Az echinakozid és az akteozid phloridzin-érzékeny szállítása és a megváltozott bélrendszeri felszívódási útvonal a Cistanche Tubulosa kivonat alkalmazása után

További információ:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino et al

AbstractObjectives

Ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy megvizsgálja a jótékony hatásokatCistanche tubulosa kivonataz echinakozid (ECH) és az akteozid (ACT) alacsony bélpermeabilitásának javításáról.

Mód

Az ECH és az ACT abszorpciójaCistanche tubulosa kivonathumán intestinalis Caco{0}} sejt egyrétegű rétegeit intakt vegyületekkel jellemezték. Az ECH és az ACT glükóztranszporter-függő felszívódását in-situintestinalis perfúziós technikával igazoltuk.

Kulcsfontosságú leletek

A látszólagos permeabilitás (Papp) nem különbözött szignifikánsan az ép ECH és az ép ACT között. Phloridzin jelenlétében a nagy dózisú theECH és az ACT Papp értéke a megfelelő nem kezelés 20 százalékára csökkent, de a phloretin és a verapamil nem változtatta meg.Cistanche tubulosa kivonatalacsony és nagy dózisok esetén az ECH és az ACT Papp-értéke (mindkettő háromszorosára) nőtt, ami nagymértékű részvételt eredményezett a nátrium-függő glükóz transzportertől független felszívódásban. Alacsony koncentrációban a phloridzin szignifikánsan elnyomta a portálvér egyidejű ECH és ACT szintjét.

Következtetés

Diétás és gyógyászatiCistanche tubulosa kivonataz ECH és az ACT bélben történő felszívódásának fokozása az emberi egészség jobb kezelését szolgálhatja, bár a phloridzin-érzékeny transzport részvételét csökkenteni kell.

Kulcsszavakakteozid; Caco{0}} sejt monorétegek;Cistanchetubulosa kivonat; echinakozid;phloridzin-érzékeny glükóz transzporter

Cistanche tubulosa kivonat

Kattintson a Cistanche tubulosa porhoz

Bevezetés

A Cistanche tubulosa gyökereit hagyományosan gyógyászatban és élelmiszerekben használják.Cistanche tubulosa kivonatismert, hogy farmakológiai hatásai vannak különböző agyi betegségekben, öregedésgátló funkciókban, zsíranyagcserében és hajnövekedésben.[1–4]A közelmúltban iridoidokat, monoterpenoidokat, fenil-etanol-glikozidokat és lignánokat izoláltakCistanche tubulosa[5,6] A feniletanoid-glikozidok, a polifenolvegyületek egy osztálya, a Cistanche fajok fő kémiai összetevői[7], bár mennyiségük a különböző fajok között változik. Az echinakozid (ECH; 1. ábra) a HerbaCistanchis egyik fő fenil-etanoid-glikozidja. Bakteriális eredetű enzimek a vastagbélben hidrolizálják akteoziddá (ACT; más néven verbaszkozid).[8,9] Az ECH és az ACT jótékony májvédő[10] és gyulladásgátló[11] hatással bír rágcsálóállatoknál. Meglepő módon a vízben jól oldódó ECH javítja a viselkedési és neurokémiai eredményeket a Parkinson-kór egérmodelljében, és gátolja a kaszpáz{10}} és a kaszpáz-8 aktiválását kisagyi szemcseneuronokban.[9] Köztudott, hogy a vér-agy gát szigorúan korlátozza a xenobiotikumok vérből az agyba jutását és eloszlását. Wu et al.[12] azt is kimutatták, hogy a vízben oldódó ACT gyorsan eloszlik a patkányok agyszövetében. Ezért az ECH és az ACT az adott rendszer(ek) által az agyba, a belekbe és a májba kerülhet.

