A fenil-etanol-glikozidok bioszintézisének fokozása a Cistanche Deserticola sejttenyészeteiben ozmotikus stressz hatására

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Chun-Zhao Liu. Xi-Yu Cheng

AbsztraktAz ozmotikus stressz hatását a sejtnövekedésre és a fenil-etanoid-glikozidok (PeG-k) bioszintézisére sejtszuszpenziós tenyészetekben vizsgálták.Cistanche deserticolaYC Ma, egy sivatagi gyógynövény, amelyet Kína nyugati régiójában termesztenek. A különböző kezdeti szacharózkoncentrációk szignifikánsan befolyásolták a sejtnövekedést és a PeGs bioszintézist a szuszpenziós tenyészetekben, és a legnagyobb száraz tömeg és PeGs felhalmozódás elérte a 15,9 gl–1-DW, illetve a 20,7 mg g–1-DW értéket a kezdeti ozmotikus értéknél. 300 mOsm kg–1 stressz, ahol a szacharóz koncentráció 175,3 mM volt. A szacharóz és a nem-metabolikus cukor (mannit) vagy nem cukormentes ozmotikus szerek (PEG és NaCl) különböző kombinációival végzett sztöchiometrikus analízis kimutatta, hogy maga az ozmotikus stressz fontos tényező a PeG-ek bioszintézisének fokozásában a sejtszuszpenziós tenyészetekben.Cistanche deserticola. A maximális PeGs-tartalom 26,9 és 23,8 mg g–1-DW 21 nap után alakult ki 87,6 mM szacharóz és 164,7 mM mannit (303 mOsm kg-1), illetve 20 mM PEG kombinációjával, ami magasabb volt, mint 30 nap után 175,3 mM kezdeti szacharózkoncentráció mellett növesztett C. deserticola sejtkultúráké. A stimulált PeGs felhalmozódás a sejtszuszpenziós tenyészetekben összefüggést mutatott az ozmotikus stressz által kiváltott fenilalanin-ammónium-liáz (PAL) aktivitás növekedésével.

Kulcsszavak Cistanche deserticola, Sivatagi gyógynövény, Fenil-etanol glikozidok, Ozmotikus stressz, Fenilalanin ammónia-liáz

Cistanchetubulosaszámos hatása van, kattintson ide, ha többet szeretne megtudni

Bevezetés

Cistanche deserticolaA YC Ma egy értékes kínai gyógynövény, a Haloxylon ammodendrun gyökereiben élősködik, és Nyugat-Kína sivatagi területein nő. A fenil-etanoid glikozidok (PeG-k), a C. deserticolából izolált fő bioaktív komponensek, jelentős aktivitást mutatnak a szabad gyökök megkötésében, az immunitás erősítésében, a szexuális funkció javításában stb. (Zong és mtsai. 1996; Lu 1998; Wang és mtsai. 2001). Ellenőrizetlen kiaknázása és hasznosítása miattCistanche deserticola, a természeti erőforrásCistanche deserticola a kimerültség határán volt. Tekintettel ezekre a problémákra, a C. deserticola sejtszuszpenziós tenyészeteivel történő PeG-termelést ígéretes alternatívának tekintették a hiány megoldására.Cistanche deserticolanövényi anyagok (Lu és Mei 2003; Ouyang et al. 2003; Cheng et al. 2005a).

Az ozmotikus stressz fontos tényező, amely befolyásolja a növények növekedését, fejlődését, morfogenezisét és a másodlagos metabolitok képződését. Néhány gyógynövényfajnál beszámoltak a másodlagos metabolitok fokozott termelését in vitro szövettenyészetekből optimális ozmotikus stressz mellett (Kim et al. 2001; Wang et al. 1999; Wu et al. 2005). A szacharóz az ilyen esetekben szokásos ozmotikus stresszt okozó szer, amely létfontosságú szén- és energiaforrásként is szolgál. Ezért nagyon nehéz elkülöníteni az ozmotikus stressz hatását és a cukrok szénforrásként betöltött táplálkozási szerepét. A kezdeti ozmotikus stressz fokozódása nem metabolikus mannittal, szorbittal és PEG-gel szintén javította a paklitaxel felhalmozódását Taxus Chinensis sejttenyészetekben, a szaponin és poliszacharid felhalmozódást Panax notoginseng sejttenyészetekben, valamint az eleutherosidok felhalmozódását az Eleutherosids tenyészetben (Eleutherogenrys. és mtsai 2001; Shohael és mtsai 2006). Eredményeik azt mutatták, hogy a szénhidrátkoncentráció és az ozmotikus stressz hatása növényfajonként és másodlagos metabolitonként eltérő volt.

