A poligona-poliszacharóz hatása a ferroptózisra diabéteszes nephropathiás patkányokban

Kulcsszavak:diabéteszes nefropátia;poligona-poliszacharóz; ferroptosis; transzferrin; FTH1; GPX4

 

Diabéteszes nefropátia(DN) egy súlyos mikrovaszkuláris szövődménydiabetes mellitus[1] A DN komolya cukorbetegség mikrovaszkuláris szövődményeimellitus [1], amely általában korai stádiumban mikroalbuminuria formájában jelentkezik, majd progresszív kialakulása követi. A korai stádium általában mikroalbuminuriával jelentkezik, amit a masszív proteinuria, a glomeruláris filtrációs ráta progresszív csökkenése és a vér kreatininszintjének fokozatos növekedése követ [2]. ]. a kreatinin fokozatos növekedése[2]. Ha nem kezelik, a betegség krónikus betegséghez vezethet. Ha nem kezelik, krónikus, progresszív vesekárosodáshoz és végül végstádiumú betegséghez vezethet. Ha nem kezelik, krónikus progresszív vesekárosodáshoz és végül végstádiumú veseelégtelenséghez vezethet[3]. Vashalál A vashalál a telítetlen zsírsavak vastól függő felhalmozódása A vashalál a telítetlen zsírsavak vastól függő felhalmozódása, a foszfolipid oxidációja, ami sejthalálhoz vezet, főként a vashalál fő megnyilvánulása a vasfüggő intracelluláris lipid-peroxidok[4] . [4] . Tanulmányok Megállapították, hogy a vese tubuláris hámsejt-károsodása szorosan összefügg a vashalállal[5]. Wang és mtsai.

Wang és munkatársai[6] azt találták, hogy a glutation-peroxidáz 4 (GPX4) expressziója a vese tubuláris intersticiális (GPX4) expressziójában szorosan összefügg a DN-betegség súlyosságával és progressziójával. A GPX4, mint a vashalál-program kiváltásának fontos célpontja, az oxidatív stressz és a sejthalál jelzéseinek érzékelője, és a csökkent GPX4 expresszió az élő GPX4 expressziójának jelentős növekedéséhez vezet, ami jelentősen megnöveli az élő oxigén mennyiségét a szervezetben. 7] . . Ezért a vesetubuláris epiteliális sejthalál gátlása a vashalál szabályozásán keresztül Ezért a vesetubuláris epiteliális sejthalál gátlása a vashalál szabályozásán keresztül a DN vesekárosodás enyhítésére hatékony stratégia lehet a DN kezelésére. A vashalál szabályozásán keresztül történő epiteliális sejthalál hatékony stratégia lehet a DN kezelésében.
Apoliszacharidnak,-nekC. flavusa legelterjedtebb és legfontosabb farmakológiai A C. flavus egyik legelterjedtebb és legfontosabb farmakológiai összetevője. A kísérleti tanulmány megállapította, hogy fontos szerepet játszik a DN veseműködésének javításában és a gyulladásos válasz enyhítésében. Li és mtsai[8]. Li és mtsai[9]. Li és munkatársai[9] azt találták, hogy a C. flavus poliszacharid beavatkozása szignifikánsan javította a glükolipid metabolizmus zavarait és az inzulintoleranciát cukorbeteg egerekben. Li és mtsai. Egy másik tanulmány kimutatta, hogy a diabéteszes nephropathiában szenvedő egerek glükóz-, 24 órás glükóz- és inzulintoleranciája jelentősen javult a sárga kivonatú poliszacharid beavatkozása után. Egy másik tanulmány kimutatta, hogy a vércukorszint, a 24-h vizelet mikroalbumin, a vér kreatinin (SCr) és a vér karbamid-nitrogénje (BUN) a diabéteszes nephropathia modell egerekben jelentősen javult a Fructus flavus poliszacharid beavatkozása után. és a vér karbamid-nitrogén (BUN) szintje szignifikánsan csökkent egy diabéteszes nephropathia modellben[10]. A DN kezelése a Flos Chrysanthemi poliszacharidjával Mindazonáltal nem tisztázott a konkrét hatásmechanizmusa. Ezért a jelen Ebben a tanulmányban magas zsírtartalmú étrendet alkalmaztunk streptozotocin (STZ) injekcióval kombinálva a DN patkánymodell létrehozására.
Ezért ebben a vizsgálatban létrehoztunk egy DN patkánymodellt magas zsírtartalmú étrenddel, streptozotocin (STZ) injekcióval kombinálva, és megfigyeltük a C. flavus poliszacharid hatását a vashalálra patkányokban. Ezért a jelen vizsgálatot a C. flavus poliszacharid vashalálra gyakorolt ​​hatásának megfigyelésére végeztük olyan patkányokban, amelyeket magas zsírtartalmú étrenddel és sztreptozotocin (STZ) injekcióval kombinálva etettek, és hogy tisztázzuk a C. flavus poliszacharid DN-re gyakorolt ​​hatásmechanizmusát.

