A Xiaoyaosan hatása a CAMP jelátviteli útvonalára depressziós patkányok agykérgében
Nov 26, 2025
Absztrakt
Célkitűzés:A szérum prosztaglandin E2 (PGE2) és a P anyag (SP) változásainak, valamint a ciklikus adenozin-monofoszfát (cAMP) és a cAMP válaszelem-kötő fehérje 1 (CREB1) mRNS expressziójának értékelése depressziós patkányok agykéregében, valamint a Xiaoyaosan antidepresszáns hatásának molekuláris mechanizmusának feltárása.
Módszerek: Negyvennyolc hím SD patkányt véletlenszerűen négy csoportba osztottak (mindegyik n=12): normál, modell, Xiaoyaosan és fluoxetin. A krónikus immobilizációs stressz (CIS) segítségével depressziós modellt állítottak fel. A Xiaoyaosan-t szondán keresztül adták be 30 perccel a napi modellezés előtt 21 napon keresztül. Az antidepresszánsokhoz hasonló hatásokat makroszkópos viselkedési megfigyeléssel, szacharózpreferencia teszttel, nyílt terepen végzett teszttel és kényszerúszási teszttel értékelték. A corticalis cAMP és CREB1 mRNS szintjét valós idejű fluoreszcens qPCR segítségével határoztuk meg. A szérum PGE2-t és SP-t enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA) mértük.
Eredmények: A modellcsoporttal összehasonlítva mind a Xiaoyaosan, mind a fluoxetin szignifikánsan csökkentette a depresszióhoz hasonló viselkedést; megnövekedett szacharózfogyasztás, függőleges nevelési számok, vízszintes keresztezések és ápolás a szabadföldi tesztben; és csökkenti a kumulatív mozdulatlanság idejét a kényszerúszó tesztben. Mindkét kezelés javította az agykéregben a corticalis hisztopatológiát, megemelkedett a cAMP és CREB1 mRNS expresszióját, és csökkentette a szérum PGE2 és SP szintet (P < 0,01).
Következtetés:A Xiaoyaosan egyértelmű antidepresszáns hatást fejt ki depressziós patkányokban, potenciálisan a kortikális cAMP jelátviteli útvonal szabályozásán keresztül.
Kulcsszavak: Xiaoyaosan; Depresszió; tábor; CREB1; prosztaglandin E2 (PGE2); P anyag (SP)
Bevezetés
A depresszió világszerte a megbetegedések és fogyatékosságok egyik vezető oka, amely jelentősen rontja az életminőséget. A Xiaoyaosan, egy klasszikus, több gyógynövényből álló hagyományos kínai orvoslás (TCM) formula klinikai hasznosságát bizonyította a gyakori depressziós megnyilvánulásokban, támogatva botanikai terápiaként való folyamatos fejlődését.
Mechanikailag a cAMP-protein kinase A (PKA)-CREB jelátviteli kaszkád központi szerepet játszik a hangulat és az érzelmi viselkedés szabályozásában. Ennek az útvonalnak a leszabályozása depressziós fenotípusokat válthat ki. A CREB szerepet játszik a depresszió patofiziológiájában, és a cAMP aktiválása fokozza a downstream gének transzkripcióját; a polimorfizmusokat és a funkcionális redukciókat ezen a tengelyen a depresszióra való hajlam tényezőinek tekintik.
A gyulladásos mediátorok szintén hozzájárulnak a depresszióhoz. A prosztaglandin E2 (PGE2) gyulladásos válaszokat közvetít, az emelkedett PGE2 pedig depresszív viselkedést válthat ki. A P-anyag (SP), a stresszhez és az érzelmekhez kapcsolódó neuropeptid, gyakran emelkedett a depresszióban szenvedő betegek szérumában. Így a megváltozott kérgi cAMP és CREB1 mRNS expresszió, valamint a megnövekedett szérum PGE2 és SP egy olyan molekuláris mechanizmust képviselhet, amely depresszióban a kérgi sérülés hátterében áll.
Bár számos TCM vegyület képletét vizsgálták az antidepresszáns mechanizmusok tekintetében, a legtöbb képlet hatása a cAMP-útvonalra továbbra is tisztázatlan. A krónikus immobilizációs stressz (CIS) paradigma segítségével patkányokban depresszióhoz hasonló viselkedést indukálva, ez a tanulmány tovább vizsgálja a Xiaoyaosan antidepresszáns mechanizmusát, és összehasonlítja a fluoxetinnel, azzal a céllal, hogy tájékozódjon a botanikai terápiák jövőbeli fejlesztéséről, és hasznos betekintést nyújtson a depresszióhoz segítséget kereső emberek számára.
