Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Absztrakt:Az általános egészséggel kapcsolatos egyre növekvő aggodalom a természetes összetevők globális piacát mozgatja nemcsak az élelmiszeriparban, hanem a kozmetikai területen is. Ebben a tanulmányban három izlandi vizes kivonat lehetséges kozmetikai alkalmazásainak szűrésehínárpulzáló elektromos mezők (PEF) által előállított s-t végeztek. A PEF által előállított Ulva lactuca, Alaria esculenta és Palmaria palmata kivonatokat a hagyományos forró vizes extrakcióval hasonlították össze polifenol-, flavonoid- és szénhidráttartalom tekintetében. Ráadásul,antioxidánstulajdonságait és enzimatikus gátlóaktivitását in vitro vizsgálatok segítségével értékeltük. A PEF a hagyományos módszerhez hasonló eredményeket mutatott, számos előnyt mutatva, mint például a nem termikus természete és a rövidebb extrakciós idő. A három izlandi faj közül az Alaria esculenta mutatta a legmagasabb fenol- (átlagérték 8869,7 µg GAE/g dw) és flavonoid (átlag) tartalmat. 12 098,7 µg QE/g dw) vegyületek, amelyek szintén a legmagasabb értéket mutatjákantioxidánskapacitások. Ezenkívül az Alaria esculenta kivonatok kiváló enzimellenes aktivitást mutattak (76,9, 72,8, 93.{6}} és 100 százalék a kollagenáz, elasztáz,tirozinázés hialuronidáz) bőrfehérítő és öregedésgátló termékekben való felhasználásuk miatt. Így előzetes tanulmányunk azt sugallja, hogy a PEF által előállított izlandi Alaria esculenta alapú kivonatok felhasználhatók természetes kozmetikai és kozmetikai készítmények lehetséges összetevőjeként.

Kulcsszavak:makroalgák; Ulva lactuca; Alaria esculenta; Palmaria palmata; PEF által támogatott extrakció;bioaktív vegyületek; zöld kitermelés; természetes hozzávalók; kozmetikai termékek

A cistanche fehérítő természetes összetevők

1. Bemutatkozás

Az elmúlt években jelentősen megnőtt a kereslet a potenciális egészségügyi előnyökkel bíró új bioaktív vegyületek iránt. Számos kutatócsoport a tengeri élőlényekkel, például a makroalgákkal kapcsolatos kutatásokra helyezte a hangsúlyt, hogy új és fenntartható természetes vegyületeket találjanak az agrár-élelmiszeriparban, a farmakológiában, az élelmiszeriparban és újabban a kozmetikumok területén [1,2]. . A makroalgák a fotoszintetikus organizmusok nagy és heterogén csoportja, amelyet hatalmas biológiai sokféleség és összetett biokémiai összetétel jellemez. Kémiai szerkezetük és pigmenttartalmuk szerint a makroalgák három törzsre oszthatók, beleértve a barna algákat (Phaeophyceae), a vörös algákat (Rhodophyta) és a zöld algákat (Viridiplantae). Az algavegyületek a sejt citoplazmájában tárolódnak, vagy a sejtmembránokhoz kötődnek; így a sejtek szétesése döntő fontosságú az alga biomassza felértékelődése szempontjából. Ezenkívül a sejtfal összetétele nagymértékben változhat az algafajok között, az apró membránoktól a többrétegű összetett struktúrákig, ami kihívást jelent az algatermékek visszanyerése [3]. Általánosságban elmondható, hogy a tengeri moszatok kiváló forrásai a poliszacharidoknak, fehérjéknek, lipideknek és számos másodlagos anyagcsereterméknek, például fenolos vegyületeknek, terpenoidoknak, karotinoidoknak, pigmenteknek és nitrogénszármazékoknak [4–6]. Bár az elsődleges metabolitok döntő fontosságúak, a legújabb adatok azt mutatják, hogy a másodlagos metabolitok tartalma meghatározza ahínárkivonatok [7].

Az általános egészséggel és jóléttel kapcsolatos növekvő aggodalom, valamint a mindennapi termékekben előforduló káros vegyi anyagok iránti tudatosság a természetes és szerves összetevők globális piacát mozgatja [8]. Az elmúlt években a fogyasztói tudatosság a természetes összetevők és a környezetbarát termékek preferálása iránt az élelmiszeripartól a kozmetikai és testápolási iparig terjedt [9]. Ezen túlmenően a globális felmelegedés és az ökológiai problémák jelenlegi kontextusában a közvélemény egyre jobban tudatosítja a környezeti problémákat. Ezen aktuális aggodalmak fényében a fogyasztók érdeklődésüket a zöld, egészséges és vegyszermentes termékek felé fordították. Ennek eredményeként a kozmetikai ipar jelenleg a mérgező vegyszereket és a káros összetevőket újszerű és természetes, nagy értékű vegyületekre cseréli, hogy „kémiailag tiszta” szépségápolási termékeket állítson elő [10].

A kozmetikumokat hagyományosan olyan termékekként határozták meg, amelyeket az emberi test tisztítására, szépítésére vagy vonzóvá tételére alkalmaznak anélkül, hogy befolyásolnák a test szerkezetét vagy funkcióit. Az új trendek és a közelmúltban jelentkező fogyasztói igények azonban olyan újszerű termékek kifejlesztését mozdították elő, amelyek minimális erőfeszítéssel többféle előnnyel járnak. A kozmetikai kifejezést manapság gyakran használják olyan bioaktív összetevőket tartalmazó kozmetikai termékek leírására, amelyekről azt állítják, hogy orvosi vagy gyógyszerszerű előnyökkel járnak [11]. A kozmetikumok általában olyan funkcionális összetevőket tartalmaznak, mint a vitaminok, fitokemikáliák, enzimek,antioxidánsokés/vagy illóolajok [12]. Mivel ezeknek a bioaktív vegyületeknek a széles skáláját találták meg a makroalgákban, újhínárs és tengeri algákból származó kivonatok a kozmetikai és kozmetikai vizsgálatok ígéretes területének bizonyultak [13,14].

Számos másodlagos metabolit származikhínárismertek a bőrre gyakorolt ​​értékes egészségügyi jótékony hatásaikról, mint például fényvédő, hidratáló,antioxidánsgyulladáscsökkentő és regeneráló tulajdonságokkal [15]. Ezen jótékony hatások alapján az algákat beépítik a kozmetikai termékekbe, például fényvédőkbe, öregedésgátló termékekbe, valamint a hiperpigmentáció megelőzésére, a poliszacharidokat pedig a bőr hidratáltságának megőrzésére és a kiszáradás megelőzésére [16]. Az öregedés során az extracelluláris mátrix fehérjék érzékenyek a proteolitikus enzimek, például a kollagenázok és az elasztázok túlzott aktivitására, ami látható változásokat eredményez a bőrön, például ráncokat vagy a bőr rugalmasságának elvesztését. Ígéretes megközelítés a bőr külső öregedésének megelőzésére a kollagenáz és elasztáz aktivitás természetes vegyületek általi gátlása. A növényi kivonatokat széles körben vizsgálták, és azt találták, hogy anti-kollagenáz és anti-elasztáz aktivitással rendelkeznek [17]. Kevés információ áll azonban rendelkezésre a hínárkivonatok gátló enzimaktivitásával kapcsolatban.

A bioaktív anyagok hínárból való izolálására leggyakrabban alkalmazott extrakciós módszerek a hagyományos technikákon alapulnak. Mindazonáltal a hagyományos módszerek alkalmazásának számos hátulütője van, mint például a nagy mennyiségű szerves oldószer alkalmazása, a hosszabb extrakciós idők, a magas hőmérsékletek, a szelektivitási problémák, a nagy energiaigény, valamint a nem célzott vagy zavaró vegyületek együttes extrakciója [18]. Ezért a zöld kémiai elveken alapuló új extrakciós technikák potenciális érdeklődésre tarthatnak számot [19].

Az impulzusos elektromos mező (PEF) egy feltörekvő, nem termikus és energiahatékony élelmiszer-feldolgozási technológia [20]. A PEF rendszerint magas feszültségű (kV tartomány) és rövid időtartamú (mikro- vagy nanomásodperc) elektromos térimpulzusok alkalmazását foglalja magában egy két elektróda közé helyezett terméken [21]. Az elektromos impulzusok alkalmazása reverzibilis vagy irreverzibilis pórusok képződését idézi elő a sejtmembránokban, elektroporációként vagy elektropermeabilizációként definiálva, ami így elősegíti az oldószerek gyors diffúzióját és az intracelluláris vegyületek tömegtranszfer fokozását [22]. A legújabb alkalmazások az impulzusos elektromos energia bio-, élelmiszer- és mezőgazdasági termékekből való extrakciós technikaként (PEF-assistedextraction) történő felhasználására összpontosítottak [23]. A PEF kezeléssel nagyobb tisztaságú kivonatokat lehet előállítani, növelni a bioaktív vegyületek, például polifenolok, karotinoidok vagy antocianinok kivonási sebességét, valamint kiküszöbölni a szerves oldószerek használatát és lerövidíteni az extrakciós időt [24,25]. A PEF-kezelést sikeresen alkalmazzák értékes vegyületek különböző tengeri forrásokból való kinyerésére, mint például aproteinek [26–28], szénhidrátok [29,30], lipidek [31,32] és pigmentek, például karotinoidok, klorofillok vagy fikocianinok [22,33]. ,34] mikroalgákból és hínárokból.

Így jelen tanulmány fő célja az volt, hogy felmérje a PEF kivonatok lehetséges kozmetikai alkalmazását három Izlandon tenyésző makroalgából: U. lactuca (zöld makroalgák), A. esculenta (barna makroalgák) és P. palmata (vörös makroalgák). . A zöld készítmények szerves és természetes összetevőinek kifejlesztésére tett erőfeszítések során a PEF-asszisztált extrakciót a hagyományos szerves oldószeres textúra környezetbarát alternatívájaként javasolták. Az extrakciós eljárás után vizeshínárA kivonatokat polifenol-, flavonoid- és szénhidráttartalommal jellemezték. Ráadásul,antioxidánstulajdonságait és enzimatikus gátló aktivitását in vitro aktivitási vizsgálatokkal értékeltük. Az itt közölt eredmények alapot adnak a barna, vörös és zöld makroalgák jobb megértéséhez, hogy aktív összetevőket állítsanak elő természetes és fenntartható forrásokból izolált biológiailag aktív vegyületeket tartalmazó kozmetikai termékek innovatív formuláihoz.

2. Eredmények és megbeszélés

2.1. PEF által támogatott extrakció az izlandi hínár biomassza feldolgozásához

Az eredmények azt mutatják, hogy az elektromos vezetőképesség az A. esculenta-ból, majd a P. palmata-ból és az U. lactuca-ból készített szuszpenzióban volt a legmagasabb (p < {0}},05)="" (1.="" táblázat).="" a="" kezelés="" típusának="" hatását="" azonban="" nem="" azonosították="" szignifikánsnak="" (p=""> 0,05). Az elektromos vezetőképesség mérését más szerzők sikeresen alkalmazták a PEF-kezelés hatékonyságának értékelésére biológiai szövetekben az intracelluláris ionos anyagok felszabadulására, a megnövekedett sejtmembrán-permeabilizáció következtében [35–37].

Vizsgálatunkban az eredmények nem utaltak ezeknek az anyagoknak a PEF általi erősebb felszabadulására, mivel az extrakciós kezelések által kiváltott vezetőképesség-változások általában a HW szuszpenzióknál voltak a legnagyobbak. Korábbi tanulmányok arra a következtetésre jutottak, hogy az extracelluláris közeg kezdeti vezetőképessége befolyásolja az elektroporáció hatékonyságát, de nincs egyetértés abban, hogy van-e pozitív vagy negatív kapcsolat e két tényező között [38]. A vezetőképesség és az anyag jellemzőinek eltérései bonyolíthatják az összehasonlítást. Vizsgálatunk során az A. esculenta szuszpenziója és a másik két faj vezetőképessége között nagy különbség volt, ami nem tükröződött az extrakciós kezelés során bekövetkező vezetőképesség-változás mértékében. Megállapították, hogy a barna moszat hamutartalma száraz tömegének több mint 50 százalékát teszi ki [39], amely nagyrészt ionokból áll, ami részben megmagyarázhatja az A. esculenta szuszpenziók magas vezetőképességét a másik két fajhoz képest.

