A zöld kávébab kivonattal töltött öregedésgátló liposzóma gél fejlesztése

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

ABSZTRAKT

Háttér:A Coffee arabica L. zöldbab családja: A Rubiaceae gazdag polifenolforrás, amely megakadályozza a bőr oxidatív károsodását. Ebben a vizsgálatban a liposzómákat gyógyszerhordozóként formulázták, hogy fokozzák a polifenolok bőráteresztő képességét helyi adagoláshoz. Anyagok és módszerek: A zöld kávébab kivonatait a metanol és a víz arányának változtatásával állítottuk elő. Fitokémiai analízist és in vitro antioxidáns értékelést végeztünk minden kivonatnál, hogy a legjobb kivonatot válasszuk ki további vizsgálatokhoz. A kiválasztott kivonat citotoxicitási potenciálját (MTT vizsgálat) és anti-elasztáz aktivitását L929 sejtvonalakon áramlási citométerrel értékeltük. A kivonat liposzómáit vékonyréteg-hidratációs módszerrel állítottuk elő, és a foszfatidil-kolin/koleszterin arány változtatásával és a kivonat mennyiségének fokozatos növelésével optimalizáltuk. A liposzómás készítményt géllé alakítottuk, gélesítőszerként carbopol"974P-t. Az elkészített liposzómaszuszpenziót és a liposzómagélt különböző összetételi paraméterekre értékelték. Eredmények: Fitokémiai analízis, in vitro antioxidáns vizsgálatok és in vitro értékelés eredményei Az L929 sejtvonalak arra a következtetésre jutottak, hogy a 25 százalékos metanolos kivonat nem toxikus, a legmagasabb fenoltartalommal, és jó antielasztáz aktivitást mutatott.Az optimalizált liposzómális készítményben a klorogénsav kapszulázási hatékonysága 75 százalék volt. órával összehasonlítva a hagyományos készítmény 6-7 órájával Következtetés: A zöld kávébab kivonattal töltött liposzóma alapú gél potenciális hordozója lehet az öregedésgátló hatásoknak.

Kulcsszavak:Zöld kávébab (GCB), klorogénsav, kivonat, liposzómák, antioxidáns, öregedésgátló.

BEVEZETÉS

A bőr létfontosságú szerepet játszik a testhőmérséklet szabályozásában, a fájdalom és a nyomás érzékelésében, és kulcsfontosságú gátként működik a környezetszennyezéssel szemben, ami nagyon nyilvánvalóvá teszi a bőr öregedését.1 A bőr hosszú távú ultraibolya sugárzásnak való kitettsége szabad gyököket termel, amelyek oxidatív stresszt okoznak a bőrön. bőr, ami fotoöregedés, napégés, melanogenezis, immunszuppresszió és fotokarcinogenezis kialakulásához vezet.² A szabad gyökök rendkívül reaktív oxigénmolekulák, amelyek a kollagénmolekulákkal való keresztkötések kialakításában vesznek részt, ami a bőr rugalmasságának elvesztéséhez vezet.3 Az öregedés megereszkedéssel, elvékonyodás, szárazság és foltosodás a bőrön. Így a fiatalos megjelenés vágya miatt az öregedésgátló termékekre nagy a kereslet. A növényi eredetű antioxidánsok jelentőségre tettek szert a kozmetikai iparban. Az antioxidánsok segítenek a szabad gyökök által okozott oxidatív károsodások helyreállításában és megelőzésében. A gyógynövények antioxidáns aktivitása főként a fenolos vegyületek redox tulajdonságainak köszönhető.4 Így az antioxidánsokról azt találták, hogy ígéretesek az öregedés jeleinek, például a ráncok, öregségi foltok és finom vonalak késleltetésében.

