A Cistanches Herba nyerstermékeinek és bor gőzzel feldolgozott termékeinek összetételének és gyógyászati ​​hatékonyságának különbségei

Absztrakt:

CélkitűzésÖsszehasonlítani a Roucongrong (Cistanches Herba) kémiai összetételében és gyógyászati ​​hatékonyságában bekövetkezett változásokat feldolgozás előtt és után, tisztázni a borral való párolás elvét.

Módszerek A Cistanches Herba főzése előtti és utáni kémiai összetételtípusok azonosítására LC-MS-t alkalmaztunk, többváltozós statisztikai elemzéssel kombinálva a borpárolás előtti és utáni komponensek közötti eltérések megállapítására. A hatékonysági különbséget a hidrogénezett kortizonekidney yang-hiány patkánymodellje igazolta.

EredményekÖsszesen 45 kémiai komponenst azonosítottakCistanches Herba minták; A vegyületek hozzájárultak a közötti különbségekhezCistanches Herba és borban pörkölt Cistanches Herbavannakechinakozid, verbaszkozid, izoakteozid és tubulozid B; A Cistanches Herba teljes fenil-etanol-glikozid-kivonata jobb hatással van a vese-yang-hiányos patkánymodell javulására, mint a borban pörkölt Cistanches Herba. Következtetés A Cistanche összetétele megváltozott a borral való párolás után, és fokozódott a vese yang-hiányra gyakorolt ​​hatása. A Cistanches Herbato borban pörkölt Cistanches Herba transzformációs összetevői olyan hatóanyagok lehetnek, amelyek erősítik a vesét és támogatják a jangot.

Kulcsszavak: Cistanches Herba; borban pörkölt Cistanches Herba;vese yang hiány;echinakozid;verbascoside; izoakteozid; tubulozid B

KIVÁLÓ MINŐSÉGŰ CISTANCHE GYÓGYNÖVÉNY ELADÓ

Wecistanche támogató szolgálata

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

"Ginseng" néven ismert, és főként Belső-Mongóliában, Ningxiában (Azuqi), Gansuban (Changma), Hszincsiangban és más régiókban terjesztik [1]. A Cistanche meleg természetű, édes és sós ízű, és behatol a vese és a vastagbél meridiánjaiba. Táplálja a májat és a vesét, javítja az esszenciát és a vért, nedvesíti a beleket és enyhíti a székrekedést. Alkalmazható vese yang-hiány, impotencia és meddőség, derék- és térdfájás, izom- és csontgyengeség, bélszárazság és székrekedés esetén [2]. A modern kutatások azt mutatják, hogy a Cistanche pikkelylevelű húsos szárai főleg különféle kémiai komponenseket tartalmaznak, például fenil-etanol-glikozidokat, ciklopentán-éter-terpéneket és ezek glikozidjait, lignánokat, cukrokat stb. [3], és számos farmakológiai hatásuk van, mint pl.öregedésgátló,antioxidáns,demencia elleni,fáradtság elleni, valamint a belek nedvesítése és a székrekedés enyhítése [4].

Borral párolás után a Cistanche vese-tonizáló és jang-fokozó hatása felerősödik. A feldolgozás elvét nem magyarázták el egyértelműen. Fan Yanan et al. [5-7] a Cistanche hatásait tanulmányozta a patkányok székletürítésére, az immunrendszer működésére, az enterális neurotranszmitterekre és a kapcsolódó génexpressziókra a feldolgozás előtt és után. Da és mtsai. felhasználta a fenil-etanol-glikozidok hatását a feldolgozás előtt és után a feldolgozási elv magyarázatára; Zhang Chao et al. [8] a fenil-etanol-glikozidok feldolgozás előtti és utáni tartalmának változásait használta fel a feldolgozási elv magyarázatára; Zhang Shuyun et al. [9] a betaintartalom feldolgozás előtti és utáni változásait használta a feldolgozás Cistanche-ra gyakorolt ​​hatásának magyarázatára. A Cistanche feldolgozásának eddigi szakirodalma elsősorban a farmakológiára fókuszál, a komponensek kutatása pedig az egyes komponensek tartalmi változásaira is fókuszál, hiányzik a komponenskülönbségek szisztematikus vizsgálata. Ez a kísérlet folyadékkromatográfiás-tömegspektrometriás (LC-MS) technológiát használt többváltozós statisztikai elemzéssel kombinálva a Cistanche kémiai összetevőinek azonosítására, a nyers Cistanche és a borpörkölt termékek közötti különbségek meghatározására, valamint a nyers Cistanche és borpörkölt termékek a hidrokortizon által kiváltott vese yang-hiány patkánymodelljén keresztül, hogy megmagyarázzák aCistanche a vese tonizálásában és a yang elősegítésébenés a borban pörkölt Cistanche feldolgozási elve.

