Az EDS{0}}kölcsönhatásba lépő J Protein 1 a növényi veleszületett immunitás alapvető negatív szabályozója az Arabidopsisban

Absztrakt

A növények precíz mechanizmusokat fejlesztettek ki a kórokozók elleni immunválasz optimalizálására. A MEGHATÁROZOTT BETEGSÉGRE SZUSCEPTIBILITÁS 1 (EDS1) létfontosságú szerepet játszik a növényi veleszületett immunitásban az alaprezisztencia és az effektor által kiváltott immunitás szabályozása révén. Az EDS1 nukleocitoplazmatikus kereskedelme szükséges a rezisztencia erősítéséhez, de a molekuláris mechanizmus továbbra is megfoghatatlan. Itt megmutatjuk, hogy az EDS1-INTERACTING J PROTEIN1 (EIJ1), amely DnaJ fehérjeszerű chaperonként működik a kórokozó fertőzésére válaszul, a növényi immunitás alapvető negatív szabályozójaként működik az EDS1-gyel kölcsönhatásba lépve. Az EIJ1 funkcióvesztési mutációja nem befolyásolta a növény növekedését, de jelentősen megnövelte a kórokozó rezisztenciát. A kórokozó fertőzés után az EIJ1 áttelepült a kloroplasztiszból a citoplazmába, ahol kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel, ezáltal korlátozva az EDS1 kórokozók által kiváltott forgalmát a sejtmagba, és veszélyeztetve a rezisztenciát a fertőzés korai szakaszában. A betegség kialakulása során az EIJ1 fokozatosan lebomlott, lehetővé téve az EDS1 nukleáris felhalmozódását a transzkripciós rezisztencia erősítésére. Az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) törzs megszüntette az EIJ1 represszív hatását azáltal, hogy gyorsan indukálta lebomlását az effektor által kiváltott immunválaszban. Eredményeink tehát azt mutatják, hogy az EIJ1 a veleszületett növényi immunitás alapvető EDS{23}}függő negatív szabályozója, és mechanikusan megérti, hogy az EDS1 nukleáris versus citoplazmatikus eloszlása ​​hogyan szabályozódik az immunválasz során.

A cistanche jótékony hatású – erősíti az immunrendszert

Bevezetés

A növények egy bonyolult hálózatot fejlesztettek ki immunválaszuk modulálására. A kórokozók elleni védekezés érdekében a növények két fő szabályozási stratégiát alkalmaznak: a minta által kiváltott immunitást (PTI) és az effektor által kiváltott immunitást (ETI). A PTI-t olyan mintázatfelismerő receptorok (PRR-ek) szabályozzák, amelyek felismerik a kórokozókkal vagy mikrobákkal kapcsolatos molekuláris mintázatokat (Zipfel, 2008). A fertőzés elősegítése érdekében a virulens kórokozók elnyomják a PTI-t azáltal, hogy kórokozó effektorokat választanak ki, és manipulálják a gazdasejteket, hogy elősegítsék a tápanyagfelvételt és végül a szaporodást (Tsuda és Katagiri, 2010). Az alacsony szintű rezisztenciát, amelyet a növény mutat ezekkel a virulens kórokozókkal szemben, alaprezisztenciának nevezik (Jones és Dangl, 2006; Klessig et al., 2018). Másrészt az ETI-t növény által kódolt betegségrezisztencia (R) fehérjék közvetítik, amelyek közvetlenül vagy közvetve képesek felismerni a kórokozók által kiválasztott effektorok jelenlétét (Tsuda és Katagiri, 2010). A legtöbb R fehérje tartalmaz egy nukleotid-kötő helyet és egy leucinban gazdag ismétlődő domént (NB-LRR). Az N-terminális Toll/Interleukin-1 receptor (TIR) ​​fehérje-fehérje interakciós domént tartalmazó NB-LRR fehérjék TIR-NB-LRR (TNL) fehérjékként ismertek, és ezek alkotják az NB-fehérjék legnagyobb csoportját. LRR fehérjék (Caplan et al., 2008). A bazális rezisztenciához képest az ETI erősebb és gyorsabb védekezési választ indukál a kórokozókkal szemben, és gyakran lokális sejthalál is kíséri, ami a túlérzékeny válasz jellemzője (HR; Dodds és Rathjen, 2010). Az ENHANCED DISEASE SUSCEPTIBILITY 1 (EDS1), a növényi immunitás központi szabályozója, a biotróf és hemibiotróf kórokozók inváziójának korlátozásával segít a bazális rezisztencia szabályozásában (Wiermer et al., 2005). Az EDS1 fontos szerepet játszik az ETI-ben is, amelyet főként az R fehérjék TNL osztálya közvetít (Heidrich et al., 2012). Az EDS1 szorosan együttműködik társregulátoraival, a PHYTOALEXIN DEFICIENT 4-gyel és a SENESCENCE-ASSOCIÁLT GENE 101-gyel a citoplazmában és/vagy a sejtmagban, hogy szabályozza az intracelluláris reaktív oxigénfajták (ROS) termelését, a szalicilsav (SA) felhalmozódását és más folyamatokat, ezáltal erősítve a kórokozókkal szembeni rezisztenciát (Ruste). ´rucci et al., 2001; Rietz és mtsai, 2011; Wagner és mtsai, 2013). Ennek megfelelően az Arabidopsis eds1 mutáns nagyon érzékeny a Pseudomonas syringae pv-re. paradicsom (Pst) DC3000 törzs, és veszélyeztetett TNL-közvetített ETI-t mutat, amelyben az ISOCHORISMATE SYNTHASE1 (ICS1; SA bioszintetikus gén) expressziója és az SA bioszintézise gátolt (Parker és mtsai, 1996; Feys és mtsai, 2001; Bartsch et al. al., 2006). Ezenkívül az EDS1 fehérjeforgalmat mutat a citoplazma és a sejtmag között nukleáris transzportreceptorok által közvetítve (Garcı´a et al., 2010). Bár az EDS1 nukleáris funkciói magukban foglalják a bazális rezisztenciát és a ROS termelést, a programozott sejthalál és a rezisztencia megerősítése megköveteli az EDS1 nukleáris versus citoplazmatikus lokalizációjának koordinációját (Heidrich et al., 2011). A citoszolban lévő EDS1 mennyisége és a sejtmagban lévő mennyiség közötti egyensúly fontos a hatékony bazális rezisztencia és a TNL által kiváltott immunitás szempontjából (Garcı´a et al., 2010). Azonban továbbra sem világos, hogy az EDS1 hogyan tartja fenn a nukleocitoplazmatikus eloszlási mintát a növényi veleszületett immunválaszok során. A DnaJ fehérjék (vagy J fehérjék) chaperon fehérjék (Pulido és Leister, 2018), amelyek a ciszteinben (Cys) gazdag domén szupercsaládhoz tartoznak, és részt vesznek a születő fehérjék feltekeredésében és összeállításában, a fehérjék membránokon keresztül történő szállításában, majd újratekeredésben, és a szétterült vagy hibás fehérjék ártalmatlanítása (Bukau et al., 2006). Ezek a folyamatok szükségesek a legtöbb sejtfehérje normál működéséhez különböző fejlődési szakaszokban (Pulido és Leister, 2018). Különböző organizmusokon végzett kutatások azt mutatják, hogy a DnaJ fehérjék sokrétű szerepet játszanak a biotikus és abiotikus stresszválaszokban, különösen az immunválaszokban. A Nicotiana benthamianában az Nb-MIP1 DnaJ fehérje kochaperonként működik a vírusos kórokozókra adott válaszban (Du et al., 2013). A szójabab (Glycine max L.) Gm-heat shock protein 40 (HSP40.1), egy sejtmagban lokalizált DnaJ fehérje, a szójabab mozaikvírussal szembeni rezisztencia pozitív szabályozója (Liu és Whitham, 2013). Paradicsomban (Solanum lycopersicum) a kloroplasztokban lokalizált DnaJ-fehérje, a Le-CDJ2 javítja a Pseudomonas solanacearum bakteriális kórokozóval szembeni ellenállást (Wang és mtsai, 2014). Ezenkívül a Tsi1- kölcsönhatásba lépő protein1-ről (Tsip1), egy dohány (Nicotiana tabacum) DNS-fehérjéről számoltak be, hogy szabályozza a Tsi{71}} által közvetített transzkripciós aktivációt a stressz hatására (Ham et al., 2006). Ezek az eredmények egyértelműen azt mutatják, hogy a DnaJ fehérjék fontos szerepet játszanak a növényi immunitásban, bár a mögöttes mechanizmusok további vizsgálatot igényelnek. Ebben a vizsgálatban izoláltuk az Arabidopsis thaliana EDS1 INTERACTING J PROTEIN 1-et (EIJ1), egy HSP{76}}szerű DnaJ fehérjét, és kimutattuk, hogy az EIJ1 kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel a növényben. A funkcióvesztést szenvedő eij1 mutáns növények normális növekedést, erősebb patogén rezisztenciát és a rezisztenciával kapcsolatos gének magasabb expresszióját mutatták kórokozók általi fertőzés esetén, mint a vad típusú növények. Az EIJ1 funkcióvesztéses mutációja azonban nem mentette meg az eds1 mutáns fogékony fenotípusát a Pst DC3000 fertőzés hatására. Ezenkívül az EIJ1 fehérje, amely normálisan a kloroplaszton lokalizálódik, a kloroplasztiszból a citoplazmába szabadul fel a kórokozó beoltása során, ahol kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel, így megakadályozta a kórokozó által kiváltott forgalmát a sejtmagba, és ennek következtében a korai rezisztenciaválaszt veszélyeztetve. fertőzési szakasz. Ezek az eredmények megvilágítják az EDS1 nukleocitoplazmatikus eloszlási mintázatának hátterében álló szabályozó mechanizmus fontos részleteit, és potenciálisan hatékony célpontot jelentenek a növények betegségekkel szembeni rezisztenciájának nemesítéséhez.