A zöld kávé (Coffea arabica L, Rubiaceae) bab gazdag forrása a polifenoloknak, mint például a klorogénsavnak és rokon vegyületeinek, például a kávésavnak, a kumársavnak és a ferulinsavnak, amelyek megakadályozzák a bőr oxidatív károsodását. A tanulmányok kimutatták, hogy a C. arabica kivonat antibakteriális, 5 vírusellenes, 6 gyulladáscsökkentő, 7 bőrsebgyógyító hatású, és csökkenti a makromolekulák oxidatív károsodását? és a metalloproteináz expresszió szuppresszív aktivitása.10

A klorogénsav, a zöld kávébab fő polifenol vegyülete antioxidáns és depigmentáló tulajdonságokkal rendelkezik, és gátolja az UV-sugárzás okozta bőrkárosodást. I2 Tudományos vizsgálatok szerint a zöld kávébab nagyobb mennyiségű klorogénsavat tartalmaz, mint a pörkölt kávébab és más növények. "3

További információért kattintson ide

A polifenolok bőrön keresztüli bejuttatása a korlátozott behatolás miatt nem hatékony. Ezért szükség van a készítmény alapjára vagy a behatolását fokozó penetrációfokozókra." Ezért a liposzómákat választották gyógyszerhordozóként, mivel amfifil természetűek, és a hidrofil molekulák könnyen beágyazhatók a koncentrikus kettősrétegekbe. A sejtmembránhoz fiziológiailag hasonló liposzómák nem A foszfolipidek jelenléte a liposzómákban javítja a gyógyszer helyi felszívódását az epidermiszből az alsó rétegekbe, mivel a gyógyszer foszfolipid komplex megnövekedett adhéziója a bőrön.'5 Jelen tanulmány célja egy Zöld kávébab kivonatú liposzómákat tartalmazó gél antioxidáns kozmetikai készítményként az öregedésgátló hatás érdekében.

ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK Anyagok

A zöld kávé arabica L babot a mumbai helyi piacról szerezték be 2019 augusztusában, és Dr. Harshad M. Pandit hitelesítette. A botanika volt vezetője és docense, Guru Nanak Khalsa College, Mumbai, India. A foszfatidilkolint a HiMedia Laboratories Pvt Ltd.-től, a 99 százalékos koleszterint a Loba Chemie Pvt Ltd-től, a 2,{4}}difenil-1-pikrilhidrazilt (DPPH), a klorogénsavat pedig az Otto Chemie Pvt Ltd.-től, Mumbai szerezték be. . A gallusavat és az aszkorbinsavat a mumbai SD Fine Chemicals Ltd.-től szereztük be. A vizsgálatban használt összes vegyszer AR minőségű volt. A liposzómákat Rotary evaporátorral állítottuk elő, a liposzómák értékelésére Rotaeva, Equitron és UV-látható spektrofotométert (Shimadzu 1800) használtunk.

A Cistanche öregedésgátló hatású

Mód

Kivonási módszertan

A porított zöld kávébabot zsírtalanítottuk petroléterrel 40-60 fokos (1:6 tömeg/térfogat%) 3 órán át, egy Soxhlet-készülékben. A zsírtalanított zöldkávéport különböző oldószerekkel, például vízzel, 25% metanollal, 50% metanollal, 75% metanollal és 100% metanollal extraháltuk 2 órán keresztül, Soxhlet rendszer alkalmazásával. A kapott kivonatokat porcelán edényben elektromos vízfürdőn 80 fokon bepároljuk, hogy eltávolítsuk az oldószert. Az elkészített kivonatokat kvalitatív és kvantitatív elemzéshez használtuk fel.

Összes fenoltartalom

A teljes fenoltartalmat Folin-Ciocalteu reagens módszerrel határoztuk meg standard eljárással. Standardként gallusavat használtunk, és a teljes polifenoltartalmat mg/g galluszsav-ekvivalensben (GAE) fejeztük ki a galluszsav kalibrációs görbéjéből.16

Spektrális átfedés

UV-spektrometriás módszerrel határoztuk meg a klorogénsav jelenlétét az extraktumban. A standard oldatok elkészítéséhez Img/ml standard klorogénsavat foszfát pufferben oldunk, és további hígítást készítünk, hogy 10 ug/ml standard oldatot kapjunk. A mintaoldathoz 25% 1 mg/ml-es metanolos kivonatot oldottunk foszfátpufferben, és további hígítást készítettünk, hogy 10 ug/ml standard oldatot kapjunk. Mindkét oldat fedőspektrumát UV-Vis spektrofotometriával kaptuk.