Az eredmények azt mutatják, hogy az U. lactuca szuszpenzió pH-értéke alacsonyabb volt, mint a másik két fajé, de az extrakciós típus egyértelmű hatását nem tapasztaltuk. A hőmérsékletet a kezelés előtti 22 ± 1 ◦ C-ról 95 ◦ C-ra emelték HW-re (minden faj esetében), 36.0 ± 1.0 ◦ C, 46,3 ± 0. 6 ◦C és 51.{12}} ± 1◦C PEF által, A. esculenta, P. palmata és U. lactuca szuszpenziókban. Ugyanez a tendencia volt megfigyelhető a PEF-fel kezelt csoportoknál is, amelyeket ezután a HW tovább fűtött. A hőmérséklet-emelkedést az elektromos energia hőenergiává alakítása (ohmos fűtés) okozta a felfüggesztésben a PEF kezelés során. A hőmérséklet-emelkedés mértéke köztudottan arányos az alkalmazott áramerősséggel, de fordított arányban a vezetőképességgel. Ez megmagyarázhatja, hogy a P. palma és azU. A lactuca magasabb hőmérsékletet érte el a PEF kezelés során, bár alacsonyabb vezetőképességgel rendelkezik, mint az A. esculenta.

2.2. Az izlandi hínárkivonatok UV-VIS abszorpciós spektruma

A vizsgált hínárok spektrális profiljukban különböznek (1. ábra), ami arra utal, hogy az összetétel és az UV-abszorpciós potenciál fajonként eltérő. Az extrakciós technika típusa azonban nem mutatott figyelemre méltó hatást az UV-abszorpciós spektrumban, a tengeri moszatkivonatok hasonló abszorpciós profilt mutattak az extrakciós módszertől függetlenül.

Az U. lactuca zöld alga UV-abszorpciós spektruma kiemelkedő csúcsot mutatott az UV-B tartományban (280-320 nm) (1a. ábra), míg az A. esculentas barna algából származó kivonatok nem mutattak egyértelmű abszorpciós zóna kialakulását (1c. ábra). ). Az eredmények azonban 220 nm-en erősebb abszorbanciát jeleztek az A. esculenta kivonatokban, mint az U. lactuca és a P. palmata, amiről azt feltételezték, hogy az A. esculenta magas fenolvegyület-tartalma okozza (2. táblázat). Az ezen a tartományon belüli abszorpciós maximumot a fenolos vegyületek és az alginátok közötti kapcsolattal hoznak összefüggésbe. Feltételezhető, hogy ez az összefüggés idővel megőrzi a fenolos vegyületek UV-abszorpciós képességét [40].

Érdekesebb megállapítás volt, hogy a vörös alga kivonatokra kapott eredmények, P. a tenyér elnyelte az UV-A sugárzás egy részét (320-400 nm). Ismeretes, hogy a vörös algák ultraibolya sugárzást elnyelő képességgel rendelkező fényvédő vegyületeket halmoznak fel, például mikosporinszerű aminosavakat (MAA), amelyek ebben a specifikus UV-régióban abszorbeálnak [41]. A P. palmata kimagasló 320 és 340 nm közötti csúcsokkal jeleskedett az UV abszorpciós spektrumban, összhangban az ebben a tartományban elnyelő MAA-k jelenlétével [42], mint például a palitinol (csúcs abszorpció 332 nm-en), az asterina-330 (abszorpciós csúcs 330 nm), porphyra-334 (csúcs abszorpció 334 nm-en) és mások [43]. Mivel az extrakciós körülmények, például az oldószer típusa ismert, hogy befolyásolják az extrakció hatékonyságát, a jelen tanulmány eredményeit összehasonlították a MAA-k P. palmata-ból vízzel történő extrakciójával kapcsolatos korábbi tanulmányokkal. Ezekben a vizsgálatokban az abszorpciós maximumcsúcsokat 325-330 nm-nél észlelték [44], akárcsak a jelen tanulmányban. Ezért feltételezhető, hogy a 320 és 340 nm között megfigyelt csúcsok MAA-k jelenlétének tudhatók be.

A 350 és 700 nm közötti abszorpciós spektrumokban mutatkozó különbségeket a zöld, barna és vörös makroalgák, a klorofill-b (450-500 nm), a fukoxantin (400-500 nm) és a fikoeritrin különböző kiegészítő pigmentek jelenléte magyarázza. (600–650 nm) [45]. A kivonatokban lévő vízoldható vegyületek koncentrációja erősebb hatást fejtett ki. Következésképpen az algafajok közötti különbségeket tükröző mintázat nem volt nyilvánvaló a jelen tanulmányban.

2.3. Az izlandi algakivonatok összes fenol-, flavonoid- és szénhidráttartalma

A teljes fenoltartalom ahínárs 1592 és 9368 µg GAE/g dw között volt (2. táblázat). Az A. esculenta barna alga mutatta a legnagyobb mennyiséget (p < 0.05)="" fenolvegyületekből="" (átlagérték="" 8869,7="" µg="" gae/g="" dw),="" ezt="" követi="" a="" p.="" palmata="" (átlagérték="" 1806,2="" µg).="" gae/g="" dw)="" és="" u.="" lactuca="" (átlagérték="" 1750,7="" µg="" gae/g="" dw)="" (nem="" volt="" szignifikáns="" különbség="" a="" p.="" palmata="" és="" az="" u.="" lactuca="" kivonatok="" között)).="" az="" egyes="" hínárfajok="" esetében="" a="" polifenoltartalom="" nem="" különbözött="" az="" extrakciós="" módszerek="" között,="" kivéve="" az="" u.="" lactuca-t,="" mely="" eredmények="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="" hw="" volt="" a="" leghatékonyabb="" technika="" (p="">< 0,05).="" ki="" kell="" emelni="" azonban="" a="" pef="" előnyeit,="" beleértve="" a="" nem="" termikus="" természetét,="" a="" rövidebb="" extrakciós="" időt="" (10="" perc="" vs.="" 45="" perc)="" és="" a="" zöld="">

A három algacsoport közül a barna makroalgák több polifenolt tartalmaznak, mint a vörös és zöld makroalgák. Az eredmények megegyeztek a korai tanulmányokkal [46,47], amelyek arról számoltak be, hogy a barna (pl. A. esculenta és Saccharina latissma) algák magasabb fenoltartalmúak, mint a vörös (P. palmata) és a zöld fajok (pl. U. lactuca). Ezt más szerzők is alátámasztották [48], akik arra a következtetésre jutottak, hogy az átlagos polifenoltartalom fajspecifikus (A. esculenta > S. latissma > P. palmata), a fenoltartalom pedig több mint háromszor magasabb volt az A. esculenta esetében, mint a többi fajban. A. esculenta: 37 mgphloroglucinol-ekvivalens (PGE)/g dw; S. latissma: 8 mg PGE/g dw; P. palmata: 5 mgGAE/g dw). Továbbá, ugyanebben a tanulmányban a szerzők arról számoltak be, hogy a polifenoltartalom évszakonként változik, míg a térbeli eltérések (az algákat Norvégiában, Franciaországban és Izlandon gyűjtötték be) marginális hatást mutattak. Például Gager és mtsai. (2020) azt találták, hogy az A. esculenta polifenoltartalmának szezonális ingadozása szignifikáns hatást gyakorolt, ősszel több mint 300 mg GAE/g DW, szemben a 20 mg GAE/g DW alatti beindulási idővel. Hét, Bretagne-ban (Franciaország) kereskedelemben betakarított barna moszatból származó florotanninok 1H NMR-rel és in vitro vizsgálatokkal kimutatva: időbeli változás és potenciális valorizáció a kozmetikai alkalmazásokban. Mintánkat júliusban (U. lactuca és A. esculenta) és novemberben (P. palmata) gyűjtöttük. Roleda tanulmányában [48] a norvégiai trondheimi (Izlandon nem gyűjtött) A. esculenta átlagos tartalma nyáron 40 mg PGE/g dw és P. palmata Izlandról, de ősszel 4 mg GAE/g dw volt. A vizsgálatunkhoz képest közölt magasabb értékek az alkalmazott extrakciós közeggel (80:20 aceton:víz) magyarázhatók, ami valószínűleg magasabb extrakciós hozamot eredményez. Magasabb polifenol tartalmat is találtak az A. esculenta kivonatoknál, etanol és víz (50:50) elegyével ultrahanggal [49]. Azonban ugyanazt az extrakciós közeget és a klasszikus oldószeres extrakciót alkalmazva az A. esculenta 44,1 mg GAE/100 g dw vizes kivonatot tartalmaz [50], ami viszonylag hasonló a jelen vizsgálatban megfigyelthez.

Az átlagos flavonoidtartalom fajspecifikus volt (A. esculenta > U. lactuca > P. palmata; (p < 0.{{10}}5) (2. táblázat). flavonoidokat az A. esculenta kivonatoknál (átlagérték 12098,7 µg QE/g dw), míg az U. lactuca esetében alacsonyabb tartalmat (átlagérték 4152,4 µg QE/g dw), a minimális tartalmat pedig a P. palmata kivonatoknál határoztuk meg ( átlagérték 905,8 µg QE/g dw). A teljes fenoltartalomnál tapasztalt viselkedéshez hasonlóan az extrakciós technológia típusa nem gyakorolt ​​szignifikáns hatást a flavonoid tartalomra (p > 0,05), az U. lactuca kivételével. A HW és a két technika kombinációja (PEF plusz HW) volt a leghatékonyabb technika a flavonoidok kivonására U. lactuca-ban (p < 0,05).

Számos tanulmány készült a szárazföldi növények flavonoid tartalmáról, de az algák flavonoidtartalmának vizsgálata kevés [51], különösen a jelen munkában vizsgált fajok esetében. Ugyanis Ummat et al. [49] arról számolt be, hogy az ultrahanggal segített extrakció mind a 11-ben javította a flavonoidok visszanyerését.hínárs vizsgálták (beleértve az A. esculenta-t is), összehasonlítva a hagyományos oldószeres extrakciókkal, 50%-os etanol keverékével. Egy másik tanulmányban a flavonoidokat négy Ulva faj (Ulva clathrata, Ulva linza, Ulva flexuosa és Ulva intestinalis) metanolos kivonatában határozták meg, amelyeket a Perzsa-öböl északi partjainak különböző részein termesztettek Irán déli részén; az algakivonatok flavonoid tartalma 8 és 33 mg RE/g dw között változott [52]. Ugyanezen kutatócsoport korábbi tanulmányai azonban jelentős változásokat mutattak ki a kémiai összetevőkben az évszakok és a környezeti feltételek változásával [53]. Így kissé nehéz teljes áttekintést kapni ezen bioaktív vegyületek bibliográfiájárólhínárs, a rendelkezésre álló publikált kutatások hiánya miatt, de a flavonoid tartalomnak a termesztési feltételek és a földrajzi elhelyezkedés hatására bekövetkező változásai miatt is.