A cistanche jótékony hatású – erősíti az immunrendszert

Eredmények

Az EIJ1 in vitro és in vivo kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel

A növényvédelmi válaszok alapvető összetevőjeként az EDS1 a növény veleszületett immunitásjelző hálózatának kulcsfontosságú csomópontjában található. Az EDS1 potenciális kölcsönhatásba lépő fehérjepartnereinek azonosítására élesztő két-hibrid szűrést végeztünk. Az EDS1 erős kölcsönhatást mutatott egy ismeretlen funkciójú Arabidopsis HSP40- típusú chaperon fehérjével (AT2G24860), amely a DnaJ szupercsaládba tartozik (1A. kiegészítő ábra); ezt a fehérjét a továbbiakban EIJ1-nek nevezzük. A szekvenciaanalízis kimutatta, hogy az EIJ1 144 aminosavat tartalmaz, köztük négy Cys-ben gazdag Zn ujj motívumot (CXXCXGXG; 1A. kiegészítő ábra). Bár más zárvatermő fajok rendelkeznek az EIJ1 homológjaival, a legközelebbi homológok a Brassicaceae-ra korlátozódnak (1B kiegészítő ábra és S1 fájl). Nevezetesen, az EIJ1 szekvencia-hasonlóságot mutatott az N. tabacum Tsip1 fehérjével, amely részt vesz a patogén rezisztenciában (1B. kiegészítő ábra; Ham et al., 2006). Az EDS1 és az EIJ1 közötti kölcsönhatásért felelős funkcionális domének azonosítására e fehérjék két csonkolt változatát használták élesztő-kéthibrid vizsgálatokban (1A ábra; 1A kiegészítő ábra). Az EIJ1 N-terminálisa erős kölcsönhatást mutatott a teljes hosszúságú EDS1-el, valamint az EDS1 N-végével, de gyenge kölcsönhatást az EDS1 C-végével (1B. ábra). Ez arra utal, hogy az EDS1 lipázszerű domént tartalmazó N-terminálisa és az EIJ1 N-terminálisa szükséges és elegendő kölcsönhatásukhoz. Bár az EIJ1 C-terminálisa konzervált Cys-ben gazdag Zn ujjdomént tartalmaz, amely elősegítheti a DNS-hez vagy más fehérjékhez való kötődését, nem járul hozzá az EDS1-gyel való kölcsönhatáshoz. A lehúzó tesztek tovább igazolták az EDS1 és EIJ1 közötti kölcsönhatást in vitro (1C. ábra), míg a koimmunprecipitációs (Co-IP) tesztek 35Spro: EIJ1- 6HA 35Spro: EDS1-3FLAG transzgenikus növényeket alkalmaztak. megerősítette kölcsönhatásukat a növényben (1D ábra). Összességében ezek az eredmények azt mutatják, hogy az EDS1 kölcsönhatásba lép az EIJ1-gyel mind in vitro, mind in vivo. Az EIJ1 jellemzése Az EIJ1 szubcelluláris lokalizációjának meghatározásához az EIJ1 nyílt leolvasási keretet fuzionáltuk az mCherry riportergénnel a karfiol mozaikvírus 35S promoterének szabályozása alatt, így létrehoztuk a 35Spro: EIJ1-mCherry konstrukciót. Ez a konstrukció átmenetileg N. benthamiana levelekké alakult át agroinfiltrációval. A fluoreszcens mikroszkópos vizsgálat kimutatta, hogy az EIJ{57}}mCherry mind a kloroplasztiszban, mind a sejtmagban lokalizálódott (2A. ábra). Ezt a lokalizációs mintát transzgenikus 35Spro: EIJ1-6HA növények immunblot analízise igazolta (2. kiegészítő ábra). Az EIJ1 expressziós mintázatának vizsgálatához az EIJ1 genomiális szekvenciáját fuzionáltattuk a ß-glükuronidáz (GUS) riportergénnel, hogy létrehozzuk az EIJ1pro: EIJ1-GUS transzgenikus Arabidopsis vonalakat. Erős GUS aktivitást mutattunk ki a rozetta levelekben és gyökerekben; azonban a GUS-aktivitás gyenge volt a szilikonokban, és nem volt kimutatható a szárban és a virágokban (2B. ábra). Ezek az eredmények összhangban voltak az EIJ1 expressziós eredményeivel, amelyet kvantitatív reverz transzkripciós-PCR-rel (RT-PCR) vizsgáltak különböző szövetekben (2C. ábra). Tekintettel arra, hogy az EDS1 a növényi immunitás központi szabályozója (Saikat et al., 2011), megvizsgáltuk, hogy az EIJ1, az EDS1 feltételezett kofaktora is részt vesz-e a kórokozó fertőzésre adott válaszban. Az EIJ1 transzkriptumszintjét Pst DC3000 vagy SA hemibiotróf baktériumokkal való kezelés váltotta ki (2D ábra). A GUS-festés kimutatta, hogy az EIJ1 indukálódott és jelentősen koncentrálódott a trichomák körül a Pst DC{80}}inokulált levelekben (2E–G ábra), ami arra utal, hogy az EIJ1 lehetséges biológiai jelentőséggel bír a védekezési válaszban (Xin és He, 2013). Ezután megvizsgáltuk az EIJ1 szintjét a Pst DC3000-zel vagy SA-val kezelt 35Spro: EIJ{86}}HA növényekben. Érdekes módon a Pst DC3000 vagy SA kezelés hatására az EIJ1 fokozatosan lebomlott egy gyors indukció után (2. ábra, H és I). Ez az eredmény nem volt összhangban az EIJ1-HA stabil expressziós mintázatával, amelyet a 35Spro: EIJ1-HA növényekben figyeltek meg a kórokozó fertőzés során (3. kiegészítő ábra), ami az EIJ1 poszttranszkripciós szabályozását jelzi. Ezek az eredmények együttesen arra utalnak, hogy az EIJ1 részt vesz a növényi immunválaszban.

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

Az EIJ1 funkcióvesztéses mutációja fokozza a Pst DC3000 elleni rezisztenciát az SA útvonalon keresztül

Az EIJ1 növényi immunitásban betöltött szerepének vizsgálata céljából azonosítottunk egy Arabidopsis mutánst (SALK_142975), amely az EIJ1 harmadik exonjában T-DNS inszerciót tartalmaz (3. ábra, A és B). A kvantitatív RT-PCR analízis azt mutatta, hogy az EIJ1 gyengén expresszálódott ebben az eij1 T-DNS inszerciós mutánsban; ezért ezt az EIJ1 allélt eij{{10}}-nak neveztük el (3C. ábra). Ezt követően értékeltük a 3-hetes eij1-1 mutáns növények és az Arabidopsis (A. thaliana) ökotípusú Columbia (Col-0; vad típusú) növények betegségrezisztencia fenotípusát oltással. Pst DC3000. A fertőzött levelek értékelése az oltás után 5 nappal (dpi) kevesebb nekrotikus elváltozást mutatott ki az eij1-1 leveleken, mint a Col-0 leveleken (3D. ábra). Következetesen az eij1-1 levelek szignifikánsan alacsonyabb bakteriális titert mutattak, mint a Col-0 levelei 5 dpi mellett, bár a baktériumtiter nem mutatott különbséget a Col-0 és eij1-1 levelei között 0 dpi (3E. ábra). Ezután eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA komplementációs vonalakat hoztunk létre egy 6xHA tagszekvenciával fuzionált EIJ1 genomiális fragmentumot az eij1-1 háttérbe transzformálva. A komplementációs vonalak teljesen megmentették az eij1-1 patogén rezisztencia fenotípusát (3E. ábra), ami alátámasztja, hogy az eij1-1 funkcióvesztéses mutáns. Az EIJ1 apoplasztikus immunitásra gyakorolt ​​hatásának meghatározásához ezen komplementációs vonalak betegségrezisztencia fenotípusát is értékeltük a Pst DC3000 nyomásos infiltrációjával, és hasonló eredményeket kaptunk (4A. kiegészítő ábra). Az EIJ1 funkciójának megerősítésére ezután azonosítottunk egy másik Arabidopsis mutánst, eij1-2 (WiscDsLox343G09), amely egy T-DNS inszerciót tartalmazott az EIJ1 promoter régiójában (5. kiegészítő ábra, A és B). Az EIJ1 transzkriptumok alig voltak kimutathatók az eij1-2 mutánsban, ami azt jelzi, hogy az eij1-2 az EIJ1 null allélja. Az eij1-1-hoz hasonlóan a bakteriális növekedési tesztek kimutatták, hogy az eij1-2 szignifikánsan alacsonyabb bakteriális titerrel volt jelen, mint a Col-0 (5. kiegészítő ábra, D és E). Összefoglalva, ezek az eredmények azt mutatják, hogy az EIJ1 fontos represszív szerepet játszik a növényi immunválaszban.

