A Cistanche deserticola minőségellenőrzésének módszerei

további információ:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei és társai.

A hagyományos kínai orvoslásCistanchea zamatos szára aCistanche deserticolaYC Ma vagy Cisanche tubulosa (Schenk) Wight száraz pikkelyes levelekkel. A vese yang tonizáló funkciója, tápláló esszencia és vér, bélnedvesítő és hashajtók stb. Leginkább vese yang hiányára, esszencia- és vérhiányra, impotenciára és meddőségre, derék- és térdfájásra és gyengeségre, gyengeségre használják. izmok és csontok, bélszárazság és székrekedés. A modern farmakológiai kutatások azt mutatjákCistancheszámos funkciója van, például javítja a szexuális funkciót, ellenáll az Alzheimer-kórnak és a Parkinson-kórnak, javítja a tanulási és memóriaképességet, öregedésgátló, fáradtsággátló, májvédő és hashajtó [4]. Számos tanulmány megerősítette, hogy a fenil-etanol-glikozidok aCistanche deserticolanyilvánvalóan javítják a tanulási és memóriaképességet, ellenállnak az Alzheimer-kórnak és a Parkinson-kórnak (4, az oligoszacharidok és poliolok hashajtó és hashajtó hatásúak 64 ). A "Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyve" csak a fenil-etanol-glikozidok, az echinakozid és a verbaszkozid tartalmát mériCistanchedeserticola, de nem méri hashajtó hatásának aktív összetevőit, így nehéz a gyógyászati ​​anyagok átfogó elemzését elérni.Cistanchedeserticola. Minőség ellenőrzés. Ennek a korlátnak a leküzdése és egy többindexes minőségértékelési rendszer létrehozása a fő funkcióihoz és jelzéseihez kapcsolódóan.Cistanchedeserticola, ez a tanulmány a HPLCELSDP4 segítségével kvantitatív elemzési módszert dolgozott ki a betainra, mannitra, fruktózra, glükózra és szacharózra a gyógyászati ​​anyagokban.Cistanchedeserticola. Ezen kívül 58 tételCistanchedeserticolakülönböző eredetű gyógyászati ​​anyagok és 10 tétel gyógyászati ​​anyagCistancheXinjiang Hotan területén tesztelték, ami referenciaként szolgálhat a gyógyászati ​​anyagok átfogó minőségellenőrzéséhez és értékeléséhez.Cistanchedeserticolaa jövőben.

Kattintson a ciszternakivonat előnyeihez a termékekhez

1 Műszer és reagensek

1.1 Műszerek

Sartorius elektronikus mérleg BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 nagy teljesítményű folyadékkromatográfia; ALLTECH 2000ES Evaporative Light Scattering Detector (EISD); Ultrahangos tisztító KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd.). 1.2 Reagensek

Kontrollanyag: betain (tétel: {{0}}, tisztaság: 99,2 százalék), mannit (tétel: 10053-201304, tisztaság: 99,0 százalék), D-fruktóz (tétel: 111504-201703) , tisztaság: 99,8 százalék ), D - Vízmentes glükóz (tételszám: 110833-201506, tisztaság: 99,9 százalék ), szacharóz (tételszám: 111507-201303, tisztaság: 99,8 százalék ), mindegyiket a China National Institute-tól vásároltuk Élelmiszer- és Gyógyszer-ellenőrzés.

A gyógyászati ​​anyagokCistanchedeserticolaBelső-Mongóliában, Hszincsiangban, Gansuban és más helyeken gyűjtötték össze, összesen 58 tétellel. Tu Pengfei, a Pekingi Egyetem Gyógyszerészeti Iskola professzora azonosította őket a szárított húsos szárként.CistanchedeserticolaA Lidangaceae növény YCMa-ja, a 3. táblázat szerint.

A gyógyászati ​​anyagokCistanchedeserticolaa hszincsiangi Hotan körzetben gyűjtötték össze, összesen 10 tételben. Tu Pengfei professzor, a Pekingi Egyetem Gyógyszerészeti Iskola munkatársa azonosította őket, mint a Liedangaceae növény Cistanche tubulosa (Schenk) pikkelyes leveleivel rendelkező szárított, húsos szárát, amint az a 4. táblázatban látható.