Mean carbohydrate content of produced extracts was also species-specific (P. palmata >U. lactuca > A. esculenta; p < 0,05)="" (2.="" táblázat).="" a="" tartalom="" 44,8="" és="" 510="" mg="" glue/gdw="" között="" változott="" algafajtól="" függően.="" a="" tengeri="" alga="" nagy="" mennyiségű="" poliszacharidot="" tartalmaz,="" amelyek="" fontos="" funkciókat="" töltenek="" be="" a="" makroalgasejtek="" számára,="" beleértve="" a="" szerkezeti="" támogatást="" és="" az="" energiatárolást.="" például="" a="" vörös="" és="" barna="" hínár="" sejtfalának="" nagy="" részét="" szulfatált="" galaktánok="" képviselik,="" amelyek="" agar,="" alginát="" és="" karragenán="" néven="" ismertek="" [54].="" a="" legnagyobb="" szénhidráttartalmat="" a="" redalgae="" p.="" palmata="" mutatta="" (átlagérték="" 441="" mgglue/g="" dw).="" az="" eredmények="" megegyeztek="" a="" korábbi="" tanulmányokkal,="" amelyek="" a="" palmaria="" fajok="" legmagasabb="" poliszacharid="" koncentrációjáról="" számoltak="" be="" [55].="" ezenkívül="" mutripah="" et="" al.="" [56]="" a="" p.="" palmata="" összes="" szénhidráttartalmát="" 469="" mg/g="" száraz="" hínárban="" írták="" le,="" ami="" viszonylag="" hasonló="" a="" jelen="" tanulmányban="">

Az U. lactuca zöld makroalgák 249,5 mg GluE/g dw-t mutattak az alkalmazott extrakciós technikától függően (2. táblázat). Az irodalom alapján az U. lactucaha vízben oldódó és oldhatatlan cellulózt tartalmaz, amely szerkezeti poliszacharidoknak felel meg, egy fő komponenssel, az ulvánnal, amely 9-36 százalékos szárazanyag-tartalommal járul hozzá a biomasszához [57]. Az Ulvan főként szulfatált ramnózból, uronsavakból (glükuronsav és iduronsav) és xilózból áll. Poláris jellege miatt az ulván vizes oldatainak oldhatóságát növeli a magas hőmérsékleten (80–90 ◦C) végzett extrakció [58]. Az extrakciós hőmérséklet lehet az oka annak, hogy a hagyományos melegvizes extrakcióval és a két módszer kombinációjával (PEF plusz HW) előállított U. lactucaextracts összes szénhidráttartalma magasabb volt (p < 0,05),="" mint="" a="" csak="" pef="" alkalmazásával="" elért="">

Más szerzők viszont kiemelik a poliszacharidtartalom szezonális változásának fontosságát. Például Schiener és munkatársai azt állítják, hogy azonosítják a szezonális ingadozásokat, és megjósolják a hínár legjobb betakarítási idejét. Az A. esculenta szezonális összetételének elemzése kimutatta, hogy a szénhidrátok maximális értékei egybeesnek a fehérje, a hamu, a polifenolok és a nedvesség csökkent koncentrációjával [39]. A szerzők szerint ezeket az évszakonként és fajonként változó összefüggéseket az iparágak felhasználhatják a célzott hozamok maximalizálására.hínáralkatrészek.

2.4. Az izlandi hínárkivonatok antioxidáns kapacitása

A három algafaj nyers kivonata közül az A. esculenta rendelkezett a legerősebb DPPH-megkötő aktivitással (p < {0}},05),="" 90="" százaléknál="" nagyobb="" tisztítóhatás="" mellett="" (3.="" táblázat).="" a="" standard="" oldatok="" esetében="" az="" a.="" esculenta="" 100="" µg/ml="" aszkorbinsav="" (87,9="" százalék),="" galluszsav="" (91,0="" százalék)="" és="" -tokoferol="" (87,9="" százalék)="" tisztító="" hatását="" mutatta.="" eredményeink="" megegyeztek="" a="" legutóbbi="" tanulmányokkal="" [50],="" amelyek="" szintén="" pozitívak="">antioxidánsAz A. esculenta kivonatok aktivitása. Meglepő módon nincs jelentős különbségantioxidánsaktivitást figyeltek meg a különböző tesztelt extrakciós módszerek között (p > 0,05). Várható volt, hogy a PEF-kivonatok jobb antioxidáns értékeket mutatnak, mint a hagyományos forró extrakcióval előállított kivonatok, mivel más tanulmányok kimutatták, hogy a zöld technikák (mint például a mikrohullámmal segített extrakció vagy az enzimes extrakció) hatékonyan elkerülhetik a magasabb antioxidáns aktivitást mutató bioaktív vegyületek lebomlását [59]. ,60].

Az a képesség,hínárA vas (Fe3 plusz) vas (Fe2 plusz) ionokká redukáló kivonatait és a gyök ABTS megkötő képességét is vizsgálták FRAP, illetve ABTS módszerrel. A FRAP eredmények a DPPH-hoz hasonló tendenciákat mutattak, ami azt mutatja, hogy a három algafaj nyers kivonata közül az A. esculenta volt a legerősebb vas (Fe3 plusz ) vas (Fe2 plusz) ionra redukáló képessége (p < 0.{{6}="" }5).="" az="" abts-nél="" azonban="" más="" viselkedést="" találtak.="" a="" hínárkivonatok="" hasonló="" képességet="" mutattak="" az="" abts="" gyökök="" megölésére="" (p=""> 0,05), ami azt jelzi, hogy ezek a fajok valószínűleg tartalmaznak néhány hatékony vegyületet, amelyek felelősek a gyökfogó aktivitásáért.

Általánosságban elmondható, hogy a barna algák magasabb arányban vannak jelenantioxidánspotenciál a vörös és zöld családokhoz képest [61]. Eredményeink azt is mutatták, hogy a vizes kivonatok A. Az esculenta hatékony antioxidáns aktivitást mutatott a szabadgyökök megkötésében és a redukáló erejében, ami arra utal, hogy az A. esculenta potenciálisan a természetes antioxidánsok forrása lehet. Az A. esculenta kivonatoknál megfigyelt magas antioxidáns aktivitás a barna algakivonatokban meghatározott magas fenolos vegyülettartalommal hozható összefüggésbe. Számos tanulmányban aantioxidánsAz algakivonatok aktivitását a fenolos vegyületeknek tulajdonították, ami pozitív korrelációt mutat a fenoltartalom és a leválasztó képesség között többnyire a DPPH-val [62,63]. Hasonló korrelációs eredményeket találtunk a jelenlegi tanulmányban az A. esculenta kivonatokra (lásd a 2.6. fejezetben: A kémiai vegyületek és a bioaktív tulajdonságok közötti összefüggések).

2.5. Az izlandi hínárkivonat enzimatikus gátló hatásai

izlandihínárs kivonatai pozitív gátló hatást mutattak az összes tesztelt enzimre (4. táblázat), ami új utakat nyitott az algaforrásokból származó természetes enzimes inhibitorok kiaknázására. Legjobb tudomásunk szerint ez az első alkalom, hogy az izlandiak enzimatikus gátló tevékenységeihínára PEF által előállított kivonatokat tesztelték.

2.5.1. Kollagenáz gátlási aktivitás

Az A. esculenta kivonatok pozitív kollagenáz gátlást mutattak 68-91 százalék között, míg a P. palmaria és U. lactuca kivonatok jelentéktelen gátló hatást mutattak a kollagenázzal szemben (4. táblázat). Az A. esculenta forróvizes kivonat 71,1%-os kollagenáz-gátló aktivitást mutatott, ami magasabb volt, mint az epigallocatechin-3-gallát (EGCG) standard oldatánál (63,2%), és összehasonlítható a kereskedelmi enzimkészlet által biztosított pozitív standarddal (74,9%). Azt találtuk, hogy a PEF által termelt A. esculenta kivonatok 91 százalékos akollagenáz gátlást mutattak, ami még nagyobb aktivitást mutat, mint a kereskedelmi kit által biztosított inhibitor. Ki kell emelni, hogy ez az aktivitás csak a PEF által előállított vizes kivonatokban volt megfigyelhető, a PEF és a HW kombinációja esetén nem. Ez a viselkedés azzal magyarázható, hogy a melegvizes folyamat negatív hatással lehet a kollagenáz aktivitás gátlásáért felelős vegyületekre. A nyers algakivonatok összetettsége miatt azonban további vizsgálatokra van szükség ezen eredmények magyarázatához. A fent említett kutatócsoport jelenleg az A. esculenta kivonatokban lévő gátlómolekulák azonosításán dolgozik, hogy jobban megértse a PEF által kiváltott pozitív hatásokat.

Az A. esculenta kivonatokkal a kollagenáz gátlásával kapcsolatos eredmények megegyeznek a korábbi adatokkal, amelyekben az A. esculenta öregedésgátló hatása miatt kereskedelmi kivonatokban használatos. A kollagén lebomlása az öregedés során a kollagenáz aktivitás miatt következik be, ami ráncokat eredményez a bőrön. A kollagenáz természetben előforduló vegyületek általi gátlása érdekes lehetőség az öregedésgátló termékek számára. Például a SEPPIC, a kozmetikai ipar összetevőit szállító cég az A lipofil kivonatát kínálja. esculenta (Kalparane® AD) [64].

2.5.2. Elasztáz gátlási aktivitás

Csak az A. esculenta nyers kivonatai gátolták az elasztázt, 70 százaléknál nagyobb gátlási aktivitást mutatva (4. táblázat). Az A. esculenta kivonatok anti-elasztáz aktivitása azonban statisztikailag nem különbözött az extrakciós módszerek között (p > 0,05). Összehasonlítva a kvercetinoldatokkal, egy jól ismert elasztáz inhibitorral, amely 100%-os gátlást mutatott 1 mM-nál és 58,7%-os gátlást 0,5 mM-nál, az A. esculenta-ból származó kivonatok teljesítménye magas volt.

Az elasztáz egy proteináz enzim, amely képes csökkenteni az elasztint azáltal, hogy megszakítja a specifikus peptidkötéseket. Következésképpen az elasztáz aktivitás gátlása a dermisz rétegben felhasználható a bőr rugalmasságának megőrzésére [65]. Számos növényi kivonatot elasztázgátlóként azonosítottak [17]; azonban kevés vizsgálatot végeztek az algákból származó elasztáz gátlással kapcsolatban. Irodalmi adatok szerint a növényekből kivont polifenolok erős elasztáz és hialuronidáz inhibitorok [66]. Egy nemrégiben készült tanulmány arról számolt be, hogy a phlorotanninok, a barna algák tanninjai, az Eisenia bicyclis tengeri moszat és az Ecklonia cava barna alga kivonatai jótékony hatással vannak a bőrre, mivel jelentősen csökkentik az elasztáz aktivitást [67]. Az ebben a vizsgálatban előállított A. esculenta kivonatok A legmagasabb TPC és TFC értékek a többi vizsgált fajhoz képest (4. táblázat), így ez lehet az oka annak, hogy a P. palmaria és U. lactuca vizes kivonatai nem mutattak elasztáz ellenes aktivitást. Ennek a hipotézisnek a megerősítésére Pearson korrelációs analízist végeztünk, amely arra utalt, hogy az antienzimatikus aktivitások pozitív korrelációt mutatnak a fenolos anyagok tartalmával (lásd a további tárgyalásokat a 2.6. Kémiai vegyületek és bioaktív tulajdonságok közötti összefüggések fejezetben).

2.5.3. Tirozináz gátlási aktivitás

Az A. esculenta kivonatok pozitívnak bizonyultaktirozináz90 százaléknál magasabb gátlás az összes használt extrakciós módszernél, míg a P. palmaria és az U. lactuca kivonat nem mutatott tirozináz gátló hatást (4. táblázat). Az A. esculenta kivonatok anti-tirozináz aktivitása azonban nem különbözött (p < 0,05)="" az="" extrakciós="" módszerekkel.="" összehasonlítva="" az="" a.="" esculenta="" kivonatok="" hatását="" a="" vizsgált="" kvercetin="" oldatokkal,="" a="" barna="" algák="" nyers="" kivonata="" jobb="" gátló="" hatást="" mutatott,="" mint="" ezek="" az="" oldatok="" (88="" és="" 75="" százalék="" a="" 0,5="" és="" 1="" mm="" kvercetin="" oldatok="" esetében).="" az="" irodalom="" alapján="" számos="" kutató="" számolt="" be="" növények,="" baktériumok="" és="" gombák="" tirozináz-ellenes="" aktivitásáról="" [68].="" mindazonáltal,="" bár="" különböző="" tanulmányok="" azt="" sugallják,="" hogy="" a="" tengeri="" algákból="" származó="" bioaktív="" vegyületek="" jó="" eséllyel="" használhatók="" bőrfehérítő="" szerként="" [13],="" ez="" még="" mindig="" feltáratlan="" terület,="" és="" csak="" néhány="" vizsgálatot="" végeztek.="" az="" ezen="" a="" területen="" végzett="" vizsgálatok="" többsége="" a="" barna="" algákra="" összpontosított,="" egyetértve="" a="" jelen="" tanulmány="" eredményeivel,="" amelyben="" az="" a.="" esculenta="" kivonatok="" mutatták="" a="" legjobb="" tirozináz-ellenes="" aktivitást.="" például="" a="" floroglucinol-származékok="" és="" a="" fluorotanninok,="" amelyek="" a="" barna="" algákban="" található="" gyakori="" másodlagos="" metabolitok,="" gátló="" hatást="" mutattak="" a="" tirozináz="" ellen,="" mivel="" rézkelátképző="" képességük="" van="" [69].="" egy="" nemrégiben="" végzett="" tanulmányban="" a="" lessonia="" trabeculate="" barna="" algák="" mikrohullámmal="" segített="" extrakcióval="" előállított="" kivonata="" 33,73="" százalékkal="" gátolta="" a="" tirozináz="" aktivitást="" [60].="" egy="" másik="" tanulmányban="" a="" turbinaria="" conoides="" barna="" algák="" kivonata="" olyan="" aktivitást="" mutatott,="" mint="">antioxidánséstirozinázgátlószert, azonban ebben az esetben oldószerként etanolt használtak [70]. Szignifikáns korreláció a gombákon lévő növényekből kivont polifenolok gátló hatása közötttirozinázkorábbi tanulmányok is beszámoltak [68]. Hasonlóképpen, ennek a vizsgálatnak az eredményei arra utalnak, hogy a tirozináz gátló aktivitása pozitívan korrelált a flavonoid- és fenoltartalommal (lásd 2.6. Kémiai vegyületek és bioaktív tulajdonságok közötti összefüggések).