1. ábra Az EIJ1 kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel in vitro és in planta. (A) Sematikus diagram, amely az EIJ1-ben, EDS1-ben található tartományokat és azok csonkolt változatait mutatja be. (B) Az élesztő két-hibrid vizsgálatok az EIJ1, az EDS1 és csonka változatai közötti kölcsönhatásokat mutatják. A transzformált élesztősejteket SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade és SD/-Trp/-Leu táptalajon növesztettük. Üres, csak vektoros vezérlők; AD, aktiválási tartomány; BD, DNS-kötő domén. (C) Pull-down assay, amely a His-EIJ1 és a GST-EDS1 fúziós fehérjék közötti közvetlen kölcsönhatást mutatja in vitro. A His-EIJ1 fehérjéket immobilizált GST vagy GST-EDS1 fehérjével inkubáltuk. Az immunprecipitált frakciókat anti-His, illetve anti-GST antitestekkel detektáltuk. (D) Co-IP, amely az EIJ1 és az EDS1 kölcsönhatását mutatja az Arabidopsis leveleiben. A 3-hetes 35Spro: EIJ1-6HA (genotípus kontrollként) és a 35Spro: EIJ1-6HA 35Spro: EDS1-3FLAG levelekből kivont összes fehérjét immunprecipitálták vagy egy anti-FLAG antitest vagy egy preimmun szérum (IgG). A koimmunoprecipitált fehérjéket anti-FLAG és anti-HA antitestekkel detektáltuk. A (B–D) pontban bemutatott reprezentatív eredményeket egymástól függetlenül háromszor megismételtük.

A hidrogén-peroxid (H2O2) termelése, a reaktív oxigénfajták egyik fajtája, a kórokozók sikeres felismerésének és az ezt követő növényvédelmi reakciók aktiválásának fémjelzi, beleértve a HR-hez kapcsolódó programozott sejthalált (Lam et al., 2001; Torres et al. al., 2006; Nanda et al., 2010). Ezért figyeltük a H2O2 szintjét a 3-hetes kórokozóval beoltott Col-0, eij1-1 és eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA növényeket a 3,3-diaminobenzidin (DAB) festési módszerrel. Az eredmények azt mutatták, hogy a H2O2 magas szintre halmozódott fel a fertőzött növényekben, de nem volt kimutatható a nem oltott (ál-) növényekben (3F. ábra). Magasabb H2O2 szintet mutattunk ki az eij1-1 levelekben, mint a Col- 0 leveleiben és a Pst DC3000-nel beoltott komplementációs vonalakban (3F. ábra). Továbbá, míg a tripánkék festés feltárta, hogy sejthalál (microHR, Alvarez és mtsai, 1998) következett be az eij1-1 levelekben 24-órával a beoltás után (HPI) Pst DC3000-nel, de nem microHR-t figyeltek meg a Col-0 és eij1-1 EIJpro1:EIJ1-6HA növényekben (3G. ábra). Az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) beoltása nagyobb H2O2-felhalmozódást és több microHR-t eredményezett, bár nem volt látható különbség e három genotípus között (3. ábra, F és G). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az EIJ1 alapvető szerepet játszik a kórokozókkal szembeni alaprezisztenciában.

2. ábra EIJ1 mRNS és fehérje expressziós mintázata. (A) Az EIJ1 kloroplasztisz és sejtmag lokalizációja. Egy EIJ1-mCherry fúziós fehérjét átmenetileg expresszáltak N. benthamiana levelekben, és konfokális mikroszkóppal elemeztük. A DAPI fluoreszcencia a sejtmagot jelzi. A klorofill fluoreszcenciáját zöld szín jelzi. Bár=10 lm. (B) GUS festés, amely az EIJ1 expresszióját mutatja gyökerekben, szárban, rozetta levelekben, virágokban, szilikonokban és 10-napos palántákban (balról jobbra). Bar=1 mm. (C) Az EIJ1 expressziós mintázata Col-növények különböző szöveteiben, beleértve a gyökereket, szárakat, rozettaleveleket, virágokat és szilikonokat, amint azt qRT-PCR-rel kimutattuk. A relatív expressziót úgy számítottuk ki, hogy a vizsgált gén transzkripciós szintjét normalizáltuk az ACTIN2-vel szemben (ugyanaz, mint lent). Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD. A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01; 1. kiegészítő adatkészlet). (D) Az EIJ1 expressziós analízise Pst DC3000-val (OD600=0.1) bemártott, vagy 0,05 mM SA-val permetezett 3-hetes Col növények alkalmazásával. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD (1. kiegészítő adatkészlet). (E-G) A GUS festés azt mutatja, hogy a kórokozók indukálják az EIJ1 expresszióját. Háromhetes pEIJ1:EIJ1-GUS növényeket áloltottunk (10 mM MgCl2; E) vagy beoltottunk Pst DC3000-nel (OD600=0.1; F). Bar=1 mm. A kinagyított kép azt mutatja, hogy az EIJ1-GUS a (G) trichome régióra koncentrálódik. Bár=100 lm. A 4 hpi-s leveleket begyűjtöttük, és GUS festőoldattal inkubáltuk. (H) és (I) EIJ1 expressziós mintázata Pst DC3000 vagy SA kezelést követően. Az összes fehérjét a Pst DC3000-zel (OD600=0.1; H) beoltott, vagy 0,05 mM SA-val (I) permetezett 3-hetes 35Spro: EIJ1-6HA növényekből vontuk ki. és anti-HA antitesttel detektáltuk. Az alsó panelek Coomassie Brilliant Blue (CBB) festést mutatnak be töltési kontrollként. A (H) és (I) pontban bemutatott immunblot analíziseket egymástól függetlenül háromszor megismételtük.

3. ábra Az Arabidopsis EIJ1 mutált allél eij1-1 azonosítása. (A) Sematikus diagram, amely a T-DNS beillesztési helyet mutatja eij1-1-ban (SALK_142975). Az exonokat dobozok, az intronokat pedig a dobozok közötti vonalak jelölik. A fekete dobozok az EIJ1 kódoló régiókat, a fehérek pedig a nem lefordított régiókat jelzik. A háromszög a T-DNS beépítési helyét jelzi. (B) A genomi DNS PCR-amplifikációja megerősíti, hogy az eij1-1 homozigóta inszerciós mutáns. A használt primereket (P1, P2) az (A) mutatja. Az LB a T-DNS bal szegély primert, az M pedig a DNS molekuláris markereket jelöli. (C) Az EIJ1 expresszió qRT-PCR elemzése. A teljes RNS-t a 3-hetes eij1 és Col levelekből vontuk ki. Az EIJ1 relatív expresszióját eij{18}}-ben 1-re állítottuk. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD (1. kiegészítő adatkészlet). (D) A Col, eij1-1 és két reprezentatív EIJ1 komplementációs transzgenikus vonal, eij1 EIJ1pro: EIJ1-6HA betegségrezisztencia fenotípusa. A háromhetes növényeket Pst DC3000 (OD600=0.05) mártással oltottuk be. A bemutatott levelek 5 dpi felbontással készültek. Rudak=5 mm. (E) A Pst DC3000 bakteriális növekedése a (D) pontban leírt növényeken 0 és 5 dpi-vel. cfu/g, telepképző egység/g friss tömeg. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD. A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01, 1. kiegészítő adatkészlet). (F) H2O2-szintek vizsgálata a Col leveleiben,

