A Cistanche Deserticola YC Ma-ból származó nyers poliszacharidok immunregulátorként és adjuvánsként

További információért kérjük lépjen kapcsolatbaoscar.xiao@wecistanche.comtöbbért

Absztrakt:A Cistanche deserticola YC Ma (CD) ideális gyógynövények egészségügyi problémákra. Ebben a tanulmányban a CPCD modulátor aktivitása az aktiváláskordendritikus sejtek(DCs) és a ragadós száj- és körömfájás vakcina (FMDV) adjuváns potenciálját értékelték. CPCD nélkülcitotoxicitásDC aktivációt indukált a fenotípusos markerek és az antigénfelvétel fokozásával. A TLR-2 vagy TLR-4 antitestek elnyomták a CPCD által közvetített CD40 és CD86, valamint az IL-6 és IL-1 szintjét a DC-kben. A CPCD a MAPK-okkal rokon molekulák és az NF-κB foszforilációját indukálta. Ha egerekben intramuszkulárisan FMDV-vel együtt injektálták, a CPCD növelte az FMDV-specifikus antitestek, a limfocita proliferáció és az effektor T-sejtek számát. Pontosabban, a CPCD Th1 választ váltott ki, amint azt a CD4 plusz IFN-, CD8 plusz IFN- és CTL válasz magasabb expressziója jelezte. A CPCD fokozta az MHC-II, CD80, CD86 és CD40 expresszióját a DC-kben, és csökkentette a Tregs gyakoriságát. Ezért a CPCD hatékonyan stimulálhatja az erősebb humorális és sejtes válaszokat azáltal, hogy modulálja a DC-aktivációt a TLR-2/TLR-4-hoz kapcsolódó MAPK-kon és NF-κB útvonalakon keresztül.

További információért kattintson ide

1. Bemutatkozás

A legtöbbpoliszacharidokA gyógynövényekből származó termékek egyre nagyobb érdeklődést váltottak ki az adjuvánsok területén alacsony toxicitásuk és széles spektrumú immunerősítőjük miatt (Chen és Huang, 2018; He és mtsai, 2020). Sok kutató sikeresen használt gyógynövényeket számos vakcina adjuvánsaként. A tipikus poliszacharidokat, köztük az Astragalus poliszacharidot, a Panax ginseng poliszacharidot, a Poria cocos poliszacharidot és a lentinánt széles körben alkalmazták számos fertőző betegség elleni vakcinák adjuvánsaiként (P. Li & Wang, 2015; Rey Ladino, Ross, McManus, &, Cripps 2011; B. Sun et al., 2018). A Cistanche deserticola YC Ma-t (kínaiul C. deserticola, "Rou Cong-Rong") hagyományosan tonizáló gyógynövény-kiegészítőként használják betegségek kezelésére a hagyományos kínai orvoslásban (TCM) a kínai gyógyszerkönyv szerint évszázadok óta (S. Li, Wu és Le, 2021; Yong és Tu, 2009). In vivo és in vitro vizsgálatok kimutatták, hogy a C. deserticola kivonatokban sok voltfarmakológiai funkciókbeleértve a fáradtság enyhítését ésgyulladáscsökkentő, neuroprotektív, vírusellenes és immunmoduláló funkciók (Fu, Fan, Wang és Gao, 2018; Tian Wang, 2012). A C. deserticolából származó poliszacharidokról, a C. deserticola aktív összetevőiről bebizonyosodott, hogy széles körű biológiai aktivitással rendelkeznek, beleértve az immunválasz modulálását, valamint az antioxidáns gyulladáscsökkentő és fáradtság elleni funkciókat (Dong, Yao, Fang és Ding , 2007; W. Zhang et al., 2016). 2018-ban és 2019-ben kimutattuk, hogy a C. deserticola (CPCD) nyers poliszacharidjai az OVA-antigén adjuvánsaként működtek, elősegítve a Th1/Th2 immunválaszt. A CPCD egyenáramú aktiválást válthat ki a Toll-like receptor 4-en (TLR-4) keresztül (Zhang et al., 2018). Azt is megállapították, hogy a CPCD Th1 immunválaszt vált ki, beleértve az IFN-szekréciót és az IgG2a-generációt az influenza elleni vakcina ellen egerekben (Zhao, Lian, Wang, Li és Zhang, 2019). Ezért fel kell tárni a CPCD által kiváltott immunválasz mögött meghúzódó mechanizmust és a CPCD immunpotenciáló hatását az inaktivált FMDV-re.