A jelen tanulmány célja a szacharóz, a mannit, a PEG és a NaCl ozmotikus hatásai a sejtnövekedésre és a PeG-ek bioszintéziséreCistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészetek. A szuszpenziós tenyészetekben a PAL-aktivitást a kezdeti ozmotikus szerek különböző kombinációiban vizsgáltuk, és tárgyaltuk a PeG-ek felhalmozódásának javítását az ozmotikus stressz növelésével.

Anyagok és metódusok

Növényi anyagok és kalluszindukció

MagjaiCistanche deserticolaAz YC Ma-t a kínai Xinjiang tartomány sivatagi területeiről gyűjtötték össze, és felhasználás előtt 4C-on tárolták. A botanikai azonosságot a Kínai Tudományos Akadémia, a Kínai Tudományos Akadémia Botanikai Intézetének referenciastandardjaival való összehasonlítás igazolta. A magvakat 70 százalékos etanolba 30 másodpercre mártással sterilizáltuk, majd 20 percre 5,4 százalékos nátrium-hipoklorit 20 százalékos vizes oldatába merítettük, majd háromszor steril desztillált vízzel öblítettük. A kalluszokat a felszínen sterilizált magvaiból indukáltukCistanche deserticolaMS (Murashige és Skoog 1962) táptalajon 1.0 mg l–1 naftalin-ecetsavval (NAA), 2.0 mg l–1 6-benzil-adeninnel ({{7}) }BA), 0,25 mg l–1 2, 4-diklór-fenoxi-ecetsav (2, 4-D), 6 gl–1 agar (PhytoTechnology LaboratoriesTM, termékazonosító: A181) és 30 gl–1 szacharózt 60 napig, sötétben, 25 °C-on, növesztőszekrényben. A magexplantátumokból indukált kallusztenyészeteket ezt követően 30 napos időközönként áttenyésztettük a fenti szilárd táptalajba (Cheng et al. 2005a).

Sejtszuszpenziós tenyészetek létrehozása és fenntartása

A szuszpenziós kallusztenyészeteket (3.{1}} g friss tömeg), amelyeket egy 1,000 lm-es szitán átszűrtünk és egy 200 lm-es szitán tartottunk, egy 500- ml-es Erlenmeyer-tenyészetbe tenyésztettük. 100 ml fenti folyékony táptalajt tartalmazó lombik forgó rázógépen 110 fordulat/perc sebességgel 25 °C-on, sötétben, 18 napos áttenyésztési időközönként. Az autoklávozás előtt a tápközeg pH-ját 5,8-ra állítottuk 1 M NaOH-dal vagy 1 M HCl-dal. A tíz alkalom után továbbtenyésztett szuszpenziós kallusztenyészeteket oltóanyagként alkalmaztuk a következő kísérleti lombiktenyészethez. Az összes lombikkísérletet 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban végeztük, amelyek 50 ml folyékony tápközeget tartalmaztak 30 gl–1 szacharózzal, és 1,5 g friss tömegű 18-napos sejtszuszpenziós tenyészettel oltották be. Ezeket az Erlenmeyer-lombikot rotációs rázógépen (110 fordulat/perc) 25 °C-on, sötétben inkubáltuk.

Ozmotikus stressz kísérlet

A kezdeti szacharózkoncentráció hatásának vizsgálata asejtnövekedés és a PeG-ek felhalmozódása,Cistanche deserticolaszuszpenziós tenyészeteket 87,6 MS táptalajban tenyésztettünk,175,3 és 262,9 mM szacharóz. Ozmotikus stresszhelyzetek esetén,Cistanche deserticolaszuszpenziós tenyészeteket MS-ben inkubáltuk87,6 mM szacharózt tartalmazó táptalaj kombinálva164,7 mM mannit. Egyéb ozmotikus szerek (PEG 4, 000 ésNaCl) ozmolaritásnak megfelelő mennyiségben adtunk hozzá87,6 mM szacharóz. Az ozmotikus ekvivalens koncentrációkAz ozmotikus szerek mennyiségét kísérletileg PEG-ként határoztuk meg4, 000 20 mM és NaCl 50 mM. Minden kísérletben és minden értékben három párhuzamos lombikot használtunka három párhuzamos lombik átlaga ± SD.

