A Yishen Tonglong főzet terápiás hatásainak és mechanizmusának feltárása patkányok jóindulatú prosztata hiperpláziájára a IL-6/STAT3 jelátviteli útvonalon keresztül
Dec 17, 2025
Absztrakt
Célkitűzés:Az interleukin (IL)-6/jelátalakító és a transzkripciós aktivátor (STAT)3 jelátviteli útvonalon keresztül a Yiqi Wenshen Tonglong Decoction (rövidítve Yishen Tonglong Decoction) javító hatásának és mechanizmusának vizsgálata patkányok jóindulatú prosztata hiperpláziájára (BPH).
Mód:A hím Sprague–Dawley (SD) patkányokat kasztrálták, majd szubkután tesztoszteron-propionátot fecskendeztek be, hogy létrehozzák a BPH modellt. A patkányokat véletlenszerűen a következő csoportokba soroltuk (n=12/csoport): modell; Yishen Tonglong Decoction alacsony és nagy dózisú csoportok (15 és 30 g/kg); STAT3 aktivátor csoport (Colivelin, 1 mg/kg); és kombinált nagy dózisú Yishen Tonglong Decoction (30 g/kg) + Colivelin (1 mg/kg) csoport. További 12 hím SD patkány szolgált áloperált csoportként. A Yishen Tonglong Decoction és/vagy Colivelin csoportspecifikus kezelések után felmértük a prosztata indexet (PI) és az ösztradiol (E2)/tesztoszteron (T) arányt; a prosztata hisztomorfológiáját és fibrózisát hematoxilin-eozin (HE) és Masson-féle trikróm festéssel értékelték; mért Ki-67 expressziót immunhisztokémiával; számszerűsített IL-6 és IL-1 szint a prosztataszövetben és a szérumban ELISA-val; és Western blottal kimutatták a kollagén I/III és IL-6/STAT3 útvonalhoz kapcsolódó fehérjéket.
Eredmények:A színlelttel összehasonlítva a modellcsoport markáns prosztata hiperpláziát és fibrózist mutatott, a PI, a Ki-67 optikai denzitás, a szövet/szérum IL-6 és IL-1, a kollagén I/III, a IL-6 fehérje és a p-STAT3/STAT3 szignifikáns növekedése mellett, az E2/T (mindegyik P <05) szignifikáns csökkenése mellett. A modellcsoporttal szemben a Yishen Tonglong Decoction kis és nagy dózisai egyaránt enyhítették a hiperpláziát és a fibrózist, csökkentették a PI-t, a Ki-67-et, a IL-6-t, a IL-1-t, a kollagén I/III-at, a IL-6-fehérjét és a p-STAT3/STAT3-at, valamint növelték az E2/T-értéket (minden P < 0,05). A nagy dózisú főzet nagyobb javulást eredményezett, mint az alacsony dózis (P < 0,05). A Colivelin önmagában súlyosbította a hiperpláziát és a fibrózist, és tovább növelte a PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kollagén I/III, IL-6 és p-STAT3/STAT3 értékeket, miközben csökkentette az E2/T-t (P < 0,05). A Colivelin együttes alkalmazása gyengítette a nagy dózisú főzet előnyeit, jelentősen rontva az összes fenti mutatót a nagy dózisú főzet önmagában történő alkalmazásához képest (P < 0,05).
Következtetés:A Yishen Tonglong Decoction enyhíti a gyulladást és javítja a BPH patológiáját patkányokban, legalábbis részben azáltal, hogy elnyomja a IL-6/STAT3 jelátviteli útvonal aktiválását.
Kulcsszavak:IL-6/STAT3 jelzés; Yishen Tonglong főzet; jóindulatú prosztata hiperplázia; gyógynövény prosztatagyulladás kezelésére
Gyógynövényes Cistanche-kiegészítők
További részletek az új tcm gyógynövényről a prosztata egészségére
Bevezetés
A jóindulatú prosztata-megnagyobbodás (BPH) egy gyakori obstruktív alsó húgyúti betegség középkorú és idősebb férfiaknál, amelyet hám- és stromaburjánzás, valamint prosztata-megnagyobbodás jellemez, ami tétovázáshoz, gyakorisághoz és sürgősséghez vezet, ami jelentősen rontja az életminőséget [1,2]. A gyulladás a BPH patogenezisének kulcsfontosságú mozgatórugója; elősegíti a hám és a stroma simaizomzatának proliferációját és a fibrotikus átalakulást. A fertőzés- és gyulladásgátló stratégiák ezért hatékonyak a BPH megelőzésében és kezelésében [3,4].