A tirozináz fontos szerepet játszik a melanin pigment bioszintézisében a bőrben. A melanin felelős a káros ultraibolya besugárzás elleni védelemért, amely számos kóros állapotot okozhat [71]. Ezenkívül esztétikai problémákat okozhat, ha a melanin hiperpigmentált foltok formájában halmozódik fel [72]. Így a tirozináz inhibitorok kozmetikai termékekbe történő beépítése vonzó lehet a fehérítő és/vagy halványító hatások miatt.

a cistanche gátolhatja a tirozinázt

2.5.4. Hialuronidáz gátlási aktivitás

Mind ahínárA kivonatok szignifikánsan magas anti-hialuronidáz aktivitást mutattak (4. táblázat), összehasonlítható eredményeket mutatva a csersavas oldatokkal (a hialuronidáz jól ismert inhibitora). Pontosabban, az A. esculenta kivonatok 100 százalékos gátlást mutattak az összes vizsgált módszer esetében. Ezen túlmenően az U. lactuca kivonatok 90 százaléknál nagyobb gátlási aktivitást mutattak, ahol a PEF (96,8 százalék) és a PEF plusz HW kombinációja (97,3 százalék) által termelt kivonatok gátlása magasabb volt, mint a hagyományos forró vizes módszerrel 93,4 százalék) (p < 0,05).="" az="" összes="" p.="" palmaria="" kivonat="" hasonló="" aktivitást="" mutatott="" (p="">< 0,05),="" a="" pef="" által="" termelt="" kivonatok="" gátlása="" (91,9="" százalék),="" a="" pef="" plusz="" hw="" (89,5="" százalék)="" és="" a="" hagyományos="" melegvizes="" módszer="" (91,8="" százalék)="">

Más szerzők is leírták a különböző anyagok antihialuronidáz aktivitásáthínárs kivonatok, különösen a barna algákból származó florotanninban gazdag kivonatok esetében [73,74]. Legjobb tudomásunk szerint azonban ez az első alkalom, hogy a PEF által termelt P. palmata és U. lactuca kivonatok hialuronidáz gátló hatásáról számoltak be.

A hialuronsav a dermisz egyik fő alkotóeleme, ahol részt vesz a szövetek helyreállításában, az öregedéssel lebomlik, ráncokat és a bőr feszességének elvesztését okozva. Ebben az értelemben a hialuronidáz inhibitorok növelik a dermális extracelluláris mátrix hialuronsav szintjét az öregedő arcbőr megjelenésének javítása érdekében [13]. Ezért a tanulmány eredményei új utakat nyithatnak az algákból származó természetes hialuronidáz-inhibitorok kozmetikai termékekben való felhasználása előtt.

Összefoglalva, az összegyűjtött adatok alapján arra a következtetésre jutottunk, hogy az A. esculenta kivonatok összességében jobb gátló hatást mutattak, mint a P. palmaria és az U. lactuca a vizsgált enzimekkel szemben. Így a legígéretesebb hínárfaj, amely kiváló antienzimatikus aktivitással rendelkezik, ezért választottuk ki laboratóriumunkba további vizsgálatokra. Bár az A. esculenta nyers kivonatai jó jelöltek in vitro kísérletekben, további vizsgálatokra van szükség a biológiai hatásokért felelős metabolitok azonosítására.

cisztanche kivonat: antioxidáns

2.6. Összefüggések a kémiai vegyületek és a bioaktív tulajdonságok között

A főkomponens-analízis (PCA) eredményei azt mutatták, hogy a csoportok fő szétválasztását a PC1 és PC2 határozta meg, amelyek az adatok varianciájának 71,9 százalékát, illetve 14,5 százalékát tették ki (2. ábra). Az A. esculenta kivonatokat a többi fajhoz képest magasabb flavonoid- és fenolvegyület-tartalom, enzimgátló hatás (kollagenáz, tirozináz és elasztáz), valamint DPPH és FRAP értékek jellemezték, P. palmata és U. lactuca. Ezzel szemben az A. esculenta alacsonyabb szénhidráttartalommal rendelkezett, különösen a P. palmatához képest (amely a PC1 ellentétes oldalán található). Az adatok PC2 mentén történő eltérése főként az ABTS és a hialuronidáz gátlással függött össze. Amint azt a parcellán elfoglalt hely is jelzi, a P. palmata erősebb korrelációt mutatott az ABTS-sel, míg az U. lactuca inkább a hialuronidáz gátló hatásokkal volt összefüggésben, e két fajhoz képest.

Magas és szignifikáns pozitív korreláció a TPC, TFC, DPPH, FRAP és a kollagenázra, elasztázra éstirozinázPearson-korrelációs analízissel igazoltuk (5. táblázat).

Ez megegyezett a korábbi tanulmányokkal, amelyek arról számoltak be, hogy a fenolos vegyületek (beleértve a flavonoidokat is) a fő szerepet játszanak a különböző anyagok antioxidáns aktivitásában.hínár[75–77]. A barna makroalgából származó kivonatok magas antioxidáns aktivitását a polifenolok, a fluorotanninok egy meghatározott csoportjával és azok egyedi molekulaszerkezetével hozták összefüggésbe. A jelentések szerint a barna algákból származó Phlorotannis nyolc egymással összefüggő fenolgyűrűt tartalmaz, amelyek elektroncsapdaként működnek [78,79]. Várható volt, hogy az ABT-k korrelálnak a TPC-vel, egyebekkelantioxidánsparamétereket. Ennek oka lehet, hogy a módszerek eltérő reakciókörülményeken alapulnak, és a reakcióképesség mind az idő, mind a komponensek köre tekintetében eltérő. Például az ABTS reagens a reagensek szélesebb körével reagálantioxidánsmint a DPPH gyök [80]. Másrészt az ABTS-nél említett korlátozások egyike a hosszú reakció és az általános reakcióidő nem biztos, hogy lehetővé teszi a végpont elérését.

Az eredmények azt mutatják, hogy a TPC és a TFC között magas pozitív korreláció áll fenn a kollagenáz, elasztáz és tirozináz gátló aktivitásával ({{0}},93–0,99), míg a kapcsolat a gátlással A hialuronidáz szintje nem volt olyan erős (r=0,42, illetve 0,54). Ez arra utal, hogy más komponensek is hozzájárulhattak a kivonatok gátló hatásához. Más tanulmányok arról számoltak be, hogy a poliszacharidok hialuronidáz-gátló aktivitással rendelkeznek, például az alginsav barna algákban [81,82]. További vizsgálatokra van szükség a makroalgák kémiai összetételére vonatkozóan az izolált vegyületek enzimre gyakorolt ​​hatásaira vonatkozóan, hogy értékeljük az egyes kémiai komponensek hozzájárulását, mivel ebben a tanulmányban a nyers kivonatokra helyeztük a hangsúlyt.

Az eredmények összhangban voltak a korábbi tanulmányokkal, amelyek szerint a kivonatok kémiai összetétele és bioaktivitási szintjei jelentősen eltérnek a három törzs (vörös, zöld és barna alga) között, és az azonos törzshöz tartozó különböző fajok között az életkor és a szövetek befolyásolják. típus. Ezenkívül az összetétel és a jellemzők számos környezeti tényezőtől függenek, amelyek befolyásolják a makroalgák elterjedését és növekedését. Például a fény (UV-sugárzás), a hőmérséklet, a tápanyagok elérhetősége, a levegőnek való kitettség, a víz mozgása, a hullámok kitettsége és a sótartalom. A hőmérsékletet a pigmentképződésre és a tápanyagkoncentrációra, a sótartalomra és az UV-sugárzásra, mint a TPC koncentrációját befolyásoló tényezőkre a legerősebben befolyásoló tényezőként írták le [83].

A különböző makroalgák elterjedése a vízmélység függvényében változik. Az árapály- vagy part menti zónában a part feletti fekvés stresszesebb, mivel az ott termő fajoknak ellenállniuk kell az abiotikus tényezők többszörös változásának az árapály-változások miatt. Például a levegő szárító hatása, a magas napsugárzás (apálykor), a sótartalom és a hőmérséklet változása, valamint alacsony levegőhőmérséklet esetén, beleértve a fagyást is. Az alsó vízjel alatt a növekvő mélység a fényintenzitás nagyon gyors csökkenését és a besugárzásnak való kitettség csökkenését eredményezi.

Az árapály-tartományban növekvő algák kevésbé érzékenyek az UV-sugárzásra, és gyorsabban felépülnek a napsugárzásból. Míg a szulitorális zónában növekvő algák érzékenyebbek az UV-sugárzásra, és kevésbé térnek vissza a napsugárzásból [84]. Ugyanakkor a vízoszlop védelmet nyújt. Jelen tanulmányban a napfény expozíciója feltehetően erősebb volt a P. palmata esetében, mint a többi fajnál. Más tanulmányok kimutatták, hogy a MAA képződése közvetlenül kapcsolódik a napfényhez [85], ami megvédi a szervezetet az UV-A és UV-B sugárzástól. Ezenkívül kimutatták, hogy a MAA-k fajlagos mennyisége a gyűjtési mélység növekedésével csökkent. A moszat, mint például az A. esculenta, ismert, hogy a felső szublitorális zónában nő, de a legalacsonyabb árapályba is kiterjed, közvetlenül az alsó vízjel felett. Ez azt jelenti, hogy a vízoszlop erősebb védelmet nyújtott, mint a P. palmata esetében. Emellett a morfológiai jellemzők is eltérőek, az A. esculenta pengéi vastagabbak a másik két fajhoz képest. Az U. lactuca, amely főleg az intertidaland sublittorálban nő, képes fotoszintetizálni és nagyon alacsony besugárzás mellett is növekedni. Az UVB fénynek való kitettségről azt állították, hogy felgyorsítja az U fotoszintetikus paramétereinek helyreállítását. lactuca az UVA fény negatív hatásaitól. Kisebb, egyszerűbb felépítésű és rövidebb életű (3 hónap), mint az A. esculenta (5-7 év) és a P. palmata, amely minden évben új növekedést hoz.

Összefoglalva, az a feltételezés levonható, hogy a kivonatok tulajdonságaiban a fő különbségek az algafajok élettartamának, morfológiai jellemzőinek és növekedési körülményeinek változásaiban keresendők.

3. Anyagok és módszerek

3.1. Anyagok

izlandihínárs U. lactuca (zöld alga), A. esculenta (barna alga) és P. palmata (vörös alga) az izlandi kékkagyló ésHínár, amely Breidafjordurban (Nyugat-Izland) hínárokat gyűjtött be. A betakarítás után a hínárokat megszárítottuk (kb. 90 százalékos szárazanyagig), megőröltük és vákuumcsomagolással szállították. A mintákat felhasználásig száraz és sötét helyen, szobahőmérsékleten tároltuk.

Tirozinázgombából, L-3, 4-dihidroxifenilalanin (L-DOPA), sertés hasnyálmirigyből származó elasztáz, aszkorbinsav, N-szukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN), szarvasmarha herékből származó hialuronidáz , kvercetin, -tokoferol, csersav, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), 2,4,6-tripiridil-s-triazin (TPTZ), Trolox, Folin-Ciocalteu A reagenst, a gallusavat és a kollagenáz aktivitás kolorimetriás vizsgálati készletet (MAK293) a Sigma-Aldrich Co.-tól (St. Louis, MO, USA) vásároltuk. A hialuronsav-nátriumsót a MakingCosmetics-től (Redmond, WA, USA) vásároltuk. Az összes többi felhasznált vegyszer és reagens analitikai minőségű volt, és a VWR International, LLC-től szereztük be. Ionmentesített vizet (Elix® Essential, Merck, Darmstadt, Németország) használtunk a vízbázisú oldatok extrakciójához és elkészítéséhez.