Elemzés

Cistanche deserticolaA tenyésztett sejteket különböző ozmotikus stressz alatt figyeltük meg Nikon AFX-DX fénymikroszkóppal (Nikon, Japán) 400·-as nagyítás mellett. A táptalaj ozmolaritását gőznyomás-ozmométerrel (Fiske One-Ten Osmometer, MA, USA) mértük. A friss tömeg (FW) meghatározásához aCistanche deserticolaA sejteket finoman szűrőpapírra nyomtuk, hogy eltávolítsuk a felesleges vizet, és lemérjük. Ezt követően a sejteket kemencében 60 °C-on 24 órán át szárítottuk, és feljegyeztük a száraz tömeget (DW). A maradékcukor koncentrációt fenol és tömény kénsav felhasználásával határoztuk meg, standardként glükózt használva (Dubois et al. 1956).

A szárított sejtekből metanollal 15 percig 60 °C-on a PeG-ket extraháltuk ultrahangos vízfürdőben (KQ2200, Shanghai Cany Precision Instrument Co., Ltd., Kína), 40 kHz-es frekvenciával és 100 W teljesítménnyel. A szűrletet betöményítettük. és a maradékot feloldjuk desztillált vízben, majd átengedjük egy makro retikuláris gyantaoszlopon (AB-8, a Nankai Egyetem kémiai terméke, Tianjin, Kína). A metanol-eluátumot összegyűjtöttük, és a teljes PeG-tartalmat 333 nm-en mértük echinakoziddal standardként (Du és Liu 1993a; Du et al. 1993b).

A sejtek életképességét 2, 3, 5-trifenil-tetrazólium-klorid (TTC) redukciójával becsülték meg (Steponkus és Lanphear 1967). Az életképességi index a friss szövet grammjánként mért abszorbancia. A PAL aktivitás meghatározása Koukol és Conn (1961) módszerén alapult. A PAL-aktivitás (U) egy egysége a 0.01 abszorbancia-változás mértéke.

Eredmények és vita

A kezdeti szacharózkoncentráció hatása a sejtnövekedésre és a PeGs bioszintézisére sejtszuszpenziós tenyészetekbenCistanche deserticola.A válaszCistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészeteket teszteltünk 87,6 és 262,9 mM közötti kezdeti szacharózkoncentrációig. Amint az 1. ábrán látható, a sejtek gyorsan növekedtek és felhalmozták a PeG-ket alacsony, 87,6 mm-es kezdeti szacharózkoncentráció mellett, és a sejtnövekedés és a PeG-ek felhalmozódása nyilvánvalóan elnyomta a magas, 262,9 mm-os kezdeti szacharózkoncentrációt. A friss tömeg és a száraz tömeg aránya csökkent, amikor a kezdeti szacharózkoncentráció 87,6 mM-ról 262,9 mM-ról emelkedett (az adatokat nem mutatjuk be). A maximális száraz tömeg 15,9 gl–1 és a PeGs tartalom 20,7 mg g–1-DW a 30. napon 175,3 mM kezdeti szacharózkoncentráció mellett, amelynek ozmolaritása körülbelül 300 mOsm kg–1 volt. Mikroszkópos megfigyelés mellett a sejtfalak a legmagasabb, 388 mOsm kg-1 ozmotikus stressz mellett váltak el, ahol a szacharóz kezdeti koncentrációja 262,9 mM volt (2. ábra), és a legmagasabb ozmotikus stressz zavarhatja a sejtek anyagcseréjét, és a súlyos növekedési gátlás és a PeGs bioszintézis hanyatlása. Hasonló jelenséget figyeltek meg a T. Chinensis szuszpenziós sejtkultúrák szuszpenziós tenyészeteiben is, és a paklitaxel termeléséhez az optimális szacharózkoncentráció 175,3 mM volt (Kim et al. 2001). A 204,5 mM kezdeti szacharózkoncentráció azonban előnyös volt az E. sessiliflorus sejttenyészetek növekedésében. A magasabb, 262,9 mM-os szacharózkoncentráció fokozta az eleutherozidok, fenolok és flavonoidok bioszintézisét az Eleutherococcus tenyészetekben (Shohael et al. 2006). Nyilvánvaló, hogy a szacharóz kezdeti koncentrációja fontos a növényi sejttenyészetek növekedéséhez és a másodlagos metabolitok felhalmozódásához, és hatása egy adott sejtvonalhoz kapcsolódik.

