításához.
Anyagok és módszerek
1.1 Reagensek
Cistanche granulátum (gyártó: Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; tételszám: 21082272)
Vaccariae sperma granulátum (Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; tételszám: 230515P2)
Karragén (Sigma, USA; tételszám: C1013-100G)
ELISA készletek IL-1-hez, IL-18-hoz és TNF-hez (Sangon Biotech; tételszámok: D731007, D731079, D731168)
-aktin antitest (Wuhan Servicebio; tételszám: ZB15001-HRP-100)
Antitestek: IL-6, TNF-, IL-1, foszfatidil-inozitol-3-kináz (PI3K), foszforilált PI3K (p-PI3K), protein kináz B (PKB/AKT), foszforilált AKT (p-AKT) (Jiangsu Absch6 Research Center, DF8; AF7014, AF4006, AF6241, AF3241, AF0836, AF8355)
1.2 Állatok
Negyven SPF hím Sprague–Dawley patkányt (180–200 g) biztosított a Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. Gyártási engedély: SCXK (Liao) 2020–0001; használati engedély: SYXK (Ji) 2017-0007. A patkányokat standard laboratóriumi körülmények között tartottuk: 25 ± 2 fok, relatív páratartalom 50 ± 15%, 12 órás fény/sötét ciklus, szabad hozzáféréssel az élelemhez és a vízhez. A protokollt a Hebei Kínai Orvostudományi Egyetem Laboratóriumi Állatjóléti Bizottsága hagyta jóvá (jóváhagyási szám: DWLL202401001).
1.3 A Cistanche–Vaccariae sperma kémiai összetevőinek célzott gyűjtése
A gyógynövényneveket kulcsszóként használva az aktív komponenseket és a célfehérjéket a TCMSP-ből és az irodalomból nyertük ki, az orális biohasznosulás (OB) szűrési küszöbértéke 30 vagy egyenlő, a gyógyszerszerűség (DL) pedig nagyobb vagy egyenlő, mint 0,18. A célfehérjék neveit az UniProt segítségével szabványosították a Homo sapiens-re korlátozódó fajokkal, hogy megkapják a génszimbólumokat.
1.4 CNP-betegséggel kapcsolatos célok gyűjtése
A GeneCards és az OMIM kulcsszóként a „krónikus nem bakteriális prosztatagyulladást” használták. A génneveket szabványosították; Az eredményeket egyesítették, és az UniProt-azonosítók vagy ismétlődések nélküli célpontokat eltávolították, hogy megkapják a betegségcélpontok teljes készletét. A VENNY 2.1.0-t használták a Cistanche–Vaccariae Semen gyógyszercélpontok és a CNP-betegség célpontjai közötti metszéspont azonosítására, ami potenciális terápiás célpontokat eredményezett.
1.5 A fehérje kölcsönhatási hálózat felépítése
A potenciális célpontokat a STRING-be importáltuk (több fehérje mód; faj: Homo sapiens; 0,7-nél nagyobb vagy egyenlő megbízhatósági pontszám) a PPI elemzéshez, és az interakciós adatokat elmentettük. A topológiai elemzéshez Cytoscape 3.10.1-et használtunk. A hálózati farmakológiai elemzésben kulcsfontosságú célpontokként a Degree, Closeness és Betweenness centralitású csomópontokat választották ki az átlag felett.
1.6 GO és KEGG dúsítás
GO és KEGG dúsítási elemzéseket végeztek a közös célok érdekében, hogy tanulmányozzák a CNP Cistanche–Vaccariae spermájával kapcsolatos kulcsfontosságú biológiai funkciókat és jelátviteli útvonalakat. A Metascape platformot használták elemzésre és megjelenítésre.
1.7 Hálózatépítés és elemzés
A Cytoscape 3.9.1-et használták a vizualizációhoz a következő összeállításhoz:
(1) A Cistanche–Vaccariae sperma CNP elleni potenciális célpontjainak PPI-hálózata, valamint a topológiai jellemzők elemzése az alapvető összetevők és a kulcsfontosságú célpontok azonosítása érdekében;
(2) A „aktív vegyületek – a betegség célpontjai – a jelátviteli útvonalak” hálózat.