Az EIJ1 közvetíti a növényi immunitást az EDS1 aktivitás elnyomásával

Az EDS1 és az EIJ1 közötti genetikai kapcsolat megértéséhez eij1-1 eds1-22 kettős mutáns vonalat hoztunk létre az eij1-1 mutáns és az eds1-22 keresztezésével, ami egy az EDS1-90 funkciómutáns allélja (AT3G48090; Col-0 háttér), amely veszélyeztetett patogénrezisztenciát mutat (Yang és Hua, 2004). Normális növekedési körülmények között nem figyeltek meg morfológiai különbséget az eij1-1, eds1-22 és eij1-1 eds1-22 mutáns növények között (4. ábra, A és B). A Pst DC3000-nel történő beoltást követően az eij1-1 mutáns növények erősebb rezisztenciát mutattak, mint a Col-0 növények 5 dpi mellett (4. ábra, A és B). Az eij1-1 eds1-22 kettős mutáns azonban figyelemre méltó nekrotikus elváltozásokat és magas bakteriális titert mutatott, ami összehasonlítható az eds1-22 egymutánssal, jelezve, hogy az eij1-1 allél nem volt képes az eds betegségre fogékony fenotípusának megmentésére1-22 (4. ábra, A és B). A betegségekkel szembeni rezisztenciát a Pst DC3000 nyomás alatti infiltrációját követően is értékelték, és hasonló eredményeket kaptunk (4B. kiegészítő ábra). Továbbá az EDS1 null allélt használtuk, eds1-2; Col-0 háttér; Bartsch és mtsai, 2006), az eij1-1 eds1-2 kettős mutáns növények generálására genetikai elemzéshez. Az eij1-1 eds1-22-hoz hasonlóan az eij1-1 eds1-2 kettős mutáns növények is figyelemreméltó nekrotikus elváltozásokat és magasabb bakteriális titert mutattak, mint az eij1-1. összehasonlítható az eds1-2 egyetlen mutánssal (6. kiegészítő ábra). Ez a genetikai bizonyíték arra utal, hogy az EDS1 episztatikus az EIJ1-re. A fenti megfigyelésekkel összhangban a H2O2 magas szintre halmozódott fel az eij1-1 levelekben, de alacsony szintre az eds1- 22 és eij1-1 eds1-22 levelekben, összehasonlítva a Col{{ 53}} levelek, Pst DC3000 beoltáskor (4C. ábra). Ezenkívül az eij{56}} mikroHR-t egyértelműen elnyomta az EDS1 funkcióvesztése 24 hpi-nél Pst DC3000 vagy avirulens Pst DC3000 esetén (AvrRps4; 4D ábra). Ezzel az eredménnyel összhangban az ICS1 és PR1 expressziós szintje az eij1-1 eds1-22 és eds1-22 növényekben összehasonlítható volt, de lényegesen alacsonyabb volt, mint az eij1-1 és a Col{ {71}} növények (4E. ábra). Ezek az eredmények alátámasztják, hogy az EIJ{73}}közvetített veleszületett immunválasz az EDS1-től függ. Az EIJ1–EDS1 kölcsönhatásnak a növényi immunválaszban betöltött szerepének vizsgálatára az eij1-1, az eds1-22 és a Col-0 levelek RNS-seq elemzését végeztük 24 hpi-nél Pst DC3000 segítségével. ; oltatlan Col{83}} levelekkel álkezelésként használták. Összesen 2762, 923 és 622 differenciálisan kifejeződő gént (DEG) azonosítottak a Col_Pst DC3000 versus Col_mock, eij1-1_Pst DC3000 versus Col{92}} Pst DC3000 és eds1-22_Pst DC3000 versus Col_Pst DC3000 összehasonlítása. Ezeket a géneket a továbbiakban kórokozó-reszponzív, EIJ{100}{101}szabályozott, illetve EDS{100}{101}szabályozott géneknek nevezzük (7A. kiegészítő ábra és 2. adatkészlet). Ezen gének közül 471-et az EIJ1 szabályozott; 396-ot az EDS1 szabályozott (4F. ábra; 2. kiegészítő adatkészlet); és 124-et az EIJ1 és az EDS1 együtt szabályozott (4F ábra). A klaszteranalízis kimutatta, hogy a társszabályozott gének (124) 93,5%-át (116) az EDS1 felfelé, az EIJ1 pedig lefelé szabályozta (4F. ábra; Kiegészítő 7B. ábra és 2. adatkészlet), ami alátámasztja az EIJ1 elnyomó szerepét EDS1 funkció. A génontológiai (GO) elemzés továbbá feltárta, hogy az EIJ1 és EDS1 által antagonista módon szabályozott gének többsége főként a stresszválaszokban és a veleszületett immunválaszokban vesz részt (4G ábra; S1 kiegészítő táblázat). Ezek az elemzések arra utalnak, hogy az EIJ1 és az EDS1 kontrasztos módon szabályozza a rezisztenciával kapcsolatos géneket a patogén fertőzés során. Az EDS{135}}szabályozott gének jelentős részét (272/396) nem szabályozta az EIJ1, valószínűleg az EDS1 kisebb változása (52) vagy EIJ{140}független funkciója miatt.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

Kattintson ide a Cistanche Enhance Immunity termékek megtekintéséhez

【Kérjen többet】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Az EIJ1 kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel a citoplazmában, és gátolja az EDS1 nukleáris kereskedelmét

Az EIJ1 a levélsejtek kloroplasztiszában és magjában lokalizálódik (2A ábra), míg az EDS1 fehérje nukleocitoplazmatikus eloszlási mintázatot mutat, mindkét helyen előfordul (Garcı´a et al., 2010). Annak vizsgálatára, hogy az EIJ1 hol és hogyan lép kölcsönhatásba az EDS1-gyel a növényben, tranziens expressziós vizsgálatokat végeztünk Arabidopsis protoplasztok felhasználásával. Érdekes módon, bár az EIJ1 megtartotta eredeti szubcelluláris lokalizációs mintáját a kloroplasztiszban és a sejtmagban a zöld fluoreszcens fehérje (GFP; kontroll) jelenlétében, a kloroplasztiszban lokalizált EIJ1-mCherry diffundált a citoplazmában, amikor EDS-sel együtt expresszálták. {9}}GFP protoplasztokban (5A. ábra, lásd a másolatokat a 2. kiegészítő fájlban). Ezt a jelenséget megerősítették N. benthamiana epidermális sejtekben, amelyekben az EIJ1-mCherry átmenetileg együtt expresszálódott vagy EDS1-GFP-vel vagy GFP kontrollal (8. kiegészítő ábra, lásd a másolatokat a 2. kiegészítő fájlban) . Ezek a megfigyelések azt mutatják, hogy az EDS1 túlzott expressziója az EIJ1 szubcelluláris áthelyeződéséhez vezethet. Ezt követően az EDS1 és az EIJ1 kölcsönhatásának szubcelluláris helyének meghatározásához egy lehúzási vizsgálatot végeztünk a rekombináns glutation-S-transzferáz (GST)-EDS1 fúziós fehérje (csali) és a teljes fehérje kivonat, a sejtmag-kimerült frakciók és a sejtmagok felhasználásával. 35Spro dúsított frakciói: EIJ1-HA transzgenikus vonalak (zsákmányfehérjék). Eredményeink azt mutatták, hogy az EDS1 immunprecipitált EIJ1-HA-val a teljes fehérjekivonat és a 35Spro: EIJ1-HA levelek sejtmagmentes frakcióinak alkalmazásakor, de a sejtmagban dúsított frakciók használatakor nem (ábra) 5B), ami arra utal, hogy az EIJ1 és az EDS1 közötti kölcsönhatás a citoplazmában történik.

4. ábra: Az EIJ1 és az EDS1 ellentétes módon szabályozza a növények kórokozókkal szembeni rezisztenciáját. (A) A Col, eij1-1, eds1-22 és eij1-1 eds1-22 betegségrezisztencia fenotípusa. A háromhetes növényeket Pst DC3000 (OD600=0.05) mártással oltottuk be. A bemutatott levelek 5 dpi felbontással készültek. Bar=5 mm. (B) Pst DC3000 bakteriális növekedése az (A) pontban leírt növényeken 0 és 5 dpi-vel. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD. A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01, 1. kiegészítő adatkészlet). (C) H2O2-szintek vizsgálata Col, eij1-1, eds1-22 és eij1-1 eds1-22 növényekben. A háromhetes növényeket Pst DC3000 vagy Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1) mártással oltottuk be, majd DAB-val festettük 24 hpi-vel. Bár=500 lm. (D) Col, eij1-1, eds1-22 és eij1-1 eds1-22 növények sejthalál-elemzése. A háromhetes növényeket Pst DC3000 vagy Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1) segítségével dipinokuláltuk, majd 24 hpi-vel tripánkékkel festettük. Bár=500 lm.

Tekintettel arra, hogy az EIJ1 negatívan szabályozza a növényi immunválaszt EDS1-függő módon (4. ábra), ezt követően megvizsgáltuk a kórokozók hatását az EIJ1 és az EDS1 közötti kölcsönhatásra. Meglepő módon a Pst DC3000 fertőzés inkább a citoplazmában fokozta az EDS1–EIJ1 kölcsönhatást, nem pedig a kloroplasztiszban és a sejtmagban (5C. ábra, lásd a 2. kiegészítő fájl ismétléseit). Ez a megállapítás, valamint az EDS1 nukleo-citoplazmatikus eloszlási mintázata és az EDS1 nukleáris lokalizáció szerepe a kórokozó rezisztencia transzkripciós szintű erősítésében (Garcı´a et al., 2010) arra késztetett bennünket, hogy megvizsgáljuk az EIJ1 szerepét az EDS1 szubcelluláris kereskedelme a kórokozó fertőzés során. Amikor átmenetileg EDS{16}}FLAG-ot expresszáltunk az eij1-1, az EIJ1 túlzott expressziója és a Col{19}} növényekből izolált Arabidopsis protoplasztokban, az EIJ1 jelentősen visszaszorította az EDS1 sejtmagba való bejutását (9. kiegészítő ábra) . Ezenkívül az immunblot-analízis kis különbséget mutatott ki az összes EDS1 fehérje mennyiségében az eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG és az eij1-1 eds1-22 EDS1pro: EDS{{30} között. } FLAG transzgenikus növények (5D. ábra, lásd a másolatokat a 2. kiegészítő fájlban). Az eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG transzgenikus növényekhez képest azonban a Pst DC3000- beoltott eij1-1 eds1-22 EDS1pro: EDS13FLAG növények jelentős növekedést mutattak a sejtmagokkal dúsított EDS1 fehérje szintjében és a citoplazmában lokalizált EDS1 szintjének csökkenésében (5D ábra, lásd a 2. kiegészítő fájl ismétléseit), megerősítve az EIJ1 elnyomó szerepét az EDS1 citoplazma-nukleusz forgalmában. Ezt követően megvizsgáltuk, hogy ez az EIJ1–EDS1 kölcsönhatás által közvetített újraelosztási folyamat befolyásolja-e a rezisztenciával kapcsolatos gének transzkripciós szabályozását növényekben. A 35Spro: EIJ1-mCherry és a 35Spro: EDS1-3FLAG effektor konstrukciókat külön-külön vagy a riporter konstrukciókkal együtt N. benthamiana levél epidermális sejtekké transzformálták (5E. ábra). 24 hpi-nél Pst DC3000-nél az EDS1 aktiválta a PR1 és ICS1 expresszióját (5F. ábra), míg az EIJ1 jelentősen gátolta az EDS{65}}indukált génexpressziót (5F. ábra). A teljes hosszúságú EIJ1-től eltérően az EIJ1 fehérje N-terminális vége, amely nem érintett az eij{71}}-ban, nem tudta gátolni az EDS1- által kiváltott PR1 expressziót (10. kiegészítő ábra, A és B ), jelezve, hogy az EIJ1 intakt fehérjeszerkezete szükséges a represszív funkciójához. Ezek az eredmények együttesen alátámasztják, hogy az EIJ1 alapvető represszorként működik az EDS{77}}közvetített rezisztenciaválaszban az EDS1 nukleocitoplazmatikus forgalmának szabályozásával. Mivel az EIJ1 fehérje fokozatosan lebomlott a Pst DC{80}}oltott vagy SA-kezelt növényekben egy gyors kezdeti indukció után (2. ábra, H és I), megvizsgáltuk, hogy az EDS1 viszont kiváltja-e az EIJ1 lebomlását egy fehérje-fehérje kölcsönhatás. Az eds{86}}Spro:EIJ1-HA transzgenikus növényeket használó sejtmentes degradációs vizsgálatok és in vivo fehérjedetektálási vizsgálatok azt mutatták, hogy sem az EDS1 hiánya, sem jelenléte nem befolyásolta az EIJ1 lebomlását (11. kiegészítő ábra), ami arra utal, hogy Az EDS1 nem vesz részt az EIJ1 kórokozó által kiváltott degradációjában.

