A gazdaszervezet immunválasza a Clostridioides Difficile felszíni S-réteg fehérjéire (SLP-k)

Absztrakt:

A Clostridioides difficile, egy nozokomiális kórokozó, egy kialakulóban lévő bélpatobiont, amely antibiotikumokkal összefüggő hasmenést okoz. A C. difficile fertőzés magában foglalja a bél kolonizációját és a bél epiteliális gát felbomlását, ami gyulladásos/immun válaszok kiváltásához vezet. Két fő exotoxin, a TcdA és a TcdB expressziója a C. difficile patogenitásának fő oka. A virulencia szempontjából kritikus fontosságú a bakteriális sejtfalfehérjék vagy felszíni S-réteg fehérjék (SLP-k), mint például az SlpA, a gazdasejt hámsejtekhez való kapcsolódása. Amellett, hogy toxinok, ezek a felületi komponensek erősen immunogénnek bizonyultak. A legújabb tanulmányok azt mutatják, hogy a C. difficile SLP-k fontos szerepet játszanak a baktériumoknak a bélhámsejtekhez való adhéziójában, a szoros kapcsolatok megszakításában és a gazdasejtek immunválaszának modulálásában. Ezek a fehérjék új célpontként szolgálhatnak vakcinák és új terápiás szerek számára. Ez az áttekintés összefoglalja jelenlegi ismereteinket az SLP-k immunológiai szerepéről a gazdaszervezet immunitásának kiváltásában, valamint a vakcinák és a C. difficile fertőzés leküzdésére szolgáló új terápiás szerek kifejlesztésében való felhasználásukat.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

Kattintson ide a Cistanche Enhance Immunity termékek megtekintéséhez

【Kérjen többet】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Kulcsszavak:

antibiotikumokkal összefüggő hasmenés; sejtfalfehérjék; terápiás szerek; S-réteg fehérjék; vakcina

1. Bemutatkozás

A Clostridioides difficile, egy toxintermelő anaerob baktérium, egy fontos opportunista és nozokomiális patobiont a bélben, amely betegségek tüneteit okozza az egészséges mikrobiómban bekövetkező zavarok következtében számos tényező miatt, beleértve az antibiotikum-használatot, genetikai, expozíciós, mikrobiális, és egyéb gazdatényezők [1]. A C. difficile szelekciója és proliferációja a pszeudomembranosus colitis életveszélyes állapotát váltja ki [2,3]. A Centers for Disease Control and Prevention 2019-es jelentésének legfrissebb becslései szerint a C. difficile 223 900 fertőzést és 12 800 halálesetet okozott 2017-ben, csak az Egyesült Államokban 1 milliárd dolláros veszteséggel [4]. A C. difficile fertőzés (CDI) első epizódjának kezelése antibiotikumokkal történik. Mindazonáltal a betegség nagymértékben kiújul – 20-30% a kezdeti CDI első kezelését követően, és több mint 50% az első kiújulás után [5]. Ezért sürgős terápiás beavatkozásra van szükség a CDI elleni küzdelemhez világszerte. A C. difficile patogenezisének egyik fő molekuláris tényezője a két fő toxin, a TcdA és a TcdB expressziója és szekréciója, amelyeket a C. difficile 19{18}}kb patogenitási lókuszában (PaLoc) kódoló gének kódolnak. genom [6]. A toxintermelés szabályozását és a toxintermelésben szerepet játszó különböző transzkripciós faktorokat Chandra és munkatársai alaposan áttekintették. máshol [6].

A CDI patogenezise a C. difficile spórák bejutásával/csírázásával kezdődik a vegetatív sejtekbe, amelyek a bélben csíráznak, ahol elszaporodnak, és kolonizálják a bélnyálkahártyát [1,6]. Az intestinalis mucosalis barrier (IMB) a veleszületett védekezés első vonala a patobionták ellen. A gazdaszervezet IMB különböző típusú hámsejtekből áll, amelyek szorosan kapcsolódnak egymáshoz, és egy vastag védő nyálkaréteg borítja, amelyet a serlegsejtek választanak ki [1]. Az IMB megzavarása lehetővé teszi a C. difficile számára, hogy a hámsejtek felszínéhez kapcsolódjon, ahol virulencia faktorainak kidolgozása a C difficile patogenitásának károsodásához és megnyilvánulásához vezet [1,6]. A bakteriális sejtfal számos Gram-pozitív és negatív fajban, köztük a C. difficile-ben, a felületi fehérjéknek (S-layer proteineknek vagy SLP-knek) nevezett fehérjemolekulák bőséges, felszínre kerülő rétegéhez kapcsolódik, amelyek túlnyomórészt bőséges fehérjékből állnak. fehérje SlpA, amely egy kis és nagy molekulatömegű doménből áll, amelyek parakristályos szabályos kétdimenziós tömbként vannak elrendezve elektronmikroszkóppal [7]. Az SLP réteg többi sejtfalfehérje (Cwp) komponense kevésbé bőséges és rosszul jellemzett, de szintén fontos szerepet játszanak a CD patogenitásában. Az elmúlt években az SLP-k kutatása fokozott figyelmet kapott, mivel ezekről a fehérjékről kimutatták, hogy kulcsszerepet játszanak a felületi adhézióban, a Toll-szerű receptorok aktiválásában, a citokintermelés indukciójában és a gyulladásos aktivációban a gazdaszervezet immunválaszának részeként. szerepe a baktérium növekedésében és túlélésében [7–9].