Különféle ozmotikus szerek hatása a sejtnövekedésre és a PeGs bioszintézisére C. deserticola sejtszuszpenziós tenyészetekben

A metabolikus szacharóz és más nem-metabolikus kémiai szubsztrátok ozmotikus szerepének megértése a PeG-ek bioszintézisében sejtszuszpenziós tenyészetekbenCistanche deserticola, egy sor kísérletet végeztünk szacharóz és nem-metabolikus ozmotikus szerek (mannit, PEG és NaCl) kombinálásával. Ezekben a kísérletekben 164,7 mM mannitot, 20 mM PEG-et és 50 mM NaCl-t adtunk a 87,6 mM szacharózt tartalmazó tápközeghez, és a kezdeti ozmolaritást 300 mOsm kg-1 körüli értékre állítottuk, ami a 175,3 mM-os táptalajhoz hasonló ozmotikus állapot volt. szacharóz.

A 3a. és b. ábrákon látható, hogy a mannit (nem metabolikus cukorozmotikus szer) és a PEG (nem áteresztő ozmotikus szer) hozzáadása kismértékben gátolta a sejtnövekedési sebességet, de jelentősen fokozta a PeGs bioszintézisétCistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészetek. A maximális PeGs-tartalom 26,9 és 23,8 mg g–1-DW a 21. napon volt elérve, amikor a sejteket 87,6 mM szacharóz és 164,7 mM mannit (303 mOsm kg-1) vagy 20 mM PEG (299 mOsm kg-1). A PeG mennyisége magasabb volt, mint aCistanche deserticolasejttenyészeteket MS folyékony tápközegben növesztettek 175,3 mM kezdeti szacharózkoncentrációval a 30. napon. A cukrot fokozatosan fogyasztották el aCistanche deserticolasejtkultúrát, majd a cukor által kiváltott ozmotikus stressz ennek megfelelően csökkent (3c, d ábra). A 175,3 mM kezdeti szacharózkoncentrációjú folyékony tápközeg ozmotikus stressze 280-ról 110 mOsm kg-1-re csökkent, amikor a sejttenyészetekben a PeG-k a 9. napon elkezdtek felhalmozódni, és a 30. napon érték el maximumukat (az adatokat nem mutatjuk be). Nem-metabolikus ozmotikus szerek (mannit és PEG) a sejttenyésztés során nem fogyasztottak, így a folyékony tápközeg ozmotikus stressze 200 és 280 mOsm kg–1 között tartható, ami a PeG-ek bioszintézisének kedvező ozmotikus nyomás. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az ozmotikus stressz maga is fontos szerepet játszott a PeG-ek bioszintézisének fokozásában.Cistanche deserticolasejttenyészetek.

A NaCl hozzáadása javította az indol alkaloidok és a szaponin bioszintézisét Catharanthus roseus és Panax ginseng sejttenyészeteiben (Smith és mtsai 1987; Wu és mtsai 2005), de a NaCl-kezelés elnyomta a T. Chinensis sejtnövekedését miközben nem mutatott különbséget a palitaxel bioszintézisében (Kim et al. 2001). Ezért minden esetben részletes vizsgálatra van szükség. 50 mM NaCl ozmotikus ekvivalens hozzáadása elnyomta a sejtnövekedést és a PeGs bioszintézist. Ez az eredmény a NaCl permeábilis természetére vezethető vissza, ami nem előnyös ennek a sivatagi növényfajnak a sejttenyészetében, amely jól tolerálja a szárazságstresszt.