3.2. Kísérleti terv

Az izlandi hínárfajok (U. lactuca, A. esculenta, P. palmata) és az extrakciós kezelés (melegvizes extrakció (HW, 95 ◦C)), a PEFassisted extrakció (PEF) és a kettő kombinációjának hatását a faktoros tervezéssel értékelték. technikák (PEF plusz HW), a kivonat összetételére és bioaktivitására vonatkozóan (6. táblázat). Az extrakciót három párhuzamosban végeztük minden csoportnál, és minden extraktum ismétlést három párhuzamosban elemeztünk.

3.3. Bioaktív anyagok kivonása az izlandi hínárokból

A makroalga-biomassza különböző szinteken történő kiaknázása arra ösztönözte a tudósokat, hogy környezetbarátabb, hatékonyabb és költséghatékonyabb extrakciós technikákat fedezzenek fel, amelyek a zöld kitermelési megközelítéseken alapulnak. Ebben a munkában a PEF-el segített extrakciót a funkcionális kivonatok előállításának újszerű zöld módszereként értékelték, míg összehasonlításként a hagyományos melegvizes extrakciót alkalmazták. Ezen túlmenően a két technika kombinációjának, a makroalgák PEF-kezelésének, majd a hagyományos melegvizes extrakciónak a hatását vizsgálták a bioaktív visszanyerésre. A fizikai kezelést követően a sejtmembránokban várható elektroporáció miatt a következő forró vizes extrakció tovább elősegítheti az intracelluláris anyag [86] felszabadulását, növelve az extrakciós hozamot. A kezelés után egy időre van szükség az anyagokhoz a sejtekből kidiffundálni [87,88], és ebben a kísérletben a szuszpenziók egy éjszakán át vártak, amíg a folyadék (kivonat) elválik a péptől.

Az extrakciós közeg előállításához desztillált vizet használtunkhínárkivonatok, hogy leküzdjék a mérgező anyagok és szerves oldószerek használatával kapcsolatos korlátokat. A víz jó oldószernek bizonyult számos bioaktív vegyület kinyerésérehínárs [46,89–91] és környezetbarát. Ezenkívül a vizet gyakran használják a PEF segítségével történő elszívásra, mivel ez jó elektromos vezető.

3.3.1. Kivonási eljárások

Az egyes csoportok minden ismétléséhezhínárs (15 g) egy éjszakán át szobahőmérsékleten (22 °C) 300 ml ionmentes vízben áztattuk. Ezután a szuszpenziót PEF-fel (PEF), melegítettük (HW) vagy PEF-fel kezeltük és melegítettük (PEF plusz HW). A szuszpenziókat egy éjszakán át hűtőszekrényben tároltuk, majd durva (20 µm) szűrőpapírral leszűrtük. Ezután a szűrleteket (kivonatokat) 4 ◦C-on tároltuk az elemzésig.

Az impulzusos elektromos térrel segített extrakciót házon belüli impulzusgenerátorral végeztük. FuGHCK-200-2000 kondenzátorral (FuG Elektronik GmbH, Rosenheim, Németország) és szikraközvel (18,5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelectronics, GMBH, Wiese Baden, Németország) volt. A PEF berendezés 0.96 µs szélességű és 18 kV amplitúdójú exponenciális csillapító impulzusokat generált. A szuszpenziók 8 kV/cm-es elektromos térrel, 1,2 Hz-en 10 percig történő kezeléséhez egy plexiüveg kezelőkamrát használtak, amelynek méretei (H × H × 20 × 8 × 2,5 cm), a lemezelektródák közötti legrövidebb távolsággal.

A HW-kivonatokat úgy állítottuk elő, hogy a szuszpenziót főzőpohárban, termosztatikus vízfürdőben melegítettük, és 95 ◦C-on tartottuk 45 percig. A kombinált impulzusos elektromos tér és melegítés során a szuszpenziókat PEF-kezeléssel kezeltük, majd főzőpohárba helyeztük, vízfürdőben melegítettük, és 95 ◦C-on tartottuk 45 percig.

3.3.2. Vezetőképesség, pH és hőmérséklet mérések

A hínár szuszpenziók elektromos vezetőképességét és pH-ját áztatás után és az extrakciós kezelések után szobahőmérsékleten mértük vezetőképesség-érzékelővel felszerelt pH-mérővel (OrionStar™ A215 pH/Conductivity Benchtop Meter, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). pH/ARC trióda kombinációs elektróda. Ezenkívül rögzítettük a kezelések miatti hőmérsékletváltozásokat.

3.4. A tengeri algakivonatok spektrális profiljai

A különböző hínárkivonatok UV-VIS abszorpciós spektrumát 200-450 nm tartományban mértük meg kettős sugarú Thermo Scientific Evolution 350 UV Vis spektrofotométerrel (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 1 cm-es kvarcküvettákkal. Minden hínárkivonat esetében három vizsgálatot végeztünk.

3.5. A teljes polifenoltartalom meghatározása

A teljes fenoltartalom (TPC)hínárA kivonatokat Folin–Ciocalteu reagenssel határoztuk meg, Zhang [92] enyhén módosított módszerét követve, Multiskan Sky Microplate spektrofotométerrel (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). 20 µl térfogatúhínárAz extraktumot vagy a sorozat standard oldatot 100 µl Folin-Ciocalteu reagenssel (10%-os desztillált vízben) kevertük. 5 perc elteltével 80 µl 7,5%-os (v/w) nátrium-karbonát oldatot adtunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten és sötétben 30 percig inkubáltuk. Az abszorbanciát 760 nm hullámhosszon mértük. Desztillált vizet használtunk vakpróbaként. A galluszsav standard görbéjét használtuk a teljes fenoltartalom meghatározására, és µg galluszsav-ekvivalensben (GAE) per gramm szárazanyagban (µg GAE/g dw) fejeztük ki.

3.6. A teljes flavonoidtartalom meghatározása

A teljes flavonoid tartalom (TFC)hínárA kivonatokat a Kamtekar [93] által leírt módszerrel határoztuk meg, és 96-lyuk mikrolemezekre adaptáltuk. Röviden, 25 µl tengeri algakivonatot vagy sorozatos standard oldatot kevertünk össze 1 00 µl nátrium-nitrittel (0,375 tömeg/térfogat%). 5 perc elteltével 25 µl alumínium-kloridot (3 tömeg/térfogat%) adtunk az elegyhez, és 6 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezután 100 µl nátrium-hidroxidot (2 tömeg/térfogat%) adunk az elegyhez, és összekeverjük. Azonnal megmértük az abszorbanciát 510 nm hullámhosszon. Vakmintaként desztillált vizet és etanolt használtunk. A kvercetin (etanolban oldott) standard görbéjét használtuk a teljes fenoltartalom meghatározására, és µg kvercetin ekvivalensben (QE) fejeztük ki a szárazanyag grammjára vonatkoztatva (µg QE/g dw).

3.7. A szénhidráttartalom meghatározása

A szabad cukortartalmat a [94] által leírt módszer szerint mértük, kis módosításokkal. 50 µl fenolos oldatot (4 százalék) és 250 µl kénsavat (96 százalék) adtunk 100 µl mintához vagy standard oldathoz. 10 perces szobahőmérsékleten végzett inkubálás után a keverék abszorbanciáját 490 nm-en olvastuk le. A glükóz standard görbéjét használtuk a teljes szénhidráttartalom meghatározására, és mg glükóz-ekvivalensben (GluE) adtuk meg a szárazanyag grammjára vonatkoztatva (mg GluE/g dw).

3.8. A tengeri algakivonatok antioxidáns tulajdonságai

3.8.1. 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) szabadgyökfogó vizsgálat

Azantioxidánsaktivitása (DPPH).hínárA kivonatok meghatározása a korábban leírt módszertan [94] szerint történt, némi módosítással. Röviden, 200 µl 10,825 × 10-5 M DPPH oldatot adtunk 100 µl mintához (1:1 metanolban) egy lyukú lemezen. Ugyanilyen térfogatú DPPH-t kevertünk össze 50 µl standard plusz 50 µL metanollal. Ezután a mintákat és a standardot sötét helyen, szobahőmérsékleten 30 percig inkubáltuk. Az abszorbanciát 517 nm hullámhosszon mértük. Desztillált vizet használtunk vakpróbaként. A DPPH gyök megtisztításának képességét a következő egyenlettel számítottuk ki:

Öblítő hatás ( százalék )=(1 − (E minta − Egy vakminta)/(A kontroll − Ametanol vak)) × 100 (1)

ahol Akontroll a kontroll abszorbanciája (DPPH oldat minta nélkül), az A minta a vizsgálati minta abszorbanciája (DPPH oldat plusz vizsgálati minta), az A minta vakpróba csak a minta abszorbanciája (minta DPPH oldat nélkül) és az Ametanol vakpróba csak a metanol abszorbanciáját mutatja. Kereskedelmiantioxidánss-t (aszkorbinsav, galluszsav és -tokoferol) használtunk pozitív kontrollként.

A cistanche antioxidáns

3.8.2. Vas-ion redukáló antioxidáns teljesítmény (FRAP) vizsgálat

A FRAP aktivitást Benzie és Strain [95] módszerével mértük. Röviden, acetát puffert (300 mM, pH 3,6), 2,4, 6-tripiridil-s-triazint (TPTZ) 10 mM 40 mM HCl-ben és FeCl3·6H2O-t (20 mM) kevertünk össze a következő arányban: 10:1:1 a működő FRAPreagent beszerzéséhez. A reakcióelegyet 37 °C-on 10 percig inkubáltuk. Minden kivonatból 50 µl mintát 150 µl FRAP munkaoldattal kevertünk össze 8 percig szobahőmérsékleten. A színes termék, a vas-TPTZ abszorbanciáját 593 nm hullámhosszon mértük. FRAP értékeihínárA kivonatokat µM trolox-ekvivalensben (TE) adtuk meg a száraz anyag grammjára vonatkoztatva.

3.8.3. 2,2-azino-bisz(3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav) (ABTS) vizsgálat

Az elemzést az ABTS színtelenítési protokoll [76] alkalmazásával végeztük, némi módosítással. ABTS gyökkationt (ABTS. plus ) állítottunk elő úgy, hogy ABTS-t (66 mg) 10 ml kálium-perszulfát oldattal (2,45 mM) reagáltatunk. Használat előtt a keveréket sötét szobahőmérsékleten 12-16 órán át hagyjuk. Az ABTS. plusz oldatot vízzel hígítottuk 0,700 abszorbanciára 734 nm-en. A reakcióelegyet (200 ul) átvittük amicroplate-re, hozzáadtunk 50 µl mintát, majd 150 µl reagens oldatot. A lemezt 10 másodpercig ráztuk közepes sebességgel, és az abszorbanciát 734 nm-en mértük 5 perces szobahőmérsékleten végzett inkubálás után. Standard görbét készítettünk úgy, hogy a Trolox standardok A734 nm-es gátlását a koncentráció függvényében ábrázoltuk. A Trolox egyenértékűantioxidánsa minták kapacitásértékét (TEAC) az egyes minták A734 nm értékeivel helyettesített standard görbe lineáris regressziójából kapott egyenlet felhasználásával számítottuk ki:

TEAC (µM)=(minta gátlása A734nm – metszéspont)/lejtő (2)

Azantioxidánsaktivitását TEAC-koncentrációban fejeztük ki, µmol/g szárazsúlyú algákban.

3.9. A tengeri algakivonatok enzimellenes hatásai

3.9.1. Kollagenáz gátlási vizsgálat

A Sigma Aldrich cégtől beszerzett kollagenáz aktivitás kolorimetriás vizsgálati készletet (MAK293) használtuk a kollagenáz gátlásának meghatározására.hínárkivonatok. A kit mérte a kollagenáz aktivitást egy szintetikus peptid (FALGPA) segítségével, amely utánozza a kollagén szerkezetét. Az eljárást a készlet utasításai szerint végeztük.