Ebben az áttekintésben a C. difficile SLP-kről szóló legújabb ismeretek fényében tárgyaljuk a gazdaszervezet immunválaszát a fő SlpA komponensekre és más kevésbé bőséges Cwp-kre, és rávilágítunk arra, hogy új vakcinaként és terápiás célpontként használhatók fel a CDI patogenezisében.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

2. CDI elleni veleszületett immunreakciók

Kimutatták, hogy a nem toxikus C. difficile (NTCD) törzsek az állatmodellekben kolonizálva védelmet nyújtanak a C. difficile patogén törzsei ellen. Az 1980-as évek elején Wilson és Sheagren arról számolt be, hogy a cefoxitin antibiotikummal végzett sterilizálás után egy NTCD-törzs által kolonizált hörcsögök védettek voltak, ha egy toxigén C. difficile (TCD) törzzsel fertőzték meg őket [10]. Más fajokkal, például C. perfringens-szel, C. bifermentans-szal, C. beijerinckivel, C. sporogenes-szel és egy hővel elölt, nem toxikus C. difficile NTCD törzzsel végzett kezelés azonban nem nyújtott védelmet a CDI-vel szemben. Ezenkívül a védelem elveszett, amikor a kolonizáló NTCD-t vancomycin kezeléssel sterilizálták a fertőzés előtt [11]. Ezeken az eredményeken felbuzdulva az NTCD-M1 törzs spóráit korlátozott számú klinikai betegnél alkalmazták, akik visszatérő CDI-ben (rCDI) szenvedtek jelentős sikerrel (körülbelül 50%) [12]. Jelenleg a CDI-kezelési lehetőségek korlátozottak, és nagymértékben támaszkodnak antibiotikumok, például vankomicin, fidaxomicin és metronidazol használatára [13,14]. Az antibiotikumok túlzott használata az egészséges mikrobiom dysbiosisához vezet, és tovább segíti a patobionták, például a C. difficile kiválasztását, amelyek később visszaeshetnek [1,15]. E kihívások hatékony megkerüléséhez azonnali figyelmet kell fordítani az alternatív kezelési módszerekre. E kezelési lehetőségek közül néhány magában foglalja a C. difficile toxinok semlegesítését TcdB elleni monoklonális antitestekkel, például bezlotoxumab infúzióval, amely megakadályozza a bélhám toxin által közvetített károsodását [16]. Egy másik lenyűgöző módszer az egészséges mikrobióma helyreállítása fekális mikrobiota transzplantációval (FMT) egészséges donorból a közvetlen családtagok körében. Az FMT ígéretes eredményeket mutatott a visszatérő CDI-vel szemben, akár 90%-os sikeraránnyal [17,18]. Sajnos ezek a vizsgálatok nem foglalkoztak a gazdaszervezet immunválaszának szerepével ezeknek a betegeknek a védelmében. Ezért vitatható, hogy az élő NTCD bizonyos antigéneket/sejtfalkomponenseket szekretál, amelyek erős immunválaszt indukálnak a toxigén TCD-vel szemben. Hasonlóképpen, az FMT-védelem is rosszul definiált. Ezért annak megértése, hogy az FMT bejuttatása miként indukálja a gazdaválaszokat, segíthet a kulcsfontosságú antigének azonosításában, ami viszont segíthet az immunválasz jobb megértésében és a CDI elleni új vakcinák kifejlesztésében.