1.3 Reagensek

Az acetonitril kromatográfiás tiszta (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), a metanol kromatográfiás (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), a víz pedig ultratiszta víz.

2 Módszerek és eredmények

2.1 Kromatográfiás körülmények

A kromatográfiás oszlop egy ShodexAshaipak NH2P-50 4E polimer géloszlop (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); a mozgó fázis acetonitril-víz (77°23); az áramlási sebesség 0,7 ml·perc{11}} volt; az oszlop hőmérséklete 25 fok volt; Fényszórási detektor (ELSD): A sodródó cső hőmérséklete 100 fok volt, a vivőgáz áramlási sebessége 3 L·perc{15}}.

2.2. Összehasonlító oldat készítése

Vegyünk megfelelő mennyiségű betaint, mannitot, fruktózt, glükózt és szacharóz referenciaanyagot, pontosan mérjük le, adjunk hozzá vizet, hogy vegyes oldatot kapjunk, amely per 0,25 mg betaint, mannitot, fruktózt, glükózt és szacharózt tartalmaz. 1 ml-t, jól rázzuk fel, és vegyük fel.

2.3. A vizsgálati oldat elkészítése

Vegyünk körülbelül 1.0 g-otCistanchegyógyport (4-es számú szitán átpasszírozva), pontosan lemérjük, 100 ml-es barna mérőlombikba tesszük, precízen adjunk hozzá 50 ml 50 százalékos metanolt, szorosan dugjuk be, rázzuk fel, mérjük áztassa be 30 percig, majd ultrahanggal (teljesítmény 250 W, frekvencia 35 kHz) 40 percig vegye ki, hagyja kihűlni, mérje le újra, adjon hozzá 50 százalékos metanolt a tömeg csökkentése érdekében, jól rázzuk össze, és hagyjuk. az áll. Szívjon fel pontosan 5 ml felülúszót, tegye egy 25 ml-es mérőlombikba, hígítsa a jelig 50%-os metanollal, jól rázza fel, és szűrje át egy 0,2 μm-es mikroporózus membránon.

2.4 Meghatározási módszer

Vegyünk fel pontosan 5, illetve 10 µl összehasonlító oldatot, illetve 5 µL vizsgálati oldatot, fecskendezzük be a folyadékkromatográfba, jegyezzük fel a csúcsterületet, és számítsuk ki a külső standard kétpontos módszer logaritmikus egyenlete szerint.

2.5 Rendszeralkalmassági teszt

A 2.1. pont szerinti kromatográfiás körülményeknek megfelelően vegyünk fel pontosan 5 μ-t az összehasonlító oldatból, illetve a vizsgálati oldatból, és fecskendezzük be a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiába, mérjük meg és rögzítsük a kromatogramot az 1. ábra szerint. A kromatográfiás csúcsok A tesztminta retenciós ideje megegyezett a referenciaanyag kromatográfiás csúcsaival, a felbontás jó volt, a kromatográfiás körülmények pedig megvalósíthatóak voltak.

Megjegyzés: A. Kontroll anyag; B.Cistanche49. sz. minta; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. mannibol ; 4. glükóz; 5. sucreve

1. ábra A referenciaanyag és a 49. számú Cistanche mintájának HPLC-profilja

2.6 Lineáris kapcsolatok vizsgálata

Vegyünk megfelelő mennyiségű betaint, mannitot, fruktózt, glükózt és szacharózt referenciaanyagként, pontosan mérjük le, és adjunk hozzá vizet, hogy 1 ml-enként betain legyen 0.496 0 mg, mannit {{3} }.994 0 mg, gyümölcs 1.0126 mg, glükóz 1.0882 mg és szacharóz 0,9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 μ, mannit 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, fruktóz 0,5063, 1.{38}}. 2.{40}}. 4.{42}}. 5.{44}}. A kromatográfiás körülményeket injektáltuk és detektáltuk, és feljegyeztük a csúcsterületet; majd minden referenciaanyag befecskendezett mennyiségének X (ug) logaritmusát használtuk abszcisszaként, és a csúcsterület Y logaritmusértéke volt az ordináta, és megrajzoltuk a standard görbét. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.