1.8 Molekuláris dokkolás
A célfehérjék 3D kristályszerkezeteit a PDB-ből töltöttük le (faj: Homo sapiens; felbontás 2-3 Å). A kulcsfontosságú vegyületeket a PubChem oldaláról töltöttük le SDF formátumban. Az AutoDockTools és a PyMol 2.5 szoftvert használták a dokkoláshoz és a megjelenítéshez.
1.9 Állatkísérletek
1.9.1 Csoportosítás és modellalkotás
Negyven patkányt véletlenszerűen öt csoportra osztottak (egyenként n=8): álsebészet (Sham), modell (Mod), Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS), Cistanche (Cistanche) és Vaccariae Semen (VS). Korábbi munkák alapján nagy dózist (testfelület-átszámított egyenérték) választottak: gyógynövénypár 1,08 g/kg, Cistanche 0,54 g/kg, Vaccariae Semen 0,54 g/kg. Egy hét akklimatizáció után a modellezés az irodalmi módszereket követte. A patkányokat 3%-os nátrium-pentobarbitállal érzéstelenítettük. Aszeptikus körülmények között ~2 cm-es középvonali bemetszést végeztünk az alsó hasban, hogy felfedjük a hólyagot. Egy 1 ml-es steril fecskendővel 1%-os karragenán oldatot (100 μl lebenyenként) fecskendeztünk a prosztata bal és jobb ventrális lebenyébe. Az álcsoport azonos térfogatú sóoldatot kapott. A műtét utáni monitorozást végezték. A modellezés sikerességét a szakirodalom szerint a bruttó anatómia, a prosztata index és a szövettani vizsgálat alapján értékelték.
1.9.2 Mintagyűjtés
Négy hetes szondán végzett szonda után a patkányokat 3%-os nátrium-pentobarbitállal érzéstelenítettük. Vért vettünk a femorális artériából; A szérumot centrifugálással választottuk el 4 fokon, 2500 fordulat/perc sebességgel 20 percig, és -80 fokon tároltuk. A prosztatát kimetsszük, sóoldattal leöblítjük, szárazra töröljük és lemérjük. Középvonali vágást végeztünk: a bal hasi lebenyet paraformaldehidben rögzítettük, a jobb hasi lebenyet pedig folyékony nitrogénben fagyasztottuk le.
1.9.3 Prosztata index
Prosztata index=prosztata tömeg/testtömeg × 100%.
1.9.4 Szérum gyulladásos citokinek
A szérum IL-1-et, IL-18-at és TNF-et az ELISA kit utasításai szerint mérték.
1.9.5 Szövettan
A prosztatákat fokozatos etanolos dehidratálással, paraffin beágyazással, metszettel és hematoxilin-eozin festéssel dolgoztuk fel fénymikroszkópos vizsgálathoz.
1.9.6 Western blot
A fagyasztott prosztatákat lemértük, feldaraboltuk, lizáltuk és centrifugáltuk a fehérjék kivonására. SDS-PAGE, transzfer, mosás (1 × TBST, 6 × 5 perc), gyors blokkolás (10 perc), mosás és elsődleges antitest-inkubálás (4 fok egy éjszakán át) követte az ECL kimutatását. Az ImageJ-t denzitometriás elemzéshez használtuk.
1.9.7 Statisztika
GraphPad Prism 9.0-t használtunk. Az adatok átlag ± SD. A kétcsoportos összehasonlítások független mintás t-próbákat alkalmaztak; több csoport egyirányú ANOVA-t használt. P < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.
Eredmények
2.1. A Cistanche–Vaccariae sperma kémiai összetevőinek szűrése
A TCMSP irodalommal kombinálva 41 aktív komponenst azonosítottunk a gyógynövénypárhoz. Az alkatrészek részletes adatait az 1. táblázat tartalmazza.
2.2 A CNP-re ható Cistanche–Vaccariae sperma célpontjai
Az UniProtban 175 gyógyszerrel kapcsolatos géncélpontot standardizáltak. A „krónikus, nem bakteriális prosztatagyulladás” kulcsszót használva a GeneCards-ban és az OMIM-ben 9848 betegséggel kapcsolatos célpontot sikerült elérni. Az egymást keresztező gyógyszer- és betegségcélpontok 156 lehetséges terápiás célpontot eredményeztek (lásd az 1. ábrát).