3.9.2. Elasztáz gátlási vizsgálat

Az elasztáz gátlásahínárs kivonatokat vizsgáltam TRIS pufferoldatban a korábban leírt módosított módszerrel [96]. Röviden: 100 µl 0,1 M TRIS pufferoldatot (pH 8,0), 25 µl elasztázt (1 U/ml TRIS pufferben) és 25 µl mintakivonatokat összekevertünk, majd 15 percig inkubáltuk. 30 C-on a szubsztrát hozzáadása előtt a reakció megkezdéséhez. Az inkubációs idő után 50 µl 2 mM AAAPVN oldatot adtunk hozzá. Ezután az abszorbanciát 420 nm-en 20 percig monitoroztuk mikrolemez-leolvasóval állandó, 30 C-os hőmérsékleten. Végül az elasztázgátlást százalékban számítottuk ki az egyenlet segítségével:

százalékos gátlás=[(∆Abs/perc kontroll − ∆Abs/perc minta)/∆Abs/perc kontroll] × 100 (3)

ahol az Abscontrol az inhibitor (minta) helyett pufferrel végzett vizsgálat abszorbanciája, az Abs-minta pedig a mintakivonatok abszorbanciája. Pozitív kontrollként kvercetint használtunk. Üresként TRIS puffert használtunk.

hatásaicisztanche kivonat:öregedésgátló

3.9.3. Tirozináz gátlási vizsgálat

TirozinázA gátló vizsgálatot a [66] által korábban leírt módszer szerint végeztük, szubsztrátként L-DOPA-t használva. 20 µl minta, 10 µl gombatirozinázoldatot (50 U/ml foszfátpufferben) és 80 µl foszfátpuffert (pH=6,8) összekevertünk egy mikrolemezen, és 37 ◦C-on 5 percig előinkubáltuk. Ezután 90 µl L-DOPA-t (2 mg/ml) adtunk hozzá. A dopakróm képződését azonnal követtük 20 percig 475 nm-en mikrolemez-leolvasóban, állandó, 37 ◦C hőmérsékleten. A százalékos gátlástirozinázAz enzimet a következő egyenlettel számítottuk ki:

százalékos gátlás=[(∆Abs/perc kontroll − ∆Abs/perc minta)/∆Abs/perc kontroll] × 100 (4)

ahol az Abs-kontroll az inhibitor (minta) helyett pufferrel végzett vizsgálat abszorbanciája, az Abs-minta pedig a mintakivonatok abszorbanciája. Pozitív kontrollként kvercetint használtunk. Foszfát puffert használtunk vakpróbaként.

3.9.4. Hialuronidáz gátlási vizsgálat

A hialuronidáz gátló aktivitást a [66] által korábban leírtak szerint mértük, kevés módosítással. 100 µl térfogatú-1-S típusú szarvasmarhaherék hialuronidáz (2100 U/mL) 0-ben oldva. 1 M acetát puffert (pH 3,5) összekevertünk 100 µl kivonattal, és 37 °C-on 20 percig inkubáltuk. A reakcióelegyhez 200 µl 6 mM kalcium-kloridot adtunk, majd az elegyet 37 °C-on 20 percig inkubáltuk. Ezt a Ca2 plusz aktivált hialuronidázt 0,1 M acetát pufferben (pH 3,5) oldott 250 µl nátrium-hialuronáttal (1,2 mg/ml) kezeltük, majd vízfürdőben 37 °C-on 40 percig inkubáltuk. 50 µl 0,9 M nátrium-hidroxidot és 100 µl 0,2 M nátrium-borátot adtunk a reakcióelegyhez, majd forrásban lévő vízfürdőben 5 percig inkubáltuk. Szobahőmérsékletre hűtés után 250 µl ρ-dimetil-amino-benzaldehid (DAMB) oldatot adunk a reakcióelegyhez. A DAMB-oldatot úgy állítottuk elő, hogy 0,25 g DAMB-t 21,88 ml 100%-os ecetsavban és 3,12 ml 10 n sósavban oldottunk. A kontrollcsoportot kivonat helyett 100 µl 5%-os vízzel kezeltük. Az abszorbanciát 585 nm hullámhosszon mértük 45 perc elteltével. A százalékos enzimgátlást a következő egyenlettel számítottuk ki:

százalékos gátlás=[(Abscontrol − Abssaample)/Abscontrol] × 100 (5)

ahol az Abs-kontroll az inhibitor (minta) helyett pufferrel végzett vizsgálat abszorbanciája, az Abs-minta pedig a mintakivonatok abszorbanciája. Referenciastandardként csersavat használnak.

3.10. Statisztikai analízis

Minden kivonat háromszoros elemzésének átlagát kiszámítottuk, és felhasználtuk az egyes csoportok átlagértékeinek és szórásának meghatározásához (n {0}}). A fix tényezők általános lineáris modelljeit (GLM) alkalmaztuk a kísérleti tényezők (fajok és extrakciós módszerek) fő hatásainak és kétirányú kölcsönhatásainak értékelésére a mért változókra. Továbbá ANOVA-t és Tukey–Kramer tesztet alkalmaztunk a csoportok közötti szignifikáns (p < 0,05)="" különbségek="" azonosítására.="" a="" változók="" közötti="" lineáris="" kapcsolat="" értékelésére="" pearson="" korrelációt="" használtunk.="" a="" főkomponens-analízist="" (pca)="" alkalmaztuk="" a="" mért="" változók="" és="" a="" kísérleti="" tényezők="" közötti="" kapcsolat="" szerkezetének="" kimutatására.="" a="" pca="" a="" terjedelmes="" adatokat="" a="" kapcsolódó="" változók="" (azaz="" faktorok)="" lineáris="" kombinációinak="" kis="" halmazára="" redukálja="" az="" eredeti="" változók="" közötti="" korrelációs="" minták="" alapján.="" az="" eredményül="" kapott="" linearattribútum-kombinációk="" a="" vizsgált="" változók="" alapján="" konkrét="" termékjellemzők="" profilozására="" használhatók.="" minden="" statisztikai="" elemzést="" az="" ncss="" 2020="" statisticalsoftware="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="" usa)="" segítségével="">

öregedésgátló cisztanche kivonat

4. Konklúziók

Ennek az első szűrési kísérletnek az eredményei három izlandi potenciált mutattak behínárfajok hatékony jótékony hatása révén több úton is. A vizes impulzusos elektromos mezők felhasználásával kifejlesztett zöld megközelítés hasonló eredményeket mutatott, mint a hagyományos melegvizes extrakció, számos előnnyel, mint például nem termikus természete és rövidebb extrakciós ideje (10 perc vs. 45 perc). A három algafaj közül az A. esculenta barna makroalgák mutatták a legmagasabb TPC- és TFC-tartalmat, egyben a legnagyobbat is.antioxidánskapacitások Ezen túlmenően az A. esculenta vízkivonatok jobb gátló hatást mutattak, mint a P. palmaria és az U. lactuca a kollagenáz, elasztáz, tirozináz és hialuronidáz tekintetében, amelyek a legígéretesebbek.hínárkiváló antienzimatikus hatással rendelkező fajok bőrfehérítésben való felhasználásuk érdekében,öregedésgátlóés a bőr egészsége. Érdekes módon az A. A PEF módszerrel előállított esculenta kivonatok 91%-os kollagenáz gátlást mutattak, ami magasabb, mint a hagyományos forró vizes extrakcióval kimutatott gátlási aktivitás, és még nagyobb, mint a kereskedelmi készletben található inhibitoré. Összefoglalva, előzetes tanulmányunk azt sugallja, hogy az izlandihínár-alapú kivonatok, különösen a vizes pulzáló elektromos mezők által támogatott extrakcióval előállított barnamakroalgából származó A. esculenta kivonatok olyan potenciális funkcionális összetevők, amelyek a közeljövőben kozmetikai és kozmetikai készítmények hatóanyagaként használhatók fel.

Hivatkozások

1. Ariede, MB; Candido, TM; Jacome, ALM; Velasco, MVR; de Carvalho, JCM; Baby, AR Az algák kozmetikai tulajdonságai – Areview. Algal Res. 2017, 25, 483–487. [CrossRef]

2. Makkar, HPS; Tran, G.; Heuzé, V.; Giger-Reverdin, S.; Lessire, M.; Lebas, F.; Ankers, P. Tengeri algák állattenyésztési étrendhez: Áttekintés.Anim. Feed Sci. Technol. 2016, 212, 1–17. [CrossRef]

3. O'Connor, J.; Meaney, S.; Williams, GA; Hayes, M. Fehérje extrakciója négy különböző tengeri moszatból három különböző fizikai előkezelési stratégiával. Molecules 2020, 25, 2005. [CrossRef]

4. Máximo, P.; Ferreira, LM; Branco, P.; Lima, P.; Lourenço, A. Dél-Európa invazív makroalgainak másodlagos metabolitjai és biológiai aktivitása. Március Drugs 2018, 16, 265. [CrossRef]

5. Barkia, I.; Saari, N.; Manning, SR Mikroalgák nagy értékű termékekhez az emberi egészség és táplálkozás felé. Március Drugs 2019, 17, 304. [CrossRef]

6. Gomez-Zavaglia, A.; Prieto Lage, MA; Jimenez-Lopez, C.; Mejuto, JC; Simal-Gandara, J. A tengeri moszat potenciálja a prebiotikus és antioxidáns értékű funkcionális összetevők forrásaként. Antioxidánsok 2019, 8, 406. [CrossRef] [PubMed]

7. Szalehi, B.; Sharifi-Rad, J.; Seca, AML; Pinto, DCGA; Michalak, I.; Trincone, A.; Mishra, AP; Nigam, M.; Zam, W.; Martins, N. A tengeri algák jelenlegi trendjei: A kémiai összetétel, a fitofarmakológia és a kozmetikai alkalmazások vizsgálata. Molecules2019, 24, 4182. [CrossRef]

8. Ghazali, E.; Hamarosan PC; Mutum, DS; Nguyen, B. Egészség és kozmetika: A fogyasztók értékeinek vizsgálata az organikus testápoló termékek vásárlásához. J. Kiskereskedelem. Fogy. Serv. 2017, 39, 154–163. [CrossRef]

9. Amberg, N.; Fogarassy, ​​C. Zöld fogyasztói magatartás a kozmetikai piacon. Források 2019, 8, 137. [CrossRef]

10. Pereira, L. A tengeri algák mint bioaktív anyagok forrása és bőrápoló terápia – kozmetikai termékek, algoterápia és thalassoterápia. Kozmetika 2018, 5, 68. [CrossRef]

11. Martins, A.; Vieira, H.; Gáspár, H.; Santos, S. A gyógyszeriparban és a kozmetikai iparban forgalmazott tengeri természetes termékek: Tippek a sikerhez. Március Drugs 2014, 12, 1066–1101. [CrossRef] [PubMed]

12. Agatonovic-Kustrin, S.; Morton, D. Tengeri algákban található bioaktív anyagokból származó kozmetikai szerek. Oceanográfia 2013, 1, 106.

13. Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.-S. Az algák kozmetikai felhasználásában rejlő lehetőségek feltárása. Bioresour. Technol. 2015,184, 355–362. [CrossRef]

14. Jahan, A.; Ahmad, IZ; Fatima, N.; Ansari, VA; Akhtar, J. Algal bioaktív vegyületek a kozmetikai iparban: Áttekintés. Phycologia 2017, 56, 410–422. [CrossRef]

15. Morone, J.; Alfeus, A.; Vasconcelos, V.; Martins, R. A cianobaktériumok potenciáljának feltárása a kozmetikumokban és kozmetikai termékekben – Új bioaktív megközelítés. Algal Res. 2019, 41, 101541. [CrossRef]

16. Cikoš, A.-M.; Jerkovi´c, I.; Molnár, M.; Šubaric, D.; Joki´c, S. Új trendek a makroalga természetes termékek alkalmazásában. Nat. Prod.Res. 2019, 37, 1–12. [CrossRef]

17. Thring, TS; Hili, P.; Naughton, DP 21 növény kivonatának kollagenáz-, elasztáz- és antioxidáns hatása. BMCComplement. Altern. Med. 2009, 9, 27. [CrossRef]

18. Jacobsen, C.; Sørensen, AM; Holdt, SL; Akoh, CC; Hermund, DB Forrás, Új antioxidánsok kinyerése, jellemzése és alkalmazása tengeri moszatból. Annu. Rev. Food Sci. Technol. 2019, 10, 541–568. [CrossRef]

19. Castejón, N.; Señoráns, FJ Omega-3 acilglicerolok és glikolipidek egyidejű extrakciója és frakcionálása a Nannochloropsis gaditana nedves mikroalga-biomasszájából, nyomás alatti folyadékokkal. Algal Res. 2019, 37, 74–82. [CrossRef]

20. Mohamed, MEA; Eissa, AHA Impulzusos elektromos mezők élelmiszer-feldolgozási technológiához. Struktúra. Funkció. Food Eng. 2012, 11, 275–306.

