A Cistanche glikozidjainak hatása a szinaptikus morfológiai plaszticitásra öregedő felgyorsult egerekben
Mar 11, 2022
Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
LIAN Juanqi1, WANG Lu2, ZHAO Fujun3, LIN Shuai3, YAN Xusheng4, JIA Jianxin4, CAI Zhiping4
(1. Baotou Medical College Graduate School of Baotou Medical College 2014-es évfolyama, Baotou 014060, Kína)
(2. A 2015-ös klinikai orvostudomány 12. osztálya a Baotou Medical College-ban)
(3. 2013. évi törvényszéki orvostani osztály 1. osztálya a Baotou Medical College-ban)
(4. A Baotou Medical College Emberi Anatómiai Tanszéke)
ABSZTRAKT
Célkitűzés: A hatásának vizsgálataglikozidjaicistanche (GCs) a hippocampalis neuronok szinaptikus plaszticitására 8-ra hajlamos öregedéssel felgyorsult egerekben (SAMP8).Mód: 40 egeret véletlenszerűen osztottak fel kontrollcsoportra, vivőanyag-csoportra, alacsony dózisú csoportra (2,5 mg/kg ·d GC-vel), közepes dózisú csoportra (5.0 mg/kg GC-vel). d) és nagy dózisú csoport (10,0 mg/kg · d) beadott GC-k. A kontrollcsoport egerei nem kaptak semmilyen beavatkozást; a beadott csoportok és a vivőanyag-csoport intraperitoneális beadása (GC/sóoldat) vagy sóoldat 30 napon át esett át. A normál piramis neuronok számát a hippokampusz CA1 régiójában Nissl festéssel számoltuk meg; a szinapszisokban lévő dendrit tüskék számát Golgi-festéssel számoltuk meg, a PSD{11}} fehérje expresszióját pedig immunhisztokémiával határoztuk meg.Eredmények: A kontrollcsoporthoz képest a GC-k szignifikánsan megnövelték a normál piramis neuronok számát a hippocampális CA1 régióban (P<0.05) and="" increased="" the="" number="" of="" dendritic="" spines="" in="" synapses="" (p=""><0.05). the="" expression="" levels="" of="" psd-95="" in="" administered="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p=""><0.05), and="" the="" effect="" in="" the="" middle="" dose="" group="" was="" the="" most="" significant.="">Következtetés: A GC-k javíthatják a hippocampális piramissejtek túlélési arányát és javíthatják a szinaptikus plaszticitást.
KULCSSZAVAK: Cisztanche glikozidjai (GC-k); Senescence gyorsított egér; Dendritikus gerinc; PSD – 95
A társadalmi népesség elöregedésével egyre súlyosabbá válik a prevalencia aAlzheimer kór(AD) fokozatosan növekedett, ami súlyos terhet rótt a betegek családjára és a társadalomra
[1]. Az AD fő klinikai megnyilvánulásai a kognitív károsodás és a memóriazavar, az eset fő jellemzői pedig az extracelluláris amiloid lerakódások és az intracelluláris neurofibrilláris gubancok által alkotott szenilis plakkok [2]. Az AD patogenezise még mindig nem egyértelmű. A szinapszisok kóros elváltozásait tekintik az AD memória és a kognitív diszfunkció neurobiológiai alapjának. A szinapszisokban bekövetkező abnormális változások az AD patogenezisének központi láncszemei lehetnek. A Senescence Accelerated Mouse (SAM) egy beltenyésztett öregedő egérmodell. P8 alvonala egységes és stabil öregedési patológiás jellemzőkkel rendelkezik, ami a tanulás és a memória, valamint a felismerés fokozatos hanyatlásában nyilvánul meg a hónapok növekedésével. Az ismert diszfunkció és kóros megnyilvánulások hasonlóak az AD betegekéhez, így a SAMP8 egerek ideális állatmodellek az öregedéssel összefüggő tanulási és memóriazavarok mechanizmusának tanulmányozására.