Bár erős bizonyítékok utalnak arra, hogy a fogyasztásCistanche tubulosa kivonatjótékony hatással van az emberi egészségre, a tiszta ECH permeabilitása a Caco{{0}} sejtmonorétegeken 8,4 ± 1,6 ug/ml csúcskoncentrációnál megegyezik a paracelluláris transzport markermannitéval vagy az alatt.[13] Ha tiszta ECH-t adnak orálisan patkányoknak (dózis, 1{{10}}0 mg/kg), a felszívódás rendkívül gyors (Tmax, 15 perc), és a maximális szérumkoncentráció nagyon alacsony. (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] Az ECH abszolút biológiai hozzáférhetősége csak 0,83 százalék. Hasonlóképpen, ha a Caco-2 sejteket az olajbogyó-malom szennyvízéből részben tisztított fenolos frakcióval inkubálják, a tiszta ACT-felvétel gyors, a csúcsfelhalmozódás 30 perc után következik be, a teljes felhalmozódási hatékonyság pedig 0,1%, ami 130 intracelluláris szintet biztosít. pmol/mg sejtfehérje.[15] Patkányokban a tiszta ACT maximális koncentrációját (0,13 ± 0,03 ug/ml) a 100 mg/kg-os orális adagolás után 30 percen belül érte el,[12] ami gyors bélrendszeri felszívódást jelent. Az ACT, valamint az ECH orális biohasznosulása meglehetősen alacsony (0,12 ± 0,04 százalék), ami arra utal, hogy a bélrendszerben és a májban előfordulhatnak first-pass hatások. Patkányepében az ECH metilációs és glükuronidációs konjugátumai a fő metabolitok[16], bár a májban történő metabolizmus mértéke továbbra sem tisztázott. Előzetesen azt találtuk, hogy az ECH és az ACT meglehetősen stabil volt a patkány bélnyálkahártya és a mesterséges gyomorsav homogenizátumában (az adatokat nem mutatjuk be). Najar et al.[17] kimutatták, hogy az ACT gátolja a P-glikoprotein (P-gp)-ATPáz aktivitását, hasonlóan a verapamilhoz (egy reprezentatív P-gp inhibitor), ami P-gp modulátort jelent; azonban bizonytalan, hogy az ACT elérhető-e P-gp szubsztrátként. Érdekes módon az étrendi flavonoid-D-glükozidok legújabb eredményei azt mutatták, hogy a multidrug rezisztencia fehérje (MRP2) elfedte a kvercetin 4'-O- -glükóz nátrium-függő glükóz transzporter (SGLT){45}}közvetített felvételét,[18] ,19], amely nagyon rossz felszívódásért felelős. Azonban nagyon keveset tudunk a polifenol-glükozidok abszorpciós transzporterek érzékenységéről, beleértve a glükóz transzportereket is. A kvercetin4'-glükóz felszívódási jellemzőiről és a gyorsan vér-agy gát-áteresztő ECH-ról szóló információ arra késztetett bennünket, hogy megvizsgáljuk a pglikozidek transzporter-érzékeny diéta-infrakcióit. tubulosa.

Ebben a vizsgálatban az érintetlen ECH és ACT glükóz transzporter által közvetített felszívódását vizsgáltuk humán-bélrendszeri Caco-2 sejt monorétegek felhasználásával. Ezzel egyidejűleg az ECH és az ACT abszorpciós transzportja egyidejűleg bevezetettCistanche tubulosa kivonatin vitro modell és in situ intestinalis perfúziós rendszer jellemezte a portális vérmintavétellel, amely könnyen megkülönbözteti a felszívódás mértékét és a hepatikus first-passdispositió elkerülését.

Anyagok és metódusok

Anyagok

Az ép ECH és ACT az EishinTrading Co., Ltd. (Oszaka, Japán) nagylelkű ajándékai voltak. A phloridzint és a phloretint a Tokyo Kasei Co., Ltd.-től (Tokió, Japán) vásároltuk. A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) vizsgálat belső standardjaként használt verapamil és p-kumársav a Sigma-Aldrich (St Louis, MO) cégtől származik. ,USA). Az összes többi felhasznált vegyszer analitikai minőségű és kereskedelmi forgalomban volt.

Növényi anyag és a metanolos kivonat elkészítése

A C. tubulosa (SCHRENK) A R. WIGHT (Orobanchaceae) egy évelő parazita növény, amely a Salvadoraor Calotropis fajok gyökerén nő, és Észak-Afrika, arab és ázsiai országokban elterjedt. A C. tubulosa szárított szárát porítottuk, és metanollal háromszor extraháltuk visszafolyató hűtő alatt 3 órán át. Az oldószer elpárologtatásával csökkentett nyomáson metanolos extraktumot kapunk. A metanolos kivonatot (kereskedelmi minőségű, tételszám: 20070130; kereskedelmi név: Sabaku Ninnjinn Kanka) az Eishin Trading Co., Ltd. nagylelkű ajándéka volt Muraokán és Morikawán (Kinki Egyetem, Japán) keresztül, és a botanikai azonosítást Jia Xiaoguang professzor végezte a Xinjiang Hagyományos Kínai és Etnológiai Gyógyászati ​​Intézet.