A klorogénsav mennyiségi meghatározása az egyes kivonatokban Standard oldat készítése

A standard klorogénsavat feloldottuk az oldószerekben, például vízben, 25% metanolban, 50% metanolban, 75% metanolban és 100% metanolban. Az elkészítési hiba csökkentése érdekében mindegyik fenti oldószerben elkészítettük a 10 ppm-es klorogénsav oldatot, majd ennek megfelelő hígítást 2-10 ppm koncentrációban. A linearitási görbét úgy készítettük el, hogy az abszorbanciát 324 nm-en UV-Vis spektrofotométerrel rögzítettük.

Mintaoldat elkészítése

A mintaoldat elkészítéséhez az extraktumokat feloldottuk a megfelelő oldószerben, és 10 ppm-es oldatot készítettünk. A mintaoldat abszorbanciáját 324 nm-en vettük fel UV-Vis spektrofotométerrel. A kapott abszorbanciát a linearitási diagramon extrapoláltuk, hogy meghatározzuk a klorogénsav koncentrációját az egyes kivonatokban.

Az antioxidáns aktivitás meghatározása

PDF (2,2-difenil -1-pikrilhidrazil) antioxidáns vizsgálat A kivonatok DPPH gyökökre gyakorolt ​​gyökfogó aktivitását standard módszerrel vizsgáltuk." Standardként aszkorbinsavat használtunk. A kísérletet három párhuzamosban végeztük. A DPPH gyökfogó aktivitásának százalékos arányát minden kivonatkoncentráció függvényében ábrázoltuk, és meghatároztuk az IC-t Nitrogén-oxid antioxidáns vizsgálat

A nitrogén-monoxid gyökfogó aktivitását Griess Illosvoy reakció alkalmazásával vizsgáltuk.elveszett birodalom cistanche18 Aszkorbinsavat használtunk standardként. A kísérletet három párhuzamosban végeztük. A nitrogén-monoxid gyökfogó aktivitásának százalékos arányát az egyes kivonatkoncentrációk függvényében ábrázoltuk, és mindkét antioxidáns vizsgálat IC százalékos gátlását az alábbi képlettel számítottuk ki.

A sejtek életképességének meghatározása MTT vizsgálattal Zöld kávébab kivonat, azaz 25%-os metanolos kivonat, citotoxicitási vizsgálatot végeztünk L929 sejtvonalakkal szemben. sejtsűrűség (20,000 sejt per lyuk), a tesztágens nélkül. A sejteket körülbelül 24 órán át hagytuk növekedni. Megfelelő koncentrációjú tesztanyagot (25%-os metanolos kivonatot) adtunk hozzá, a lemezt 24 órán át 37°C-on inkubáltuk 5%-os CO atmoszférában, majd az elhasznált közeget eltávolítottuk. MTT-reagenst adtunk hozzá a végkoncentráció (0,5 mg/ml) össztérfogatig, és a lemezeket 2-3 órán át inkubáltuk sötét körülmények között. Az MIT-reagens eltávolítása után 100 ul DMSO-t adtunk hozzá, és óvatosan összeráztuk. Az abszorbanciát 570 nm-en és 630 nm-en mértük spektrofotométerrel ELISA olvasón. Az IC.o értéket lineáris regressziós egyenlet segítségével határoztuk meg. A vizsgálathoz használt képletek:

Az anti-elasztáz aktivitás meghatározása

A sejteket 3×105 sejt/2 ml sűrűséggel tenyésztettük, és CO inkubátorban inkubáltuk 24 órán át 37 fokon. 1 Az anti-elasztáz vizsgálathoz a 25{18}}uM epigallocatechin-galláttal (EGCG) kezelt sejteket használtuk pozitív kontrollként, a 200ug/ml A metanolos kivonat 25%-át használtuk vizsgálati mintaként (6. táblázat), és a csak tenyésztő tápközeget tartalmazó sejteket használtuk negatív kontrollként, és 2 ml táptalajban 24 órán át inkubáltuk. A csöveket 5 percig centrifugáltuk 300xg-vel 25 fokon, és a sejteket PBS-sel mostuk. 0,5 ml BD Cytofix/Cytoperm oldatot adtunk hozzá a PBS eltávolítása után, és a csöveket 10 percig zavartalanul tartottuk. SEd 20 μl egér anti-humán neutrofil elasztáz/ELA2 Alexa Fluor® 647- konjugált monoklonális antitestet adtunk hozzá, összekevertük és 30 percig szobahőmérsékleten, sötétben inkubáltuk. A sejteket 0,1% nátrium-aziddal és 0,5 ml PBS-sel kezeltük, és áramlási citometriával analizáltuk 650 nm, illetve 668 nm gerjesztéssel és emisszióval. Ebben a vizsgálatban a tesztvegyületeket, nevezetesen a zöld kávébab kivonatot (25 százalékos metanolos kivonat) és a standard epigallocatechin-gallátot (EGCG) használtuk az ELA-2 (konjugált egér anti-humán elasztáz antitest) L929 sejtben történő expressziójára gyakorolt ​​hatásuk értékelésére. vonalak.