Ennek a cikknek a célja a sejtek túlélési arányának elemzése, a dendritikus gerinc sűrűségének mérése és a posztszinaptikus tömörülések kimutatása a GC-k lehetséges mechanizmusának feltárása érdekében.(glikozidjaicistanche)a hippocampalis neuronok szinaptikus morfológiai plaszticitásának befolyásolása gyorsan öregedő egerekben, az AD-vel kapcsolatos kezelés céljábólcistancheglikozidok(GCs) A térbeli tanulás és memóriazavar elméleti és kísérleti alapot ad.
1 Anyag és módszer
1.1 Kísérleti állatok és csoportosítás 40 hím 10-hónapos SAMP8 egér (a Tianjin Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetemtől vásárolt), tiszta környezetben, környezeti hőmérsékleten (24.0 ±) nevelt 1.0) fok , páratartalom (50.0 ± 5,0) százalék , ingyen étel és víz. A kísérlet megkezdéséhez az állatokat 11 hónapos korukra nevelték. Az állatokat véletlenszerűen 5 csoportra osztották (8 állat/csoport): vak kontroll (kontroll) csoport, oldószeres kontroll (vivőanyag) csoport,cistanche összes glikozid(GC-k) alacsony dózisú csoport [2,5 mg / (kg · d)], közepes dózisú csoport [5. 0 mg / (kg · d)], nagy dózisú csoport [10.0 mg / (kg · d)]. A kontrollcsoportba tartozó állatok nem kaptak beavatkozást. Az alacsony dózisú csoportba tartozó állatok 2,5 mg/(kg ·d), a közepes dózisú csoportba tartozó állatok 5.0 mg/(kg ·d) GC-t kaptak. a nagy dózisú csoport GC-t kapott. 0 mg/(kg ·d), a hordozó csoportba tartozó állatok ugyanannyi normál sóoldatot kaptak. Gyógyszerek vagy fiziológiás sóoldat folyamatos intraperitoneális injekciója 30 napig, 0,5 ml/nap.
1.2 A minta előkészítése és feldolgozása Az állatokat az utolsó adagolás után 24 órával leöltük, elaltattuk, és a nyakukat leöltük. Vágja le a mellüreget, hogy szabaddá tegye a szívet, vágja le a jobb pitvar függelékét, hogy kiengedje a vért, és szúrja be a perfúziós tűt a bal kamrába. 100 ml normál sóoldat beadása után 4%-os paraformaldehidet tovább adtunk, amíg az egerek végtagjai megmerevedtek. Vegyük az agyat, és helyezzük 4 százalékos paraformaldehidbe több mint 24 órára.
1.3 Gyógyszerek és reagensek GC(glikozidjaicistanche) a Kínai Hagyományos Kínai Orvostudományi Akadémiától vásárolták, a posztszinaptikus sűrűség -95, a PSD -95 értéket az Epitomictól, a Coomassie Brilliant Blue CBBG 250 készletet a Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Engineering Institute-tól vásárolták, a DAB készletet az immunhisztokémiától vásárolták. Peking Zhongshan Jinqiao Biotechnológiai Vállalat.
1.4 Nissl festés és sejtszám Az agyszövet 4 százalékos paraformaldehid rögzítése több mint 24 órán keresztül, trimmelés és víztelenítés gradiens alkohollal, átlátszó xilollal, viaszbemerítés, hagyományos paraffin beágyazás, 5 μm vastag sorozatmetszet. Szeleteket vágunk és viaszmentesítjük, 37 fokon 60 percig festjük 1 százalék toluidin kékkel, 5 perc x 3-szor mossuk, 95 százalék alkohollal, 100 százalék alkohollal megkülönböztetjük. Víztelenítés, átlátszó xilol, semleges gumival rögzítjük, megfigyelés alatt mikroszkóp. Mindegyik csoport azonos hippocampális metszetének CA1 területét véletlenszerűen választottuk ki 3 megfigyelési mezőből (×100), megszámoltuk a normál piramissejtek számát 1 mm-en belül, és az átlagot vettük az elemzéshez.