Növényi kivonat elemzése: kromatográfia

Meghatároztuk az ECH és ACT tartalmat aCistanche tubulosa kivonat(20070130 sarzsszám) az alábbiakban ismertetett HPLC analízissel. A kapott adatokat az 1. táblázat tartalmazza.

Sejttenyésztés

Az American Type CultureCollection-től (ATCC, Rockville, MD, USA) vásárolt Caco{{0}} sejteket a 38–53. Dulbecco módosított Eagle táptalajból (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japán) tartalmazó táptalajban növesztettük őket, kiegészítve 0,1 mM nem esszenciális aminosavakkal, 10% hővel inaktivált magzati szarvasmarha szérummal, 100 pl. E/ml penicillin G és 0,1 mg/ml sztreptomicin-szulfát.

Közlekedési tanulmányok

A Caco-2 sejteket 6,4 × 103 sejt/cm2 sűrűséggel polikarbonát szűrőkre szélesztettük. A transzportkísérletekhez monorétegeket használtunk 21-25 nappal a vetés után. Sértetlen ECH és ACT, amelyek megegyeztek a bennük lévő tartalommalCistanche tubulosa kivonat (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinakozid benneCistanche tubulosa kivonat

In situ bélperfúzió

A 230–250 g-os hím Wistar patkányokat az SLCJapantól (Hamamatsu, Japán) szereztük be. Az állatokat egy légkondicionált szobában tartottuk 12 órás világos/sötét ciklus alatt 1 hétig használat előtt. A patkányokat standard laboratóriumi táplálékkal (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokió, Japán) etettük vízzel ad libitum, és a vizsgálat előtt egy éjszakán át koplaltuk őket. Az in-surecirculating perfúziós vizsgálatot a Mihara és munkatársai által leírt módosított eljárás szerint végeztük.[20]Röviden, a patkányokat 25%-os uretán oldattal (1 mg/kg) érzéstelenítettük, hogy elkerüljük a vérnyomás csökkenését. Egy középvonali hasi bemetszést végeztünk, és a vékonybelet feltártuk. Az epevezetéket lekötöttük, hogy elkerüljük az epe kiválasztását a perfuzátumba. Az egész vékonybelet, mint egy szakaszt (a nyombéltől az ileumig) normál sóoldattal öblítettük 37 fokos hőmérsékleten 10 percig, amíg a mosószer átlátszóvá nem vált. A szilikon csőhöz csatlakoztatott üvegcsöveket ezután a vékonybél mindkét végébe kanülözték, és varrószállal rögzítették. Ezután a vékonybelet kicserélték a hasban, és a kanülöket egy perisztaltikus pumpához csatlakoztatták. A portális vénát polietilén csővel (PE10) kanüláltuk.Cistanche tubulosa kivonatA kereskedelemben kapható Krebs-Henseleit bikarbonát pufferben (pH 7,4) szuszpendáltuk, így 4,5 mg/ml végső koncentrációt kaptunk, és 10 percig 8000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk az oldhatatlan komponensek eltávolítására. A phloridzin (1 mM) hiányában vagy jelenlétében lévő felülúszót egy tartályba gyűjtöttük, amelyet a kísérlet során 37 ± 0,5 fokos hőmérsékleten tartottunk. A jelzett időpontokban vért vettek a portális véna kanülön keresztül. A vérminták centrifugálása után a kapott plazmát a belső standardot tartalmazó acetonitrillel fehérjementesítettük, és 3000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk. A felülúszót bepároljuk, és a maradékot acetonitrilt és 0,5%-os ecetsavat tartalmazó mozgófázissal feloldjuk. A kevert oldatot HPLC oszlopra visszük. A patkányokat a japán kormány és a Kinki Egyetem által kiadott Laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó irányelvek szerint etikai eljárásokkal összhangban használták.

HPLC elemzés

A HPLC analízist aShimadzu SPD{{0}}A, UV-detektorral, Shimadzu LC-10A pumpával és Shimadzu C-R4A chromatopac integrátorral (Kyoto, Japán) felszerelt rendszeren végeztük. Az ECH-t és az ACT-t Inertsil ODS-oszlop segítségével választottuk el (5 μm, 4,6 × 15{13}} mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japán). Acetonitril és 0,5% ecetsav 15:85 (v/v) arányú mozgófázisát használjuk 1,0 ml/perc áramlási sebesség mellett. A detektálást 334 nm-en végeztük

Kinetikai elemzés

A látszólagos permeabilitási együtthatókat (Papp) a Caco-2 sejt monorétegeken keresztüli vegyülettranszport időbeli lineáris szakaszának meredekségéből becsültük meg, a következők szerint: P dQ dt AC app=( ) ( )

ahol dQ/dt a permeabilitási arány, C0 az oldott anyag kezdeti koncentrációja a donorkamrában, A pedig a membrán felülete (4,7 cm2).