A cistanche tubulosa előnyei- erősíti az immunrendszert

A kórokozó fertőzés megváltoztatja az EIJ1 szubcelluláris lokalizációját

Az EIJ1 és az EDS1 közötti fokozott kölcsönhatás a citoplazmában a kórokozó beoltása után (5. ábra, B és C) az EIJ1 lehetséges kórokozó által kiváltott áthelyeződését sejtette a növényi sejtekben. Ennek a lehetőségnek a tesztelésére megvizsgáltuk az EIJ1 szubcelluláris lokalizációját Pst DC3000-val beoltott N. benthamiana levelekben. Nem fertőzött körülmények között az EIJ1-mCherry a kloroplasztiszban és a sejtmagban lokalizálódott. Azonban 24 dpi-nél a fluoreszcens jelek nagymértékben csökkentek a kloroplasztiszokban, és fokozódtak a citoplazmában (6A. ábra). Annak további meghatározására, hogy a kórokozók kiváltják-e az EIJ1 disszociációját a kloroplasztiszról a levelek citoplazmájára, az EIJ1 fehérje immunblot analízisét végezték el 35Spro: EIJ1-6HA transzgenikus növényekkel. Az összfehérjéket, a kloroplaszt fehérjéket és a citoplazmatikus fehérjéket 35Spro: EIJ1-6HA transzgenikus növényekből izoláltuk 0 és 4 hpi-vel Pst DC3000 segítségével. Az EIJ1 mennyisége jelentősen megnőtt a citoplazmatikus frakcióban, de csökkent a kloroplasztisz frakcióban 24 dpi-nél (6B. ábra, lásd a 2. kiegészítő fájl ismétléseit), ami negatív korrelációt jelez a kloroplasztisz és a citoplazma EIJ1 fehérjeszintje között.

5. ábra: Az EIJ1 kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel a citoplazmában, hogy közvetítse az EDS1 nukleáris forgalmát. (A) Átmeneti expressziós elemzés, amely az EDS1 és EIJ1 lokalizációját mutatja Arabidopsis protoplasztokban. Bár=10 lm. (B) Az EIJ1 és az EDS1 közötti kölcsönhatás lehúzási vizsgálata. A 3-hetes eij1-1 35Spro: EIJ1-6HA transzgenikus növényekből kivont teljes fehérjéket, sejtmagszegény frakciókat és sejtmagban dúsított frakciókat immobilizált GST-EDS1 vagy GST fehérjékkel inkubáltuk , ill. Az IP-ket anti-HA vagy anti-GST antitestekkel detektáltuk. A PEPC-t és a hiszton H3-at használtuk citoplazmatikus, illetve nukleáris markerként. A csillagok a GST-EDS1 fehérjék sávjait jelzik. (C) A Pst DC3000 fertőzés fokozza az EDS1 és az EIJ1 fehérje kölcsönhatását a citoplazmában. A teljes fehérjéket, a sejtmagtól mentesített frakciókat, a sejtmaggal dúsított frakciókat és a kloroplaszt fehérjéket a 3-hetes EIJ1pro: EIJ1-6HA 35Spro: EDS1-3 FLAG növényekből vontuk ki, amelyeket mártással oltottak ki. Pst DC3000 (OD600=0.1) vagy ál-oltva 4 hpi-vel, és immunprecipitálva vagy anti-FLAG antitesttel vagy preimmun szérummal (IgG). A koimmunoprecipitált fehérjéket anti-HA és anti-FLAG antitestek segítségével detektáltuk. N-szegényített, magszegény frakciók; N-ben dúsított, sejtmaggal dúsított frakciók. A PEPC-t és a hiszton H3-at használtuk citoplazmatikus, illetve nukleáris markerként. (D) Az immunblot elemzés azt mutatja, hogy az EIJ1 közvetíti az EDS1 citoplazmatikus versus nukleáris eloszlását. A teljes fehérjéket, a sejtmagvakkal mentesített frakciókat és a sejtmagokkal dúsított frakciókat a 3-hetes kiadások1-22 EDS1pro: EDS1- 3FLAG és eij{58}} eds-ből{59 vonták ki. }} EDS1pro: EDS1-3FLAG transzgenikus növények, amelyeket Pst DC3000-zel (OD600=0.1) mártottak be, vagy 4 hpi-vel oltottak be, és anti-FLAG antitesttel mutatták ki. Az eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG-ból származó fehérjék relatív intenzitása 1-re állított áloltási kezeléssel. M, mock; P, Pst DC3000. A PEPC-t és a hiszton H3-at használtuk citoplazmatikus, illetve nukleáris markerként. Az (A), (C) és (D) pontban bemutatott eredményeket egymástól függetlenül háromszor megismételtük (2. kiegészítő fájl). (E) és (F) Az EIJ1 és az EDS1 által szabályozott PR1 és ICS1 promoter aktivitás tranziens elemzése. A tranziens expressziós vizsgálatokban használt különféle konstrukciókat az (E) mutatjuk be. A PR1pro: GUS vagy az ICS1pro: GUS effektorokkal vagy az üres vektorral (Control) együtt N. benthamiana levelekké alakult, amelyeket Pst DC3000 (OD600=0.1) ivartalanítottunk 24 órán keresztül. A relatív GUS aktivitást (GUS/luciferáz), amely a PR1 és ICS1 különböző effektorok által szabályozott expressziós szintjét jelzi, az (F) mutatja. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD (1. kiegészítő adatkészlet). A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01).

A kórokozó által kiváltott EIJ1 disszociáció a kloroplasztiszból az EIJ1 lehetséges funkciójára utal a citoplazmában. Ennek a lehetőségnek a tesztelésére immobilizáltuk az EIJ1 fehérjét a kloroplasztiszokon úgy, hogy a kloroplasztot célzó szekvenciát (CTS; Lee et al., 2008) az EIJ1-mCherry riportergén N-terminális végéhez kapcsoltuk. A CTS-EIJ1-mCherry fúziót ezután N. benthamiana levelekben expresszálták a natív promoter irányítása alatt. Fluoreszcenciát csak a kloroplasztiszokban mutattunk ki, a Pst DC3000-beoltott N. benthamiana levelek citoszoljában és sejtmagjában azonban nem (12A. kiegészítő ábra). Ez a megfigyelés megerősítette, hogy a CTS-taggal jelölt EIJ1 megmaradt a kloroplasztiszban, és nem kényszerítette a citoplazmába a kórokozó fertőzés. Ezt követően létrehoztuk az EIJ1pro: CTS-EIJ1-6HA transzgenikus Arabidopsis vonalakat, hogy értékeljük a CTS-EIJ1 biológiai funkcióját a növényi immunválaszban. Ahogy az várható volt, az eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA-val ellentétben az eij1-1 EIJ1pro: CTS-EIJ1-6HA vonalak nem mutattak szignifikáns különbséget a kórokozókkal szembeni rezisztenciában a eij1-1, ami azt jelzi, hogy a kloroplasztiszban immobilizált EIJ1 nem képes megmenteni az eij1-1 betegségrezisztencia fenotípusát (6C. ábra). Ezzel a megfigyeléssel összhangban a PR1 expressziója magas szinten maradt az eij1-1 EIJ1pro: CTSEIJ1-6HA transzgenikus növényekben, hasonlóan az eij1-1-hoz (12B. kiegészítő ábra). Ezenkívül a CTS-EIJ1 kevésbé képes elnyomni az EDS1 transzkripciós aktivitást, mint az EIJ1 (6. ábra, D és E). Ezek az eredmények arra a következtetésre vezettek, hogy a kórokozó fertőzésre adott korai gazdaválasz kiváltja az EIJ1 szubcelluláris relokalizációját, ami viszont modulálja az immunválaszt azáltal, hogy elnyomja az EDS1 sejtmagba való bejutását.