1.5 Módosított Golgi-festés Tegye a javított agyszövetet Golgi-Cox festőoldatba, védje a fénytől 14 napig, és cserélje ki az oldatot 2 naponta; helyezzük az agyszövetet 30 százalékos szacharózba, és tegyük hűtőbe 4 fokra. A szövetet a fenékre süllyedés után fel lehet vágni; rezgő mikrotom metszéshez és festéshez; fixer megoldás fejlesztéshez; a rögzítőlemez szárítása, megfigyelése és mikroszkóp alatti számlálása. Figyelje meg a hippocampus CA1 és CA3 neuronális csúcsának dendritgerincének változásait az egyes egércsoportokban, és számítsa ki a dendritgerinc sűrűségét.
1.6 Az immunhisztokémiai metszeteket paraffinmentesítettük vízzel, 3 százalékos H2O2-vel inkubáltuk 1 0 percig az endogén peroxidáz aktivitás megszüntetése érdekében, desztillált vízzel mostuk 5 percig × 3-szor, javítottuk nagynyomású mikrohullámú sütővel, mostuk PBS-sel. 5 perc x 3-szor, a kecskeszérumot 30 percig szobahőmérsékleten blokkoltuk, nyúl anti-egér PSD-95 primer antitestet csepegtettünk, éjszakán át 4 fokon, majd 5 percig PBS-sel mostuk. 3 alkalommal cseppenként biotinnal jelölt másodlagos antitestet adtunk hozzá, 37 fokon 2 órán át inkubáltuk, 5 percig PBS-sel mostuk x 3-szor, csepegtettük a torma-peroxidázzal jelölt sztreptavidint, mossuk PBS-sel 5 percig x 3-szor, mossuk DAB 2 percig, ellenfestés hematoxilinnel, dehidratált gradiens alkohollal, átlátszó xilollal, és rögzítse. 1.7 Képfeldolgozás és statisztikai elemzés. Mindegyik csoport azonos hippocampális keresztmetszetét választottuk ki megfigyelésre. Három látómezőt (×100) véletlenszerűen választottunk ki a CA1 területen, hogy megszámoljuk a normál piramissejtek számát 1 mm-en belül, és az átlagot elemezzük. Az immunhisztokémia eredményeit IPP 7.0 képelemző szoftverrel mértük. A kísérleti adatokat SPSS 17.0 szoftverrel elemeztük, és egyutas ANOVA-t használtunk a többmintás átlagok páronkénti összehasonlítására. P<0.05 was="" considered="" statistically="">
Anti-Alzheimer-kór
2 eredmény
2.1 Az összes glikozid hatásacistanchea normál piramissejtek számáról SAMP8 egerek hippocampusában Nissl festés A Nissl festés eredményei azt mutatták, hogy a kontrollcsoport CA1 területén csökkent a neuronok száma, az elrendeződés rendezetlen volt, és a sejtek többsége morfológiailag abnormális volt. valamint lízis és nekrózis. A sejtek morfológiája a GC-ben(glikozidjaicistanche)csoport viszonylag tiszta és teljes volt, nagyszámú kiemelkedés látható, a Nissl test lila volt, a sejtmagok mélyen festettek, tiszták és központosítottak, a magok pedig nem festettek. A vivőanyag-csoport sejtmorfológiája hasonló a kontrollcsoportéhoz. A sejtszám azt mutatta, hogy a normál piramis neuronok száma nőtt a kezelt csoport CA1 területén (P<0.05); the="" difference="" between="" the="" medium="" and="" high="" dose="" groups="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), the number of normal pyramidal neurons To a certain extent, it shows an upward trend with increasing dose. There was no significant difference in the number of normal pyramidal cells between the vehicle group and the control group (P>0.05). Lásd az 1. táblázatot.