A patkányokon végzett in situ bélperfúziós vizsgálatban a plazmakoncentráció-idő görbe alatti területet (AUC0–90) a portális vénában nullától az utolsó mérésig a lineáris trapézszabály szerint számítottuk ki.

Akteozid benneCistanche tubulosa kivonat

Fizikai-kémiai tulajdonságok

A vegyületek poláris és nem poláris felületét a SAS program segítségével számítottuk ki (verzió: 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, USA). A kísérletileg meghatározott log P és pKa értékeket az irodalomból kaptuk.

Statisztikai analízis

Az adatokat egyirányú varianciaanalízissel, majd Tukey post-hoc teszttel elemeztük. Az 5 százaléknál kisebb valószínűségi értékeket szignifikánsnak tekintették.

Eredmények

Az echinakozid és az akteozid abszorpciós transzportja a Caco-2 sejt egyrétegein keresztül

Egerekben és patkányokban ép ECH[10,14] és ACT[12,21] orálisan adják be 100-1000 mg/kg dózisban. AzCistanche tubulosa kivonatadagonként körülbelül 30 százalék ECH-t és 15 százalék ACT-t tartalmazott. Mivel a kivonat megváltoztatta az ozmózisnyomást és a pH-t az inkubációs közegben, a per os adagolás alapján 4,5 és 13,5 mg/ml koncentrációt határoztunk meg (ép vegyületek: 2-20 mg/2{{2{{31} }}} g testtömeg) egerekben. Az alacsony (4,5 mg/ml) és nagy dózisú (13,5 mg/ml) kivonat 2.0 és 6,1 mg ECH-t és 1.{35}} és 3.{39}} mg az ACT esetében. C. tubulosa kivonatot alkalmaztunk, amely jóval alacsonyabb volt, mint az ECH és az ACT emberben közölt orális adagja (a kivonat javasolt étrendi mennyisége: 15{41}} mg, amely körülbelül 45 mg forECH-t és 22,5 mg ACT-t tartalmaz). Az érintetlen vegyületek kis és nagy dózisainál az abszorpciós profilok (2. ábra) és a Papp nem különböztek szignifikánsan az ECH és az ACT mint ECH egyenérték között (2. táblázat). Amikor C. tubulosa kivonatot nagy, 13,5 mg/ml dózisban töltöttünk a táptalajba, a Pappvalues ​​(1,27 ± 0,13 és 0,34 ± 0,03 × 10-6 cm/s) Az ECH és az ACT egyidejű alkalmazása háromszor magasabb volt, mint az ép ECH és ACT (2. táblázat). Az intakt vegyületekkel ellentétben a kivonat jelentősen javította az ECH és az ACT abszorpciós transzportját.

A phloridzin, a phloretin és a verapamil gátló hatása

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0,3 mM) phloretint nem lehetett használni az észrevehető sejttoxicitás miatt. Ezenkívül a P-gp-t fontos szereplőként azonosították, amely felelős a növényi gyógyszerek és a klinikailag fontos P-gps-szubsztrátok közötti kölcsönhatásért. A verapamil nem fokozta az intakt vegyületek abszorpciós transzportját (3. ábra).

Az ECH és az ACT abszorpciós transzportját a kivonatban (alacsony dózisban) a phloridzin jelentősen gátolta (2. táblázat és 4. ábra). A nagy dózisú kivonat elnyomta a phloridzin-érzékeny gátlást, bár az érintetlen ECH és ACT transzportja érzékenyebb volt a phloridzinre (2. táblázat).

Az in situ bélperfúziós vizsgálat

Egy in situ vizsgálat során megvizsgáltuk, hogy az ECH és az ACT inCistanche tubulosa kivonata vékonybél apikális oldalán található SGLT1 szállította őket. Amikor az étrendi kivonatot alacsony dózisban (4,5 mg/ml) perfundáltuk, az ECH és az ACT gyorsan megjelent a portális vérben (5. ábra). Az AUC értéke 2702,8 ± 384,1 μm·min az ECH és 698,3 ± 197,2 μm·min az ACT esetében. Miután az AUC-t normalizálták a következőtől származó tartalommalCistanche tubulosa kivonat, az elnyelt mennyiség nem különbözött szignifikánsan az ECH és az ACT között. Az SGLT1-érzékeny phloridzin a phloretinnel ellentétben szignifikánsan elnyomta az egyidejűleg alkalmazott ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·perc) és ACT (nem észlelt) abszorpciós transzportját.