1. táblázat A lineáris kapcsolat vizsgálatának eredményei

2.7 Precíziós teszt

Pontosan rajzolja le a vizsgálati oldatot (49. számú minta), a fenti kromatográfiás körülmények között, folyamatosan fecskendezze be 6-szor, mérje meg az egyes kromatográfiás csúcsok csúcsterületét, és számítsa ki az RSD értékét. Eredmények A betain, mannit, fruktóz, glükóz és szacharóz csúcsterületeinek RSD-értéke 0,84 százalék, 2,56 százalék, 1,27 százalék, 2,62 százalék és 1,52 százalék volt, ami azt jelzi, hogy a használt műszer pontossága jó volt ez a tanulmány. 2.8 Ismételhetőségi vizsgálat

Vegyünk 6 mintátCistanchedeserticola(49. számú minta), készítsük el a vizsgálati oldatot a 2.3. pontban leírt módszer szerint, mérjük meg az egyes kromatográfiás csúcsok csúcsterületét, és számítsuk ki a megfelelő tartalmat. Eredmények Az átlagos betain-, mannit-, fruktóz-, glükóz- és szacharóztartalom (n=6) 7,93%, 7,27%, 8,74%, 2,75% és 4,81%, az RSD-k pedig 2,83%, =6% voltak. 18}},97 százalék, illetve 2,60. százalék , 1,40 százalék , ami azt jelzi, hogy a módszer jó ismételhetőségű. 2.9 Stabilitási vizsgálat

Vegye ki a tesztoldatot (49. számú minta), fecskendezze be 0, 4, 8, 12, 16 és 24 órával a mérés előkészítése után, és számítsa ki az egyes kromatográfiás csúcsok RSD-értékét. Eredmények A betain, a mannit, a fruktóz, a glükóz és a szacharóz RSD-értéke rendre 0,61 százalék , 1,92 százalék 1,34 százalék , 2,83 százalék és 0,69 százalék volt, ami azt jelzi, hogy a tesztoldat jó volt stabilitása 24 órán belül. 2.10 Helyreállítási teszt

Vegyünk 6 mintátCistanchedeserticolaismert tartalommal (49. számú minta), pontosan mérjen ki 0,25 g-ot, tegye egy 50 ml-es barna mérőlombikba, és pontosan szívjon fel 25 ml-t 1-es koncentrációjú összekevert referenciaoldatból: 1 (amely {{10}},7900 mg betaint tartalmaz). mL-, fruktóz 0,7236 mg"mL-1, mannit 0,8812 mg·mL-1, glükóz 0,2708 mg/mL-1, szacharóz 0,4883 mg"mL-") adtunk a mintához, és a tesztoldatot a 2.3. pontban leírt módszer szerint készítettük. A fent említett kromatográfiás körülmények között detektáltuk, kinyerését számítottuk, az eredményeket a 2. táblázat mutatja, jelezve, hogy a módszer jó pontosságú.

2. táblázat: 5 vizsgálandó komponens minta-visszanyerési arányának mérési eredményei (n=6)

3 Vita

3.1 Az index komponensek kiválasztása

Az összes oligoszacharidCistanchehatásos részeiCistanchehashajtókra. A szerző ennek a résznek a kémiai összetételét LC-MS-sel és a referenciaanyaggal elemezte, és megállapította, hogy ez a rész főként betainból, mannitból, fruktózból, glükózból és szacharózból áll. Ezért ezt az 5 komponenst választottuk ki az index komponenseikéntCistanchedeserticola, és létrejött a tartalommeghatározási módszer.

