A Cistanche hatékony összetevői: A fenil-etanol-glikozidok elválasztási és tisztítási módszere

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com

Fenil-etanol-glikozidok izolálása és tisztítása Cistanche Deserticola-ból nagy sebességű ellenáramú kromatográfiával

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young szül., Honghui Zhu szül

Kémiai Tanszék, Changchun Normal University, Changchun 130032, Kína

b Guelph Élelmiszerkutató Központ, Mezőgazdasági és Agri-Food Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Kanada N1G 5C9

Beérkezett 2007. május 31-én; átdolgozott formában érkezett 2007. október 16-án; elfogadva 2007. október 29-én

Absztrakt:

Ötfeniletanoid glikozidok(PhG-k),echinakozidA cisztanozid A, az akteozid, az izoakteozid és az 20-acetil-lakteozid izolálása és tisztításaCistanche deserticolaelőször nagy sebességű ellenáramú kromatográfiával (HSCCC) két kétfázisú rendszerrel, amelyek közül az egyik etil-acetát–etanol–víz (5:0.5:4,5, v/v/v), a másik pedig etil-acetát–etanol–víz elegyből áll. etil-acetát–n-butanol–etanol–víz ({{10}},5:0,5:0,1:1, v/v/v/v). Összesen 28,5 mg echinacoside, 18,4 mg ofcisztanozid A14,6 mgakteozid1412 mg n-butanol-kivonatból 30,1 mg izoakteozidot és 25,2 mg 20-acetil-lakteozidot tisztítottunk meg.Cistanche deserticolaHPLC-vel meghatározva, mindegyik 92,5% feletti tisztaságú. A szerkezeteket retenciós idejük, UV, LC-ESI-MS alapján azonosítottuk negatív ion módban, és NMR-kísérletekkel igazoltuk. Az öt vegyület jellegzetes LC-ESI-MSn fragmentációs mintázatát tárgyaljuk, és nagyon specifikus és hasznos eszköznek találtuk a PhG-k szerkezeti azonosítására ebből a fontos gyógynövényből.

Korona Copyright © 2007 Kiadó: Elsevier Ltd. Minden jog fenntartva.

Kulcsszavak:Cistanche deserticola; feniletanoid;Echinakozid; cisztanozid A;Acteozid; izoakteozid; 20-Acetil-lakteozid; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Bemutatkozás

Cistanche deserticolaA YC Ma egy jól ismert kínai gyógynövény, amelyet széles körben használnak hagyományos, a mai funkcionális élelmiszer-összetevőkhöz vagy étrend-kiegészítőkhöz hasonló készítményekben (Wong, Li, Cheng és Chen, 2006). A C. deserticola fő bioaktív összetevői a következőkfeniletanoidglikozidok (PhG-k), beleértveechinakozid, akteozid, izoakteozid, 20-acetil-lakteozid éscisztanozid A(Kobayashi, Karasawa és Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). A PhG-k széles körben elterjedtek a növényvilágban, és széles körben tanulmányozták különféle biológiai funkcióikat, például májvédő (Xiong és mtsai, 1998), gyulladásgátló, antinociceptív hatásukat (Schapoval et al., 1998) és antioxidáns hatásukat (Cheng). , Wei, Guo, Ni és Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang és Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu és Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu és Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani és Namba, 1996), a szexuális funkció javítását (Xie és Wu, 1993; Zong, He, Wu és Chen, 1996) és a nyugtató hatást (Lu, 1998) .

A fenti jelentős bioaktivitások miatt sürgősen nagy mennyiségű tiszta vegyületre van szükség referencia standardként, valamint a hagyományos kínai orvoslás alkalmazásával kapcsolatos különféle in vitro és in vivo vizsgálatokhoz. Ezért szükségessé válnak hatékony módszerek a PhG-k izolálására, tisztítására és szerkezeti jellemzésére. Az ilyen munkákhoz azonban általában több kromatográfiás lépésre van szükség a minta tisztítására és izolálására (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten és Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin és Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara és Li, 1990; Shoyama, Matsumoto és Nishioka, 1987), ami általában alacsony visszanyerési arányt eredményez a PhG-k irreverzibilis adszorpciója miatt a szilárd hordozón az elválasztás során (Lei et al., 2001). Ezzel szemben a nagysebességű ellenáramú kromatográfia (HSCCC) a hagyományos kromatográfiás technikák hatékony alternatívájává vált egyes PhG-k növényi kivonatokból történő elválasztására (Lei és mtsai, 2001; Li és mtsai, 2005). Lei et al. sikeresen elválasztvaakteozidés 20-acetil-lakteozid a Cistanches salsa-ból (CA Mey.) G. Beck HSCCC használatával (Lei et al., 2001). A cikk szerzői korábban már beszámoltak a szétválásrólakteozidés a Plantago psyllium L.-ből származó izoakteozidot a HSCCC (Li et al., 2005). Mindazonáltal nem publikáltak jelentést több PhG elválasztásáról és tisztításárólCistanche deserticolaHSCCC használatával. A szabványok hiánya miatt LC-MS módszereket fejlesztettek ki és alkalmaztak hatékony analitikai eszközként a növényi kivonatokban található PhG-k gyors jellemzésére és azonosítására (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