A bélben a gazdaszervezet veleszületett immunrendszere az első védelmi vonal a behatoló kórokozókkal szemben, amely döntő szerepet játszik a gazdaszervezet robusztus adaptív immunválaszának kialakításában és felépítésében [1]. A veleszületett válasz főleg három részből áll: (i) a bélhám és a nyálkahártya réteg (fizikai gát), (ii) az antimikrobiális peptidek, amelyek a hámsejtek, a Paneth-sejtek és a bélmikrobióta egyes tagjainak kiválasztó termékei (kémiai gát), és (iii) sejtválaszok a veleszületett immunsejtek, például neutrofilek, eozinofilek, makrofágok, veleszületett limfoid sejtek (ILC) és dendritikus sejtek (DC-k) toborzásával, amelyeket többféle veleszületett jelátviteli útvonal irányít a behatoló kórokozó leküzdésére. 1]. A gazdasejtek felületükön mintafelismerő receptorokat (PRR-eket), például TLR-eket hordoznak, amelyek felismernek bizonyos konzervált bakteriális szignatúrákat a mikrobákon, úgynevezett patogen-asszociált molekuláris mintázatokat (PAMP). Ezeket a PRR-eket Toll-like Receptor-oknak (TLR-eknek) is nevezik. Amikor a TLR-ek felismerik ezeket a veszélyjeleket (PAMP), a gazdasejt immunválaszt vált ki. Ebben a vonatkozásban a Toll-like Receptor 4 (TLR4) kimutatták, hogy felismeri a C. difficile veszélyjeleket, amely tevékenység részt vesz a gazdaszervezet gyulladásos válaszának megindításában. Ebben az összefüggésben a C. difficile SLP-iről kimutatták, hogy kölcsönhatásba lépnek a gazdaszervezet TLR-jével-4, míg a C. difficile flagella a TLR5-ön keresztül [19,20].

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

3. S-réteg fehérjék (SLP-k) a C. difficile-ben

Az elmúlt évtizedben a C. difficile felszíni rétegbeli (S-réteg) fehérjéi jelentős figyelmet kaptak. Az SLP-ket először Kawata és munkatársai azonosították. 1984-ben, és a teljes sejttömeg körülbelül 15%-át teszik ki [21,22]. Az SLP-k számos különböző prokarióta fajban megtalálhatók. Az SLP-k többsége a sejtek legkülső felületén, egyetlen fehérjeként, egy kétdimenziós parakristályos tömbben helyezkedik el [7]. A C. difficile-ben az S-réteg főleg a heterodimer SlpA fehérjékből áll. Az SlpA egy heterodimer, amely egy nagy molekulatömegű (HMW) fehérjéből és egy alacsony molekulatömegű (LMW) fehérjéből áll, amelyet egyetlen slpA gén kódol; az LMW SLP alkotja a szabaddá tett felső réteget, míg a HMW SLP az alsó réteget. Az LMW SLP egyedülálló a C. difficile-ben. A C. difficile 630 törzsben az slpA lókusz egy 36,6 kb méretű régió, amely 11 slpA paralógot tartalmaz. Ezenkívül további 17 paralóg található a genomban szétszórva [23,24]. Ezeket a paralóggéneket ma clostridium sejtfalfehérjéknek (CwpX) nevezik, ahol X az azonosított paralógszámot jelöli (X=1–29), és az 1. táblázatban találhatók. A Cwp84-et és a CwpV-t az új elnevezési konvenció elfogadása előtt nevezték el [23]. Az összes Cwps tipikus fehérje, amely egy N-terminális szignálpeptidet és három feltételezett sejtfalkötő domént tartalmaz, amelyek jelentős hasonlóságot mutatnak a HMW SLP-vel [25,26]. A különböző C. difficile törzsek eltéréseket mutattak az slpA lókuszban, és körülbelül 12 különböző S-réteg kazettatípust dokumentáltak. A többi 28 Cwps kiegészítő komponensként működik, amelyek az S-réteg ~5-20%-át kitevő polimerizált parakristályos rétegben vannak rögzítve [7].

1. táblázat. A Clostridium difficile 630 genomjában található 29 csésze gén feltételezett funkciói.

1. táblázat Folytatás

4. Sejtfalfehérjék expressziója és törzsváltozata

A C. difficile 630 törzsben körülbelül kilenc Cwps-t kódoló gén expresszálódik [25]. Míg a cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 és cwp25 gének a sejt felszínén expresszálódnak normál növekedési körülmények között [44], addig a cwp66 és cwp5 gének expresszálódtak, de a sejtfelszíni kivonatokban nem találhatók meg. Egy külön tanulmányban Biazzo et al. A C. difficile genomjában szétszórt csészéket elemzett. Megfigyelték, hogy a cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 és cwp25 gének expresszálódnak, és jól konzervált szekvenciákkal rendelkeznek, míg a cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 és cwp28 gének expressziós szintje szignifikáns volt. ribotípusok és kevésbé konzerváltak [45]. Számos slpA lókusz gén jelentős eltéréseket mutat a törzsek között, különösen a felszíni exponált régiókban. Például kimutatták, hogy az slpA, cwp66, secA2 és cwp2 nagy eltéréseket mutat az slpA lókuszon belül (ami egy 10-kb kazettát alkot); ennek a kazettának eddig 12 eltérő változatát találták a különböző genotípusok közötti homológ rekombináció eredményeként [46]. Karjalainen és munkatársai szerint a cwp66 csak 33%-os azonosságot mutat a törzsek között [26]. A cwp2 variánst egy 23,8 kb nagyságú előre jelzett S-réteg glikozilációs gén klaszter váltotta fel az slpA lókuszban [46]. Az SlpA a C. difficile sejtfelszíni kivonatokban leggyakrabban előforduló SLP, és a C. difficile SLP fő összetevője. Az érett fehérje a szekréció után HMW-vé hasad, és LMW fehérjeformákká válik a Cwp84 proteáz hatására, így keletkezik a heterodimer komplex H/L komplex, amely polimerizálva S-réteget képez [47] (1. ábra). A C. difficile 630∆ermben a cwp84 gén inaktiválása olyan S-réteget eredményezett, amely csak egy éretlen egyláncú SlpA-ból állt, megváltozott telepmorfológiával, ami arra utal, hogy a Cwp84 fontos szerepet játszik az érett S-réteg kialakulásában [32]. A secA2 gén jelenléte az slpA lókuszban fontos az SlpA és más Cwps citoplazmatikus membránon való átjutásához [48].