A IL-6 egy pleiotróp proinflammatorikus citokin, amely széles körben expresszálódik a szövetsejtekben. Aktiválja a STAT3-at, hogy gyulladásos programokat indítson el [5]. A IL-6/STAT3 aktiváció gátlása csökkenti a downstream proinflammatorikus mediátorokat, megszakítja a gyulladásos kaszkádokat, csökkenti a hipertrófiával összefüggő immuninfiltrációt és fibrózist, és végső soron lassítja a BPH progresszióját [6,7]. Ezért a IL-6/STAT3 racionális terápiás célpont a BPH-ban.
A Yishen Tonglong Decoction egy klasszikus kínai gyógynövény-formula, amelynek hagyományos funkciói a Yin táplálása és a Yang támogatása, tonizálja a Qi-t és a vesét, valamint elősegíti a vérkeringést a nedvesség enyhítésével. Klinikailag nedves hő és vese Qi-hiányos vérpangás okozta dysuria esetén alkalmazzák, és arról számoltak be, hogy csillapítja a prosztatagyulladást és a BPH hiperplasztikus változásait [8]. A BPH-n túl gátolja a humán prosztataráksejtek proliferációját, elősegíti az apoptózist, valamint elnyomja az inváziót és a migrációt [9]. A hálózati farmakológia és a molekuláris dokkolás azt sugallja, hogy a prosztatabetegség modulációja szempontjából lényeges célpontok közé tartozik többek között az AKT1, a IL-6 és a VEGFA [10]. Ezen elméleti indoklás és a korábbi bizonyítékok alapján azt feltételeztük, hogy a Yishen Tonglong Decoction javítja a BPH-t a IL-6/STAT3 jelátvitel elnyomásával. Ezt a hipotézist egy patkány BPH modellben teszteltük.
Anyagok és módszerek
Állatok
Az SPF minőségű, 200–230 g súlyú, 6–7 hetes hím SD patkányokat a Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd.-től szereztük be (SCXK [Yue] 2022-0060). A patkányokat ketrecenként legfeljebb 4 helyen tartottuk 12 órás világos/sötét ciklusok mellett, 50-60%-os páratartalom mellett 23-25°C hőmérsékleten.
Reagensek és műszerek
Yishen Tonglong Decoction nyers gyógynövények: Anemarrhena asphodeloides (Zhi Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), Rehmannia glutinosa preparált gyökér (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Zhu Yu), Dioscore L Yaposita, Dioscore L Yaoo. Paeonia suffruticosa kéreg (Mu Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli feldolgozott oldalgyökér (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), Prunus persica mag (Tao Ren), Vaccaria Buquaisma Liua Xied (Ze Xie). Forrás: Beijing Tongrentang (Anguo) Chinese Herbal Slices Co., Ltd.
Colivelin (HY-P1061), MCE (USA).
Tesztoszteron-propionát (tisztaság 98%, T7260); ELISA készletek patkány IL-1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. számára.
HE festőkészlet (ab245880), anti-p-STAT3 (ab76315), Masson készlet (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-kollagén I (ab270993), anti-Ki-67 (ab16667), anti-kollagén III (ab16667), anti-kollagén III (ab18-IL93), anti-ab18-IL9-3 szamár nyúl elleni másodlagos (ab205722), patkány IL-6 ELISA (ab234570), Abcam (USA).
Anti-aktin (AF5003), Beyotime (Sanghaj).
HS-2205 paraffin mikrotom (Olabao, Jinan), KP-PH100S mikroszkóp (Shenzhen KEPUS), UMR-9600 mikrolemez-olvasó (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 és PROTEAN tápegységek (Bio-Rad, USA).
BPH modell és csoportosítás
A patkányokat nátrium-pentobarbitállal (45 mg/kg, 3 tömeg/térf.%, intraperitoneálisan) érzéstelenítettük, a heréket kivettük és műtéti úton eltávolítottuk. 3 napos gyógyulás után a patkányok napi tesztoszteron-propionát (5 mg/kg olívaolajban) szubkután injekciót kaptak 21 napon keresztül. A súlyos megnagyobbodás és a hisztopatológiai hiperplázia megerősítette a BPH modellezés sikerét [11]. Az álpatkányokon orchidectomia nélkül herezacskós metszést végeztek, és olívaolajat kaptak.