Ebben a cikkben egy echinakozid előállítására kifejlesztett HSCCC módszert ismertetünk,cisztanozid A, akteozid, izoakteozid és 20-acetil-lakteozidCistanche deserticola. Az öt elkülönített PhG jellemzése és elemzése LC-vel, in-line ESI tömegspektrometriával és NMR-kísérletekkel párosult. Ebben a cikkben bemutatjuk és tárgyaljuk az öt PhG retenciós idejét, molekulatömegét és jellegzetes fragmensionjait. A vizsgálat során azonosított öt PhG szerkezetét az 1. ábra mutatja.

echinakozidin cistanche

2. Kísérleti

2.1. Vegyszerek és reagensek

Acteozida Sigma–Aldrich-től (Oak-Ville, ON), az echinakozidot a ChromaDextől (Santa Ana, CA) vásároltuk. Az izoakteozidot P. psyllium L.-ből izolálták (Li et al., 2005).Cistanche deserticolaa Peking TongRenTang Medicinal Store-tól (Kína) vásárolták. Az összes oldószer HPLC minőségű volt, és a Caledon Laboratories Ltd.-től (Georgetown, ON) vásároltuk.

2.2. Minta előkészítés

Cistanche deserticola20 g-ot szobahőmérsékleten ötször 12 órán át extraháltunk 100 ml 80%-os vizes etanollal. Az extrakciós keveréket minden alkalommal Whatman No.1 szűrőpapíron (Whatman International Ltd., Maidstone, England) szűrtük. Az egyesített szűrletet vákuumban 40 °C alatti hőmérsékleten 100 ml-re betöményítettük. A kapott vizes oldatot kétszer zsírtalanítjuk, egyenként 100 ml hexánnal, majd egymás után ötször extraháljuk 100 ml n-butanollal. Az n-butanolos rétegeket egyesítjük, és vákuumban, 40 °C alatti hőmérsékleten szárazra pároljuk, így 2,2 g n-butanolos kivonatot kapunk. A kivonatot -20 fokon tároltuk a HSCCC elválasztás előtt.

2.3. HSCCC elválasztási eljárás

A preparatív HSCCC-t Model CCC{{0}} nagysebességű ellenáramú kromatográfiával (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA) végeztük. Ennek a készüléknek három, sorba kapcsolt preparatív tekercs volt (teljes térfogata 325 ml). A berendezés fordulatszáma 0 és 2000 ford./perc között volt szabályozható. A HSCCC rendszert HPLC-szivattyúval (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), Model 450 UV-detektorral (Alltech, USA), Model L 120 E síkágyas rögzítővel (Linseis Inc., Princeton Jct.) szerelték fel, USA), egy frakciógyűjtő (Advantec MFS Inc., USA) és egy mintainjektáló szelep 10-ml-es mintahurokkal.

