A Cistanche Deserticola-ból származó nyers poliszacharid hatása a ragadós száj- és körömfájás vírusos vakcina ellenanyagára és T-sejt alcsoportjára

Kapcsolat: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Száj- és körömfájás (FMD)által okozott betegségragadós száj- és körömfájás vírus (FMDV)amely a hasított körmű állatok között terjed, súlyosan veszélyeztetve az állatállomány egészségét és óriási gazdasági veszteségeket okozva. A vakcinázást széles körben használják hatékony eszközként a ragadós száj- és körömfájás megelőzésében, és figyelemre méltó eredményeket ért el. A ragadós száj- és körömfájás vírusának inaktivált antigénjének gyenge immunogenitása miatt gyakran szükség van adjuváns hozzáadására, hogy betöltse szerepét [1-2]. Jelenleg a ragadós száj- és körömfájás elleni vakcinákban általánosan használt adjuváns az ISA-206 olajemulzió, amely a sejtek aktivátora, és a humorális immunválaszt is fokozhatja, de mellékhatásai viszonylag nagyok. Bár sokféle adjuváns létezik, mint például az általánosan használt adjuvánsok (alumínium-só adjuvánsok, olaj-víz emulziók stb.) és új adjuvánsok (MF59, növényi poliszacharidok stb.), a ragadós száj- és körömfájás elleni vakcinákhoz használt adjuvánsok még mindig korlátozottak, főleg alumínium-hidroxidot, Span-t, könnyű ásványi olajat stb., mindegyiknek más-más hibája van, például nem kielégítő immunitás vagy erősen mérgező és mellékhatások [3-4]. Ezért sürgősen szükség van a ragadós száj- és körömfájás elleni vakcinák nagy hatékonyságú, alacsony toxicitású új adjuvánsainak kifejlesztésére, amelyek javítják a vakcina immunvédő hatását, ami pozitív jelentőségű a ragadós száj- és körömfájás elleni védőoltások számára.ragadós száj- és körömfájás megelőzése és kezelése.

kínai gyógymódgyógynövényes széles körű alkalmazási lehetőségei vannak a fertőző betegségek megelőzésében és kezelésében. A kínai gyógynövény-gyógyászat nagy múltra tekint vissza az emberi és állati betegségek kezelésében. A vakcina-adjuváns-kutatás területén hazai és külföldi kutatók különféle kínai gyógynövényekből származó poliszacharidokat vontak ki, hogy tanulmányozzák adjuváns hatásukat, mint például a ginzeng poliszacharidok, astragalus poliszacharidok, tuckahoe poliszacharidok, epimedium poliszacharidok stb. immunfunkciók emberek és állatok számára. Jó promóciós hatása van, és új jelölt adjuvánssá válik [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)a Dang család növénye. Ez egy gyakran használt tápláló kínai gyógynövény, és tápláló élelmiszerként használták hosszú távú fogyasztásra. Az elmúlt években a kutatók rengeteg kutatást végeztek a Cistanche-ból származó poliszacharid kémiai szerkezetével és farmakológiai aktivitásával kapcsolatban, és megállapították, hogy hatóanyagai főleg poliszacharidokat, teljes fenil-etanol-glikozidot, alkaloidokat stb. viszonylag magas és állítható. Az immunrendszer antioxidáns és öregedésgátló hatással rendelkezik [8-9].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

Az előzetes tanulmányok azt találták, hogy a nyers cisztán sivatagi poliszacharid és az OVA-val immunizált egerek kombinációja jelentősen növelte az OVA-specifikus antitestek szintjét, és az influenza elleni vakcinával való kompatibilitás növelheti az influenza elleni oltás antitestszintjét [10-11]. Ennek fényében ez a tanulmány a Cistanche deserticola nyers poliszacharidját használta az inaktivált ragadós száj- és körömfájás elleni vakcina adjuvánsaként, és kiválasztott vízoldható adjuvánsokat, amelyek jelentős immunerősítő hatással és kis mellékhatásokkal rendelkeznek, ígyA Cistanche deserticola nyers poliszacharidja hatékonyan használható a ragadós száj- és körömfájás elleni vakcinák új adjuvánsaként.

A szer elkészítése

Ebben a tanulmányban,Nyers poliszacharid a Cistanche deserticola-ból (CDCP)-vel kombináltákragadós száj- és körömfájás vírusavakcinák elkészítésére. Az ICR egereket izom útján immunizáltuk. Kimutatták az immunizálás hatását az egerek humorális és celluláris immunválaszaira, és megfigyelték biztonságosságukat. A ragadós száj- és körömfájás elleni vakcina új, biztonságos adjuvánsának kifejlesztése referenciaként szolgál.