Az EIJ1 szabályozza a virulencia effektor által kiváltott választ

A P. syringae III. típusú szekréciós rendszer által kiválasztott AvrRps4 effektor fehérjét a TIR-NB-LRR receptor RPS4 felismeri, hogy ETI-t indítson el, ami az EDS1-től függ (Gassmann és mtsai, 1999; Wirthmueller és mtsai, 2007; Heidrich et al., 2012). Az eij{8}} leveleket avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) vagy virulens Pst DC3000 vírussal oltottuk be, hogy felmérjük, hogy az EIJ1 részt vesz-e az ETI-ben. Az eij1-1 levelek nagyobb ellenállást mutattak a virulens Pst DC3000-nel szemben, mint a Col{15}} levelei (7A. ábra). Nem figyeltek meg azonban szignifikáns különbséget a Col-0 és az eij1-1 levelek között az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) rezisztenciában, bár mindkét genotípus nagyobb rezisztenciát mutatott az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) ellen, mint a Pst DC3000 ( 3. ábra F és G; 7. ábra A), ami azt jelzi, hogy az EIJ1 nem feltétlenül szükséges az RPS4-indukált ETI-hez. Meghatároztuk a növények ellenállását a Pst DC3000 hrcC-vel szemben is, amely hibás III-as típusú szekréciós rendszert tartalmaz, és nem képes effektorokat injektálni a gazdasejtekbe a PTI elnyomása érdekében (Gassmann és mtsai, 1999; Gloggnitzer és mtsai, 2014). Mind az eij1-1 mutáns, mind a Col-0 levelei hasonló rezisztenciát mutattak a Pst DC3000 hrcC-vel szemben (13. kiegészítő ábra), ami arra utal, hogy az EIJ1 nem vesz részt a PTI-ben.

Tekintettel arra, hogy az EDS1 nukleáris felhalmozódása nélkülözhetetlen a védekező génexpresszió és rezisztencia TIR-NB-LRR által indukált újraprogramozásához (Garcı´a et al., 2010), megvizsgáltuk, hogy az EIJ1 szabályozza-e a szubcelluláris eloszlást. az EDS1 válaszul az ETI-re. A 3-hetes eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG és eij1-1 eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG növények leveleit beoltották Pst DC3000 vagy Pst DC3000 (AvrRps4) segítségével, és a sejtmagvakkal kimerített és sejtmagokkal dúsított frakciókat 0 és 4 lóerővel extraháltuk. Az előző vizsgálattal összhangban (Garcı´a et al., 2010) az EDS1 nukleáris lokalizációjának növekedését figyelték meg a Pst DC3000-zel (AvrRps4) beoltott eds1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG növényekben, de nem a Pst DC3000-el beoltottakban. Az EIJ1 funkcióvesztése azonban nem befolyásolta az EDS1 ETI által kiváltott nukleáris felhalmozódását (7B. ábra; lásd a 2. kiegészítő fájl ismétléseit). Ez arra utal, hogy az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) vagy az EIJ1 megkerülésével váltja ki az EDS1 sejtmagba való bejutását, vagy ismeretlen módon megszünteti az EIJ1 funkcióját. Ezen lehetőségek tesztelésére megvizsgáltuk az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) hatását az EIJ1 szintjére. Az EIJ1 túlexpressziós vonalakkal kapott eredményekhez hasonlóan (2H. ábra), a Pst DC3000-nel beoltott eij1-1 EIJ1pro:EIJ1-6HA növények fokozott EIJ1-felhalmozódást mutattak a fertőzés korai szakaszában, bár az EIJ1 fokozatosan 8 hpi után leromlott (7C. ábra; lásd a másolatokat a 2. kiegészítő fájlban). Az EIJ1 felhalmozódása elegendő ahhoz, hogy a fertőzés korai szakaszában megakadályozza a Pst DC{58}}kiváltotta EDS1 bejutását a sejtmagba (5., D. és 7., B. ábra). Ezzel az eredménnyel összhangban az EIJ1 funkcióvesztése felgyorsította az EDS1 nukleáris transzlokációját a fertőzött növényekben (14. kiegészítő ábra). Ezzel szemben a Pst DC3000 (AvrRps4) megszüntette az EIJ1 funkciót az EIJ1 fehérje degradációjának gyors indukálásával, de nem az EIJ1 gén transzkripciójának visszaszorításával (7C. ábra; Kiegészítő 15. ábra), így elősegítette az EDS1 nagyobb nukleáris transzlokációját a fertőzés korai szakaszában (7B. ábra). ). Az a megfigyelés, hogy a Pst DC3000-nel beoltott eij1-1 növények az avirulens Pst DC3000-zel (AvrRps4) beoltott Col-0 és eij1-1 növények rezisztenciáját mutatják, alátámasztja ezt a hipotézist. Ez legalább bizonyos mértékig megmagyarázhatja, hogy az avirulens törzs, de nem a virulens törzs, miért képes megerősített ellenállást kiváltani az ETI-válasz kiváltására. Ezért ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy az EIJ1 részt vesz a virulencia effektor által kiváltott válaszban a gazdasejtekben.

6. ábra Az EIJ1 citoplazmába történő áthelyezése szükséges az EDS1-függő rezisztenciához. (A) A Pst DC3000 fertőzés megváltoztatja az EIJ1 szubcelluláris lokalizációját. Az EIJ1-mCherry átmenetileg expresszálódott a Pst DC3000-zel (OD600=0.1) ivartalanított N. benthamiana levelekben, vagy 24 órán keresztül ál-oltva. Bár=10 lm. (B) A Pst DC3000 fertőzés kiváltja az EIJ1 disszociációját a kloroplasztiszból. Az összfehérjéket, a citoplazmatikus fehérjéket és a kloroplasztikus fehérjéket 3-hetes EIJ1pro: EIJ1-6HA növényekből vontuk ki, amelyeket Pst DC3000-zel (OD600=0.1) mártottunk be, vagy ál-oltottunk. 4 hpi-nél, és az anti-HA antitest kimutatta. A PEPC-t, a hiszton H3-at és az RbcL-t használtuk citoplazmatikus, nukleáris és kloroplasztikus markerként. A fehérjék relatív intenzitása álkezeléssel 1-re van állítva. Az (A) és (B) pontban bemutatott eredményeket egymástól függetlenül háromszor megismételtük (2. kiegészítő fájl). (C) Az immobilizált EIJ1 a kloroplasztiszokban nem képes helyreállítani az eij1-1 rezisztenciáját. A háromhetes növényeket Pst DC3000-zel (OD600=0.05) mártottuk be. Meghatároztuk a Pst DC3000 bakteriális titerét 0 és 5 dpi mellett. CTS, kloroplasztisz lokalizációs jelek. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD (1. kiegészítő adatkészlet). (D) és (E) Az EIJ1, CTS-EIJ1 és EDS1 által szabályozott PR-promoter aktivitás tranziens elemzése. A tranziens expressziós vizsgálatokban használt különféle konstrukciókat a (D) mutatja. PR1pro: A GUS-t effektorokkal vagy az üres vektorral (Control) együtt transzformáltuk N. benthamiana levelekké, amelyeket Pst DC3000 (OD600=0.1) ivartalanítottunk 24 órán keresztül. A relatív GUS aktivitást (GUS/luciferáz), amely a PR1 különböző effektorok által szabályozott expressziós szintjét jelzi, az (E) mutatja. A hibasávok három párhuzamos független minták szórását jelentik. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD. A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01, 1. kiegészítő adatkészlet).

7. ábra: Az EIJ1 és az EDS1 modulálja a növényi bazális rezisztenciát. (A) A Col és az eij1-1 mutáns bakteriális növekedése. A háromhetes növényeket Pst DC3000 vagy Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.05) mártással oltottuk be. Meghatároztuk a Pst DC3000 bakteriális titerét 0 és 5 dpi mellett. Az adatok három biológiai ismétlés átlaga ± SD. A kisbetűk jelentős eltéréseket jeleznek (egyirányú ANOVA, P 5 0.01, 1. kiegészítő adatkészlet). (B) Az EIJ1 alig befolyásolja az EDS1 Pst DC3000 (AvrRps4) által kiváltott felhalmozódását a sejtmagokban. A sejtmagban kimerült és a magokkal dúsított frakciókat a 3-hetes kiadások1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG és eij1-1 eds1-22 EDS1pro-ból nyertük ki: EDS1-3a FLAG transzgenikus növényeket Pst DC3000-zel (OD600=0.1), Pst DC3000-zel (AvrRps4; OD600=0.1) oltották be, vagy 4 hpi-vel oltották be, és kimutatták egy anti-FLAG antitest. A PEPC-t és a hiszton H3-at használtuk citoplazmatikus, illetve nukleáris markerként. A növényekből származó fehérjék relatív intenzitását álkezeléssel 1-re állítottuk. M, mock; P, Pst DC3000; R, Pst DC3000 (AvrRps4). (C) A Pst DC3000 (AvrRps4) fertőzés elősegíti az EIJ1 fehérje lebomlását. Az összes fehérjét a 3-hetes eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA növényekből vontuk ki, amelyeket Pst DC3000 vagy Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1) mártással oltottak be. és anti-HA antitesttel mutatták ki. Az alsó panel a Coomassie Brilliant Blue-val (CBB) végzett festést mutatja betöltési kontrollként. A (B) és (C) pontban bemutatott reprezentatív eredményeket egymástól függetlenül még kétszer megismételtük, és betöltési kontrollként anti-ACTIN antitesttel vizsgáltuk (2. kiegészítő fájl). (D) Az EIJ1 hipotetikus modellje, amely szabályozza az EDS{67}}függő növényi bazális rezisztenciát. Amikor a növényeket kórokozók támadják meg, az EIJ1 gyorsan felszabadul a kloroplasztiszból a citoplazmába, ahol kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel. Az EIJ1–EDS1 kölcsönhatás megakadályozza, hogy az EDS1 a citoplazmából a sejtmagba kerüljön, és így korlátozza az EDS1 nukleáris rezisztenciáját, lehetővé téve az EDS{74}}közvetített immunválaszok modulálását. Nyíl és tompa vonalak jelzik az aktiválást, illetve az elnyomást.