3.2. A kromatográfiás oszlopok kiválasztása

Az öt vizsgálandó komponens, a betain, a mannit, a fruktóz, a glükóz és a szacharóz viszonylag polárisak, és nem maradhatnak vissza a fordított fázisú Cn oszlopban. Általában a csúcsok 1-2 percen belül jelennek meg, és az összetevőket nem lehet szétválasztani. Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) és Phenomenex Bondclone 10 NH (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) aminooszlopok cukor és poliol elválasztására, valamint polimer alapú aminooszlopok Prevail Carbohydrate ES ( 250 mm) × 4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Az eredmények azt mutatják, hogy a polimer mátrix aminooszlop hatékonyan el tudja választani ezt az öt komponenst.

3.3 Érzékelő kiválasztása

Az öt vizsgálandó komponensnek nincs nyilvánvaló UV-elnyelése, és az UV-detektor tartalma közvetlenül nem határozható meg. Ezért ez a cikk kvantitatív elemzési módszert dolgozott ki a cukoralkohol összetevőireCistanchedeserticolaHPLC-EISD segítségével. Az eredmények azt mutatják, hogy a módszer nagy érzékenységgel, jó ismételhetőséggel és nagy pontossággal rendelkezik, és felhasználható aCistanchedeserticolaés egyéb betaint és cukoralkoholokat tartalmazó gyógyászati ​​anyagok.

3.4 A vizsgálati oldat elkészítési módjának vizsgálata

Különböző extrakciós oldószereket, köztük vizet, 30% metanolt, 50% metanolt, 70% metanolt, metanolt, stb. hasonlítottunk össze. Az eredmények azt mutatták, hogy a 70 százalékos metanol és a metanol oldószer valamivel alacsonyabb extrakciós sebességét leszámítva a többi oldószerben nem volt szignifikáns különbség, ezért a közvetlen szelekcióra került sor. Oldószerként 50%-os metanolt használtunk a "Tartalom meghatározása" alattCistanchea Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyvében, és a vonatkozó vizsgálati oldat elkészítési módja szerint készült, majd 5-szörös hígítással a cukoralkohol komponensek meghatározásához.

3.5 Különböző bázisú minták kimutatása és elemzése

Ebben a tanulmányban 5 komponens tartalma 58 tételbenCistanchedeserticolaés 10 tételCistanchedeserticolagyógyászati ​​anyagokat határozták meg. A betain, mannit, fruktóz, glükóz és szacharóz tömegfrakciói 58 tételbenCistanchedeserticolaa minták 2,73 százaléka -17,65 százalék , 2,46 százalék -16,34 százalék , 2,52 százalék {{10}},74 százalék , 0,97 százalék -14,06 százalék , 3,15 százalék -27,16 százalék ; A mannit, a fruktóz és a glükóz 1.00 százalék -13,04 százalék , 2,98 százalék -8,85 százalék , 1,09 százalék -5,33 százalék a 10 tételbenCistanchemintákat, illetve betaint és szacharózt nem mutattak ki. A gyógyszeralapanyag-tartalom tételenként nagymértékben eltér, és nincs betartandó szabály, ami a gyógyászati ​​anyagok minőségének ellenőrzésére szolgáló tartalommeghatározási szabvány kialakításának szükségességét sugallja. Ezen túlmenően, ez a módszer hatékonyan megkülönbözteti két fajtaCistanchealapnövények, nevezetesenCistanchenem tartalmaz betaint és szacharózt, míg e két komponens tartalma magasabbCistanche deserticola. Ez alapot ad a két gyógyászati ​​anyag textúrája és élőhelye közötti különbségek elemzéséhez isCistanche deserticola. Összehasonlítva a gyógyászati ​​anyaggalCistanche deserticola, a textúra lágyabb, és helyi nevén "Soft Dayun", mígCistanche"Chai Dayun"-nak hívják, mert szacharózt tartalmaz (3,15% ~ 27,16%). ).Cistanche deserticolafőként a belső-mongóliai Alxában terjesztik, mígCistanchefőként a hszincsiangi Hotan területén oszlik el, ahol a hőmérséklet magasabb, mint Alxa területén, és a helyi területen gyakran alkalmaznak csepegtető öntözést, de amint a hőmérséklet lecsökken,Cistanchesúlyos károkat fog szenvedni. A fagykár egyrészt a magas víztartalommal van összefüggésben, másrészt a benne lévő összetevőkkel. A betain 243 egy fontos ozmotikus beállító anyag, amely fontos szerepet játszik a növények stresszállóságának fokozásában, például ellenáll a sótartalomnak, szárazságnak, alacsony hőmérsékletnek és erős fénynek. Pontosan a benne lévő magas betain tartalma miattCistanche deserticolahogy jobban ellenáll a só-lúgoknak, a szárazságnak és a fagykároknak, mintCistanche, és viszonylag széles az elterjedése.