Etil-acetát–etanol–víz (5:0,5:4,5, v/v/v) elegyet választótölcsérben erőteljesen rázattuk, majd szobahőmérsékleten állni hagytuk, majd szétválni. A két fázist a HSCCC-ben használtuk, miután egyensúlyba kerültek. A teljes tekercses oszlopot először a felső réteggel töltöttük fel, amely állófázisként szolgál. Az alsó réteget (mozgófázis) az oszlop fejvégébe pumpáltuk 1,5 ml/perc áramlási sebességgel. A forgási sebesség 1050 fordulat/perc értékre volt beállítva. 8 ml etil-acetát–etanol–víz (5:0,5:4,5, v/v/v) elegyben oldott mintát (minden alkalommal kb. 230 mg) betöltöttünk a befecskendező szelepbe, miután a rendszer elérte a hidrodinamikai szintet. egyensúlyi. Ezt a kétfázisú oldószerrendszert a megoszlási hányados (K) alapján választottuk ki, amely 0,87, 1,11 és 1,32 voltakteozid, izoakteozid és 20 nm acetil-lakteozid. A K-érték ugyanazon vegyület felső és alsó rétegében lévő koncentrációk aránya volt, HPLC-vel meghatározva (2. ábra). Az oszlop kimenetéből kifolyó folyadékot 254 nm-es UV-detektorral folyamatosan figyeltük, és kémcsövekbe gyűjtöttük, mindegyik csőhöz 4 percre beállított frakciógyűjtővel.

2.4. LC feltételek

statikus automatikus mintavevőt és fotodiódasoros detektort (DAD) használtunk a PhG-k elemzésére az n-butanol kivonatban.Cistanche deserticolaés a HSCCC elválasztásból gyűjtött frakciókat. Az elválasztást Phenomenex ODS-C18 oszlopon (250 × 4,6 mm, 5 lm) végeztük, C18 védőoszloppal. A bináris mozgófázis acetonitrilből (A oldószer) és 2% ecetsavat tartalmazó vízből (B oldószer) állt. Az összes oldószert a

{{0}},45 lm-es szűrő használat előtt. Az áramlási sebességet állandó értéken tartottuk 1.{6}} ml/perc értéken, a teljes futási idő 25 perc volt. A rendszert gradiens programmal futtattuk: 0–20 perc: 90 százalék B – 60 százalék B; 20–22 perc: 60 százalék B – 0 százalék B; és 22–25 perc, 0 százalék B és 90 százalék B között. A befecskendezett minta térfogata 10 l volt. Az érdeklődésre számot tartó csúcsokat 320 nm-en DAD detektorral követtük.

2.5. LC-ESI-MS kísérletek

Az LC-MS kísérleteket Finnigan LCQ DECA ioncsapda tömegspektrométerrel (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) végeztük, amely elektropermet ionizációs (ESI) forrással volt ellátva. A mintákat azonos kromatográfiás körülmények között elemeztük. Az adatgyűjtéshez negatív modellt használtunk. A köpenygáz és a segédgáz áramlási sebességét 96-ra, illetve 7-re (tetszőleges egység) állítottuk be. A kapilláris feszültségét 29 V-ra, hőmérsékletét 350 fokra állítottuk. A bemeneti lencse feszültségét 40 V-ra, a többpólusú RF amplitúdót 540 V-ra állítottuk. Az ESI tűfeszültségét 4,5 kV-ra állítottuk. A csőlencse eltolása 16 V, a többpólusú lencse 1 eltolása 8,20 V, a 2. többpólusú lencse eltolása 10,5 V. Az elektronsokszorozó feszültségét 980 V-ra állítottuk be az ionérzékeléshez.

2.6. NMR az azonosításhoz

Az NMR-spektrumokat Bruker Avance{0}} spektrométerrel vettük fel (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Csak a 2. és 5. vegyületet (standardok nem állnak rendelkezésre) vetettük alá NMR-kísérleteknek. A mintákat CD3OD-ben oldottuk fel.

3. Eredmények és megbeszélés

3.1. HSCCC elválasztás

Az n-butanol kivonatCistanche deserticolaés a HSCCC-vel izolált egyes csúcsoknak megfelelő frakciókat HPLC-vel elemeztük, és az eredményeket a 2. ábra mutatja. Öt fő vegyületet (1-5. csúcs) különítettünk el és detektáltunk 9,2 perc, 10,7 perc, 12,3 perc retenciós időkkel. ,

13,3 perc, illetve 16,2 perc.