1. táblázat: A Cisztanche-glikozidok hatása a SAMP8 egér hippokampális nisz festésére, a normál piramissejtek számára és a dendritikus tüskék számára (db)
a-t összehasonlítjuk a t kontrollcsoporttal=0.193, P=0.582; b összehasonlítása a t kontrollcsoporttal=13.621, P=0.008; c-t összehasonlítjuk a t kontrollcsoporttal=21,798 , P=0,005; d összehasonlítása a t kontrollcsoporttal=18.326, P=0.006; e-t összehasonlítjuk a t kontrollcsoporttal=0.244, P=0.463; f összehasonlítása a kontrollcsoporttal Összehasonlítás: t=10.903, P=0.010; g-t összehasonlítjuk a t kontrollcsoporttal=21,817, P=0,005; h-t a t=15.572, P=0 kontrollcsoporttal hasonlítjuk össze. 007.
2.2 Azaz összes glikozid hatásacistanche A dendrittüskék sűrűségéről SAMP8 egerekben Golgi festés azt mutatta, hogy a kontrollcsoportban csökkent a dendrittüskék száma, és csökkent a sűrűség. Az állatoknak GC adását követően a dendrittüskék száma és sűrűsége megnőtt, és nagyszámú kitüremkedést lehetett látni (P=0.048). Nem volt statisztikailag szignifikáns különbség a közepes dózisú és a nagy dózisú csoport között (P=0,853). A dendritgerincek száma és sűrűsége A fokszám emelkedő tendenciát mutat a dózis növekedésével. hordozócsoport és kontroll
A csoportban a dendrittüskék számának és sűrűségének nincs statisztikai szignifikancia (P=0.764). Lásd az 1. táblázatot.
2.3 A hatásaCistancheglikozidok a PSD-95 expressziójára SAMP8 egerekben A PSD-95 immunhisztokémiai kvalitatív kimutatása azt mutatta, hogy a kontrollcsoportban kisebb volt a PSD-95 expressziója, a sejttest festődése világosabb volt, és a a pozitív expressziós arány alacsonyabb volt. GC-k in vitro kiegészítése után a sejttest mélyebben festődött, és a PSD-95 expressziója és pozitív aránya nőtt (t=5.751, P<0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" middle-dose="" group="" and="" the="" high-dose="" group="" (t="1.077," p="">0.05). A PSD-95 kifejeződése bizonyos mértékig növekvő dózisokkal emelkedő tendenciát mutatott. jármű
There was no statistically significant difference in PSD-95 expression between the control group and the control group (t = 0.585, P>0.05).
3 Vita
A PSD-95 a posztszinaptikus fő összetevője, és számos szinaptikus funkcióhoz kapcsolódik, beleértve az ioncsatornákat, a szinaptikus aktivitást, az intracelluláris jelátviteli útvonalakat stb. [3]. A PSD-95 a rokon fehérjéket az NMDA-receptor jelátviteli útvonalában csoportosítja, és egy receptor-szignál molekula-szabályozó molekula-célzó molekula komplexet képez [4], amely kulcsszerepet játszik a jelátviteli folyamatban. Az NMDA receptorok részt vesznek a hosszú távú potencírozás (LTP) indukciójában a hippocampus CA1 régiójában, valamint a tanulási és memóriafolyamatban [5]. A PSD-95 kulcsfontosságú szabályozó szerepet játszik ebben a folyamatban, és fehérjetartalma egy másik molekuláris markerként használható a szinaptikus plaszticitás mérésére. Korábbi vizsgálataink során bebizonyítottuk, hogy a GC(glikozidjaicistanche)javíthatja a tanulási és kognitív károsodást SAMP8 egerekben, de nem tisztáztuk lehetséges sejtmorfológiai mechanizmusát. A kísérlet célja annak lehetséges sejtmorfológiai mechanizmusának tanulmányozása.