Vita

A túlélés maximalizálása érdekében a növények pontos mechanizmust fejlesztettek ki a növekedés optimalizálására és a behatoló kórokozók elleni védekezésre, bár e mechanizmusok számos részlete tisztázatlan. Az EDS1 kulcsfontosságú szerepet tölt be a növény veleszületett immunitás jelátviteli hálózatában, mivel szabályozza a biotróf és hemibiotróf kórokozókkal szembeni rezisztenciát (Wiermer et al., 2005). Ebben a tanulmányban azonosítottunk egy EIJ1 gént, amely egy chaperon DnaJ fehérjét kódol, és kimutattuk, hogy az EIJ1 reagál a korai kórokozó fertőzésekre, és szerepet játszik a növényi veleszületett immunitásban azáltal, hogy közvetlenül kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel. Ezen eredmények alapján javaslatot teszünk az EIJ1 szabályozási modelljére (7D ábra). Amikor a növényeket kórokozók támadják meg, az EIJ1 gyorsan felszabadul a kloroplasztiszból a citoplazmába, ahol kölcsönhatásba lép az EDS1-gyel. Ez az EIJ1–EDS1 kölcsönhatás megakadályozza, hogy az EDS1 a citoplazmából a sejtmagba kerüljön, és ez korlátozza az EDS1 nukleáris rezisztenciáját, lehetővé téve az EDS{13}}közvetített immunválaszok modulálását, mint például az SA bioszintézisének indukálása és a rezisztencia kifejezése. - kapcsolódó gének. Amikor a növények folyamatos ingereket szenvednek el a behatoló kórokozóktól, az EIJ1 fokozatosan lebomlik, ami az EDS1 fokozott nukleáris felhalmozódásához vezet a rezisztencia megerősítése érdekében. Ezek az eredmények illusztrálják az EIJ1 alapvető elnyomó szerepét a kórokozók inváziójára adott korai gazdaválasz során, kitöltve azt a rést, hogy megértsük, hogyan szabályozzák az EDS1 szubcelluláris lokalizációját a rezisztencia megteremtése érdekében.

A szekvenciaelemzés kimutatta, hogy az EIJ1 egy DnaJ fehérje. Az Arabidopsis genom hét különböző klasszikus típusú DnaJ fehérjét kódol (Pulido és Leister, 2018). Korábbi tanulmányok azt mutatják, hogy a DnaJ fehérjék fontos és határozott szerepet játszanak a növényi immunitásban. Például a szójabab (Glycine max) GmHSP40 pozitívan szabályozza a sejthalált és a betegségekkel szembeni rezisztenciát (Liu és Whitham, 2013). Ezzel szemben a rizs (Oryza sativa L.) Os-DjA6 fehérje negatívan szabályozza a növényi veleszületett immunitást az ubiquitináció által közvetített proteaszóma lebomlási útvonalon keresztül (Zhong és mtsai, 2018). A P. syringae-specifikus Hopl1 virulencia effektor, amely egy J domént tartalmaz, a kloroplasztiszra irányul, ahol kölcsönhatásba lép a növényi stressz-válasz mechanizmussal (Jelenska et al., 2007). Ezek a vizsgálatok azt mutatják, hogy a DnaJ fehérjék sokrétű szerepet játszanak a növény védekező válaszában. A Tsip1, az EIJ1-gyel homológ N. tabacum DnaJ fehérje szabályozza a gének Tsi1-közvetített transzkripciós aktiválását stresszre adott válaszként (Ham et al., 2006). A Tsi1 egy APETALA2 (AP2) típusú transzkripciós faktort kódol, amely fontos szabályozóként működik mind a biotikus, mind az abiotikus stresszválaszokban N. tabacumban (Park et al., 2001). Az SA kiváltja a Tsip1 áthelyeződését a kloroplasztiszból a citoplazmába, ami megkönnyíti a Tsip1 és a Tsi1 közötti kölcsönhatást, valamint a Tsip1–Tsi1 komplexnek a sejtmagba való bejutását a stresszel kapcsolatos gének transzkripciós aktiválása érdekében (Ham et al., 2006). . A Tsip1-gyel ellentétben ebben a vizsgálatban az EIJ1 a kloroplasztiszban és a sejtmagban volt lokalizálva normál körülmények között. Kimutattuk, hogy a kórokozó fertőzés kiváltja az EIJ1 áthelyeződését a kloroplasztiszból a citoplazmába, és hogy a citoplazmában az EIJ1 és az EDS1 közötti kölcsönhatás gátolja az EDS{32}}közvetített nukleáris rezisztenciát. Ezzel a megállapítással összhangban a funkcióvesztést szenvedő eij1 mutáns erősebb rezisztenciát mutatott a kórokozókkal szemben, mint a vad típusú (Col-0). Ez megerősíti, hogy az EIJ1 negatív szerepet játszik a növényi veleszületett immunitásban. Korábbi tanulmányok szerint az EDS1 összehangolt nukleáris és citoplazmatikus aktivitásai elengedhetetlenek ahhoz, hogy a növények befejezzék a kórokozókkal szembeni veleszületett immunválaszt (Garcı´a et al., 2010; Heidrich et al., 2011). Az EDS1 nukleáris lokalizációja szükséges a TNL-indukált rezisztencia transzkripciós újraprogramozásához, hogy SA-vel kapcsolatos és egyéb növényvédelmi válaszokat váltsanak ki (Wirthmueller et al., 2007). A citoplazmatikus EDS1 pool a fertőzési folyamat során is megmarad a kórokozókkal szembeni teljes rezisztencia érdekében (Garcı´a et al., 2010). Ezek a megfigyelések jelentős aggodalomra adnak okot azzal kapcsolatban, hogy a növények hogyan szabályozzák pontosan az EDS1 elosztását a citoplazma és a sejtmag között a megfelelő védekezési válaszok érdekében, amikor kórokozó fertőzéssel támadják meg őket. Itt megmutatjuk, hogy az EDS1 pontos elosztását a különböző szubcelluláris kompartmentekben részben az EIJ1 szabályozza fehérje-fehérje kölcsönhatáson keresztül. Az EIJ1 funkcióvesztéses mutációja különösen elősegítette az EDS1 sejtmagba való bejutását (5., D. és 7., B. ábra), ami fokozott betegségrezisztenciához vezetett.

Mivel az EIJ1 gyorsan indukálódott a kórokozó fertőzés korai szakaszában, majd a betegség kialakulása során lebomlott, feltételezzük, hogy az EIJ1 az immunitás fontos negatív szabályozója, amely lehetővé teszi a növények számára, hogy finomítsák optimális védekezésüket. Az EDS1 aktivitás EIJ1-közvetített elnyomása megakadályozhatja a szükségtelen immunválaszok kiváltását rövid távú stimulációra, például patogén baktériumok esetenkénti támadására. Alternatív megoldásként a patogén baktériumok úgy manipulálhatják a gazdaszervezet immunitását, hogy kiváltják az EIJ1 disszociációját a kloroplasztiszból, valószínűleg virulens effektorok kiválasztásával. Nem zárhattuk ki annak lehetőségét, hogy az EIJ1 ismeretlen funkciót tölt be a kloroplasztiszban. Mint tudjuk, az SA, a biotróf kórokozókkal szembeni rezisztenciában szerepet játszó növényi hormon és jelátviteli molekula elsősorban a kloroplasztiszban bioszintetizálódik, majd az EDS5, egy multidrog- és toxintranszporter segítségével a citoplazmába kerül (Serrano et al., 2013). Az EIJ1 valószínűleg az SA felhalmozódásának negatív szabályozója, mivel csökkentette az SA bioszintetikus gén ICS1 expresszióját a kórokozó beoltásakor (4E. ábra). Az EIJ{13}}közvetített transzkripciós represszión túl az EDS1-gyel való kölcsönhatása révén lehetséges, hogy az EIJ1 azonosítatlan módon közvetlen szerepet játszik az SA bioszintézisében vagy a kloroplasztiszból történő SA transzportban. Nem lenne meglepő, ha egy jövőbeli tanulmányban kiderülne, hogy az EIJ1 és az SA bioszintézis folyamata összefügg. Érdekes módon az EIJ1 is a sejtmagban volt lokalizálva. Bár az EIJ1 nem lépett kölcsönhatásba az EDS1-gyel a sejtmagban, valószínűleg az alapvető kofaktorok vagy módosítások hiánya miatt, a sejtmagban lokalizált EIJ1 funkciója további vizsgálatokat érdemel.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