Anyagok és metódusok
1.1 Állatok
Ötven egészséges, (200±20) g testtömegű hím SD patkányt helyeztek el a Kínai Orvostudományi Akadémia Radiológiai Intézetében, Pekingben, Kínában, 12- órás világosság-sötét ciklus alatt (25±2) fok és relatív páratartalom (50±15) százalék , és ad libitum táplálják. Magas cukor- és zsírtartalmú étrend (10 százalék disznózsír, 20 százalék szacharóz, 2,5 százalék koleszterin, 67,5 százalék hagyományos takarmány), (4,8 százalék zsír, 20 százalék fehérje és 59,4 százalék cukor), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Ezt a kísérletet a a Cangzhou Integratív Orvostudományi Kórház (CZX2022-KY-023).

1.2 Gyógyszer és készítmény
Poliszacharidnak,-nekFlos Astragalus(70 százalékos tisztaság, S27804 tételszám), a Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd.-t 200, 800 mg/ml koncentrációjú sóoldattal állítottuk elő. 800 mg/ml oldat. Az Irbesartan tablettákat (8A411. tétel), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. 30 mg/ml koncentrációjú sóoldatban állítottuk elő. megoldás.

 

1.3 Főbb reagensek és műszerek
Vizeletfehérje (C035-2-1 tételszám), SCr (C011-2-1 tételszám), BUN (C013-2-1 tételszám) BUN (C tételszám013-2-1), malondialdehid ( MDA, tételszám: C003-1- 2), glutation (GSH, tétel C006-2-1), teljes vasion-tartalom (A039-2-1 tételszám), Nanjing Jiancheng Biológiai Mérnöki Kutatóintézet Biológiai Mérnöki Intézet , Nanjing, Kína; Transzferrin (tételszám: ab278498), ferritin Transzferrin (ab278498. tétel), ferritin nehézlánc (FTH1, ab75973 tétel), GPX4 (ab252833. tétel) és -ferritin (ab252833. tétel). ab252833), -aktin (ab179467 tétel), Abcam, Egyesült Királyság. iMark680 multifunkcionális enzimmarker, Bio-Rad, USA. Fresco17 centrifuga, Thermo, USA; 5810 asztali fagyasztott centrifuga, Eppndorf, Németország; ABI Prism® 7500 fluoreszcencia mennyiségi meghatározása Applied Biosystems, USA; DYCZ-24DN függőleges elektroforézis tartály, Peking Liuyi Műszergyár, Peking, Kína; SH-523 kemilumineszcenciás képalkotás Ltd., Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modellezés, csoportosítás és gyógyszerbeadás
1 hét adaptív etetés után véletlenszerűen 10 patkányt választottunk ki normálisnak. A fennmaradó 40 patkányt a szakirodalom [11] módszerére utaltuk a DN patkánymodell létrehozásához. A patkányokat magas cukor- és zsírtartalmú diétával etették 7 hétig, majd 12 órán át koplaltak víz nélkül. A patkányokat 7 hétig magas cukor- és zsírtartalmú diétával etették, majd 12 órán át táplálékkal és vízzel koplalták. Az STZ-t intraperitoneálisan injektáltuk 30 mg/kg dózisban. 72 óra elteltével vért vettünk a farokvénából a véletlenszerű vércukorszint kimutatására, és a 16,7 mmol/l vagy annál nagyobb vércukorszintet a cukorbetegség sikeres modellezésének tekintették. A patkányokat magas cukor- és zsírtartalmú diétával etették 1 hétig, és 24-óra vizeletet gyűjtöttünk a metabolikus ketrecből.