Zöld kávébab kivonattal töltött liposzómák készítése

A liposzómák formulázásához a Bangham és munkatársai által leírt vékonyréteg-hidratációs módszert alkalmazták. A lipidkeveréket úgy állítottuk elő, hogy a foszfatidil-kolint és a koleszterint kloroformban és metanolban (2:1) feloldottuk a gömblombikban (RBF), majd üveggyöngyöket adtunk hozzá a homogén filmképződéshez. Az RBF-et rotációs gyorselpárologtatóhoz (Roteva, egyenlet) csatlakoztattuk, és 80 fordulat/perc sebességgel forogni hagytuk 40 °C-os termosztált vízfürdőben. A szerves oldószereket lassú vákuum alkalmazásával távolítottuk el, ami 100%-ban homogén lipidfilm kialakulásához vezetett a lombik falán. A filmet hagytuk megszáradni LH-ra a szerves oldószerek teljes eltávolítása érdekében. A megszárított lipidfilmet oldott extraktumot (25% metanolos kivonatot) tartalmazó foszfát pufferrel (pH: 5,4) hidratáltuk, majd az RBF-et 150 fordulat/perc sebességgel forgattuk az átmeneti hőmérséklet feletti 46 fokos, termosztált vízfürdőben. lipidből. A forgatást 60 percig folytattuk, amíg homogén szuszpenziót nem kaptunk. Az ezzel a módszerrel előállított liposzómák nagyok és heterogén méretűek, ezért a liposzómák méretének csökkentésére fürdőszonikációs módszert alkalmaztunk 30 percig. A zöld kávébab kivonat alapú liposzóma szuszpenziót 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagytuk, hogy biztosítsuk a teljes hidratálást. A liposzóma szuszpenziót borostyánszínű üvegpalackban hűtőszekrényben tároltuk a további felhasználásig.

A liposzómák jellemzése

Az alábbiakban felsoroljuk azokat a paramétereket, amelyekre az elkészített liposzómákat jellemeztük

A kapszulázási hatékonyság meghatározása UV-Vis spektrofotométert használtunk a klorogénsav kapszulázási hatékonyságának becslésére zöld kávébab-kivonattal töltött liposzómákban. A centrifugálás után a felülúszóban visszamaradt klorogénsav abszorbanciáját 324 nm-en mértük UV-Vis spektrofotométerrel.mikronizált tisztított flavonoid frakció 1000 mg felhasználásokEzután a koncentrációt a standard klorogénsavra kapott kalibrációs görbéből számítottuk ki.

Az optikai mikroszkóphoz hozzáadott gyógyszer teljes mennyisége

A liposzóma-szuszpenzió egy cseppjét tiszta üveglemezre helyeztük, és az optikai mikroszkóp (Motic mikroszkóp) 45-szeres és 100-szoros teljesítménye mellett megfigyeltük. A hólyag méretének, a polidiszpergálhatósági indexnek (PDI) és a zéta-potenciálnak a meghatározása

A vezikulák méretét és a polidiszpergálhatósági indexet dinamikus fényszórásos műszerrel, számítógépes vizsgálórendszerrel (Malvern részecskeméret-analizátor) elemeztük. A frissen készített liposzómás tételeket 1:100 arányban hígítottuk ioncserélt vízzel. Minden mérést három párhuzamosban végeztünk 25±0,5 fokon. A liposzóma-szuszpenziót ionmentesített vízzel hígítottuk, és a zéta-potenciált Malvern Zetasizer segítségével határoztuk meg.