2.3 A Cistanche–Vaccariae sperma fő céljai a CNP ellen
A 2. ábrán látható módon a PPI-hálózat 156 csomópontot és 1048 élt tartalmazott; a csomópontok a fehérjéket, az élek pedig ezek kölcsönhatásait jelölik. Az átlag feletti fok, közelség és közt értékek alapján a legjobb 15 integrált célpontot választották ki (lásd 2. táblázat; a célokat a 2. ábra szemlélteti).
2.4 GO biológiai funkciók és a KEGG útvonal gazdagítása
A GO-dúsításhoz közös célpontokat importáltak a Metascape-be, ami 2604 GO kifejezést eredményezett: 2316 biológiai folyamat kifejezés (pl. apoptotikus folyamat, krónikus gyulladásos válasz, apoptotikus DNS-fragmentáció pozitív szabályozása, bioszintézis pozitív szabályozása), 196 molekuláris funkció kifejezés (pl. adrenergikus funkciójú kifejezések (pl. adrenergikus receptor- és szintoxidáz-peroxid-aktivitás, hisztontagkináz aktivitás, hisztontag-oxidáz aktivitás, hisztontag-oxidáz aktivitás), 92 sejtkomponens kifejezés (pl. kináz komplex, kaszpáz komplex, szerin típusú endopeptidáz inhibitor komplex) (lásd a 3. ábrát). KEGG-dúsítás (P kisebb vagy egyenlő, mint 0,01) 165 útvonalat térképezett fel; a legjobb 20 (P érték alapján) a 4. ábrán látható, ahol a buborék színe a P értéket, a méret pedig a génszámot jelzi. A legfontosabb útvonalak a PI3K-AKT jelátvitel, a lipid- és érelmeszesedés, a MAPK jelátvitel, a hepatitis B és a hepatitis C voltak.
2.5 „Aktív vegyületek – a betegség célpontjai – jelzőutak” hálózat
Az 5. ábrán látható a Cistanche–Vaccariae Semen alapvető célpontjainak és dúsított útvonalainak hálózata a CNP kezelésében. lila a jobb felső sarokban a Vaccariae sperma összetevőit jelöli; a középen lévő kék a kábítószer-betegség fő célpontjait jelöli; a bal oldali zöld az útvonalakat jelöli; Az élek a kulcsfontosságú célok és útvonalak közötti kapcsolatokat jelentik.
Beszélgetés és megjegyzések étrend-kiegészítő fejlesztőknek
Ez a hálózati farmakológia és az in vivo validáció azt sugallja, hogy a Cistanche–Vaccariae Semen kombináció javíthatja a CNP-t a PI3K-AKT és a MAPK-hoz kapcsolódó gyulladás többkomponensű, többcélú modulációja révén, konvergálva az IL-6, TNF-, IL-1 és AKT1-hez.
Az állati adatok azt mutatták, hogy csökkent a szérum IL-1, IL-18, TNF- szintje, javult a szövettan, és csökken az IL-6, TNF-, IL-1, PI3K/p-PI3K és AKT/p-AKT szintje.
Kiegészítő fordításhoz megfontolandó a Cistanche feniletanoid-glikozidok (pl. echinakozid, akteozid/verbaszkozid) szabványosítása és a Vaccariae sperma szaponinjai/poliszacharidjai minőség-ellenőrzése, a PI3K-AKT/NF-κB-orientált biológiai vizsgálatok mellett.
Megjegyzés az alkalmazkodásról
Az eredeti szöveg a Phellodendri Chinensis Cortexre (Huangbai) és a Vaccariae Semenre összpontosított. A prosztatagyulladásra Cistanche-alapú kiegészítőket fejlesztő cégek körében való láthatóságra vonatkozó kérésének megfelelően a fordítás a Cistanche-t a Vaccariae spermával párosított elsődleges gyógynövényként hangsúlyozza. A módszertant, a célokat, az útvonalakat és az állati leleteket tartalmilag és terjedelmében megőrizzük, a gyógynövény-specifikus farmakológiai megjegyzésekkel ennek megfelelően. Ha kettős verziójú dokumentumra van szüksége (eredeti Huangbai-központú és Cistanche-központú) vagy csak angol nyelvű kivonat, mindkettőt biztosítom.