Vita

Egyes növényi összetevők a májban, a bélben, az agyban és a vesében erősen expresszálódó P-gp szubsztrátjai. A P-gp meghatározó tényező a gyógynövénykészítmények in vivo biológiai hozzáférhetőségében, diszpozíciójában és eloszlásában, beleértve az orbáncfüvet, kurkumint, echinaceát, ginzenget, ginkgot és gyömbért.[22,23]A genistein biológiai hozzáférhetősége{{5} }a glikozid, egy flavonoid származék, szintén korlátozta a bélrendszeri MRP2 transzporter [24]. Ezért ezt a tanulmányt az ECH és az ACT egyidejű étkezési és gyógyszeres abszorpciós tulajdonságainak vizsgálatára tervezték.Cistanche tubulosa kivonat.

A polarizált Caco{{0}} sejt egyrétegű sejtjei, valamint a bél[25] a főbb bélrendszeri gyógyszerkiáramlás-transzportereket, például a P-gp-t, az MRP-ket és a mellrák-rezisztencia fehérjét expresszálják.[26]Étrendi flavonoidok. kimutatták, hogy a kvercetin[27] és a miricetin[28] gátolja a P-gp által közvetített kiáramlást mind a sejtvonalakban, mind az állatmodellekben. A verapamil, egy P-gp inhibitor, nem változtatta meg az ACT és az ECH permeabilitását a Caco-2 sejt egyrétegű rétegeiben (3. ábra), ami azt jelzi, hogy az érintetlen ECH-t és ACT-t nem korlátozza a P-gp efflux pumpa. Korábbi vizsgálataink azt mutatták, hogy az MRP2 fehérjék nem expresszálódnak Caco{13}} sejt monorétegekben.[29] A P-gp és MRP{16}}közvetített efflux kizárható az ECH és ACT transzportban. A kvercetin egyes alacsony lipofilitású glikozidjai hatékonyabban szívódnak fel, mint maga a kvercetin.[30] Fontos megjegyezni azt is, hogy a cukorrésszel rendelkező ACT gyorsan eloszlik az agyszövetekben. Figyelmünk két glükóz transzporter inenterocita együttes hatására összpontosult: az SGLT a kefe-border membránban és a megkönnyített diffúziós glükóz transzport (GLUT) a bazolaterális membránban. A Caco-2 sejttenyészet modellként használható a phloretin-érzékeny GLUT2, és a phloridzin-érzékeny SGLT1 és 2 transzporterek tanulmányozására.[31–34]A glükóz a Caco-2 monorétegek apikálisától a bazolaterális oldaláig transzportálódik. nagy sebességgel 36,8 ± 1,1 × 10-6 cm/s Pappofával.[35] Magasabb Pappt, mint a transzcelluláris transzport marker propranolol (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Amint a 2. táblázat mutatja, az érintetlen ECH és ACT Papp sokkal alacsonyabb volt, mint a glükóz és a passzív propranolol esetében. A megoszlási hányados (oktanol-víz) logaritmusának logaritmusát -2,32-re, az ACT-re pedig 0,077-re számítottuk. A poláris hidrofil vegyületekről úgy gondolják, hogy paracelluláris úton (szoros csomópontokon keresztül) szállítódnak. Úgy tűnik, hogy a két fenil-etanol-glikozid, mint a mannit, paracelluláris úton szállítódik. A phloridzin azonban drámaian csökkentette az ép ECH és ACT abszorpciós permeabilitását (2. táblázat), ami arra utal, hogy az apicalSGLT1 jelentős szerepet játszik az ép ECH és ACT bélből történő felszívódásában. Egyenértékű dózis mellett a nagyobb hidrofób ACT permeabilitás közel volt az ECH permeabilitáshoz (2. ábra és 2. táblázat). Yoshikawa et al.[36] kimutatták, hogy a facilitatív transzporterek (GLUT 1 és 2), valamint a phloridzin-érzékeny SGLT1 intenzíven expresszálódnak a vékonybélben. Mivel az elnyelt vegyületek mennyisége a felvétel és az elimináció közötti tömegegyensúlyon alapul, értékeltük a GLUT2 részvételét. Az SGLT1 nagy affinitással és kis kapacitással keresztezi a glükózt az enterociták apikális membránjain, és kis affinitással és nagy kapacitással lép ki a bazolaterális membránon a GLUT2-n keresztül. A floretin (a GLUT2 specifikus inhibitora) nem szüntette meg az érintetlen ECH és ACT transzportját (3. ábra). Funes et al.[37] kimutatták, hogy az ACT erősen kölcsönhatásba lép a foszfolipid membránok foszfátcsoportjaival. Mivel az ACT szerkezetében bőségesen fordulnak elő hidroxilcsoportok, a hidrogénkötések ezen csoportok és a foszfolipidek glicerin poláris fejei vagy foszfátcsoportjai között a legvalószínűbb kölcsönhatások. Amikor az érintetlen ECH-t és az azzal egyenértékű ACT-t Caco-2 egyrétegű rétegekkel 11 órán át inkubáltuk, az ACT sejtszintű felhalmozódása (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) háromszor nagyobb volt, mint az ECH-é (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Úgy gondoltuk, hogy az SGLT{74}}érzékeny ECH és ACT lassan átkerült az enterocitákból a véráramba, ami valószínűleg a megfigyelt alacsony Papp-hoz vezetett. Az erősen hidrofil ECH-val összehasonlítva az ACT alacsony permeabilitása a sejtmembránokba való interkalációnak köszönhető.