Transzmissziós elektronmikroszkópos (TEM)TEM analízist végeztünk transzmissziós elektronmikroszkóppal (Tecnai T20,200Kev, FEI) az optimalizált gyógyszertartalmú szuszpenzió érdekében. A szuszpenzió egy cseppjét mikropipetta segítségével a rácsra helyeztük. A rács jól megszáradt. A mintát tartalmazó szárított rácsot 200 VK-ra gyorsított elektronokkal bombáztuk. Ezután a vezikulák méretét és a liposzóma morfológiáját TEM segítségével vákuum alatt tettük láthatóvá (1. ábra). Liposzómás gél készítése

Zöld kávébab kivonattal töltött liposzóma gélt állítottunk elő carbopol@974P gél alap felhasználásával. A carbopol@974P pontos 0,5 százalékát lemértük, és egy éjszakán át tartósítószert tartalmazó kétszer desztillált vízben tartottuk hidratálás céljából. A centrifugálás után kapott liposzómapelleteket ultrahanggal desztillált vízben diszpergáltuk, és keverés közben hidratált karbopol-oldathoz adtuk. A gélesedést trietanol-amin (TEA) alkalmazásával végzett semlegesítéssel indukáltuk. A gél színét, állagát (simaság és zsírosság), pH-értéket, viszkozitást, gyógyszertartalmat, kenhetőséget és hatóanyag-felszabadulási vizsgálatot értékelték.

In vitro gyógyszerfelszabadulási vizsgálat

A 22 ml-es receptorrekesz kapacitású és 3,91 cm2 felületű Franz diffúziós sejtes berendezést használtuk az in vitro gyógyszerfelszabadulási dialízis membrán (molekulatömeg határértéke 12,000-14,000) becslésére, amely éjszakai pufferben való áztatással előhidratáltuk, és a sejtekre szereltük. Receptor folyadékként pH 5,4 (37 fok ±0,5 fok) foszfátpuffert használtunk. A tartályos oldatot 100 fordulat/perc sebességgel kevertük mágnesgyöngy segítségével. 0,5 g gélt helyeztünk a membrán donorrekeszébe. Alikvot részeket gyűjtöttünk 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 és 24 órás időközönként, és UV-Vis spektrofotométerrel elemeztük 324 nm-en.20

EREDMÉNYEK ÉS MEGBESZÉLÉS Kivonási módszertan

A zöld kávé arabica L. bab kivonatainak százalékos kitermelését a 3. táblázat tartalmazza. Az összes kivonat fizikai megjelenése sötétsárga és sötétbarna színű volt. A metanolos kivonat 25 százaléka mutatta a legmagasabb százalékos hozamot 26,54±0,13 értékkel az összes többi kivonathoz képest.

Összes fenoltartalom

Az összes kivonat összes fenoltartalmának becslésére Folin-Ciocalteu módszert alkalmaztunk. Az összes kivonat TPC-jét galluszsav-egyenértékben fejezzük ki (A standard görbe egyenlet: y= 0.0031 plusz 0,3477,r2=0.9953), amelyet az 1. táblázat említ. Az összes kivonat közül a fő fenoltartalom a metanolos kivonat 25 százalékában becsülhető. Spektrális átfedés A klorogénsav mennyiségi meghatározása az egyes kivonatokban Az egyes kivonatokban jelen lévő klorogénsav mennyiségét a 3. táblázat és a 2. ábra tartalmazza.oteflavonoidAz eredmények szerint a legnagyobb mennyiségű klorogénsav a metanolos kivonat 25 százalékában volt jelen.

Az összes fenoltartalom, a klorogénsav mennyiségi meghatározása és az antioxidáns vizsgálat eredményei alapján a 25 százalékos metanolos kivonat tartalmazza a legmagasabb fenoltartalmat, nagyobb mennyiségű klorogénsavat és maximális gyökfogó aktivitást más kivonatokhoz képest.

A sejtek életképességének meghatározása MTT-vizsgálattal Az életképesség-vizsgálat egy olyan vizsgálati eljárás, amely meghatározza a szövetek, sejtek vagy szervek azon képességét, hogy fenntartsák vagy helyreállítsák a túlélési állapotot. A tesztvegyület, zöld kávébab kivonat citotoxicitási vizsgálata L929 sejtvonalakkal szemben az ELISA olvasó által végzett sejt citotoxicitási vizsgálat statisztikai adataiban azt sugallta, hogy a zöld kávébab kivonat mérsékelt citotoxicitási potenciált mutatott 306,38 ug/ml gátló koncentráció mellett a standardhoz képest. 5. táblázat. A megfigyelés erősen arra utal, hogy a zöld kávébab kivonat nem rendelkezik jelentős citotoxicitási potenciállal 12.5-200 ug/ml koncentrációban, 24 órás inkubációs periódussal 37 fokon. (1. grafikon).