3. ábra A szacharóz és más nem-metabolikus ozmotikus szerek kombinációinak hatása a sejtnövekedésre (a), a PeG-ek felhalmozódására (b), a cukorfogyasztásra (c) és az ozmotikus stressz változására (d) a C. deserticola sejt során kultúra. Az értékek a három párhuzamos lombikok átlagai ± SD

Különböző ozmotikus szerek hatása a sejtek életképességére és PAL aktivitására Cistanche deserticola sejtszuszpenziós tenyészetekben

Korábbi tanulmányainkban (Cheng és mtsai, 2005b, 2006) az elicitor hozzáadása drámaian stimulálta a PeG-ek bioszintézisétCistanche deserticolasejtkultúrákban, és a stimuláció összefüggést mutatott a PAL fokozott aktivitásával, amely a PeG-ek bioszintézisében az első kulcsenzim (Hahlbrock és Grisebach 1979). A 4. ábrán látható, hogy a nem metabolikus 164,7 mM mannit vagy 20 mM PEG hozzáadása 87,6 mM szacharózt tartalmazó MS folyékony tápközeghez kismértékben csökkentette a sejtek életképességét, de szignifikánsan megnövelte a PAL aktivitást, ami magasabb volt, mint a kezdeti szacharózkoncentráció által kiváltott. 175,3 mM. A fokozott PeG-felhalmozódásCistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészetekben magával az ozmotikus stressz által stimulált PAL aktivitás növekedésével volt összefüggésben. A 175,3 mM kezdeti szacharózkoncentráció MS folyékony tápközegben 15 nap alatt csökkentette a sejtek életképességét, és 21 nap alatt gátolta a PAL aktivitást. A növekvő cukorfogyasztás időszaka utánCistanche deserticolasejttenyészetekben, a tenyésztett sejtek életképessége és PAL-aktivitása egyaránt növekedett, és a 24., illetve a 30. napon érte el maximumát. Az ozmotikus stressz hatására megnövekedett PAL-aktivitás javítja a szaponin bioszintézist P. ginseng sejttenyészetekben és az alkaloid felhalmozódást C. roseus tenyésztett sejtekben (Godoy-Hernandez és mtsai 2000; Wu és mtsai 2005). Azonban a permeábilis NaCl hozzáadása a 87,6 mM szacharózt tartalmazó MS folyékony táptalajhoz csökkentette a sejtek életképességét és gátolta a PAL aktivitást a teljes tenyésztési időszak alatt. Ennek eredményeként mind a sejtnövekedés, mind a PeGs bioszintézis nyilvánvalóan elnyomott.

4. ábra A sejtek életképességének (a) és PAL aktivitásának (b) változása C. deserticola sejttenyészetekben különböző ozmotikus stressz alattCistanche deserticolasejtkultúra. Az értékek a három párhuzamos lombikok átlagai ± SD

Cistanche deserticolaegy sivatagi faj, és egy sivatagi faj vizsgálata in vitro sejtkultúrákban új kihívásokat és lehetőségeket jelentett a növényélettan és az ökológiai alkalmazkodás megértésében. Ebben a tanulmányban egy olyan rendszert fejlesztettünk ki, amely alkalmas egy ozmotikus stressz által közvetített jelátviteli bioszintézis út tanulmányozására, és a rendszer biztosította az alapot a PeG-ek nagyszabású előállításához aCistanche deserticolasejtkultúrák egy új ozmotikus stressz által szabályozott stratégián keresztül.

Köszönetnyilvánítás

A szerzők elismerik a Kínai Tudományos Akadémia Innovációs Kutatási Programjának pénzügyi támogatását.

Chun-Zhao Liu: „Fenil-etanoid-glikozidok bioszintézisének fokozása Cistanche deserticola sejttenyészeteiben ozmotikus stressz hatására”. Xi-Yu Cheng

---Plant Cell Rep (2008) 27:357–362 DOI 10.1007/s00299-007-0443-3

Hivatkozások

Cheng XY, Wei T, Guo B, Ni W, Liu CZ (2005a)Cistanche deserticolasejtszuszpenziós tenyészetek: Fenil-etanol-glikozidok bioszintézise és antioxidáns aktivitása. Process Biochem 40:3119-3124
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005b) Az ismételt kiváltás fokozza a fenil-etanol-glikozidok felhalmozódását a sejtszuszpenziós tenyészetekbenCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Feniletanoid glikozidok bioszintézisének javítása Cistanche deserticola sejtszuszpenziós tenyészetekben kitozán kiváltó segítségével. J Biotech 121:253–260
Du NS, Liu JL (1993a) Fenil-etanoid glikozidok meghatározásaCistanche deserticolamakro retikuláris gyanta spektrofotometriával. Nat Prod Res Dev 5:30–33
Du NS, Wang H, Yi YH (1993b) Fenylethanoid glikozidok izolálása és azonosításaCistanche deserticola. Nat Prod Res Dev 5:5–8
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK (1956) Kolorimetriás módszerek cukor és rokon anyagok meghatározására. Anal Chem. 28:350-357