Ebben a kísérletben a piramissejtek túlélési arányának és szinaptikus plaszticitásának javítása a GC-kben(glikozidjaicistanche)csoport jobb volt, mint a hordozó csoport és a kontrollcsoport. Látható, hogy a GC-k jelentősen javították a piramissejtek morfológiáját. A kísérleti eredmények azt mutatják, hogy nagyobb dózisú GC-k jobb hatást fejthetnek ki. A közepes dózisú csoport és a nagy dózisú csoport összehasonlításából látható, hogy a hatás nem változik jelentősen, amikor a dózis elér egy bizonyos koncentrációt. Ezért annak érdekében, hogy a GC-k használata során elkerüljük a pazarlást és a mellékhatásokat, a legmegfelelőbb koncentrációt kell kiválasztani [6].
Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a GC(glikozidjaicistanche)javíthatja a SAMP8 egerek tanulási és kognitív károsodását a piramissejtek túlélési arányának javításával [7]. Vannak adatok arra is, hogy a GC-k javíthatják a neurodegeneratív betegségeket azáltal, hogy elősegítik az idegi őssejtek proliferációját és differenciálódását [8-10]. A szerző úgy véli, hogy a GC-k AD-t javító mechanizmusa a szinaptikus morfológia plaszticitásának javításával és a piramissejtek számának fenntartásával érhető el, ami megalapozza a GC-k végső felhasználását a klinikai AD megelőzésében és kezelésében.
Hivatkozások
[1] Chen Juluo, Chen Xingui, Hu Panpan stb. Az Alzheimer-kórban szenvedő betegek funkciókat használnak Előzetes kutatás [J]. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2013, 22 (10): 889-891.
[2] Jin Chunhui, Liu Xiaowei, Yuan Jianmin és mások. Sorting Receptor 1 Gene Single Nucleozid Korreláció a savas polimorfizmus és a szórványos Alzheimer-kór között［J］. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2014, 23 (5): 427-429.
[3] Schliebs R, Arendt T. A kolinerg rendszer jelentősége az agyban az öregedés során és az Alzheimer-kórban［J］. Neural Transm, 2006, 113 (11): 1625-1644.
[4] Soriano FX. A halál előtti NMDA receptor jelek specifikus célzása az NR2B PDZ ligandumtól eltérően támaszkodva［J］． J Neurosci, 2008, 28 (42): 10696-10710.
[5] Selkoe DJ. Az amiloid béta-protein oldható oligomerjei rontják a szinaptikus plaszticitást és viselkedést ［J］． Behav Brain Res, 2008, 192 (1): 106 -113.
[6] Huang Zonghui, Chen Guanmin, Zhao Kangtao és mások. Tanulmány a Cistanche ［J］ toxicitásával kapcsolatban. China Journal of Hygiene Inspection, 2014, 24 (8): 1098 -1100.
[7] Jia Jianxin, Song Wei, Yan Xusheng és mások. A cistanche összes glikozidja hatással van a SAMP8 egerekre. Az inter-learning és a memória hatása és mechanizmusa［J］. Journal of Baotou Medical College, 2014, 30 (6): 6-8.
[8] Xiao Q, Yan P, Ma X et al. Az asztrocita lizoszóma biogenezisének fokozása elősegíti az A kiürülést és gyengíti az amiloid plakkok patogenezisét［J］． J Neurosci, 2014, 34 (29): 9607-9620.
[9] Li QJ, Tang YM, Liu J és mtsai. Parkinson-kór kezelése NURR1-et túlzottan expresszáló C172 idegi őssejtekkel a NURR1 gént (J) tartalmazó rekombinált republic-deficit adenovírussal. Synapse, 2007, 61 (12): 971-977.
[10] Qin Wei, Wei Wei, Xu Qian és mások. Cistanche a C172 idegi őssejtek proliferációjáról A [J] hatása. Strait Pharmacy, 2015, 27 (12): 263-265.