21. Geada, P.; Rodrigues, R.; Loureiro, L.; Pereira, R.; Fernandes, B.; Teixeira, JA; Vasconcelos, V.; Vicente, AA A mikroalga-biotechnológiában alkalmazott elektrotechnológiák – Alkalmazások, technikák és jövőbeli trendek. Megújítás. Fenntartani. Energy Rev. 2018, 94, 656–668.[CrossRef]

22. Poojary, MM; Barba, FJ; Aliakbarian, B.; Donsì, F.; Pataro, G.; Dias, DA; Juliano, P. Innovatív alternatív technológiák a karotinoidok mikroalgákból és tengeri moszatokból történő kivonására. Március Drugs 2016, 14, 214. [CrossRef] [PubMed]

23. Vorobiev, E.; Lebovka, N. 2 – Kivonás élelmiszerekből és bioanyagokból impulzusos elektromos energiával. Innovatív élelmiszer-feldolgozási technológiákban; Knoerzer, K., Juliano, P., Smithers, G., szerk.; Woodhead Publishing: Sawston, Egyesült Királyság, 2016; 31–56.

24. Käferböck, A.; Smetana, S.; de Vos, R.; Schwarz, C.; Toepfl, S.; Parniakov, O. Értékes komponensek fenntartható kinyerése a Spirulinából impulzusos elektromos mező technológiával. Algal Res. 2020, 48, 101914. [CrossRef]

25. Parniakov, O.; Barba, FJ; Grimi, N.; Marchal, L.; Jubeau, S.; Lebovka, N.; Vorobiev, E. Impulzusos elektromos mező segítette táplálkozási szempontból értékes vegyületek extrakcióját mikroalgákból Nannochloropsis spp. szerves oldószerek és víz bináris keverékének felhasználásával.Innov. Food Sci. Emerg. Technol. 2015, 27, 79–85. [CrossRef]

26. Scherer, D.; Krust, D.; Frey, W.; Mueller, G.; Nick, P.; Gusbeth, C. A ChlorellaVulgaris-ból pulzáló elektromos mező (PEF) által segített fehérje-visszanyerést egy sejthalál utáni enzimatikus folyamat közvetíti. Algal Res. 2019, 41, 101536. [CrossRef]

27. Naseri, A.; Marinho, GS; Holdt, SL; Bartela, JM; Jacobsen, C. Egy fehérje enzim-assisted extrakciója és jellemzése vörös tengeri algából, Palmaria palmitate. Algal Res. 2020, 47, 101849. [CrossRef]

kereszt

28. Robin, A.; Kazir, M.; Sack, M.; Izrael, A.; Frey, W.; Mueller, G.; Livney, YD; Golberg, A. Funkcionális fehérjekoncentrátumok, amelyeket a Green Marine Macroalga Ulva sp.-ből nagyfeszültségű impulzusos elektromos mezőkkel és mechanikai préssel extraháltak. ACS Sustain. Chem. Eng.2018, 6, 13696–13705. [CrossRef]

29. Einarsdóttir, R.; Þórarinsdóttir, KA; Aðalbjörnsson, BV; Guðmundsson, M.; Marteinsdóttir, G.; Kristbergsson, K. A pulzáló elektromos mezővel segített kezelési paraméterek hatása a Laminaria digitata nyers vizes extrakciójára. J. Appl. Phycol. 2021, 33,3287–3296. [CrossRef]

30. Posta, PR; Cerezo-Chinarro, O.; Akkerman, RJ; Olivieri, G.; Wijffels, RH; Brandenburg, WA; Eppink, MHM Biorefinery ofthe makroalgák Ulva Lactuca: Fehérjék és szénhidrátok extrakciója enyhe széteséssel. J. Appl. Phycol. 2018, 30, 1281–1293.[CrossRef]

31. Zbinden, MDA; Sturm, BSM; Nord, RD; Carey, WJ; Moore, D.; Shinogle, H.; Stagg-Williams, SM Impulzusos elektromos mező (PEF) intenzifikációs előkezelésként a zöldebb oldószeres lipidek mikroalgákból történő extrakciójához. Biotechnol. Bioeng. 2013, 110, 1605–1615.[CrossRef]

32. Silve, A.; Papachristou, I.; Wüstner, R.; Sträßner, R.; Schirmer, M.; Leber, K.; Guo, B.; Interrante, L.; Posten, C.; Frey, W. Lipidek extrakciója nedves mikroalgából Auxenochlorella protothecoides pulzáló elektromos mező kezeléssel és etanol-hexán keverékekkel. AlgalRes. 2018, 29, 212–222. [CrossRef]

33. Chittapun, S.; Jonjaroen, V.; Khumrangsee, K.; Charoenrat, T. C-phycocyanin extrakció két édesvízi cianobaktériumból fagyasztással-olvasztással és pulzáló elektromos mező technikákkal az extrakció hatékonyságának és tisztaságának javítása érdekében. Algal Res. 2020, 46, 101789. [CrossRef]

34. Aryee, ANA; Agyei, D.; Akanbi, TO Hínár pigmentek visszanyerése és felhasználása az élelmiszer-feldolgozásban. Curr. Opin. Food Sci.2018, 19, 113–119. [CrossRef]

35. Nowacka, M.; Tappi, S.; Wiktor, A.; Rybak, K.; Miszczykowska, A.; Czyzewski, J.; Drozdzal, K.; Witrowa-Rajchert, D.; Tylewicz, U. Az impulzusos elektromos mező hatása a bioaktív vegyületek céklából történő kinyerésére. Foods 2019, 8, 244. [CrossRef]

36. Martínez, JM; Delso, C.; Álvarez, I.; Raso, J. Értékes vegyületek impulzusos elektromos térrel segített extrakciója mikroorganizmusokból. Comprehend. Rev. Food Sci. Food Saf. 2020, 19, 530–552. [CrossRef]

37. Pataro, G.; Goettel, M.; Straessner, R.; Gusbeth, C.; Ferrari, G.; Frey, W. A PEF-kezelés hatása a C. vulgaris mikroalgából származó értékes vegyületek extrakciójára. Chem. Eng. Trans. 2017, 57, 67–72.

38. Brunton, NP; Luengo, E. Impulzusos elektromos mezők másodlagos metabolitok kivonására növényekből. Impulzusos elektromos mezőkben másodlagos metabolitok kivonására a növényekből; Miklavcic, D., szerk.; Springer International Publishing: Cham, Svájc, 2017;pp. 1–15.

39. Schiener, P.; Fekete, KD; Stanley, MS; Green, DH A Laminaria digitata, Laminaria hyperborea, Saccharina latissima és Alaria esculenta hínárfajok kémiai összetételének szezonális változása. J. Appl. Phycol. 2015, 27, 363–373. [CrossRef]

40. Salgado, LT; Tomazetto, R.; Cinelli, LP; Farina, M.; Filho, GMA A barna alginátok hatása az ultraibolya sugárzás abszorpciójának fenolvegyületeire in vitro. Braz. J. Oceanogr. 2007, 55, 145–154. [CrossRef]

41. Orfanoudaki, M.; Hartmann, A.; Karsten, U.; Ganzera, M. Mikosporinszerű aminosavak kémiai profilozása huszonhárom algafajban. J. Phycol. 2019, 55, 393–403. [CrossRef]

42. Pangestuti, R.; Siahaan, EA; Kim, S.-K. Tengeri algákból származó fényvédő anyagok. Március Drugs 2018, 16, 399.[CrossRef] [PubMed]

43. Schneider, G.; Figueroa, FL; Vega, J.; Chaves, P.; Álvarez-Gómez, F.; Korbee, N.; Bonomi-Barufi, J. Magas ultraibolya sugárzásnak kitett területeken termesztett tengeri fotoszintetikus organizmusok fényvédő tulajdonságai: Kozmetikai alkalmazások. Algal Res. 2020,49, 101956. [CrossRef]

44. Nishida, Y.; Kumagai, Y.; Michiba, S.; Yasui, H.; Kishimura, H. Mikosporin-szerű aminosavak hatékony extrakciója és antioxidáns kapacitása Vörös Alga Dulse Palmaria palmitátból Japánban. Március Drugs 2020, 18, 502. [CrossRef] [PubMed]

45. Rehm, E.; Dalgleish, F.; Huot, M.; Matteoli, S.; Archambault, P.; Lambert Girard, S.; Piché, M.; Lagunas-Morales, J. Fluoreszcens és differenciális abszorpciós LiDAR technikák összehasonlítása algák biomassza kimutatására sarkvidéki szubsztrátumokon történő alkalmazásokkal. InOcean Sensing and Monitoring X; Nemzetközi Optikai és Fotonikai Társaság: Bellingham, WA, USA, 2018; 10631. évfolyam, p. 106310Z.

46. ​​Wang, T.; Jonsdottir, R.; Ólafsdóttir, G. Összes fenolvegyületek, gyökfogó és fémkelátképzés izlandi tengeri moszatból származó kivonatok esetén. Food Chem. 2009, 116, 240–248. [CrossRef]

47. Bedoux, G.; Hardouin, K.; Burlot, AS; Bourgougnon, N. Tizenkettedik fejezet – Bioaktív összetevők tengeri moszatból: Kozmetikai alkalmazások és jövőbeli fejlesztés. In Advances in Botanical Research; Bourgougnon, N., szerk.; Akadémiai Kiadó: Cambridge, MA, USA, 2014; 71. évfolyam, 345–378.

48. Roleda, MY; Marfaing, H.; Desnica, N.; Jónsdóttir, R.; Skjermo, J.; Rebours, C.; Nitschke, U. A vadon betakarított és termesztett tengeri moszat tömeges biomasszájának polifenol- és nehézfém-tartalmának változásai: Egészségügyi kockázatértékelés és élelmiszer-alkalmazások következményei. Élelmiszer-ellenőrzés 2019, 95, 121–134. [CrossRef]

49. Ummat, V.; Tiwari, BK; Jaiswal, AK; Condon, K.; Garcia-Vaquero, M.; O'Doherty, J.; O'Donnell, C.; Rajauria, G. Optimization of Ultrahang Frequency, Extraction Time and Solvent for Recovery of Polyphenols, Phlorotannins and Associated AntioxidantActivity from Brown Seaweeds. Március Drugs 2020, 18, 250. [CrossRef]

50. Afonso, C.; Matos, J.; Guarda, I.; Gomes-Bispo, A.; Gomes, R.; Cardoso, C.; Gueifão, S.; Delgado, I.; Coelho, I.; Castanheira, I.; et al.Az Alaria esculenta és a Saccharina latissima bioaktív és táplálkozási potenciálja. J. Appl. Phycol. 2021, 33, 501–513. [CrossRef]

51. Cotas, J.; Leandro, A.; Monteiro, P.; Pacheco, D.; Figueirinha, A.; Gonçalves, AMM; da Silva, GJ; Pereira, L. Tengeri alga fenolok: az extrakciótól a felhasználásig. Március Drugs 2020, 18, 384. [CrossRef]

52. Farasat, M.; Khavari-Nejad, RA; Nabavi, SM; Namjooyan, F. A Perzsa-öböl északi partjairól származó egyes ehető zöld hínárok antioxidáns aktivitása, összes fenol- és flavonoid tartalma. IJPR 2014, 13, 163–170. [PubMed]

53. Manivannan, K.; Thirumaran, G.; Devi, GK; Anantharaman, P.; Balasubramanian, T. Vedalai tengerparti vizekből (Mannar-öböl): India délkeleti partvidékéről származó különböző tengeri moszatcsoportok közeli összetétele. Közel-Kelet J. Sci. Res. 2009, 4, 72–77.

54. Mišurcová, L.; Škrovánková, S.; Samek, D.; Ambrožová, J.; Mach ˚u, L. 3. fejezet – Az algapoliszacharidok egészségügyi előnyei az emberi táplálkozásban. In Advances in Food and Nutrition Research; Henry, J., szerk.; Akadémiai Kiadó: Cambridge, MA, USA, 2012; 66. kötet, 75–145.