A sikeres HSCCC elválasztás nagymértékben függ egy megfelelő kétfázisú oldószerrendszertől, amely ideális megoszlási hányadost (K) biztosít 1 körül a kívánt vegyülethez. Egy ilyen kétfázisú rendszernek ésszerűen rövid beállási időt is kell eredményeznie (Chen, Games és Jones, 2003; Foucault és Chevolot, 1998; Oka, Oka és Ito, 1991). Kísérletünkben négy oldószerrendszer sorozatot választottunk ki a célvegyületek oldhatósága szerintCistanche deserticola. Az egyes fázisokban a koncentráció mérésére HPLC-t használtunk, amelyből a célvegyületek K értékeit számítottuk ki. Két rendszer: etil-acetát–n-butanol–etanol–víz (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) és etil-acetát–víz (1: 1, v/v), korábban a HSCCC-ben használták elválasztásraakteozidés 20-acetil-lakteozid a C-ből. salsa,akteozid, illetve a P. Psylliumból származó izoakteozid (Lei et al., 2001; Li és mtsai, 2005). Bár az első rendszer viszonylag rövid beállási idővel rendelkezett, gyenge teljesítményt nyújtott a PhG-k elkülönítésében.Cistanche deserticola, az 1-es és 2-es vegyületek alacsony K-értékei, a 3-5-ös vegyületek magas K-értékei miatt. A K-értékek nagyon alacsonyak voltak a második rendszer 1–4. vegyületénél, de nagyon magasak az 5. vegyületnél (1. táblázat). Az etil-acetát–etanol–víz (5:{{10}},5:4,5, v/v/v) összetételű módosított rendszer ideális K értéket adott a 3–5. vegyületekre 0,87, 1,11, és 1,32, és ez a három vegyület jó elválasztását eredményezte (3A. és B. ábra). Ez a rendszer azonban létrejött

túl kicsi a K-érték az 1. és 2. vegyülethez, ami miatt a két vegyület együtt eluálódik az oldószerfront közelében (1. frakció a 3A. ábrán). A rendszer további módosítása (etil-acetát–n-butanol–etanol–víz (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/) v) az 1-es és 2-es vegyület K-értékét 0,52-re, illetve 0,92-re emelte, és teljes szétváláshoz vezetett (3C. ábra). A 3A. 230 mg n-butanol kivonatát tartalmazó mintaCistanche deserticolaetil-acetát-etanol-víz (5:0.5:4,5, v/v/v) alkalmazásával. Azokat a frakciókat, amelyekről HPLC-vel megerősítették, hogy csak a 3., 4. vagy 5. vegyületet tartalmazzák, külön egyesítettük, a 3. és 4. vegyületet tartalmazó frakciókat pedig egyesítettük, fagyasztva szárítottuk, és további elválasztás céljából újra alávetettük a HSCCC-nek (3B. ábra). A fent leírt kétlépéses HSCCC elválasztással összesen 14,6 mg, 30,1 mg és 25,2 mg 3-5. vegyületet kaptunk 1412 mg n-butanol kivonatból. A 3C. ábra az 1. és 2. vegyületet (1. frakció az első elválasztásnál) tartalmazó minta HSCCC-elválasztását mutatja etil-acetát–n-butanol–etanol–víz (0.5:0.5) alkalmazásával. :0,1:1, v/v/v/v). Összesen 28,5 és 18,4 mg 1. és 2. vegyületet kaptunk. A fagyasztva szárított 1-5. vegyületek kromatográfiás tisztasága 92,5 százalék feletti volt, amelyeket közvetlenül használtunk LC-ESI-MS és NMR analízisekhez.

3.2. Szerkezeti azonosítás LC-ESI-MS és NMR segítségével

Az 1-es, 3-as és 4-es vegyületek kísérleti azonosítását az autentikus echinakozid retenciós időivel és UV-spektrumadataival egybevágóan sikerült elérni.akteozidés izoakteozid (2. ábra). A 2. és 5. vegyület ismeretlen volt, azonban mind az öt vegyület UV-spektruma nagyon hasonló volt, ami hasonló szerkezeti jellemzőkre utal.

Ezen öt vegyület szerkezetének további vizsgálatára LC-ESI-MSn kísérleteket kíséreltünk meg, és az eredményeket a 4. ábra és a 2. táblázat mutatja. A 2. ábra (1-5) csúcsaihoz kapcsolódó vegyületek intenzív deprotonált molekulaionokat mutattak. [MH] – m/z-nél 785, 799, 623, 623 és 665, negatív módban. Dimer [2M H]-ionokat is megfigyeltek a 2. ábra 1–4. csúcsainál. Ezek megerősítették, hogy az 1–5. csúcsok molekulatömege rendre 786, 800, 624, 624 és 666. Az LC–MSN adatok (2. táblázat) rendkívül hasznos szerkezeti információkat szolgáltattak az öt PhG-ről, például a semleges veszteségről.