Cistanche tubulosa kivonat

A polifenolos vegyületeket gyógynövénykeverékekben fogyasztják klinikai alkalmazásuk során, és a kereskedelemben étrend-kiegészítőként kaphatók. Egy in vitro vizsgálat kimutatta, hogy a fenolos epikatekin felszívódását nem befolyásolta az italok élelmiszer-alapanyagainak összetétele.[38] Ezzel szemben a Hypericum perforatumL. a termékmátrixok befolyásolják a kvercetinglukozidok (rutin és izokvercitrin) és a Caco-2 sejtek közötti hiperozid transzportját a mátrixfitokémiai összetétel és a transzport jellemzők, azaz a paracelluláris transzfer és a hordozó által közvetített vagy aktív transzport különbségei miatt.[39] Ebben a vizsgálatban a C. tubulosa háromszor nagyobb transzepiteliális transzportot biztosított, mint az érintetlen ECH és ACT (2. ábra és 2. táblázat). Azt gyanítjuk, hogy a komponensek aCistanche tubulosa kivonataktiválja a phloridzin-érzékeny transzportert és/vagy felgyorsítja az intracelluláris ECH és ACT eliminációját.Cistanche tubulosa kivonatúgy tűnt, hogy a nagy dózis nagymértékben elfedi a phloridzin-érzékeny transzport erejét (2. táblázat). Az étrendből származó szénhidrátok[40] és fehérjék[41] kölcsönhatásba lépnek néhány polifenollal a gyomor-bél traktusban.Morikawa et al.[10] kimutatta, hogy öt iridoidot, a kankanozidot AD és a kankanolt, egy monoterpén-glikozidot, a kankanosid E-t, két fenil-etanol-oligoglikozidot, a kankanozidot F és a G, valamint egy acilezett oligocukrot, a kankanózt lehet izolálniCistanche tubulosa kivonat

jelenleg használt. Egyéb összetevők, beleértve a fehérjéket aCistanche tubulosa kivonat, tisztázatlan marad. A fenti spekulációkkal együtt azt terveztük, hogy megvizsgáljuk, hogy más komponensek kölcsönhatásba lépnek-e az SGLT1-gyel, és gátolják-e az ECH és az ACT felszívódását.