Godoy-Hernandez GC, Vazquez-Flota FA, Loyola-Vargas VM (2000) Az 14-l bioreaktorban tenyésztett, ozmotikusan igénybe vett Catharanthus roseus sejtek transz-fahéjsavval való érintkezése növeli az alkaloidok felhalmozódását. Biotechnol Lett 22:921–925
Hahlbrock K, Grisebach H (1979): Enzimszabályok a ligin és flavonoidok bioszintézisében. Ann Rev. Plant Physiol. 30:105–130
Kim SI, Choi HK, Kim JH (2001) Az ozmotikus nyomás hatása a paklitaxeltermelésre Taxus Chinensis szuszpenziós sejttenyészeteiben. Enzyme Microb Tech 28:202–209
Koukol J, Conn EE (1961) A Hordeum vulgare fenilalanin-deamináz aromás anyagcseréje és tulajdonságai. J. Biol. Chem. 236:2692-2698
Lu MC (1998) Vizsgálatok a nyugtató hatásárólCistanche deserticola.J Ethnopharmacol 59:161–165

Lu CT, Mei XG (2003) A fenil-etanoid-glikozidok termelésének javítása gomba kiváltóval a sejtszuszpenziós tenyészetbenCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Murashige T, Skoog F (1962) Átdolgozott tápközeg gyors növekedéshez és dohányszövettenyészetekkel végzett biológiai vizsgálatokhoz. Plant Physiol 15:473–497
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003) Ritkaföldfém elemek hatása aCistanche deserticolasejtek és a fenil-etanol-glikozidok termelése. J Biotechnol 102:129-134
Shohael AM, Hakrabarty D, Ali MB, Yu KW, Hahn EJ, Lee HL, Paek KY (2006) Az eleuterozidok termelésének fokozása az Eleutherococcus sessiliflorus embriogén kultúráiban a szacharóz által kiváltott ozmotikus stressz hatására. Process Biochem. 41:512–518
Smith JL, Smart NJ, Kurd WGW, Misawa M (1987) Szerves és szervetlen vegyületek alkalmazása az indol alkaloidok felhalmozódásának növelésére Catharanthus roseus (L.) Don sejtszuszpenziós kultúrákban. J Exp Bot 38:1507–1511
Steponkus PL, Lanphear FO (1967) A trifenil-tetrazólium-klorid módszer finomítása a hidegsérülés meghatározására. Plant Physiol 42:1423–1426, Wang HQ, Wu JT, Zhong JJ (1999) A taxántermelés jelentős javulása a Taxus Chinensis szuszpenziós tenyészeteiben szacharózos táplálási stratégiával. Process Biochem. 35:479–483
Wang XW, Jiang XY, Wu LY, Wang XF (2001) A glikozidok tisztító hatásaCistanche deserticolaa szabad gyökökre és annak védelmére az OH által kiváltott DNS-károsodás ellen in vitro. Chin Pharm J 36:29–31
Wu JY, Wong K, Ho KP, Zhou LG (2005) A szaponintermelés fokozása Panax ginseng sejttenyészetben ozmotikus stressz és tápanyag táplálás útján. Enzyme Microb Technol 36:133-138
Zhang YH, Zhong JJ, Yu JT (1995) Az ozmotikus nyomás hatása a sejtnövekedésre és a ginseng szaponin és poliszacharid termelésére Panax Notoginseng szuszpenziós tenyészeteiben. Biotechnol Lett 17:1347-1350
Zong GZ, He W, Wu GL, Chen LH (1996) Összehasonlítások közöttCistanche deserticolaYC Ma és Cistanche tubulosa (Scheak) Wight néhány farmakológiai tevékenységet. Tradit Chin Med J 21:436–438