1. ábra. A C. difficile SLP-i közvetítik az immunsejtek adhézióját és aktiválását. A naszcens SlpA peptidet a Cwp84 proteáz hasítja az LMW és HMW alegységekre, amelyek a sejtfal SLP rétegének érett SlpA komplexét alkotják [31–33]. Az SLP-k a TLR4-en keresztül közvetítik az adhéziót, megzavarják a bélhámsejtek szoros kapcsolatát, és tovább aktiválják a dendritikus sejteket/makrofágokat, amelyek viszont különféle citokineket és kemokineket termelnek, ami Th1/Th2 és humorális válasz indukciójához vezet [9,27]. Interleukin (IL), Dendritikus sejtek (DC), Alacsony molekulatömeg (LMW), Nagy molekulatömeg (HMW), Toll-like receptor 4 (TLR4).

5. Az S-réteg fehérjék funkciói

Az SLP-k a C. difficile biológiájában különböző funkciókban vesznek részt (lásd 1. táblázat), például a sejtintegritásban, a transzportban, a pórusok és horgonyok kialakításában, a lebontásban, a gazdasejt adhéziójában/inváziójában, az immunrendszer kikerülésében és a versengő mikroorganizmusokkal szembeni védelemben [22]. . Pechineet al. kimutatott antitesteket a Cwp66 antigén N-terminális és C-terminális doménje ellen a Clostridium difficile-vel összefüggő betegségben (CDAD) szenvedő betegek szérumában [49]. Egy másik tanulmányban Wright et al. 2D-PAGE segítségével elválasztotta a Cwps-t, és azonosított több Cwp-t (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), amelyek reagáltak a C. difficile 017 ribotípusú törzzsel fertőzött betegek szérumával, ami az SLP-k elleni erős immunválasz kiváltására utal [50]. Nemrég Kirk et al. két olyan C. difficile törzset azonosított, amelyekből hiányzott az S-réteg, és amelyek nem voltak érzékenyek a pórusokat képező és a versengő baktériumsejteket depolarizáló bakteriocinra. Azonban ezek a C. difficile törzsek szignifikánsan megnövekedett érzékenységet mutattak a lizozim és az antimikrobiális peptid LL-37 iránt, és nem okoztak CDI betegségtüneteket a fertőzés hörcsögmodelljében [51]. Egy közelmúltban végzett tanulmány a három toxikogenikus törzsből (RT126, RT001, RT084) izolált SlpA hatásait vizsgálta a szoros junction (TJ) fehérjék expressziójára és a gyulladást elősegítő citokinek indukciójára a HT humán vastagbélkarcinóma sejtvonalban-29 . Az SlpA kezelés szignifikánsan csökkentette a claudins család és a JAM-A szoros junction fehérjék expressziós szintjét (1. ábra) [9]. Ezenkívül az SlpA fehérje növelte a TLR-4 expressziós szintjét, és indukálta a TNF-, IL-1 és IL-8 szekrécióját. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az SlpA fehérje által közvetített patogenezis és gyulladásos válaszokat indukált a bélben [9]. Ezért indokolt az az érvelés, hogy az SLP-k nélkülözhetetlenek a C. difficile patogenitásához és az immunválaszokhoz.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