Az anti-elasztáz aktivitás meghatározása

Az elasztáz enzim képes lebontani az elasztint, egy oldhatatlan elasztikus rostos fehérjét, amely a kollagénnel együtt hozzájárul a kötőszövet mechanikai szilárdságához. Számos tanulmány azt sugallta, hogy mind a bőröregedés, mind a ránctalanító hatások szignifikánsan megfelelnek a csökkent elasztáz aktivitásnak. Ezért antielasztáz vizsgálatokat végeztek, hogy megerősítsék a zöld kávébab kivonat öregedésgátló szerként való hasznosságát. Ebben a vizsgálatban a tesztvegyületet, nevezetesen a zöld kávébab kivonatot és az Std-t, az EGCG-t használtuk az L929 sejtvonalban az ELA-2 (konjugált egér anti-humán elasztáz antitest) expressziójára gyakorolt ​​hatásuk értékelésére. A kísérletben használt vegyületek koncentrációi a következők voltak:

Az adott tesztvegyület GC babkivonat elnyomta az ELA-2 expressziót az L929 sejtvonalban. Az ELA-2 relatív átlagos fluoreszcencia intenzitásértékei csaknem hasonlóan csökkentek az std, az epigallocatechin-gallát és a tesztvegyület zöld kávébab kivonatában. (7. táblázat; 3. ábra és 1. hisztogram). Ezért a GC bab jó elasztáz ellenes szernek tekinthető. Zöld kávébab kivonattal töltött liposzómák készítése

Ebben a vizsgálatban vékonyréteg-hidratálási módszert alkalmaztak liposzómák formulázására.puritánok c-vitaminA választás oka

a módszer az, hogy a legegyszerűbb módszer többrétegű vezikulák előállítására, és nagyobb tömegű hidrofil molekulák, például klorogénsav betöltésére képes, mint az egyrétegű vezikulák. Azt találtuk, hogy a vékonyfilmes hidratációs módszer a kapszulázási hatékonyság 75%-át adja az extraktumban jelenlévő klorogénsav esetében. 2. táblázat. Így ezt a módszert alkalmaztuk a liposzómák előállítására.

Liposzómák jellemzése Optikai mikroszkópia

A multilamelláris vezikula egyértelműen megfigyelhető volt (4. ábra). Mikroszkópos megfigyeléseket alkalmaztunk az összes elkészített tételnél megfigyelt vezikulák alakjának és méretének értékelésére.

A polidiszpergálhatósági index (PDI), a zéta-potenciál és a hólyagméret meghatározása

A PDI alapvetően az adott mintában lévő vezikulák méreteloszlására vonatkozik.szistancheA PDI számértéke {{0}}.0-tól (tökéletesen egyenletes részecskeméret) 1,1-ig (nagyon polidiszperz részecskeméret) kezdődik. Lipid alapú hordozórendszerek esetén, mint a liposzómák ill. A 0,3-as és kisebb méretű nanoliposzómák elfogadhatók, mivel a foszfolipid vezikulák homogén populációját jelzik.21 A zéta-potenciál egy jelentős jellemzési technika, amelyet a részecskék fizikai stabilitásának megértésére használnak. A -30 mV és plusz 30 mV közötti érték általában elegendő taszító erővel rendelkezik a jobb fizikai kolloid stabilitás eléréséhez.

A vékonyréteg-hidratálási módszer nagy és heterogén multilamelláris vezikulákat ad. Az előállított liposzómák méretanalízise 864,2 nm-es z-átlagos (d.nm)-méretet, 0,375 PDI-t és -12,4-es Zéta-potenciált jóval jó befogási hatékonyság.