A patogén baktériumok intracelluláris effektorokat termelnek, hogy aláássák a gazdaszervezet PTI-jét azáltal, hogy megcélozzák a kórokozó rezisztencia fehérjéket, például a PRR-eket, míg a növényi citoplazmatikus NOD-szerű receptorok érzékelik ezeket az effektorokat, hogy elindítsák az ETI-t (Dou és Zhou, 2012; Khan és mtsai, 2016). Korábbi tanulmányok és eredményeink kimutatták, hogy az avirulens Pst DC3000 (AvrRps4) elősegíti a citoplazmatikus EDS1 sejtmagba való bejutását (Garcı´a et al., 2010). Ezen túlmenően eredményeink nem mutattak szignifikáns különbséget a Pst DC3000 (AvrRps4) által kiváltott EDS1 sejtmag-felhalmozódást és az ezt követő patogénrezisztenciát a Col{11}} és eij1-1 mutáns növények között (7. ábra, A és B) . Ezenkívül az eij1-1 mutáns rezisztenciája összevethető volt a III. típusú szekréciós rendszerben hibás Pst DC3000 hrcC törzzsel beoltott Col-0 növények rezisztenciájával (12. kiegészítő ábra). Ezenkívül az EIJ1 felhalmozódása jelentősen alacsonyabb volt az avirulens Pst DC3000-zel (AvrRps4) beoltott növényekben, mint a virulens Pst DC3000-zel beoltott növényekben (7C. ábra), ami azt jelzi, hogy az EIJ1 a virulencia effektor által kiváltott immunválasz alapvető szabályozója a gazdasejtekben. Mivel a Pst DC3000-beoltott eij1-1 növények a Pst DC3000 (AvrRps4) beoltott Col-0 növények rezisztencia fenotípusát utánozták (3. ábra, F, G, 4, C, D és 7, A), Az EIJ1 gátként funkcionálhat, hogy megakadályozza az ETI virulens törzsek általi indukálását. Összefoglalva, azonosítottuk az EIJ1-et, egy chaperon DnaJ fehérjét, és kimutattuk, hogy részt vesz a növényi kórokozókra adott korai immunválaszban. Az EIJ1 és az EDS1 közötti kölcsönhatás elnyomja az EDS1 nukleáris csempészetét, valószínűleg azért, hogy megakadályozza a szükségtelen növényi immunválaszok által okozott rövid távú stimulációt, vagy hogy elősegítse a patogén inváziót manipulációs mechanizmussal, vagy mindkettőt. A mögöttes mechanizmustól függetlenül az EIJ1 allél hatékony potenciális célpontként használható a növényi veleszületett immunitás módosítására a betegségekkel szembeni rezisztencia nemesítésében. Mivel az EIJ1 nem befolyásolja a növények normális növekedését, az EIJ1 funkció genomszerkesztéssel történő gyengülése jelentősen megemelheti a növények betegségekkel szembeni rezisztenciájának szintjét, és csekély hatással van a növekedésre.

Hivatkozások

Alvarez, ME, Pennell, RI, Meijer, PJ, Ishikawa, A, Dixon, RA, Lamb, C (1998) A reaktív oxigén intermedierek szisztémás jelhálózatot közvetítenek a növényi immunitás kialakításában. Cell 92, 773–784

An, C, Mou, Z (2011) A szalicilsav és funkciója a növényi immunitásban. J Integr Plant Biol. 53: 412–428

Armbruster, U, Carrillo, LR, Venema, K, Pavlovic, L, Schmidtmann, E, Kornfeld, A, Jahns, P, Berry, JA, Kramer, DM, Jonikas, MC (2014) Ion antiport gyorsítja a fotoszintetikus akklimatizációt ingadozó fényben környezetek. Nat Commun 5: 5439

Bartsch, M, Gobbato, E, Bednarek, P, Debey, S, Schultze, JL, Bautor, J, Parker, JE (2006) A szalicilsavtól független fokozott betegségérzékenység1 jelátvitelt az Arabidopsis immunitásban és a sejthalálban az FMO1 monooxigenáz szabályozza és a Nudix hidroláz NUDT7. Plant Cell 18: 1038–1051

Ben Rejeb, K, Lefebvre-De Vos, D, Le Disquet, I, Leprince, AS, Bordenave, M, Maldiney, R, Jdey, A, Abdelly, C, Savoure', A (2015) NADPH-oxidázok által termelt hidrogén-peroxid növeli a prolin felhalmozódását só- vagy mannitstressz során Arabidopsis thaliana-ban. New Phytol 208: 1138–1148

Bukau, B, Weissman, J, Horwich, A (2006) Molecular chaperons and protein quality control. Cell 125: 443–451

Caplan, J, Padmanabhan, M, Dinesh-Kumar, SP (2008) Növényi NB-LRR immunreceptorok: a felismeréstől a transzkripciós újraprogramozásig. Sejtgazda mikroba 3: 126–135 10.1016/j.chom.2008.02.010

Dodds, PN, Rathjen, JP (2010) Növényi immunitás: a növény-patogén kölcsönhatások integrált nézete felé. Nat Rev Genet 11: 539–548

Dou, D, Zhou, JM (2012) A gazdaszervezet immunitását felforgató fitopatogén effektorok: különböző ellenségek, hasonló csatatér. Cell Host Microbe 12, 484–495

Du, Y, Zhao, J, Chen, T, Liu, Q, Zhang, H, Wang, Y, Hong, Y, Xiao, F, Zhang, L, Shen, Q (2013) Az I. típusú J-doménes NbMIP1 fehérjék szükséges mind a Tobacco mozaikvírus fertőzéshez, mind a növényi veleszületett immunitáshoz. PLoS Pathog 9: e1003659

Fan, H, Hu, Y, Tudor, M, Ma, H (1997) Specifikus kölcsönhatások az AG K doménjei és az AGL-ek, a DNS-kötő fehérjék MADS doméncsaládjának tagjai között. Plant J 12: 999–1010

Feys, BJ, Moisan, LJ, Newman, MA, Parker, JE (2001) Közvetlen kölcsönhatás az Arabidopsis betegségrezisztencia jelátviteli fehérjék, az EDS1 és a PAD4 között. EMBO J 20: 5400–5411

Garcı´a, AV, Blanvillain-Baufume´, S, Huibers, RP, Wiermer, M, Li, G, Gobbato, E, Rietz, S, Parker, JE (2010) Az EDS1 kiegyensúlyozott nukleáris és citoplazmatikus aktivitásai szükségesek egy teljes növényi veleszületett immunválasz. PLoS Pathog 6: e1000970

Gassmann, W, Hinsch, ME, Staskawicz, BJ (1999) Az Arabidopsis RPS4 bakteriális rezisztencia gén a TIR-NBS-LRR betegségrezisztencia gének családjának tagja. Plant J 20: 265–277

Gloggnitzer, J, Akimcheva, S, Srinivasan, A, Kusenda, B, Riehs, N, Stampfl, H, Bautor, J, Dekrout, B, Jonak, C, Jime'nez-Go'mez, JM (2014) Nonsense- A közvetített mRNS-bomlás modulálja az immunreceptorok szintjét a növényi antibakteriális védekezés szabályozása érdekében. Cell Host Microbe 16: 376-390

Ham, BK, Park, JM, Lee, SB, Kim, MJ, Lee, IJ, Kim, KJ, Kwon, CS, Paek, KH (2006) A Tobacco Tsip1, egy DnaJ-típusú Zn ujjfehérje, toborzódik és erősíti Tsi1-közvetített transzkripciós aktiválás. Plant Cell 18: 2005–2020

Heidrich, K, Blanvillain-Baufume´, S, Parker, JE (2012) Az NB-LRR receptor jelátvitel molekuláris és térbeli korlátai. Curr Opin Plant Biol. 15:385–391

Heidrich, K, Wirthmueller, L, Tasset, C, Pouzet, C, Deslandes, L, Parker, JE (2011) Az Arabidopsis EDS1 a kórokozó effektor felismerését sejtkompartment-specifikus immunválaszokhoz köti. Science 334: 1401–1404

Hu, Y, Zhou, L, Huang, M, He, X, Yang, Y, Liu, X, Li, Y, Hou, X (2018) A gibberellinek alapvető szerepet játszanak az Arabidopsis késői embriogenezisében. Nat Plants 4: 289–298

Huang, M, Hu, Y, Liu, X, Li, Y, Hou, X. (2015) Arabidopsis LEAFY COTYLEDON1 mediates posztembrionális fejlődés via interacting with PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR4. Plant Cell 27: 3099–3111

Jelenska, J, Yao, N, Vinatzer, BA, Wright, CM, Brodsky, JL, Greenberg, JT (2007) A Pseudomonas syringae AJ domén virulencia effektora remodels host kloroplasztokat és elnyomja a védekezést. Curr Biol. 17: 499-508

Jones, J, Dangl, J (2006): A növényi immunrendszer. Nature 444: 323–329

Khan, M, Subramaniam, R, Desveaux, D (2016) Védőkről, csalikról, csalikról és csapdákról: kórokozók észlelése növényekben III. típusú effektor érzékelőkkel. Curr Opin Microbiol 29: 49–55

Kinkema, M, Fan, W, Dong, X (2000) Az NPR1 nukleáris lokalizációja szükséges a PR génexpresszió aktiválásához. Plant Cell 12: 2339–2350

Koch, E, Slusarenko, A (1990) Az Arabidopsis érzékeny a peronoszpóra gomba által okozott fertőzésre. Plant Cell 2: 437–445

Lam, E, Kato, N, Lawton, M (2001) Programozott sejthalál, mitokondriumok és a növényi túlérzékenységi válasz. Nature 411: 848–853

Lee, DW, Kim, JK, Lee, S, Choi, S, Kim, S, Hwang, I (2008) Az Arabidopsis sejtmag által kódolt plasztid tranzit peptidek több szekvencia alcsoportot tartalmaznak, jellegzetes kloroplasztisz-célzó szekvencia motívumokkal. Plant Cell 20: 1603–1622