6. Immunválasz az SLP-kre

A legújabb vizsgálatok rámutattak az SlpA fontos szerepére nemcsak a baktériumok túlélésében és növekedésében, hanem a gazdaszervezet immunválaszának kialakításában is. Immunproteomikai alapú megközelítések kimutatták az anti-SLP antitestek jelenlétét hat, C. difficile 017 ribotípussal fertőzött beteg szérumában, ami arra utal, hogy az SLP fehérjék immundominánsak és a fertőzés során expresszálódnak [50]. Bruxelles és munkatársai által vezetett tanulmány. magasabb anti-SlpA antitestszintet mutatott CDI-s betegekben az egészségesekhez képest [52]. Egy másik tanulmányban Negm et al. összesen 327 CDI-s egyén szérumában mutatott ki IgG antitesteket a különböző C. difficile törzsekből származó SLP kivonatokkal szemben [53]. Az SlpA mellett a második legnagyobb mennyiségben előforduló Cwp66 fehérje exponált C-terminális doménje erősen variábilis, míg az N-terminális domén jól konzervált. A Cwp66 és Cwp84 variábilis C-terminális doménjeiről kimutatták, hogy emberekben immunogének [49,54]. Ezenkívül a CDI-s betegekben az átlagos teljes anti-Cwp66 és anti-Cwp84 szint alacsonyabb volt, mint az egészséges kontrollcsoportban, ami az antitestek védő természetére utal. Ezért az SLP-k, különösen az SlpA és más komponensek fontos szerepet játszanak az immunvédelemben, és potenciális célpontjai az immunterápiás és vakcinafejlesztésnek, amint azt a következő szakaszokban ismertetjük.

7. Az SLP-k közvetítik a C. difficile adhéziót

A C. difficile fertőzést indít el a bélhámsejtekhez tapadva, ami kolonizációhoz vezet. Ebben a tekintetben a bakteriális SLP-k, például az SlpA és a Cwp66 kritikus szerepet játszanak az adhézióban. Beszámoltak arról, hogy az SLP-k, specifikusan az SlpA variációi izolált C. difficile törzsekben változást mutattak az adherenciában [55]. Kimutatták, hogy az SLP-k különböző sejtvonalakhoz kötődnek, például a Hep-2 és Vero sejtek humán gyomor-bélrendszeri sejtvonalaihoz, valamint az extracelluláris mátrix számos fehérjéhez. Ezenkívül az anti-HMW-SLP antitestekkel végzett kezelés gátolta a C. difficile tapadását. Ezenkívül a gazdasejtek tisztított SlpA alegységekkel vagy anti-SlpA antitestekkel történő előkezelése szintén megakadályozta a C. difficile adherenciáját [55]. Az SlpA fehérjecsalád legnagyobb homológja a CwpV fehérje, amely fázisváltozó módon expresszálódik. Egy külön tanulmányban kimutatták, hogy a CwpV fehérje C-terminális ismétlődő doménje közvetíti a C. difficile aggregációt. Ezenkívül ez a domén törzsenként változik, és öt antigénikusan eltérő ismétlődő típust azonosítottak [40].

Egy másik, Cwp66 nevű immunogén fehérjéről kimutatták, hogy adhéziós tulajdonságokkal rendelkezik. A tisztított Cwp66 és az N-terminális és C-terminális domének elleni antitestek gátolták a C. difficile tapadását tenyésztett Vero sejtekhez, ami a Cwp66 adhéziós tulajdonságaira utal [29].

8. Gyulladásos reakciók kiváltása

Bianco et al. kimutatták az SLP-k szerepét a gyulladásos folyamatban. Ebben a vizsgálatban a hipervirulens és járványos (H/E) vagy nem H/E C. difficile törzsekből származó SLP-ket tisztították, és humán monocitákban és monocita eredetű dendritikus sejtekben (MDDC-k) vizsgálták az immunmoduláló citokinek [interleukin] indukciója szempontjából. (IL)-1, IL-6 és IL- 10] [56]. A tanulmány kimutatta, hogy az SLP-k nemcsak az MDDC-k érését indukálták, fokozott antigénprezentáló aktivitással, hanem magas szintű IL-10 szekréciót is indukáltak. Nem találtunk azonban szignifikáns különbséget a monociták és MDDC-k aktiválódásában H/E és nem H/E törzsekből származó SLP-készítményekkel, ami arra utal, hogy az SLP-k nem járulnak hozzá a betegség fokozott súlyosságához [56]. Egy másik tanulmányban Ausiello et al. SLP-ket vontak ki a C253 klinikai izolátumból, és kimutatták, hogy az SLP-k fokozott IL-1 és IL-6 pro-inflammatorikus citokinek szekrécióját indukálták a nyugalmi monocitákban, és indukálták a humán MDDC-k érését, és fokozták a T proliferációt. sejtek [57]. Ezenkívül ezek a kezelt MDDC-k fokozott mennyiségű IL-10-ot és IL-12p70-et bocsátottak ki, és vegyes Th1/Th2 immunválaszt indukáltak. A TLR-4 fontos szerepet játszott a DC-k SLP-közvetített aktiválásában. Kimutatták, hogy az SLP-k nem képesek aktiválni a TLR4-mutáns C3H/HeJ egerekből izolált DC-ket, és nem indukálnak egy későbbi Th immunválaszt, ami arra utal, hogy az SLP-k aktiválják a TLR4 receptor által közvetített veleszületett és adaptív immunitást [19]. Egy másik tanulmányban makrofágokon kimutatták, hogy a C. difficile-ből származó SLP-k clearance-reakciót váltanak ki a gyulladást elősegítő citokinek és kemokinek szekréciója tekintetében, fokozott makrofág-migrációval és fagocitotikus aktivitással [58]. A p38-inhibitorral végzett kezelés megfordította ezeket a válaszokat, ami arra utal, hogy a jelátviteli molekulák szerepet játszanak az SLP-közvetített válaszokban [58]. Egy nagyon friss tanulmány dózisfüggő módon számolt be a C. difficile SLP-k által okozott gyulladásos aktivációról. Kimutatták továbbá, hogy a sejtmembránokon található koleszterinben gazdag mikrodomének (lipid raftok) segítettek az SLP-k sejtmembránhoz való kötődésében. Ez fluoreszcens mikroszkópos vizsgálaton alapult, ahol kimutatták, hogy a membrán koleszterinszintjét kimerítő metil- -ciklodextrin (M CD) kezelés csökkenti az SLP kötődését, ami arra utal, hogy az SLP-k toborozzák a lipid tutajokat, ami kritikus a C. difficile kolonizációja és a gyulladásos aktiváció szempontjából [59] ]. Ezek a tanulmányok azzal érvelnek, hogy a C. difficile SLP-k aktiválhatják a veleszületett és adaptív immunválaszokat, amelyeket részben a TLR4 közvetít, ami arra utal, hogy az SLP-k fontos szerepet játszanak az immunválasz kiváltásában. Ezért ezek az eredmények azt is sugallják, hogy az SLP-k vakcinajelöltek lehetnek a CDI ellen.