Transzmissziós elektronmikroszkópia (TEM) Ezeknek a liposzómáknak a TEM módszerrel végzett morfológiai analízise gömb alakú liposzómákat mutatott ki. Liposzómás gél készítése

A liposzóma diszperziót egyszerűen összekevertük a polimerrel, így megfelelő géleket kaptunk. A liposzómális gélkészítmény előnyös, mivel a vezikulák összeolvadása hatékonyan elkerülhető vagy minimálisra csökkenthető, mivel a polimer távtartóként szolgál a liposzómák között. Ezáltal a hólyag méretét nem befolyásolja, mivel ez egy szabályozott polimer/liposzóma kölcsönhatási folyamat. Nem a liposzóma alapú krém készítményt választották, mivel a módszer miatt stabilitási problémákról számoltak be az emulzió alapú termékekben, mivel ez a legegyszerűbb módszer többrétegű vezikulák előállítására, és nagyobb tömegű hidrofil molekulák, például klorogénsav betöltésére képes, mint a egyrétegű vezikulák. Azt találtuk, hogy a vékonyfilmes hidratációs módszer a kapszulázási hatékonyság 75%-át adja az extraktumban jelenlévő klorogénsav esetében. 2. táblázat. Így ezt a módszert alkalmaztuk a liposzómák előállítására.

Liposzómák jellemzése Optikai mikroszkópia

A multilamelláris vezikula egyértelműen megfigyelhető volt (4. ábra). Mikroszkópos megfigyeléseket alkalmaztunk az összes elkészített tételnél megfigyelt vezikulák alakjának és méretének értékelésére.

A polidiszpergálhatósági index (PDI), a zéta-potenciál és a hólyagméret meghatározása

A PDI alapvetően az adott mintában lévő vezikulák méreteloszlására vonatkozik. A PDI számértéke {{0}}.0-tól (tökéletesen egyenletes részecskeméret) 1,1-ig (nagyon polidiszperz részecskeméret) kezdődik. Lipid alapú hordozórendszerek esetén, mint a liposzómák ill. A 0,3-as vagy kisebb méretű nanoliposzómák elfogadhatók, mivel a foszfolipid vezikulák homogén populációját jelzik.21 A zéta-potenciál egy jelentős jellemzési technika, amelyet a részecskék fizikai stabilitásának megértésére használnak. A -30 mV és plusz 30 mV közötti érték általában elegendő taszító erővel rendelkezik a jobb fizikai kolloid stabilitás eléréséhez. 2

A vékonyréteg-hidratálási módszer nagy és heterogén multilamelláris vezikulákat ad. Az előállított liposzómák méretanalízise a z-átlagos (d.nm) 864,2 nm-es méretet, a PDI-t 0,375, a Zéta potenciált pedig -12,4-nek mutatta jó befogási hatékonyság.

Transzmissziós elektronmikroszkópia (TEM) Ezeknek a liposzómáknak a TEM módszerrel végzett morfológiai analízise gömb alakú liposzómákat mutatott ki.

Liposzómás gél készítése

A liposzóma diszperziót egyszerűen összekevertük a polimerrel, így megfelelő géleket kaptunk. A liposzómális gélkészítmény előnyös, mivel a vezikulák összeolvadása hatékonyan elkerülhető vagy minimálisra csökkenthető, mivel a polimer távtartóként szolgál a liposzómák között. Ezáltal a hólyag méretét nem befolyásolja, mivel ez egy szabályozott polimer/liposzóma kölcsönhatási folyamat. Nem a liposzóma alapú krém készítményt választották, mivel az emulzió alapú termékeknél stabilitási problémákról számoltak be a következők miatt:

felületaktív anyag és felesleges olaj jelenléte, amely kölcsönhatásba léphet a hólyagokkal. A különféle tulajdonságok, például a viszkozitás könnyen szabályozható a polimer koncentrációjának változtatásával vagy a polimer típusának változtatásával. Így a liposzómás zseléket úgy állítottuk elő, hogy megkerülik a stabilitási problémát, szabályozott felszabadulást biztosítanak, könnyen elkészíthetők, és bőrápoló kozmetikumként esztétikusak.23 Az elkészített lipogélek halványsárga színűek és átlátszatlanok voltak. 0,5 tömegszázalék carbopol@974P jó konzisztenciájúnak és sima megjelenésűnek bizonyult, mindenféle aggregációtól mentes. A liposzómás gél gyógyszertartalmát 94,16 ± 1,3-nak találták, a gél viszkozitása 13 500 cps és 16 500 cps között van, és a kenhetőség 7-8 g.cm/s körüli.