Kísérleti eljárás: minden mintából körülbelül 1 mg-ot mértünk be egy 10 ml-es kémcsőbe, amelybe az előre kiegyensúlyozott kétfázisú oldószerrendszer mindegyik fázisából 1 ml-t adtunk. A kémcsövet lezártuk, és 1 percig erőteljesen rázattuk, majd állni hagytuk, amíg teljesen el nem válik. Mindegyik rétegből 100 l-es alikvot részt vettünk ki, és külön-külön vákuumban szárazra pároltuk.<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

a koffeoilcsoport (162), a glükóz rész (162), a ramnóz rész (146), egy CH2 gyök (14) és a COCH2 csoport (42).

Az 1. csúcs LC-ESI-MS értéke a 4A. ábrán látható. A deprotonált molekulaion [MH] – m/z 785-nél nagy mennyiségben és dimer deprotonált molekula

ion [2M H]— m/z 1571-nél negatív módban volt megfigyelhető, ami 786-os molekulatömegre utal, ami megegyezik az echinakozid molekulatömegével. Az m/z 785 ionok LC–MS2 kísérletének további vizsgálata egy fő leányiont eredményezett m/z 623 értéknél (4B. ábra), amely közvetlenül az m/z 785-ből keletkezett egy koffeoil- vagy egy hexóz-rész elvesztésével, mint [M 162 H]—. Az LC–MS3 m/z 623-as spektruma két főiont mutatott 477 és 461 m/z-nél, és két kisebb iont 315 és 179 m/z értéknél (3C. ábra, 2. táblázat). Az m/z 623 és az m/z 477 és 461 fragmensionok közötti tömegkülönbség 146, illetve 162 volt, ami egy ramnóz egység és egy glükóz vagy egy caf-feel rész elvesztésének felel meg [M 162 H]. Az m/z 623 ionok egy koffeoil- és egy ramnóz-csoportot is elvesztettek az m/z 315 ionok előállításához. A 179 m/z értékű ion a kofeoil-rész hasításából keletkezett, a negatív töltés a kofeoil-részen maradt. Az autentikus echinakozidon végzett LC-ESI-MSN kísérlet ugyanazt a fragmentációs mintát mutatta. Ezért az 1. csúcs echinakozidnak bizonyult.

A 2. csúcs esetében az LC-ESI-MS m/z 799-et mutatott deprotonált molekulaionként [MH]- és m/z 1599-et dimer ionként, ami 800-as molekulatömegre utal. Az MS2-kísérletek során az m/z 799 ion alkotott három lányt

ionok m/z-nél 637, 623 és 475 (1. táblázat). A 637 m/z értékű ion ismét közvetlenül az m/z 799 kiindulási ionjából keletkezett a koffeoil [M-162-H]- vagy egy glükózrész [M-162-H]- semleges vesztesége miatt. A 623 m/z értékű ion egy CH2 gyök elvesztésének eredménye. A 475 m/z értékű ion mind a koffeoil-rész [M 162H]-, mind a glükóz-rész semleges veszteségéből keletkezett az anyaionból. Az MS3 kísérlet m/z 637-en három iont produkált 619, 491 és 475 m/z értékekkel, amelyek megfelelnek egy víz, egy ramnóz egység és egy glükóz rész veszteségének. Az m/z 623 leányion az MS3 vizsgálatban m/z 461-et és 315-öt produkált, amely ugyanazokat a fragmentációs útvonalakat követte, mint az echinakozid, mint fentebb tárgyaltuk. Az LC–ESI-MSN adatok alátámasztották a 2. csúcs kísérleti azonosítását, mintcisztanozid A.

A csúcsokra LC-ESI-MS kísérleteket is végeztünk

3. és 4. (tR 12,49 és 13,46 perc a 2. ábrán). Mindkét csúcs azonos [MH]-iont mutatott m/z 623-nál és dimert m/z 1247-nél negatív módban (1. táblázat), jelezve, hogy valószínűleg azonos molekulatömegű izomerek.