Előkészítés és adminisztráció
A Yishen Tonglong főzet egyik receptje a következőket tartalmazta: Zhi Mu, Huang Bai, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Wang Bu Liu Xing, Ze Xie (mindegyik 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (mindegyik 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (mindegyik 10 g). A gyógynövényeket kétszer főzzük vízzel, a szűrleteket egyesítjük és 1,5 vagy 3,0 g/ml-re koncentráljuk. A Colivelint sóoldatban 0,1 mg/ml koncentrációban oldottuk fel.
Alacsony és nagy dózisú főzetcsoportok: szondán keresztül 15 vagy 30 g/kg (10 ml/kg 1,5 vagy 3,0 g/ml-nél), plusz intraperitoneális sóoldat (10 ml/kg).
Colivelin csoport: szondán keresztüli sóoldat (10 ml/kg) plusz intraperitoneális Colivelin 1 mg/kg (10 ml/kg 0,1 mg/ml).
Nagy dózisú + Colivelin csoport: szondán keresztül 30 g/kg főzet plusz Colivelin 1 mg/kg ip.
Ál- és modellcsoportok: gyomorszondás sóoldat és ip-sóoldat (10 ml/kg).
Minden kezelést naponta egyszer végeztek 21 napon keresztül.
Prosztata Index és E2/T; Mintagyűjtemény
Huszonnégy órával az utolsó kezelés után a patkányokat elaltattuk (mint fent). Feljegyeztük a testtömeget és a prosztata nedves tömegét a PI=prosztata nedves tömeg/testtömeg kiszámításához. A hasi aorta vérét gyűjtöttük, centrifugáltuk (2000 rpm, 15 perc), hogy szérumot kapjunk. Az E2-t és a T-t ELISA-val mértük, és kiszámítottuk az E2/T-t; A fennmaradó szérumot –80 fokon tároltuk. Körülbelül 0,7 g prosztataszövetet folyékony nitrogénben gyorsfagyasztottunk fehérjevizsgálatokhoz; a fennmaradó részt fixáltuk, dehidratáltuk, paraffinba ágyaztuk, és ~5 μm-es metszettel vágtuk.
HE és Masson festése
A xilolban és osztályozott etanolban (100%, 90%, 80%, 75%) végzett paraffinmentesítést hidratálás követte. A metszeteket HE és Masson készletekkel festettük meg a gyártó utasításai szerint (mindegyik 3 tárgylemez), majd mostuk, dehidratáltuk, megtisztítottuk, és mikroszkópos vizsgálathoz rögzítettük.
Immunhisztokémia a sejtszaporodáshoz
Paraffinmentesítés/hidratálás után a metszeteket 3%-os H2O2-vel kezeltük, kecskeszérummal blokkoltuk, és egy éjszakán át anti-Ki‑67-tel (1:150) inkubáltuk. Az észleléshez DAB kromogént tartalmazó SP készletet használtak. A képeket gyűjtöttük, és a Ki-67 optikai sűrűségét az ImageJ segítségével számszerűsítettük.
ELISA IL-6 és IL-1 prosztatában és szérumban
A fagyasztott prosztataszövetet felaprítottuk, RIPA pufferben homogenizáltuk, és centrifugáltuk (3000 fordulat/perc, 20 perc), hogy teljes fehérjelizátumot kapjunk. A fehérjekoncentrációt BCA-val határoztuk meg. A szöveti lizátum és a felolvasztott szérum alikvot részeit (0,2 ml) ELISA-val IL-6-ra és IL-1-re analizáltuk.
Western blot kollagén I/III és IL-6/STAT3 fehérjékhez
A denaturált mintákat (100°) SDS-PAGE-val elválasztottuk és nitrocellulózra vittük át. A membránokat molekulatömeg szerint szeleteltük a kollagén I, kollagén III, -aktin, IL-6, STAT3 és p-STAT3 szempontjából. 3%-os BSA-blokkolás után elsődleges antitesteket, majd HRP-konjugált másodlagos antitestet alkalmaztunk. A sávokat kemilumineszcenciával tettük láthatóvá, és ImageJ-vel kvantifikáltuk.
Statisztika
Az adatokat SPSS 26.0 segítségével elemeztük egyutas ANOVA és SNK-q post hoc tesztekkel.
Eredmények
A BPH modellezés sikere: A modellcsoportban a prosztata méretének és a szövettani hiperpláziának és fibrózisának nyilvánvaló növekedése volt az ál-alkalmazottakhoz képest. A PI, a Ki-67 optikai denzitás, a prosztata/szérum IL-6 és IL-1, a kollagén I/III, IL-6 és a p-STAT3/STAT3 szignifikánsan emelkedett, míg az E2/T csökkent (P < 0,05).