 

 

1.5.5 Western blot vizsgálat
Gyűjtsük össze a veseszöveteket, adjunk hozzá 150 μL RIPA lízispuffert, homogenizáljuk. A fehérje felülúszót centrifugálás után visszatartjuk. A teljes fehérjekoncentrációt a BCA protein assay kit segítségével határoztuk meg. A teljes fehérjekoncentrációt BCA protein assay kit segítségével határoztuk meg, és a fehérjekoncentrációt homogenizáltuk. Egyenlő mennyiségű fehérjét 20 ug, 8 százalék -12 százalék SDS-PAGE-t használtunk a fehérjeelválasztáshoz, és a fehérjét átvittük. A membránokat 5 százalék sovány tejporral szobahőmérsékleten 2 órán át lezártuk. Nyúl anti-patkány elsődleges antitest transzferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) és GPX4 (1:3 000) került hozzáadásra. 3,000), GPX4 (1:3,000), -aktin (1:5 hígítás,000), és egy éjszakán át 4 fokon inkubáltuk. Inkubáljuk egy éjszakán át 4 fokon. A membránt mostuk, másodlagos antitestet (1:9 000) adtunk hozzá, és 2 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk. A membránokat TBST-vel mostuk, ECL kemilumineszcenciával fejlesztettük ki és segítségével detektáltuk
A sávok szürkeárnyalatos értékeinek elemzéséhez Image J szoftvert használtunk.

 

1.6 Statisztikai módszerek
Az elemzéshez SPSS Statistics25.{1}} statisztikai szoftvert használtunk. Kísérlet Az eredményeket xˉ±s-ben fejeztük ki, és minden adatot megvizsgáltunk a normalitás és a khi-négyzet szempontjából. Minden adatot teszteltünk a normalitásra és a khi-négyzetre, és t-próbákat használtunk, ha azok teljesültek, és nem paraméteres teszteket, ha nem voltak elégedettek. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 Eredmények
2.1 A Flavopiridium poliszacharid hatása modellpatkányok testtömegére és éhgyomri vércukorszintjére A normál csoporthoz képest a modellcsoportban lévő patkányok testtömege jelentősen csökkent (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Lásd a 2. táblázatot.

2.2 A Flavopiridium poliszacharid hatása modellpatkányok vesefunkciós indexeire
A normál csoporthoz képest a modellcsoportban a patkányok SCr, BUN szintje és 24 órás vizeletfehérje tartalma szignifikánsan magasabb volt (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 A sárga kivonat poliszacharid hatása a modellpatkányok veséjének hisztopatológiai morfológiájára
A normál csoportú patkányok glomerulusa és tubulus szerkezete nem mutatott eltérést, a tilakoid membrán és tilakoid stroma nem proliferált, nem volt gyulladásos sejtinfiltráció stb.; a modell A modell patkányokban fokális tubuláris degenerációt és atrófiát figyeltek meg, a glomeruláris alapmembrán enyhén A modellcsoport patkányai fokális tubuláris degenerációt és atrófiát, enyhén megvastagodott glomeruláris alapmembránt, tilakoid hiperpláziát, valamint a glomerulusok zsíros degenerációját, ill. tubulusok. A patkányok mindegyik gyógyszer-kezelési csoportjában csökkent elváltozásokat mutattak, és a javulás nyilvánvalóbb volt a pozitív gyógyszercsoportban és a nagy dózisú Flavopiridium poliszacharidban. A javulás szembetűnőbb volt a pozitív gyógyszercsoportban és a nagy dózisú Flavopiridium poliszacharidban. Lásd 1. ábra.