Az in vivo kísérletek nem tudják könnyen megkülönböztetni a felszívódás mértékét és a májon keresztüli első áthaladás elkerülését. Az in situ bélperfúziós modell előnye az in vivo és in vitro modellekkel szemben a kísérleti paraméterek egyszerű szabályozása és a többi szerv hatásának kizárása, valamint az érintetlen bélvérellátás fenntartása miatt.[22] A phloridzin-érzékeny glükóz transzporter szerepét anin-situ bélperfúziós rendszerben értékeltük. Amint az 5. ábrán látható, az ECH és az ACT egyidejűleg elnyelt mennyiségeCistanche tubulosa kivonat (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm/s teljesen felszívódik az emberben, míg a rosszul felszívódó gyógyszerek és peptidek (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm/s (2. táblázat), ami magas orális biohasznosulásra utal állatokban és emberekben. Crespy et al.[43] kimutatták, hogy egy in situ bélperfúziós vizsgálatban az efflux nem különbözött szignifikánsan a phloridzin és a phloretin között. Azt is kimutatták[44], hogy az SGLT1-re nagy érzékenységű phloridzin orális biohasznosulása csak 10 százalék volt patkányokban. A jövőbeni vizsgálatoknak ki kell értékelniük az ECH biológiai hozzáférhetőségét és a májra kifejtett first-pass hatását a diétás kivonat nagy dózisú orális adagolása után. Az in situ eredmények azt jelentik, hogy a bevitelCistanche tubulosa kivonatjavíthatja az intakt ECH és ACT alacsony oralabszorpcióját.

Következtetés

Diétás és gyógyászatiCistanche tubulosa kivonataz ECH és az ACT bélrendszeri felszívódásának fokozása az emberi egészség jobb kezelését szolgálhatja, bár a phloridzin-érzékeny transzport részvételét csökkenteni kell.

Nyilatkozatok

Érdekellentét

A Szerző(k) kijelenti(k), hogy nincs nyilvánosságra hozandó összeférhetetlenségük

Finanszírozás

Ezt a munkát részben a Kinki Egyetem High-Tech ResearchCenter támogatta.

Köszönetnyilvánítás

A szerzők köszönetet szeretnének mondani Osamu Muraokának (Kinki Egyetem, Osaka, Japán) és Toshio Morikawának (Kinki Egyetem, Osaka, Japán)Cistanche tubulosa kivonatés tiszta összetevők. Nagyon hálásak vagyunk Masahiro Iwakinak (Kinki Egyetem) a tanulmányi támogatásért.

Cistanche tubulosa kivonatTermékek

Innen: „Az echinakozid és az akteozid phloridzin-érzékeny transzportja és a bélrendszerben történő megváltozott felszívódási út a készítmény alkalmazása utánCistanche tubulosa kivonat' általTadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, 1457–1465.Az SGLT1 által szállított fenil-etanol-glükozidok