KIVÁLÓ MINŐSÉGŰ CISTANCHE GYÓGYNÖVÉNY ELADÓ

1 Anyagok

1.1 Műszerek

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL elektrosztatikus mező tandem ioncsapda nagy felbontású tömegspektrométer (Thermo Fisher Scientific, USA), Theraio Xcaliber munkaállomás; BT125D 1/100000 elektronikus mérleg (Sartorius Instrument System, Németország); KQ500DE CNC ultrahangos tisztító (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); XHF-D nagysebességű diszpergáló (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC mikrolemez olvasó (Thermo Scientific); HC-3518 nagy sebességű centrifuga (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B többfunkciós patkány önkéntes tevékenységrögzítő (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Gyógyszerek

Tömegspektrometriás minőségű metanol (Fisher); tömegspektrometriás minőségű hangyasav (tömeghányad 99%, Sigma Aldrich); víz (Watsons desztillált víz); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, tételszám: 1701653); hidrokortizon-szukcinát-nátriumsó (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., tételszám: 011705067); szuperoxid-diszmutáz (SOD) készletet (20170115 tételszám) és malondialdehid (MDA) készletet (20170117 tételszám) a Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltuk; a tesztoszteront (T) és az ösztradiolt (E2) a Qingdao Kechuang Quality Inspection Centerben, a kreatinint (CREA) és a vér karbamid-nitrogénjét (BUN) pedig a Belső-Mongóliai Orvostudományi Egyetem Analysis and Testing Centerében határozták meg.

1.3 Állatok

100 hím, 180-200 g tömegű SD patkányt a pekingi Haidian kerületben található Xinglong Kísérleti Állatfarmtól vásároltunk, engedélyszám: SCXK (Peking) 2016-0003. Ezt az állatkísérletet a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem Etikai Bizottsága hagyta jóvá, etikai száma: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Minták

Li Xiangri professzor, a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem Kínai Orvostudományi Karának professzora hat tétel Cistanche deserticola-t azonosított hitelesnek, és az Orobanchaceae családba tartozó Cistanche deserticola YC Ma szárított, húsos szárából és pikkelylevelű szárából származtatták. A mintákra vonatkozó részletes információkat az 1. táblázat tartalmazza.

1. táblázat A Cistanches Herba minták információs lapja

2 Módszerek

2.1 Minta előkészítés

2.1.1 Nyerstermékek elkészítése Vegyünk tiszta Cistanche deserticolát, puhítsuk meg, vágjuk vastag szeletekre, és szárítsuk meg.

2.1.2 Borpörkölt termékek készítése

Vegyünk 100 g Cistanche deserticola szeletet, adjunk hozzá 30 ml rizsbort, keverjük jól össze, és pároljuk, amíg a bor felszívódik. Pároljuk vízben 12 órán át, vegyük ki és hagyjuk kissé kihűlni, majd szárítsuk meg. A nyers Cistanche deserticola és a borban pörkölt Cistanche deserticola mintákat lásd az 1. ábrán.

2.2 Tanulmány a Cistanche deserticola összetevőinek különbségéről a borban párolás előtt és után

2.2.1. Az oldat elkészítése

Vegyünk körülbelül {{0}},2 g száraz mintaport (amelyet 65-hálós szitán átszűrtünk), mérjük le pontosan, helyezzük egy 50 ml-es barna mérőlombikba, adjunk hozzá 25 ml 50%-os metanolt. vizes oldattal, szorosan lezárjuk, lemérjük a masszát, áztatjuk 30 percig, ultrahanggal kezeljük 40 percig (teljesítmény 250 W, frekvencia 35 kHz), lehűtjük, újra lemérjük, 50%-os metanolos vizes oldatot adunk hozzá a kiesett tömeg pótlására, összerázzuk Nos, hagyjuk állni, szűrjük át a felülúszót egy 0,22 μm-es mikroporózus szűrőmembránon, és helyezzük a szűrletet barna folyadékfázisú palackba, hogy megkapjuk az oldatot.

KIVÁLÓ MINŐSÉGŰ CISTANCHE GYÓGYNÖVÉNY ELADÓ

2.2.2 Kromatográfiás körülmények

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 kromatográfiás oszlop (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm), oszlophőmérséklet 35 fok; mintakamra hőmérséklete 10 fok, minta injektálási térfogata 3 μL, metanol (A)-0,1%-os hangyasav vizes oldat (B) mozgófázisként, gradiens elúció: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanol; 4-18 min, 26%-40% metanol; 18-24 min, 40%-100% metanol; 24-28 min, 100% metanol. A térfogatáram 0,3 ml/perc volt, a detektálási hullámhossz 330 nm.

2.2.3 Tömegspektrometriás feltételek

Elektrospray ionizációs forrást (ESI) használtunk, negatív ion módú pásztázás, kapilláris hőmérséklet 350 fok, köpenygáz térfogatáram 30 arb, segédgáz térfogatáram 10 arb, permetezési feszültség 3

KV, kapilláris feszültség –35 V, csőlencse feszültség –110 V, pásztázási tartomány m/z 100-1 000, adatgyűjtő rendszer Xcalibur 2.1.

2.2.4 Főkomponens-elemzés (PCA)

A pontos tömeg-visszatartási idő adatpárok kétdimenziós mátrixának beszerzése után a műszerfalon megjelenik az összes automatikusan importált pontos retenciós idő információ, és a kibővített statisztikai modul PCA módszere kerül felhasználásra az elemzéshez.