55. Lafarga, T.; Acién-Fernández, FG; Garcia-Vaquero, M. Bioaktív peptidek és szénhidrátok tengeri moszatból élelmiszeripari alkalmazásokhoz: Természetes előfordulás, izolálás, tisztítás és azonosítás. Algal Res. 2020, 48, 101909. [CrossRef]

56. Mutripah, S.; Meinita, MDN; Kang, J.-Y.; Jeong, G.-T.; Susanto, AB; Prabowo, RE; Hong, Y.-K. Bioetanol előállítása Palmaria palmata hidrolizátumából kénsav felhasználásával és sörélesztővel történő fermentációval. J. Appl. Phycol. 2014, 26, 687–693.[CrossRef]

57. Dominguez, H.; Loret, EP Ulva lactuca, A bajok és a potenciális gazdagság forrása. Március Drugs 2019, 17, 357. [CrossRef]

58. Kidgel, JT; Magnusson, M.; de Nys, R.; Glasson, CRK Ulvan: Az extrakció, összetétel és funkció szisztematikus áttekintése.Algal Res. 2019, 39, 101422. [CrossRef]

59. Habeebullah, SFK; Alagarsamy, S.; Arnous, A.; Jacobsen, C. Antioxidáns összetevők enzimes extrakciója dán tengeri moszatból és a hatóanyagok jellemzése. Algal Res. 2021, 56, 102292. [CrossRef]

60. Yuan, Y.; Zhang, J.; Fan, J.; Clark, J.; Shen, P.; Li, Y.; Zhang, C. Fenol vegyületek mikrohullámmal segített extrakciója négy gazdaságos barna makroalga fajból, valamint antioxidáns aktivitásuk és -amilázra, -glükozidázra, hasnyálmirigy lipázra és tirozinázra gyakorolt ​​gátló hatásának értékelése. Int. Food Res. J. 2018, 113, 288–297. [CrossRef]

61. Balboa, EM; Conde, E.; Moure, A.; Falqué, E.; Domínguez, H. A barna algából származó nyers kivonatok és vegyületek in vitro antioxidáns tulajdonságai. Food Chem. 2013, 138, 1764–1785. [CrossRef]

62. Kainama, H.; Fatmawati, S.; Santoso, M.; Papilaya, PM; Ersam, T. The Relationship of Free Radical Scavenging and Total Phenolicand Flavonoid Contents of Garcinia lasoar PAM. Pharm. Chem. J. 2020, 53, 1151–1157. [CrossRef]

63. Dang, TT; Van Vuong, Q.; Schreider, MJ; Bowyer, MC; Van Altena, IA; Scarlett, CJ Ultrahanggal segített extrakciós körülmények optimalizálása a Hormosira banksii alga fenoltartalmára és antioxidáns aktivitásaira válaszfelületi módszertan segítségével. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 3161–3173. [CrossRef]

64. Couteau, C.; Coiffard, L. 14. fejezet – Tengeri moszat alkalmazása a kozmetikában. A tengeri moszatban az egészségügyben és a betegségmegelőzésben; Fleurence, J., Levine, I., szerk.; Academic Press: San Diego, CA, USA, 2016; 423–441.

65. Tsukahara, K.; Takema, Y.; Moriwaki, S.; Tsuji, N.; Suzuki, Y.; Fujimura, T.; Imokawa, G. A bőr fibroblasztelasztáz szelektív gátlása koncentrációtól függő megelőzését eredményezi az ultraibolya B által kiváltott ráncok kialakulásának. J. Investig. Dermatol. 2001, 117, 671–677. [CrossRef]

66. Liyanaarachchi, GD; Samarasekera, JKRR; Mahanama, KRR; Hemalal, KDP tirozináz, elasztáz, hialuronidáz, a Srí Lanka-i gyógynövények gátló és antioxidáns hatása új kozmetikai készítményekhez. Ind. Crops Prod. 2018, 111, 597–605. [CrossRef]

67. Gupta, PL; Rajput, M.; Oza, T.; Trivedi, U.; Sanghvi, G. A mikrobiális termékek kiemelkedősége a kozmetikai iparban. Nat. Prod.Bioprospect. 2019, 9, 267–278. [CrossRef] [PubMed]

68. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Átfogó áttekintés a tirozináz inhibitorokról. J. Enzyme Inhib. Med. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]

69. Couteau, C.; Coiffard, L. Phycocosmetics and Other Marine Cosmetics, Specific Cosmetics Formuled Using Marine Resources.Mar. Drugs 2020, 18, 322. [CrossRef]

70. Sári, DM; Anwar, E.; Arifianti, AE Barna alga (Turbinaria conoides) etanolos kivonatainak antioxidáns és tirozináz gátló hatása halványító összetevőként. Pharm. J. 2019, 11, 379–382. [CrossRef]

71. Brenner, M.; Hallás, VJ A melanin védő szerepe az UV-károsodással szemben az emberi bőrben. Photochem. Photobiol. 2008, 84 539–549. [CrossRef] [PubMed]

72. Lee, SY; Baek, N.; Nam, T.-G. Természetes, félszintetikus és szintetikus tirozináz inhibitorok. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2016, 31,1–13. [CrossRef] [PubMed]

73. Ferreres, F.; Lopes, G.; Gil-Izquierdo, A.; Andrade, PB; Sousa, C.; Mouga, T.; Valentão, P. Phlorotannin Extracts from Fucales Characterized by HPLC-DAD-ESI-MSn: Approaches to Hyaluronidase Inhibitory Capacity and Antioxidant Properties. Mar.Drugs 2012, 10, 2766–2781. [CrossRef] [PubMed]

74. Fayad, S.; Nehmé, R.; Tannoury, M.; Lesellier, E.; Pichon, C.; Morin, P. Macroalga Padina pavonica vízkivonatok, amelyeket nyomás alatti folyékony extrakcióval és mikrohullámú segítséggel végzett extrakcióval nyernek, gátolják a hialuronidáz aktivitást, amint azt kapilláris elektroforézis mutatja.J. Chromatogr. A 2017, 1497, 19–27. [CrossRef] [PubMed]

75. Athukorala, Y.; Kim, K.-N.; Jeon, Y.-J. A barna algából, az Ecklonia cavaból származó enzimes hidrolizátum antiproliferatív és antioxidáns tulajdonságai. Food Chem. Toxicol. 2006, 44, 1065–1074. [CrossRef]

76. Jiménez-Escrig, A.; Gómez-Ordóñez, E.; Rupérez, P. A barna és a vörös tengeri moszat, mint az antioxidáns tápanyagok potenciális forrása.J. Appl. Phycol. 2012, 24, 1123–1132. [CrossRef]

77. Karawita, R.; Siriwardhana, N.; Lee, K.-W.; Heo, M.-S.; Yeo, I.-K.; Lee, Y.-D.; Jeon, Y.-J. A Hizikia fusiformis különböző oldószerfrakcióinak reaktív oxigénfajták megkötése, fémkeláció, redukáló képessége és lipid peroxidációt gátló tulajdonságai.Eur. Food Res. Technol. 2005, 220, 363–371. [CrossRef]

78. Jormalainen, V.; Honkanen, T. Variation in natural selection for growth and phlorotannins in the barna alga Fucus vesiculosus.J. Evolut. Biol. 2004, 17, 807–820. [CrossRef] [PubMed]

79. Koivikko, R.; Loponen, J.; Pihlaja, K.; Jormalainen, V. A Fucus vesiculosus barna algából származó phlorotannins nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás analízise. Phytochem. Anális. 2007, 18, 326–332. [CrossRef] [PubMed]

80. Mareˇcek, V.; Mikyška, A.; Hampel, D.; Cejka, P.; Neuwirthov ˇ á, J.; Malachová, A.; Cerkal, R. ABTS és DPPH módszerek a tavaszi árpa és a maláta antioxidáns kapacitásának vizsgálatára. J. Cereal Sci. 2017, 73, 40–45. [CrossRef]

81. Asada, M.; Sugie, M.; Inoue, M.; Nakagomi, K.; Hongo, S.; Murata, K.; Irie, S.; Takeuchi, T.; Tomizuka, N.; Oka, S. Az alginsavak gátló hatása a hialuronidázra és a hízósejtekből származó hisztaminfelszabadulásra. Biosci. Biotechnol. Biochem. 1997, 61, 1030–1032.[CrossRef] [PubMed]

82. Mase, T.; Yamauchi, M.; Kato, Y.; Esaki, H.; Isshiki, S. PorphyridiumPurpureumból izolált hialuronidáz-gátló savas poliszacharid. Kutatási esszék gyűjteménye a Suishan Women's Gakuen Egyetemen. Nat. Sci. 2013, 44, 105–113.83. Tolpeznikaite, E.; Bartkevics, V.; Ruzauskas, M.; Pilkaityte, R.; Viskelis, P.; Urbonaviciene, D.; Zavistanaviciute, P.; Zokaityte, E.;Ruibys, R.; Bartkiene, E. Makro- és mikroalga-kivonatok jellemzése Bioaktív vegyületek és mikro- és makroelemek Áttérés algákról kivonatokra. Foods 2021, 10, 2226. [CrossRef]

84. Gómez, I.; Huovinen, P. Dél-chilei hínárok morfo-funkcionális mintázatai és zónái: A fotoszintetikus és biooptikai tulajdonságok jelentősége. Mar. Ecol. Prog. Ser. 2011, 422, 77–91. [CrossRef]

85. Karsten, U.; Wiencke, C. Az UV-sugárzást elnyelő mikosporinszerű aminosavak képződését szabályozó tényezők a Spitzbergákból (Norvégia) származó tengeri RedAlga Palmaria palmitátban. J. Plant. Physiol. 1999, 155, 407–415. [CrossRef]

86. Ummat, V.; Sivagnanam, SP; Rajauria, G.; O'Donnell, C.; Tiwari, BK Fejlődés az előkezelési technikák és a zöld extrakciós technológiák terén a tengeri moszatból származó bioaktív anyagokhoz. Trends Food Sci. Technol 2021, 110, 90–106. [CrossRef]

87. Boussetta, N.; Lanoiselle, J.-L.; Bedel-Cloutour, C.; Vorobiev, E. Oldható anyag extrakciója szőlőtörkölyből nagyfeszültségű elektromos kisülésekkel polifenol visszanyerésére: A kén-dioxid és a hőkezelések hatása. J. Food Eng. 2009, 95, 192–198.[CrossRef]

88. Goettel, M.; Eing, C.; Gusbeth, C.; Straessner, R.; Frey, W. Impulzusos elektromos mező segítette az intracelluláris értékek mikroalgákból történő extrakcióját. Algal Res. 2013, 2, 401–408. [CrossRef]

89. Hwang, P.-A.; Wu, C.-H.; Gau, S.-Y.; Chien, S.-Y.; Hwang, D.-F. A Sargassum epiphyllum tengeri moszatból származó forró vizes kivonat antioxidáns és immunstimuláló hatása. J. Mar. Sci. Technol. 2010, 18, 41–46. [CrossRef]

90. Sabeena Farvin, KH; Jacobsen, C. A dán partvidékről származó kiválasztott hínárfajok fenolvegyületei és antioxidáns hatásai. Food Chem. 2013, 138, 1670–1681. [CrossRef] [PubMed]

91. Godlewska, K.; Michalak, I.; Tuhy, L.; Chojnacka, K. Növénynövekedést elősegítő biostimulánsok a tengeri moszat vízzel történő extrakciójának különböző módszerei alapján. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

92. Zhang, Q.; Zhang, J.; Shen, J.; Silva, A.; Dennis, DA; Barrow, CJ Egy egyszerű 96-kút-mikrolemez módszer a tengeri moszat teljes polifenoltartalmának becslésére. J. Appl. Phycol. 2006, 18, 445–450. [CrossRef]

93. Kamtekar, S.; Keer, V.; Patil, V. A forgalomba hozott poliherbális készítmény fenoltartalmának, flavonoidtartalmának, antioxidáns- és alfa-amiláz-gátló aktivitásának becslése. J. Appl. Pharm. Sci. 2014, 4, 61.

94. Neto, R.; Marçal, C.; Queiros, A.; Abreu, M.; Silva, A.; Cardoso, S. Ulva rigida, Gracilaria sp., Fucus vesiculosus és Saccharina latissima szűrése funkcionális összetevőként. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 2987. [CrossRef]

95. Benzie, IF; Strain, JJ A plazma vas(III)redukáló képessége (FRAP), mint az "antioxidáns erő" mértéke: A FRAP vizsgálat. Anal. Biochem. 1996, 239, 70–76. [CrossRef]

96. Eun Lee, K.; Bharadwaj, S.; Yadava, U.; Gu Kang, S. A koffein mint kollagenáz, elasztáz és tirozináz gátló értékelése in silico és in vitro megközelítésben. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 927–936. [CrossRef] [PubMed]