624, ugyanaz, mintakteozidés izoakteozid. Az [MH]— ionok MS2 spektruma is ugyanazt a leányiont mutatta, m/z 461, ami a koffeoil rész elvesztését jelzi az anyaionból, m/z 623 (1. táblázat). Hasonló MS3 spektrumot kaptunk a két vegyületre. A 3. csúcs esetében az ion MS3 spektruma m/z 461 mellett három iont képez 315, 161 és 135 m/z mellett. Az m/z 315 a ramnóz elvesztése után jön létre, amint azt korábban tárgyaltuk. Az m/z 161 ion a koffeoil-molekularész hasításából keletkezett, amit további egy vízveszteség követett; a töltés a kofeoil-részen maradt. Az ion m/z 135 [aglycone 18 H]-on a C1 pozícióban lévő glikozidos kötés felhasadásából keletkezett, további egy vízveszteséggel, így a töltés az aglikonrészen maradt. A 4. csúcs MS3-spektruma ugyanazt a fragmentációs utat követte, mint a 3. csúcs, kivéve a hiányzó iont 135 m/z-nél. E két vegyület molekulaionjai és fragmentációs mintázata összhangban van a szakirodalmi adatokkal.akteozidés izoakteozid (Wang et al., 2000), bár találtak egy további m/z 153 iont és

Wang és munkatársai [aglikon H]-ként jelölték meg. (Wang et al., 2000). Ez az ion instabil lehetett és vizet veszített, így kísérletünkben m/z 135 volt. Az MS adatok és a 3. és 4. csúcsok standardokkal egybevágó retenciós ideje alapján ezért ezeket a következőképpen azonosítjuk:akteozidés izoakteozid, ill.

Az 5. csúcs LC-ESI-MS adatai a 2. táblázatban láthatók. Egy deprotonált molekulaion [MH]- (m/z 665) volt az egyetlen ion, amelyet negatív módban találtak, ami 666 molekulatömegű volt. Három leányion Az MS2-kísérletben 623, 503 és 461 m/z-nél figyelték meg (2. táblázat). A 623 és 503 m/z értékű leányionok közvetlenül az anyaionból képződtek egy COCH2-csoport és egy koffeoil-csoport elvesztésével. Az ion m/z 461-nél a koffeoil és a COCH2 rész [M 162 42 H] elvesztéséből származik – az anyaionból. Az MS-kísérletben az m/z 623 m/z 461-et, az m/z 503 pedig három iont adott m/z 485, 461 és 315 mellett. Az m/z 461 leányion MS3 spektruma két iont adott 443-nál. és 315. Az 5. csúcs LC–MSN fragmentációs mintázatát összehasonlítva más, ebben a tanulmányban közölt vegyületekkel és más közölt vegyületekkel (Li et al., 2005; Wang és mtsai, 2000), arra a következtetésre jutottunk, hogy az 5. csúcs szerkezetileg erősen rokon. az akteozidhoz, az egyetlen különbség a COCH3 egység az R3 pozícióban. Ezért az 5. csúcs kísérleti azonosságát 20-acetil-lakteozidként adtuk meg (1. ábra).

A két kísérletileg azonosított vegyület, a 2. csúcs (mint cisztanozid A) és az 5. csúcs (mint az 20-acetil-akteozid) szerkezetét 1H NMR-rel igazoltuk. A 2. és 5. vegyület összes protonjának kémiai eltolódásai és csatolási állandói, amint az a 3. táblázatban látható, megegyezett a közölt NMR adatokkalcisztanozid Aés 20-acetil-lakteozid (Kobayashi et al., 1984, 1987). A jelen tanulmányban 2D NMR-kísérleteket (hosszú távú COSY, ROESY és CH korreláció) is végeztünk, amelyek tovább erősítették az azonosítást (az adatokat nem mutatjuk be).

feniletanoidglikozidok a cistanche-ban

4. Konklúziók

Jelen cikkben a HSCCC-t sikeresen alkalmazták echinakozid izolálására és tisztítására,cisztanozid A, akteozid, izoakteozid és 20-acetil-lakteozid a C. deserticola n-butanol kivonatából. Ezért bevált eszköz a bioaktív anyagok félpreparatív szétválasztására. Eközben a Cistanche deserticolában található öt PhG szerkezetét LC-ESI-MSN segítségével vizsgálták; A PhG-k néhány jellegzetes jellemzőjét találtuk, amelyek lehetővé tették a szerkezetek funkcionális csoportjainak meghatározását. Az LC-ESI-MSN módszer ezért hatékony eszköz a gyors azonosításrafeniletanoidokés glikozidjaik benneCistanche deserticolakivonatok, különösen, ha azokat NMR adatok támasztják alá.