2.2.5. Ortogonális részleges legkisebb négyzetek diszkriminancia analízis (OPLS-DA) Az LCMS egyesíti a folyadékkromatográfia magas szétválasztását a tömegspektrometria nagy érzékenységével. Az összegyűjtött adatok meglehetősen nagyok, az adatok feldolgozásához többváltozós statisztikai elemzésre van szükség. Az OPLS-DA két csoportra osztja az adatokat, és egy felügyelt statisztikai modell segítségével nagyszámú ortogonalizált spektrumot nyer, amely egyértelműen mutatja a két mintacsoport közötti különbségeket. A kiegészítő ábra S-Plot formátumában minden pont egy pontos tömegmegtartási idő adatpárt jelent, az X tengely a változót, minél távolabb van az adatpont a nulla ponttól, annál nagyobb a pont hozzájárulása a minta különbségéhez ; az Y tengely az azonos mintacsoportban lévő minták közötti korrelációt ábrázolja, minél távolabb van a pontos tömeg és retenciós idő adatpár a nulla ponttól, annál erősebb a korreláció. Ezért az S-alakú görbe mindkét végén a tömegpontos retenciós idő adatpárok jelentik a legmegbízhatóbb jellemző ionokat minden mintacsoportból.

KIVÁLÓ MINŐSÉGŰ CISTANCHE GYÓGYNÖVÉNY ELADÓ

2.2.6 Tömegspektrometriás szerkezetelemzés

A jellegzetes ionok beszerzése után az elemösszetételt és a vegyületillesztést elvégeztük a pontos relatív molekulatömeg kiszámításával, valamint a meglévő adatbázis és a vonatkozó szakirodalom kombinálásával a differenciális komponensek azonosítására.

2.3 Vizsgálja meg a hatásosság különbségét a boros párolás előtt és után

2.3.1 Cistanche deserticola kivonat készítése

A Cistanche deserticola (tételszám: 160901) és a megfelelő borban pörkölt Cistanche deserticola port a "2.2.1" pontban leírt feltételek szerint extraháltuk, ultrahangos kezelés után leszűrtük, kétszer megismételtük, a szűrletet egyesítettük, vákuumdesztillációval betöményítettük, és lefagyasztottuk. szárított.

2.3.2 Állatkísérletek csoportosítása és gyógyszerbeadás

1. ábra Cistanches Herba A és borban pörkölt Cistanches Herba B

(1) Csoportosítás: A patkányok szabad hozzáférést kaptak vízhez és táplálékhoz. 1 hét adaptív etetés után véletlenszerűen 5 csoportra osztották őket (2. táblázat), minden csoportban 10 patkánnyal, nevezetesen normál csoport, modellcsoport, nyers Cistanche deserticola csoport (PR), borban pörkölt Cistanche deserticola csoport (PW). , és a pozitív kontroll Jinkui Shenqi Pill csoport (JK). (2) Modellezés: A normál csoport kivételével a másik négy csoport mindegyikét hidrokortizon-nátrium-szukcinát injekcióval injektáltuk im. 20 mg/kg dózisban, 14 egymást követő napon. A normál csoport ugyanolyan adag normál sóoldatot kapott. Mindegyik csoportban megfigyelték a patkányok általános állapotát, hogy megállapítsák, mutattak-e olyan tüneteket, mint a hidegtől való félelem, a meleg iránti preferencia, a hideg végtagok, a tiszta és hosszú vizelet, a felgöndörödött és ívelt hát, a fénytelen és rendetlen szőrzet, valamint a mentális depresszió. Ugyanakkor minden csoportban mértük a patkányok testsúlyát, spontán tevékenységeinek számát, táplálékfelvételét, vízfelvételét, vizeletkibocsátását és egyéb mutatóit.

(3) Beadás: A patkányok adagját a Jinkui Shenqi Pills és a Cistanche deserticola klinikai dózisa alapján számítottuk ki. Az egyes Cistanche deserticola csoportok dózisa 1,80 g/kg volt a nyers gyógyszer mennyiségére vonatkoztatva. A specifikus adagolást a 2. táblázat mutatja. A Cistanche deserticola és a Jinkui Shenqi Pills mindegyik kivonatát ionmentesített vízzel meghatározott koncentrációjú oldatokká készítettük. Az oldatot intragasztrikusan adtuk be minden nap 10 ml/kg intragasztrikus térfogattal 30 egymást követő napon keresztül. A normál csoportnak és a modellcsoportnak minden nap azonos térfogatú ionmentesített vízzel intragasztrikusan adtuk be. A testtömeget hetente mértük, és az intragasztrikus térfogatot a patkányok testtömegének megfelelően beállítottuk. A beadás után a patkányokat 12 órán át éheztettük. Pentobarbitál érzéstelenítés után vért vettünk a hasi aortából a szérumindex kimutatására. A veséket, a heréket, az epididimiszt, az ondóhólyagokat és a prosztatát eltávolítottuk a releváns index kimutatás érdekében.