Nyers poliszacharid a Cistanche deserticola-ból

A Cistanche deserticola (CDCP) nyers poliszacharid hatása az FMDV-specifikus antitestek szintjére a szérumban

A szérum IgG szintje fokozatosan növekvő tendenciát mutatott a kezdeti járvány után 14, 21 és 28 nappal (1. ábra). A kezdeti immunizálást követő 14. és 21. napon az FMDV Ag/CDCP csoport antitestszintje szignifikánsan magasabb volt, mint az FMDV-Ag adjuvánsmentes csoporté (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). 28 nappal a kezdeti immunizálás után, összehasonlítva az adjuváns nélküli FMDV-Ag-vel, az FMDV-Ag/CDCP IgG antitestszintje jelentősen megnőtt (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

A Cistanche deserticola (CDCP) nyers poliszacharidja a lép limfociták proliferációjára

21 nappal a kezdeti immunizálás után az MTT módszert alkalmaztuk a Cistanche deserticola nyers poliszacharid lép limfocitákra gyakorolt ​​proliferációs hatásának kimutatására. Amint a 2. ábrán látható, az FMDV-Ag-stimulált lép limfociták in vitro után az FMDV-Ag/CDCP csoport limfocita stimulációs indexe szignifikánsan magasabb volt, mint az FMDV-Ag adjuváns nélküli csoporté (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). ConA és LPS általi stimuláció után jelentősen fokozhatja a lép limfociták proliferációját (P<>

A Cistanche deserticola (CDCP) nyers poliszacharid hatása a CD4 plusz és CD8 plusz T-sejtek expressziójára

21 nappal a kezdeti immunizálás után teszteltük a CDCP és az FMDV-Ag hatását a CD4 plusz és CD8 plusz T-sejtekre egerek lépében. Az eredmények a 3-A D ábrán láthatók. A CD3 plusz, CD4 plusz, CD3 plusz, CD8 plusz T-sejt alcsoportok aránya az FMDV-Ag/CDCP csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint az FMDV-Ag adjuvánsé. -szabad csoport (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). Az FMDV-Ag adjuvánsmentes csoport nem fokozta a CD4 plusz és CD8 plusz T-sejtek expresszióját.

A Cistanche deserticola (CDCP) nyers poliszacharidjának hatása a CD4 plus, CD44 plus és CD8 plus CD44 plus effektor T-sejt-alcsoportokra

A Cistanche deserticola-ból származó nyers poliszacharid effektor T-sejtekre gyakorolt ​​hatásának megfigyelésére áramlási citometriát alkalmaztunk a CD4 plusz, CD44 plus és CD8 plusz, CD44 plus expressziójának kimutatására egerek lépsejtjeiben immunizálás után. Az eredmények a 4-Kr. ábrán láthatók. A CD4 plus , CD44 plus és CD8 plus , CD44 plus százalékos aránya az FMDV Ag/CDCP csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint az FMDV-Ag adjuvánsmentes csoportban (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

A Cistanche deserticola (CDCP) nyers poliszacharid hatása az egerek növekedésére

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). Az FMDV Ag/CDCP csoportba tartozó egereknél nem volt granuloma az injekció beadásának helyén, aragadós száj- és körömfájás vírusaAz ISA 206 olajadjuvánst tartalmazó vakcinacsoportban granulomák voltak az injekció helyén.

Az adjuvánsokat régóta használják különféle oltóanyagokban, elősegíthetik az oltások immunerősítő hatását, csökkenthetik a vakcina adagját, és nagyon fontos szerepet játszanak a fertőző betegségek megelőzésében és járványainak megelőzésében [3]. Az új vakcinák kifejlesztésével, legyen szó az állatorvosi vakcinakutatásról vagy a humán vakcinakutatásról, egyre magasabbak az oltóanyag-adjuvánsok mennyiségi és minőségi követelményei. Az ideális új adjuvánsnak hatékonyan serkentő hatással kell lennie a szervezet sejtes vagy humorális immunitására, hosszan tartó és stabil hatásúnak kell lennie, csökkentenie kell az oltások számát, kevesebb mellékhatással kell rendelkeznie, valamint könnyen előállíthatónak és könnyen beadhatónak kell lennie [13]. .

Ban benragadós száj- és körömfájás vírusaaz inaktivált vakcinákhoz általában olajadjuvánsokat adnak a vakcina immunitásának fokozása érdekében, de vannak hátrányai is, mint például a magas immunstressz. Az olajos adjuvánsokhoz képest a vizes adjuvánsok használata egyszerű, bármilyen arányban elegyedhetnek a vakcina antigénjeivel, nem igényelnek emulgeálást, és könnyen beadhatók. Ezért a víz adjuvánsok jó alkalmazási kilátásokkal rendelkeznek az FMDV-vakcinákban. A kínai növényi poliszacharidok jó immunmoduláló hatást fejtenek ki a biztonság, a pleiotrópia és a függetlenség terén, és az új vakcina-adjuvánsok kutatásának forró pontjává válnak [14]. Az FMDV vakcina adjuváns kutatásának területén néhány kínai növényi poliszacharidot használnak új adjuvánsok kutatása során. Például az astragalus poliszacharidokat FMDV-vakcinák adjuvánsaiként használják. Az orális immunizálás fokozhatja a humorális és celluláris immunitást, alacsony dózisok pedig gátolhatják a dendrites sejtek érését, a nagy dózisok pedig elősegíthetik érettségét.