A ragadós száj- és körömfájás (FMD) egy fontos vírusos állatbetegség, mivel jelentős gazdasági veszteségekhez és társadalmi következményekhez vezethet. Az inaktivált száj- és körömfájás elleni vakcinák (FMDV) az FMD leghatékonyabb védekezési eszközei. A jelenlegi inaktivált FMDV biztonságos, de gyengén immunogén az alacsony antitest-termelés, az antitestek rövid ideig tartó perzisztenciája, valamint a sertések gyenge immunválasza miatt (Y. Cao, Lu és Liu, 2016; Doel, 2003). A nagyobb vakcinadózisokat vagy a megnövelt kezelési időket, a különböző injekciózási módokat (intramuszkuláris és intradermális vakcináció) és a gyorsított adagolási programokat fontos stratégiaként alkalmazták a vakcinák védőhatékonyságának javítására. Egyre több bizonyíték támasztja alá, hogy az adjuvánsok fokozhatják a vakcinák hatékonyságát a fertőző betegségek ellen (Steven G. Reed, Orr és Fox, 2013; N. Zhang et al., 2010). Az új adjuvánsok és beépülésük az FMDV-be növelhetik az immunogenitást, és még a védelem időtartamát is megnövelhetik (Y. Cao, 2014; Dar, Kalaivanan, Sied, Mamo és Kondabattula, 2013). Jelenleg sok erőfeszítést fordítanak olyan biztonságos és hatékony adjuvánsok kifejlesztésére, amelyek személyre szabott immunválasz mellett maximalizálják az immunogenitást (Pulendran és O'Hagan, 2021). A vakcinákhoz különféle adjuvánsokra van szükség. A hagyományos adjuvánsokhoz képest a TCM-ből származó poliszacharid adjuvánsok segíthetnek immunerősítő hatások kifejtésében az FMDV-re azáltal, hogy modulálják a limfociták, citokinek és antitestek szintjét, és erősebb celluláris és humorális immunválaszokat generálnak.

A dendritikus sejtek (DC-k) aktiválása bizonyítottan adaptív immunválaszokat indít el, és szabályozza a Th1/Th2 immunitás egyensúlyát (Kapsenberg, 2003). Az új adjuvánsok DCS-re gyakorolt ​​hatását tisztázni kell. A TCM poliszacharidok javíthatják a felszíni molekulák expresszióját DC-ken, beleértve az MHC II-t, CD80-at, CD86-t és CD40-et, és növelhetik a gyulladást elősegítő citokinek, például az IL-6 és az IL{{ 8}} (J. Li, Li és Zhang, 2015). A TCM poliszacharidok immunmoduláló hatását a DC-ken lévő membránreceptorok közvetlen megkötésével érik el (Jiang, Zhu és Jiang, 2010). Más szavakkal, a CPCD immunadjuváns aktivitása összefügg a DC-kre kifejtett immunmoduláló hatásokkal. Ezenkívül a TLR-ek őrreceptorok, amelyek elősegítik a DC-k aktiválását és toborzását, valamint B-sejtes és T-sejtes válaszokat váltanak ki. A mitogén által aktivált protein kináz (MAPK) és a nukleáris faktor kappa-B (NF-κB) útvonalak a TLR-ek kritikus downstream útvonalai, és ezen útvonalak aktiválása indukálhatja a proinflammatorikus citokinek, köztük az IL-6 és az IL{{15} termelését. } (Akira és Takeda, 2004). Ezért meg kell vizsgálni a TLR-hez kapcsolódó downstream útvonalakat, hogy megértsük az immunsejtek fertőzésekre adott válaszait. Ebben a vizsgálatban általában az ICR egeret választották modellállatként az FMDV laboratóriumában, hogy meghatározzák az adjuváns és a vakcina hatékonysága közötti kapcsolatot a célzott állatok kényelmetlen alkalmazása miatt, és a CPCD-t mint FMDV adjuvánst vizsgálták in vitro és in vivo. hogy feltárja szerepét a DC-k aktiválásában a TLR-2/TLR-4-kapcsolódó downstream MAPK-k és NF-κB útvonalak által. Ez a tanulmány biztosítja az alapot a CPCD által kiváltott immunmoduláló hatások indukciós mechanizmusainak megértéséhez, valamint a CPCD poliszacharid adjuvánsként való potenciálját az FMDV-hez a megcélzott állatokban.