9. CDI elleni antitestreakciók

Számos immunológiai vizsgálat azt mutatja, hogy a C. difficile fertőzés és kimenetele a gazdaszervezet immunválaszának intenzitásától függ, amely kulcsfontosságú tényező a CDI patogenitásában. Így a robusztus antitestválasz kialakulásának képtelensége a betegség súlyosságának és kiújulásának prognózisa lehet [60]. Ebben a tekintetben a fő toxinok elleni antitestek szintje korrelációt mutatott a betegség kiújulásával és súlyosságával [61,62]. Korábbi vizsgálatokban a C. difficile felszíni komponensek elleni antitestekről is beszámoltak CDI-betegek szérumában [63]. Drudy és mtsai. értékelték a C. difficile SLP-kivonatokra adott humorális immunválaszokat egy 146 betegből álló kohorszban, amelyből 55 C. difficile-vel összefüggő hasmenés (CDAD), 34 tünetmentes hordozóban szenvedő beteg és 57 kontroll alany volt [64]. A vizsgálat során nagy és alacsony molekulatömegű frakciókat izoláltak az SLP-kből, amelyek főleg az SlpA fehérjét tartalmazták. Enzim-kapcsolt immunszorbens vizsgálattal (ELISA) mérték a szérum antitesteket ebben a kohorszban, és nem találtak szignifikáns különbséget a szérum IgM, IgA vagy IgG antitestek szintjében. Érdekes módon a visszatérő CDAD-epizódokban szenvedő betegek IgM-anti-SLP-szintje szignifikánsan alacsonyabb volt, mint az egyszeri epizódokban szenvedő betegeknél. A tanulmány arra a következtetésre jutott, hogy további vizsgálatokat kell végezni a specifikus anti-SLP antitest válaszok meghatározására és a C. difficile SLP-k felhasználásával végzett védelmi vizsgálatokra [64].

A HMW és LMW SLP izolált kivonatát alkalmazó passzív és aktív immunizálás biztató eredményeket mutatott, és megnövekedett túlélési arányt mutattak a halálos hörcsög-fertőzési modellekben. O'Brien et al. kimutatták az anti-SLP antitestek protektív válaszát a C. difficile fertőzésre hörcsögökben, ahol a túlélés szignifikánsan meghosszabbodott az anti-SLP-vel kezelt csoportokban a kontrollcsoportokhoz képest [65]. Kimutatták, hogy az antiszérum védőhatása a C. difficile fagocitózis fokozásán keresztül valósul meg [65]. Eidhin és munkatársai aktív immunizálást alkalmazva az SlpA LMW- és HMW-peptidjeit ekvimoláris mennyiségben tartalmazó nyers SLP-kivonatot teszteltek vakcinaként különböző szisztémás és nyálkahártya-adjuvánsokkal aranyszír hörcsögökben és BALB/c egérmodellekben. A tanulmány szerény vagy gyenge antiteststimulációról számolt be a különböző sémák mellett, és az egérmodellek erősebb antitestválaszt mutattak az SLP-kre, mint a hörcsögök [66]. Egy másik tanulmányban Brunet al. a toxin A receptorkötő doménjéből (TxA (C314)) és a C. difficile C253 törzsből származó SLP-36 kDa fragmentumából álló két peptid in vivo adjuváns aktivitását vizsgálta a fibronektinkötő protein A (FnbpA) ellen. ), a Staphylococcus aureus elleni védőoltás antigén [67]. Kiértékelték a választ intranazális és szubkután úton, és azt találták, hogy mindkét fragmentum fokozta a keringő anti-FnbpA IgG és IgA termelését. Arra a következtetésre jutottak, hogy ezek a fragmentumok, ha adjuvánsként használják, eltérően hatnak és polarizálják az immunrendszert [67]. Egy másik tanulmányban Shirvan et al. specifikus rekombináns antitesteket generált és expresszált C. difficile 630 fehérjékből származó SLP-k, például Cwp66 és SlpA ellen fágmegjelenítés segítségével, és kimutatta, hogy ezek a rekombináns antitestek törzsspecifikus módon, nagy specificitással reagálnak az SLP-kre és azok komponenseire [68].