A Yishen Tonglong főzet terápiás hatásai: Mind a 15, mind a 30 g/kg-os dózisok enyhítették a prosztata megnagyobbodást és a fibrózist. Ezek a kezelések jelentősen csökkentették a PI-t, a Ki-67-et, az IL-6-ot, az IL-1-et, a kollagén I/III-at, az IL-6 fehérjét és a p-STAT3/STAT3-at, és növelték az E2/T-t (P < 0,05). A nagy dózis jobb hatást fejtett ki, mint az alacsony dózis (P < 0,05).
A STAT3 aktiváció hatásai: A Colivelin súlyosbította a prosztata hiperpláziát és fibrózist, és tovább növelte a gyulladásos és fibrotikus markereket, miközben csökkentette az E2/T-t a modellhez képest (P < 0,05).
Colivelin antagonizmusa: A Colivelinnal történő együttes kezelés gyengítette a nagy dózisú főzet előnyeit, növelte a gyulladásos/fibrotikus indexeket és csökkentette az E2/T-t a nagy dózisú főzet önmagában történő kezeléséhez képest (P < 0,05).
Vita
Mechanisztikus indoklás: Az IL-6/STAT3 tengely egy központi gyulladásos út, amely szerepet játszik a prosztataszövetek átalakulásában. Az IL-6 kötődés aktiválja a JAK/STAT3 jelátvitelt, elősegíti a proinflammatorikus és profibrotikus gének transzkripcióját, elősegíti a hám/sztróma proliferációt, az immunsejt-infiltrációt és az extracelluláris mátrix lerakódását. Eredményeink – a gyógynövényes formulával kapcsolatos javulás és a STAT3 aktivátorral végzett romlás – egy ok-okozati összefüggést támasztanak alá, amelynek révén a Yishen Tonglong Decoction enyhíti a BPH-t az IL-6/STAT3 aktiváció csillapításával.
A gyógynövénykészítmények perspektívája (gyógynövény a prosztatagyulladás kezelésére): A gyógynövények összetevői a BPH és a prosztatagyulladáshoz hasonló gyulladások szempontjából releváns kiegészítő hatásokat biztosítanak:
Nedves hővel tisztító és gyulladáscsökkentő: Zhi Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (Paeonia kéreg), Ze Xie (Alisma).
Qi/vese tonizálás és endokrin moduláció: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Cornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).
Véraktiválás és antifibrotikus potenciál: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (Őszibarack mag), Wang Bu Liu Xing (Vaccaria).
Melegítő Yang és javítja a mikrokeringést: Rou Gui (fahéj), Fu Zi (akonit, feldolgozva).
Ín/csonttámogatás és kismedencei keringés: Niu Xi (Achyranthes).
Ez a szinergia együttesen csökkentheti a gyulladásos citokinek (IL-6, IL-1), a proliferációt (Ki-67) és a fibrózist (kollagén I/III), összhangban a Western-blotokban megfigyelt IL-6/STAT3 jelátvitel elnyomásával. Az E2/T emelkedése a szex-szteroid közeg részleges kiegyensúlyozására utal, ami szintén befolyásolhatja a prosztata növekedési dinamikáját.
Klinikai fordítás és korlátok: Bár ezek a preklinikai adatok ígéretesek a BPH és potenciálisan a prosztatagyulladáshoz hasonló gyulladás tekintetében, az emberekre történő extrapoláció körültekintést igényel. A dózisátalakítás, a több gyógynövényből álló készítmények minőség-ellenőrzése és a gyógynövény-gyógyszer kölcsönhatások további tanulmányozást igényelnek. Mindazonáltal az útvonal-centrikus bizonyítékok (a főzet előnyei, a STAT3 aktiválásának kárai és a leolvasási útvonalak) megerősítik az elméleti alapot a prosztatagyulladás és a BPH gyógyítására szolgáló gyógynövény-alapú megközelítés klinikai feltárásához.
Következtetés
A Yishen Tonglong Decoction enyhíti a prosztata hiperpláziát és fibrózist BPH patkányokban az IL-6/STAT3 aktiváció gátlásával és a gyulladásos és profibrotikus jelátvitel csökkentésével, dózisfüggő hatékonysággal. Ezek az eredmények mechanikus támogatást nyújtanak a hagyományos használatához, és modern, útvonal-alapú indoklást adnak a BPH és a prosztatagyulladással kapcsolatos állapotok gyógynövényalapú terápiájaként történő továbbfejlesztéséhez.
Hivatkozások
[1–13] Az eredeti szöveg idézete szerint.