Elismerés

A szerzők szeretnének köszönetet mondani Jun Gu-nak, a Guelph-i Egyetem Nukleáris Mágneses Rezonancia Központjának munkatársa, Ontario, Kanada, az NMR-kísérletekben nyújtott segítségéért. Ezt a projektet részben a kínai Jilin tartomány (20060904-es szám) finanszírozta.

Hivatkozások

Chen, LJ, Games, DE és Jones, J. (2003). Négy flavonoid összetevő izolálása és azonosítása az Oroxylum Indicum magjából nagy sebességű ellenáramú kromatográfiával. Journal of Chromatography A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W. és Liu, CZ (2005).Cistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészetek:Fenil-etanolglikozidok bioszintézise és antioxidáns aktivitása. Process Biochemistry, 40, 3119–3124.

Foucault, AP és Chevolot, L. (1998). Ellenáramú kromatográfia: műszerek, oldószerválasztás és néhány újabb alkalmazás a természetes termékek tisztítására. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R. és Sticher, O. (1988). Teukriozid, a Teucrium Chamaedrys fenilpropanoid glikozidja. Phytochemistry, 27, 1459–1463.

Ő, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC és But, PPH (2000).

Antioxidáns aktivitásafeniletanoidglikozidok Brandisia véletlen. Journal of Ethnopharmacology, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H. és Miyase, T. (1984). Tanulmányok a Cistanchis Herba összetevőiről. III. Új fenilpropanoid glikozidok izolálása és szerkezete,Cisztanozid Aés B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K. és munkatársai. (1987). Újfeniletanoidszármazó glikozidokCistanchetubulosa (Schrenk) Horog. FI Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ és Ito, Y. (2001).

Előkészítő izolálása és tisztításaakteozidés 2'-acetil-akteozid a Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck-től ellenáramú kromatográfiával. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC és társai. (2005). Izolálása és tisztításaakteozidés a Plantago psyllium L.-ből származó izoakteozid nagy sebességű ellenáramú kromatográfiával. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW és Wang, XF (1997). Antilipid-peroxidáció és glikozidok radikális hatása a Cistanches gyógynövényekben. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM és Jia, ZJ (1993). A fenilpropanoid glikozidok védelme a Pedicularisból az oxidatív hemolízis ellen in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Tanulmányok a nyugtató hatásárólCistanche deserticola.Journal of Ethnopharmacology, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M. és Mitsuhashi, H. (1991). Kilenc fenetil-alkohol glikozid a Stachys szeboldzz-tól. Phytochemistry, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H. és Ito, Y. (1991). Megfelelő kétfázisú oldószerrendszerek szisztematikus keresése nagy sebességű ellenáramú kromatográfiához. Journal of Chromatography, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M. és Li, X. (1990). Plantago Asiatica fenolos vegyületek. Phytochemistry, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA és Henriques, AT (1998). A Stachytarpheta cayennensis-ből származó kivonatok és izolált vegyületek gyulladásgátló és antinociceptív hatásai. Journal of Ethnopharmacology, 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M. és Nishioka, I. (1987). A Rehmannia glutinosa Var. beteg gyökereiből származó fenolos glikozidok. Purpurea. Phytochemistry, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY és Wang, XF (2001). A glikozidok tisztító hatásaCistanche deserticolaa szabad gyökökre és annak védelmére az OH által kiváltott DNS-károsodás ellen in vitro. Journal of Chinese Pharmacology, 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y. és Wang, HJ (2000). Elemzésefeniletanoidglikozidok a Cistanchis gyógynövények kivonatában LC/ESI-MS/MS módszerrel. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W. és Chen, F. (2006). 30 kínai gyógynövény antioxidáns aktivitásának szisztematikus felmérése a vasredukáló antioxidáns teljesítmény teszt segítségével. Food Chemistry, 97, 705–711. Xie, JH és Wu, CF (1993). Az etanolos kivonat hatásaCistanche deserticolaa monoamin neurotranszmitterek tartalmáról patkányban

agy. Kínai hagyományos és gyógynövényes drogok, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T. és Kadota, S. (1998). Hepatoprotektív aktivitásafeniletanoidoktól tőlCistanche deserticola. Planta Medica, 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T. és Namba, T. (1996). A feniletanoidok antioxidáns hatásaiCistanche deserticola. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL és Chen, LH (1996). Összehasonlítások közöttCistanche deserticolaYC Ma ésCistanchetubuláris (Schenk) Wight néhány farmakológiai tevékenységre. Journal of Traditional Chinese Medicine, 21, 436–438.