3.6 ElemzéseCistanchedeserticolakülönböző eredetű minták

Az 58 tétel sivatag közöttcistanchegyógyászati ​​anyagminták, 45 tétel a belső-mongóliai Alxa League-ből, 3 tétel a belső-mongóliai Wangyediből (Dengkou megye) származott, és 1 tétel ismeretlen volt. Mind a 49 tétel gyógyászati ​​anyag 5 komponensből eltérő tartalommal rendelkezett. Lényeges különbség azonban nincs. Az elemzés oka az lehet, hogy a gyógyászati ​​anyagokat egyazon sivatagi területen állítják elő, az ökológia és a földrajzi környezet hasonló, a termék minősége viszonylag egységes és stabil. 3 tételt gyártanak Minqin megyében, Gansuban, és 6 tételt Hszincsiangból. A 2. ábra elemzése szerint a Belső-Mongóliában előállított gyógyászati ​​anyagokkal összehasonlítva a fő különbség a fruktóz és szacharóz tartalomban mutatkozik meg. A gyógyászati ​​anyagok szacharóztartalma viszonylag legmagasabb volt, de tekintettel a két származású minta alacsony mennyiségére, ezt a következtetést további mintagyűjtéssel kell igazolni. 3.7 Összefoglalás

Ebben a vizsgálatban a HPLC Wang ISD-t a hashajtók 5 hatóanyagának egyidejű meghatározására hozták létre, amely kényelmesebb, hatékonyabb és pontosabb módszert nyújtott a hashajtók minőségellenőrzésére.Cistanche deserticola, és alapot adott a minőségi színvonal javításához és továbbfejlesztéséhezCistanchedeserticola. értelmes hivatkozás.

Hivatkozások

【1】 Állami Gyógyszerkönyvi Bizottság. A Kínai Népköztársaság gyógyszerkönyve: A 【M】. Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Kutatási előrehaladás a farmakológiai aktivitás aCistancheKiállítás. Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Összes glükozidok farmakológiai hatásainak kutatási státusza Cilantroban [J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. A neurofarmakológia kutatási előrehaladásaCistanche deserticolaKiállítás [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. A farmakológiai hatásaival kapcsolatos kutatási eredményekCistanche deserticolaAlzheimer-kór kezelésében []. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou és társai. Az izolált részek hashajtó hatásaCistanche deserticolaKísérleti kutatás □. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen és mások.Cistanche deserticolagalactitol kivonat Dózis-válasz vizsgálat a széklet hatásáról [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang és társai. A gyógyászati ​​anyagok kutatásaCistanche deserticolahashajtókra Kutatás [J]. Modern kínai orvoslás Kínában, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong és mások. Három tevékenységeCistanche deserticolakülönböző befolyásoló tényezők mellett Quantitative Analysis of Components J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong és mások. MeghatározásaCistanche deserticolaa HPLCEISD által a Galactitol tartalma.Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan és társai. HPLCELSD meghatározásaCistancheés tubus Galactitol tartalma inCistanche[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao és mások. A betain hatása a növények stresszellenállásának javítására és hatásmechanizmusa. Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. A növényi hidegrezisztencia gének kutatásának áttekintése. Vidéki gazdaság és technológia, 2018, 29(8): 23-25.