2: Anyag és módszerek

A C. deserticola (szám: CD17042001) azonosítását Jiang He professzor adta meg. A Tecon Biology Co., Ltd. (Kína) felajánlotta az inaktivált FMD vírus O-szerotípusú 146S antigénjét és ISA-206 adjuvánst. A magzati szarvasmarha szérum (FBS) a Biological Industries cégtől származott. Az RPMI 1640 tápközeget a GIBCO-tól (USA) vásároltuk. polimixin B (PMB), lipopoliszacharid (LPS), 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5- difenil-tetrazólium-bromid (MTT) Sigma termék. A sejtszámláló készlet-8 (CCK-8) a Biosharp-tól (Kína) származott. Az egér granulocita-makrofág telep-stimuláló faktor (GM-CSF) a PeproTech-től (USA) származott. Az IL-6 és IL-1 készletek a Bostertől (Kína) származtak.

A Golgistop, a Cytofix/Cytoperm, a Perm/Wash puffer és a CD3, CD4, CD8, CD44, CD11c, MHC-II, CD80, CD{7}}, CD40 elleni antitestek a BD Biosciences (USA) cégtől származtak. A nukleáris és citoplazmatikus extrakciós készletek és a BCA fehérje mennyiségi meghatározására szolgáló készletek a Cwbiotech-től (Kína) származtak. Az anti-TLR-2 és anti-TLR-4 antitesteket a Novus Biologicals-tól (USA) vásároltuk. A MAPK-k és az NF-κB útvonalkészletek a Cell Signaling Technology (USA) cégtől származtak. Torma-peroxidázzal jelölt anti-egér/nyúl antitestek (IgG/IgG1/IgG2a) a Southern Biotech-től (USA). Tregs festőkészlet az eBiosciences-től (USA).

3: eredmény

A semleges szénhidrát tartalom 50,53 százalék ± 1,28 százalék, a savas szénhidráttartalom pedig 17,81 ± 0,51 százalék volt. A CPCD átlagos molekulatömege (Mw) retenciós idővel együtt 46,77 kDa volt (1A. ábra). A CPCD monoszacharid összetétele azt mutatja, hogy a CPCD fő cukorkomponensei a Glc, Ara, Gal, Rha, GlaA és Man 33,17 százalék, 28,98 százalék, 16,39 százalék, 10,97 százalék, 8,05 százalék, 2,42 százalék (Fig.42 százalék). 1B). Az 1C. ábra a CPCD FT-IR spektrumát mutatja. A 3383,64 cm−1-nél lévő márkák a hidroxilcsoportnak köszönhetőek. Az alkilcsoport abszorpciós sávjait 2926,97 cm− 1 és 1417,99 cm− 1-nél figyelték meg.karbonilAz 1257,06-1032,02 cm-1 közötti jelek piranóz gyűrűk jelenlétét jelezték. Annak további vizsgálatára, hogy a MAPK-kat és az NF-κB-utakat aktiválták-e a CPCD-kezelés, a DC-ket eltérő időpontban stimuláltuk CPCD-vel, és megvizsgáltuk a két útvonalban részt vevő kulcsfontosságú fehérjék expresszióját. A CPCD időfüggő módon indukálta a JNK, ERK és p38 foszforilációját, és a JNK, ERK és p38 foszforilációs szintje 15-30 perc után volt a legmagasabb (5AD ábra). Emellett a citoplazmatikus NF-κB p65, IκB, IKK/ és nukleáris NF-κB p65 foszforilációja is időfüggő módon indukálódott. A citoplazmatikus p65, IκB és IKK / foszforilációs szintje, valamint a p65 aránya a sejtmagban különböző időpontok után volt a legmagasabb: 15-30 perc p65, 30 perc IkB, 60 perc IKK / és 20 perc a p65 aránya a sejtmagban (5E-5 J ábra).

Ez a cikk a Journal of Functional Foods 87 (2021) 104800 folyóirat honlapjáról származik: www.elsevier.com/locate/jff