A TCM GYÓGYNÖVÉNY-KIEGÉSZÍTŐI HOGYAN CSÜLTÍTIK A PROSTATITIS TÜNETEIT
Anyagok
Állatok
Negyvennyolc SPF-minőségű egészséges, felnőtt hím Sprague–Dawley patkányt (8 hetes, 200–220 g) a Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.-től vásároltunk [Engedélyszám: SCXK (Peking) 2016-0006]. A patkányokat a Guizhou Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem gátállatlétesítményében tartottuk 22 ± 2 fokos hőmérsékleten, relatív páratartalom 35%–55%, 12 óra világos/12 óra sötét (7:00–19:00), ketrecenként négy patkány, 7 napos akklimatizációval. Etikai jóváhagyás: Guizhou University of TCM (No. 20210142).
A TCM GYÓGYNÖVÉNY-KIEGÉSZÍTŐI HOGYAN CSÜLTÍTIK A PROSTATITIS TÜNETEIT
TCM GYÓGYNÖVÉNY-KIEGÉSZÍTŐK ELADÓK
Kábítószer
A Xiaoyaosan formula a Taiping Huimin Heji Ju Fang arányait követte. A nyers gyógynövényeket a Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.-től vásárolták: Bupleurum (Chaihu), fehér bazsarózsa (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), rántott Atractylodes (Baizhu), Poria (Fuling), Mézben sült édesgyökér (Zhi és FregancaBo) (Shengjiang), 5:5:5:5:5:4:1:5 arányban kombinálva. A főzetet és a sűrítést a Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyvének 2020-as kiadásával összhangban Hunan Jiuzhitang készítette, amely a TCM beavatkozásaként szolgált. A patkányok dózisait átalakítottuk, ionmentesített vízben feloldottuk, és szuszpenziót készítettünk.
Referencia antidepresszánsként fluoxetin-hidroklorid kapszulákat (Patheon France; csomagolt: Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; gyártási szám . 6663B; 20 mg/kapszula) használtunk.
Reagensek
ExTaq (TAKARA, Cat. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Kat. #K0242); primerek (Qingke Bio); Patkány PGE2 és SP ELISA készletek (Shanghai Yuanju Biotechnology Center, Cat. CK-E30697 and CK-E30122).
Hangszerek
7900 valós idejű fluoreszcens qPCR rendszer (Applied Biosystems, USA); mikropipetták (Eppendorf); paraffin mikrotom (HY1508, Jinhua Huiyou); Aquapro ultratiszta vízrendszer (AJY-0501, Aikepu).
Mód
Csoportosítás és modellezés
A patkányokat véletlenszerűen normál, modell, Xiaoyaosan és fluoxetin csoportokba soroltuk (mindegyik n=12). A normál csoport kivételével minden csoportban naponta 3 órán át, randomizált időpontokban, 21 napon keresztül végeztek CIS-t. A normál patkányokat nem fékezték meg, de tápláléktól és víztől megfosztották őket ugyanabban az időintervallumban, hogy megfeleljenek a kezelésnek.
Gyógyszer adminisztráció
Korábbi vizsgálatok alapján a Xiaoyaosant szondán keresztül adták be 2,22 g nyers gyógyszer · kg–1 · nap–1 mennyiségben; fluoxetin 2,0 mg·kg–1·nap–1. A gyógyszereket ionmentes vízben oldjuk. A dózisokat a testfelület átszámításával számítottuk ki; A gyomorszondás térfogat 10 ml/kg volt, 30 perccel minden napi visszatartás előtt. A normál és a modellcsoportok azonos térfogatú ionmentesített vizet kaptak.
Eredményintézkedések és eljárások
3.1 Makroszkópos megfigyelések
A napi megfigyelések rögzítették a mentális állapotot, a mozgást és az általános megjelenést.
3.2 Szacharóz preferencia teszt
A patkányokat 3 napig képezték ki. 1. nap: ketrecenként két üveg 1%-os szacharózt. 2. nap: egy palackot azonos térfogatú kétszer desztillált vízzel cserélünk. 24 órás táplálék- és vízmegvonás után minden patkány kapott egy üveg 1%-os szacharózt és egy kétszer desztillált vizet 1 órán át. A palackokat lemértük a szacharózpreferencia (%) kiszámításához: szacharóz bevitel / (szacharóz + vízfelvétel) × 100%.
3.3 Szabadtéri teszt
Fekete falú nyílt terepet (125 cm × 125 cm × 50 cm) használtak egy csendes helyiségben. A patkányokat középre helyezték; 5 perc alatt a függőleges nevelési számlálást, a vízszintes rács keresztezéseket és az ápolási eseményeket rögzítették. A kísérletek között az arénát 75%-os etanollal és vízzel tisztították.
3.4 Kényszerúszó teszt
A patkányokat egyenként üveghengerekbe helyeztük 35 cm-es, 20±2 fokos vízzel. A bemerítéstől kezdve a viselkedést 5 percig rögzítettük egy nagy felbontású kamerával. Mértük az 5 perc alatti kumulatív mozdulatlansági időt (az immobilitást úgy határozták meg, mint minimális mozgást, hogy az orrot a víz felett tartsák, enyhe testhajlítást az egyensúly érdekében). Az állatok között vizet cseréltek.