In vitro gyógyszerfelszabadulási profil

A bőr legkülső rétege a stratum corneum, amely főként keratin fehérjéből és lipidekből áll. Az intercelluláris lipidek létfontosságú szerepet játszanak a perkután felszívódás szabályozásában. Az intercelluláris lipidek kölcsönhatásba léphetnek a liposzómákban jelenlévő foszfolipidekkel, és ezáltal a lipidek duzzadását okozhatják anélkül, hogy megváltoztatnák a stratum corneum többrétegű szerkezetét. Ezek a megduzzadt lipidek a gyógyszer felhalmozódását okozzák, és intrakután depót képeznek. Bár a helyileg alkalmazott liposzómák mechanizmusa nem teljesen ismert, de a lipidösszetétel, a felületi töltés és a liposzómák lamellása elsősorban a gyógyszereloszlásban játszik fontos szerepet. A vizsgálatok azt is kimutatták, hogy a helyi bejuttatást a liposzómák mérete is befolyásolja.24 Az in vitro gyógyszerfelszabadulást dialízis membrán segítségével végeztük. A liposzómális gél in vitro =felszabadulási vizsgálata legfeljebb 12 órás tartós felszabadulási hatást mutatott ki, összehasonlítva a hagyományos gél 7-8 órájával (2. grafikon).

KÖVETKEZTETÉS

A Green Coffee Arabica babkivonatokat összes fenoltartalomra, a klorogénsav mennyiségi meghatározására és antioxidáns tesztre szűrték. E vizsgálatok eredményei alapján a metanolos kivonat 25 százalékát választották a liposzómákba való beépítésre, mivel ez a legmagasabb fenoltartalmat, nagyobb mennyiségű klorogénsavat és jobb antioxidáns aktivitást mutatott. A kivonat liposzómákba történő beépítése előtt MTT-re és antielasztáz vizsgálatra szűrtük. Az MT vizsgálat alapján a kivonatnak nem volt sejt citotoxicitási potenciálja, és az antielasztáz vizsgálat szerint a kivonat antielasztáz aktivitással rendelkezett. Így a kivonat felhasználható öregedésgátló liposzómák kialakítására. A multilamelláris vezikulákat vékonyréteg-hidratációs módszerrel állítottuk elő. Az elkészített liposzómák jó kapszulázási hatékonysággal és jobb fizikai stabilitással rendelkeztek. A kivonat alapú liposzóma szuszpenziót liposzóma géllé formálták. Az in vitro gyógyszerfelszabadulási vizsgálat szerint a liposzómás gél a hagyományos gélhez képest akár 12 órás elnyújtott felszabadulást mutatott. Ezért a zöld kávébab-kivonattal töltött liposzómák hatékony hordozónak tekinthetők a helyi bejuttatáshoz, és öregedésgátló potenciállal rendelkeznek.

ELISMERÉS

A szerzők köszönetet mondanak a Stellixir Biotechechnologynak, Bengalurunak és Karnatakának az MTT assay és az Anti-elastase assay vizsgálatok elvégzésében nyújtott segítségükért, valamint köszönetet mondunk a Sprint tesztmegoldásoknak, a Mumbainak a TEM képalkotásért és főiskolánk, az SVKM Dr. Bhanuben Nanavati College of Pharmacynak a legjobb feltételeket biztosítva e tanulmány elvégzéséhez.

ÉRDEKÜLÉKENYSÉG

A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.

RÖVIDÍTÉSEK:

TPC: Összes fenoltartalom; DPPH:2,2-difenil--1-pikrilhidrazil; GAE: galluszsav-ekvivalens; GC: Green Coffee; GCB: Zöld kávébab; ELA-2 (konjugált egér anti-humán elasztáz antitest): Neutrophil elasztáz; EGCG: epigallokatechin-gallát; PC: foszfatidilkolin; CH: koleszterin; RBF: kerek fenekű lombik; TEM: Transzmissziós elektronmikroszkópia; MTT: 3-(4,5-diemtil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólium-bromid; PDI: Polidiszpergálhatósági Index; IC": Fele-maximális gátlókoncentráció.

Ez a cikk a Desai és Mallya oldalakból származik.: A zöld kávébab kivonattal töltött öregedésgátló liposzóma gél fejlesztése