Az immunválaszt és a védelmet a Cwp84 proteázt antigénként használó hörcsögmodellben számos immunizálási móddal értékelték [69]. A tanulmány eltérő antitesttitereket talált az immunizálási módok alapján. A legjobb védelmet a rektális immunizálás során tapasztaltuk. Továbbá az immunizált hörcsögcsoportok 26%-kal gyengébb és lassabb C. difficile intestinalis kolonizációt eredményeztek C. difficile fertőzés után, szignifikánsan magasabb túlélési arány mellett (33%-kal nagyobb), mint a nem immunizált csoportok [69].

cistanche növény-növelő immunrendszer

10. SLP-alapú Anti-C. difficile Therapeutics

A C. difficile semlegesítésére szolgáló specifikus antitest-alapú terápiák hatékony stratégiát jelenthetnek. Kandalaft et al. egydoménes antitesteket használtak az SLP-k megcélzására [70]. A csoport SLP-specifikus egydoménes antitesteket (VHH) készített a QCD-32g58 (027 ribotípus) hipervirulens C. difficile törzsből. Eredményeik azt mutatták, hogy számos VHH nagy affinitással kötődik az SLP LMW alegységén található QCD-32g58 epitópokhoz. Továbbá arról számoltak be, hogy ezek a VHH-k kötődnek a 001-es és 027-es ribotípusokhoz, és ezen VHH-antitestek egy részhalmaza nagyjából keresztreaktív volt a 012-es, 017-es, 023-as és 078-as ribotípusokkal szemben. Ezekről a VHH-król kimutatták, hogy in vitro gátolják a C. difficile QCD{17}}g58 motilitását [70].

Egy másik precíziós antibakteriális szer, Av-CD291.2 kifejlesztése Kirk és munkatársai által. beszámoltak róla, hogy specifikusan elpusztítja a C. difficile-t, és megakadályozza a kolonizációt egerekben [51]. Az Av-CD291.2-ról kimutatták, hogy elpusztítja a különböző C. difficile izolátumokat a C. difficile törzsekben lévő SLP szekvenciák alapján. A szerzők azt állítják, hogy az slpA génben pontmutációt tartalmazó SLP nullmutánsokat azonosítottak, amelyek rezisztensek az Av-CD291.2 ágensekkel szemben. Ezeknek a mutánsoknak is voltak sporulációs hibái, de képesek voltak kolonizálni a bélrendszert annak ellenére, hogy egy hörcsögmodellben a virulencia gyengült [51]. Ezenkívül létrehoztak egy olyan Avidocin-CD-t tartalmazó panelt, amely SLP-szekvencia-függő módon elpusztítja a különböző C. difficile törzseket, ami arra utal, hogy ezek az SLP-ken alapuló antibakteriális szerek fontos szerepet játszanak a CDI megelőzésében [51].

11. Záró megjegyzések és kritikus megválaszolatlan kérdések

A gazdaszervezet robusztus specifikus immunválaszt fejleszt ki a C. difficile toxinok és felszíni komponensek ellen. Az SLP-kről kimutatták, hogy szerepet játszanak a sejtadhézióban, különböző citokinek indukciójában a TLR4 aktiválásán keresztül, valamint a veleszületett és humorális immunválasz aktiválásában. A T-sejtes válaszok SLP-k általi aktiválásával kapcsolatos vizsgálatokra azonban szükség van ahhoz, hogy tovább boncolhassuk a CD4 és CD8 sejtek szerepét. A humorális válasz aktiválása alapján ezek a toxinok és felületi komponensek elleni neutralizáló antitestek megakadályozhatják a CDI klinikai tüneteit. Az SLP-k elleni aktív vagy passzív immunizálást alkalmazó tanulmányok ígéretes eredményeket mutattak, jelezve, hogy a stratégia továbbfejleszthető a CDI patogenitása elleni új terápiás készítményekké. Nagy figyelmet fordítottak az SlpA-ra, mint vakcinajelöltre; azonban az SlpA törzsek közötti nagy szekvenciavariabilitása miatt a vakcina nem biztos, hogy minden ribotípus ellen hatékony. Emiatt epitóp-alapú vakcinákra lehet szükség a probléma megkerüléséhez. Ebből a szempontból az SLP-k elleni egydoménes antitestek (VHH) életképes lehetőségek, amelyek nagy specificitással kötik meg a C. difficile LMW-SLP alegységét, és kimutatták, hogy gátolják a C. difficile törzsek mozgékonyságát. Jelenleg az SLP-k és paralógjaik mechanikus szerepének megértése a CDI-patogenezisben, az adhézióban és a T-sejt-válaszban még a kezdeti szakaszban van, és nagyrészt feltáratlan. További vizsgálatokra van szükség az SLP-k molekuláris funkcióinak és specifikus immunválaszainak feltárására, hogy elősegítsék a C. difficile fertőzések leküzdésére szolgáló új vakcina/gyógyszer célpontok és terápiák gyors kifejlesztését.