3.5 Szövetszövettan
A patkányokat 3%-os nátrium-pentobarbitállal (0,15 ml/100 g) érzéstelenítettük. Csoportonként hat patkánynak 4%-os paraformaldehiddel, majd 0,9%-os sóoldattal történt transzkardiális perfúziója történt rögzítés, lefejezés és agykivonás céljából. Az agyakat 4%-os paraformaldehidbe (4 fok) merítettük 72 órára, paraffinba ágyaztuk, levágtuk és ~5 μm-en metszettek. A metszeteket 48 fokon lebegtettük, felszereltük, 60 fokon 4 órán át sütöttük, paraffinmentesítettük és rehidratáltuk, hematoxilinnel festettük, differenciáltuk, öblítettük, eozinnal festettük, dehidratáltuk, megtisztítottuk és fedőlemezzel mikroszkópos vizsgálat céljából. A maradék hat patkányt csoportonként elaltatták; Az agykérget jégen gyorsan feldaraboltuk és -80 fokon tároltuk RNS extrakcióhoz.
3,6 mRNS mennyiségi meghatározása
A célszekvenciákat az NCBI-ból és a Primer 6.0-val tervezett primerekből nyertük ki.
cAMP: előre 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Fordított 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 bp.
CREB1: előre 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Fordított 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 bp.
GAPDH: előre 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Fordított 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.
qPCR körülmények: elődenaturálás 90 fokon 30 másodpercig; 45 ciklus 95 fokos 10 s, 60 fokos 30 s, 72 fokos 30 s. Olvadási görbe analízis: 95 fok 1 perc, 55 fok 1 perc, 95 fok 1 perc.
3.7 Szérum gyulladásos faktorok
ELISA esetében: i. szabványok és minták meghatározása; adjunk hozzá 50 μL standardokat fokozatos koncentrációban a standard lyukakhoz; (ii) adjon 40 μL mintahígítót a vak- és mintaüregekhez, majd 10 μL mintát és keverje össze; (iii) adjunk hozzá 100 μL enzimkonjugátumot az összeshez, kivéve a vakpróbákat; (iv) lezárjuk és 37 fokon 1 órán át inkubáljuk; (v) híg koncentrált mosópuffer 1:20 arányban; (vi) ötször mossuk, majd szárítsuk meg; (vii) adjon hozzá 50 μL A szubsztrátot, majd 50 μL B szubsztrátot, inkubálja 37 fokon fénytől védve 15 percig; (viii) leállító oldat hozzáadása; ix. olvassa le az abszorbanciát 450 nm-en nullára állított vakpróbával.
Statisztikai elemzés
Az adatokat SPSS 26.0-ban elemeztük, és átlag ± SD-ben fejeztük ki. A normalitás és a variancia homogenitásának megerősítése után egyutas ANOVA-t alkalmaztunk. P < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.
Olvasói megjegyzés gyakorló szakembereknek és segítséget kérőknek
Botanikai/TCM antidepresszánsok fejlesztői számára: A tanulmány egy klasszikus formulát kapcsol össze egy specifikus neurobiológiai útvonallal (cAMP–CREB) és gyulladásos mediátorokkal (PGE2, SP). Az ilyen kettős moduláció-neuroplaszticitás jelátvitel és a gyulladás összhangban van a kortárs depresszióbiológiával, és irányíthatja a képletoptimalizálást, a biomarkerek kiválasztását és az SSRI-kkel, például a fluoxetinnel való kombinációs stratégiákat.
A depresszió elleni segítséget kereső egyéneknek: A preklinikai eredmények nem helyettesíthetik az orvosi ellátást, de azt sugallják, hogy a Xiaoyaosan javíthatja a depresszív viselkedést azáltal, hogy normalizálja az agyi jelátvitelt és csökkenti a gyulladásos jeleket. Ha fontolóra veszi a gyógynövényeket, forduljon szakképzett klinikushoz, különösen, ha antidepresszánsokat szed, hogy elkerülje a kölcsönhatásokat, és biztosítsa az adagolást és a minőségellenőrzést.
Átmeneti elvitel
A Xiaoyaosan javította a viselkedést, az agy szövettanát és a molekuláris markereket CIS-indukált depressziós patkányokban, valószínűleg a kortikális cAMP/CREB jelátvitel fokozásával, miközben csökkentette a perifériás PGE2-t és SP-t. Erre építve a következő tanulmány a cAMP upstream szabályozóit (pl. adenilil-cikláz izoformákat és foszfodiészterázokat) boncolgatja, és meghatározza, hogy a Xiaoyaosan közvetlenül modulálja-e ezeket a célpontokat, vagy elsősorban a CREB-n konvergáló gyulladásgátló útvonalakon keresztül fejti ki hatását.