Hivatkozások

1. Tanaka J et al. HatásaCistanche tubulosa kivonatkülönböző agyi betegségekben. Ételstílus 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J et al. Öregedésgátló funkcióiCistanche tubulosa kivonat. Ételstílus 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et al. A szépség és a hajnövekedés funkcióiCistanche tubulosa kivonat. Ételstílus 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et al. Zsír metabolizáló hatásaCistanche tubulosa kivonat. Ételstílus 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F et al. A Cistanche tubulosa Schrenk (Hog) összetevői f.II. egy új feniletanoid glikozid és egy új neolignán glikozid izolálása és szerkezete. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Fenil-etanol oligoglikozidok és acilezett oligocukrok érrelaxáns hatással a Cistanche tubulosa-ból. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et al. Herba citances fenil-etanoid glikozidjainak analízise RP-HPLC-vel. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. A Herba cisztánokból származó fenil-etanol-glikozidok metabolikus szabályozása kutya gyomor-bélrendszerében. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. Az echinakozid neuroprotektív hatásai a Parkinson-kór egér MPTP-modelljében. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. Hepatoprotektív aktivitású acilezett fenil-etanoid oligoglikozidok a Cistanche tubulosa sivatagi növényből. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et al. A syringa Vulgaris növényi sejttenyészetekkel biotechnológiailag tisztított verbaszkozid hatása a parodontitis rágcsálómodelljében. J Pharm Pharmacol 2011; 63, 707–717.
12. Wu YT et al. Az akteozid meghatározása Cistanche deserticolában és Boschniakia rossica-ban, valamint farmakokinetikája szabadon mozgó patkányokban LC-MS/MS segítségével. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. Echinaceából származó alkilamidok és kávésavkonjugátumok permeabilitási vizsgálata caco-2 sejt egyrétegű modell segítségével. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C et al. Az echinakozid meghatározása patkányszérumban fordított fázisú, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával ultraibolya detektálással és alkalmazása a farmakokinetikára és a biohasznosulásra. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbaszkozidok olíva malomvízből: biológiai hozzáférhetőségük és bélrendszeri felszívódásuk értékelése in vitro emésztési/caco{1}} modellrendszerrel. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. Az echinakozid, egy jó antioxidáns metabolizmusa patkányokban: epe metabolitjainak izolálása és azonosítása. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA et al. A P-glikoprotein ATPáz aktivitásának modulálása egyes fitokomponensek által. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. Az étrendi flavonoid kvercetin 4'-béta-glükozid kiáramlása a humán bél caco-2 sejt monorétegein az apikális multidrog rezisztenciával összefüggő fehérje-2 révén. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. Az étrendi flavonoid kvercetin 4'-béta-glükozidáz sejtfelvétele az SGLT1 nátrium-függő glükóz transzporter által. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Az eperizon bélrendszeri first-pass metabolizmusa patkányban. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B et al. A verbaszkozid antihiperalgéziás hatása a neuropátiás fájdalom két modelljében. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ et al. A klórpirifosz bélpermeabilitása az egyszeri áteresztő bélperfúziós módszerrel patkányban. Toxikológia 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS et al. P-glikoprotein és citokróm P-450- által közvetített növényi gyógyszerkölcsönhatás. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK et al. A genistein-7-glükozid transzportja az emberi bél CACO-2 sejtjeivel: az MRP2 potenciális szerepe. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et al. A gyógyszertranszporterek apikális/bazolaterális felszíni expressziója és szerepe a vektorális gyógyszertranszportban. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Caco-2 sejtkultúrák a bélrendszeri felszívódás értékelésében: egyes együtt adott gyógyszerek és természetes vegyületek hatásai a biológiai mátrixokban. (University of Helsinki, Finnország, 2006) Akadémiai Értekezés, 1–66.
27. Scambia G et al. A kvercetin fokozza az adriamicin hatását egy multirezisztens MCF-7 humán emlőrák sejtvonalban: a P-glikoprotein mint lehetséges célpont. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. A miricetin, egy antioxidáns hatása a lozartán és aktív metabolitja, az EXP-3174 farmakokinetikájára patkányokban: a citokróm P450 3A4, a citokróm P450 2C9 és a P- lehetséges szerepe glikoprotein gátlás a miricetin által. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. A paklitaxel-2′-etilkarbonát prodrug képes megkerülni a P-glikoprotein által közvetített sejtkiáramlást, hogy növelje a gyógyszer citotoxicitását. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et al. Az étrendi kvercetin-glikozidok és kvercetin felszívódása egészséges ileostomiás önkéntesekben. Am J. Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. A bélrendszeri glükózfelszívódás diffúz komponensét a GLUT2 glükóz által kiváltott toborzása közvetíti az ecsettábla membránjába. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. Az endogén plazmamembrán fehérjék válogatása két helyről történik tenyésztett humán bélhámsejtekben (Caco-2). Cell 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 és GLUT5 hexóz transzporter mRNS-ek jelenléte és eltérő expressziója Caco-2 sejtklónokban a sejtnövekedéssel és a glükózfogyasztással összefüggésben. Biochem J. 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. A GLUT 5 fruktóz transzporter cukorfüggő expressziója Cac-2 sejtekben. Biochem J. 1995; 312, 757–762.

35. Walgren RA et al. A kvercetin és glükozidjainak transzportja az emberi bélhám Caco-2 sejtjein keresztül. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. A hexóz transzporterek (SGLT1, GLUT1, GLUT2 és GLUT5) összehasonlító expressziója az egér gyomor-bél traktusában. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. A verbaszkozid, a citrom-verbénából származó fenilpropanoid-glikozid hatása a foszfolipidek modellmembránjain. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. A csokoládémátrix összetételének hatása a kakaó-flavan{1}}ol biológiai hozzáférhetőségére in vitro és emberi biológiai hozzáférhetőségre. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et al. Az orbáncfű-termékekben lévő fenolok igen változó tartalma befolyásolja azok transzportját az emberi bélrendszerben a Caco{1}} sejtmodellben: a termékek szabványosításának gyógyszerészeti és biofarmakonikus indoklása. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. Az élelmiszerek hatása a kakaóflavanolok felszívódására és farmakokinetikájára. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Az etanol és a polifenolmentes bormátrix serkenti az emberi bél Caco{1}} sejtjeinek differenciálódását. Procianidinben gazdag szőlőmag-kivonattal való társulásuk hatása. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et al. Összefüggés az emberi orális gyógyszerfelszívódás és a humán belső hámsejtek (Caco-2) látszólagos gyógyszer-permeabilitási együtthatói között. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. A kvercetin, phloretin és glükozidjaik bélrendszeri felszívódásának összehasonlítása patkányokban. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. A floretin és a phloridzin biohasznosulása patkányokban. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.