A kutatók a Baizuból származó poliszacharidokat és a belőle származó poliszacharidokat is felhasználtákEucommiaadjuvánsként aragadós száj- és körömfájás vírusavakcinát, hogy felfedezzék immunerősítő hatásukat [15-17]. A különböző kínai gyógynövénykészítmények hatóanyag-tartalmának nagy különbségei miatt a betegségek megelőzésében és az emberi egészségben nagy jelentőséggel bír az immunológiai aktivitással rendelkező kínai gyógynövényekből származó széles körű szűrés a megfelelő adjuvánsok megtalálása érdekében, és egyben kutatási központ is a gyógyítás területén. vakcinológia. Ebben a kísérletben aNyers poliszacharid a Cistanche deserticola-bóladjuváns jelöltként választották aragadós száj- és körömfájás vírusavakcina, és kísérleti vizsgálatot végeztek az adjuváns hatásról. A fertőző betegségek megelőzése és kezelése elsősorban a B-limfociták által közvetített humorális immunválaszon és a T-limfociták által közvetített celluláris immunválaszon múlik [18-20].

Mert aragadós száj- és körömfájás vírusavakcina ténylegesen izomimmunizálást alkalmaz a gyártás során, a kísérletben az egerek immunizálására az izom-útvonalat, a CDCP immunerősítő hatását pedig a CDCP antitest-termelésre és T-sejt-alcsoportokra gyakorolt ​​hatásának értékelésével, valamint biztonságosságának értékelésével értékelik. Előzetes megfigyelések. A vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy a Cistanche cistanche nyers poliszacharidja növelheti az FMDV-re specifikus antitestek szintjét az immunizálás után 14 és 21 nappal, és nincs szignifikáns különbség az ISA-206 adjuváns hatása és szintje között. ; az immunizálást követő 28. napon az antitestszint alacsonyabb, mint az ISA-206 olajadjuvánsé, ami azt mutatja, hogyA Cistanche deserticola nyers poliszacharidja fokozhatja a humorális immunitás szintjétaz immunizálást követő bizonyos időn belül. A limfocita proliferációs ráta pozitívan korrelál a stimulációs index szintjével. Az MTT kísérletbenA Cistanche deserticola nyers poliszacharidja elősegítheti a limfociták szaporodásátFMDV-antigén stimulálja, ConA és LPS. A T-sejt alcsoportkísérletben a CDCP nemcsak a CD4 plusz és CD8 plusz T-sejtek expresszióját képes növelni, hanem a CD4 plusz, CD44 plusz és CD8 plusz, CD44 plusz effektor T-sejtek szintjét is, és nincs szignifikáns különbség. az ISA-206 adjuváns csoportból; biztonságban Szexuális kísérletekben azt találták, hogy az ISA-206 oltóanyag-csoportba tartozó egereknél granulomák voltak az injekció beadásának helyén, míg a CDCP vízadjuvánst tartalmazó vakcinacsoportban nem találtak granulomát, ami előzetesen azt jelezte, hogyA Cistanche deserticola nyers poliszacharidja jó biztonsággal rendelkezik. A további biztonság érdekében megfelelő kísérleteket kell végezni a megerősítéshez.

Nyers poliszacharid a Cistanche deserticola-bólnemcsak a humorális immunválaszt fokozta, hanem a limfociták proliferációs szintjét is, elősegítette a CD4 plusz és CD8 plusz T-sejt alcsoportok szintjét, aktiválta az effektor T-sejteket, és az injekció beadása után nem találtak granulomát az injekció helyén. Az egerek normálisan nőnek, és nem viselkednek rendellenesen. Ezek a kutatási eredmények alapot adnak a további kutatásokhozNyers poliszacharid a Cistanche deserticola-bólúj adjuvánsként aragadós száj- és körömfájás vírusavakcina, és hasznos referenciaként szolgál a poliszacharid adjuvánsok más vakcinákban való alkalmazásához.

Referencia

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Ragadós száj- és körömfájás elleni vakcinák［J］. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］Park JH. A ragadós száj- és körömfájás járványok elleni továbbfejlesztett vakcinák követelményei［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvánsok ragadós száj- és körömfájás vírus elleni vakcinákhoz: közelmúltbeli fejlődés［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13(11):1377-1385.

［4］Parid AS. A ragadós száj- és körömfájás vírusa elleni vakcinázás: stratégiák és hatékonyság［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Növényi eredetű gyógyszerek: az immunológiai adjuvánsok új osztálya［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D és társai. Poliszacharidok, mint vakcina adjuvánsok［J］. Vakcina, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ és társai. A Ginkgo biloba immunmoduláló funkciói poliszacharidot hagynak a vvIBDV vakcinán［J］. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH és társai. A Cistanche［J］ kutatása és ipari fejlesztése. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W et al. Cistanche tubulosa［J］ poliszacharidok extrakciója, tisztítása, jellemzése és antioxidáns hatása. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.