Hivatkozások

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Sun, X.; Shukla, P. Pathobionts: A túlélés, a terjeszkedés és a gazdaszervezettel való interakció mechanizmusai, különös tekintettel a Clostridioides difficile-re. Gut Microbes 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM A Clostridium difficile átsorolása Clostridioides difficile-vé (Hall és O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Értesítés az IJSEM-en kívül korábban közzétett taxonómiai vélemény változásairól. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Betegségellenőrzési és -megelőzési központok. Antibiotikum-rezisztencia veszélyei az Egyesült Államokban, 2019. 2019. Elérhető online: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (Hozzáférés: 2022. szeptember 8.).

5. Shields, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Visszatérő Clostridium difficile fertőzés: A kolonizációtól a gyógyulásig. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. A Clostridioides difficile patogenezisének szabályozó transzkripciós faktorai, különös tekintettel a toxinszabályozásra. Crit. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; et al. Az S-réteg felépítése és összeállítása C. difficile-ben. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Felületi rétegbeli fehérjék jellemzői és immunológiai szerepei Clostridium difficile-ben. Ann. Labor. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR A hipervirulens Clostridioides difficile ribotipusokból származó felszíni réteg protein A szignifikáns változásokat indukál a szoros csomópontok génexpressziójában és a gyulladásos válaszban humán bélhámsejtekben. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN A toxigén Clostridium difficile antagonizmusa a nem toxikus C. difficile által. J. Infect. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Hörcsögök védelme Clostridium difficile ileocolitis ellen nem patogén törzsekkel való előzetes kolonizációval. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Seal, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Relapszusos Clostridium difficile hasmenés kezelése nem toxikus törzs beadásával. Eur. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Klinikai gyakorlati iránymutatás az Amerikai Fertőző Betegségek Társasága (IDSA) és az Amerikai Egészségügyi Epidemiológiai Társaság (SHEA) által: 2021. évi Clostridioides difficile fertőzés kezelésére vonatkozó, 2021-es célzott frissítési irányelvek. Clin. Megfertőzni. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Európai Klinikai Mikrobiológiai és Fertőző Betegségek Társasága: 2021-es frissítés a felnőttek Clostridioides difficile fertőzésének kezelési útmutatójáról. Clin. Microbiol. Megfertőzni. 2021, 27 (2. melléklet), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME A kezelés sikertelensége és a Clostridium difficile fertőzés kiújulása vankomicinnel vagy metronidazollal végzett kezelést követően: A bizonyítékok szisztematikus áttekintése. Int. J. Antimicrob. Ügynökök 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Egy feltörekvő monoklonális antitestterápia a visszatérő Clostridium difficile fertőzés megelőzésére. Biológia 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Szisztematikus áttekintés metaanalízissel: Clostridium difficile fertőzés esetén a széklet mikrobiota transzplantációjának hosszú távú eredményei. Táplálék. Pharmacol. Ott. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Price, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Szisztematikus áttekintés metaanalízissel: A széklet mikrobiota transzplantációjának hatékonysága visszatérő és refrakter Clostridium difficile fertőzés kezelésére. Táplálék. Pharmacol. Ott. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. A TLR4 szerepe a Clostridium difficile fertőzésben és a felszíni réteg fehérjék felismerésében. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. A Clostridium difficile flagella túlnyomórészt a TLR5-kapcsolt NF-κB útvonalat aktiválja a hámsejtekben. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Egy szabályos tömb bemutatása és előzetes jellemzése a Clostridium difficile sejtfalában. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB S-Layer fehérjék. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF A Clostridium difficile sejtfalfehérjéinek javasolt nómenklatúrája. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. A Clostridium difficile 630 törzs genomszekvenciájának reannotációja. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. A Clostridium difficile felszíni rétegbeli fehérjéinek molekuláris jellemzése. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. A Clostridium difficile felszínén lehorgonyzott fehérjéket kódoló gének molekuláris és genomi analízise. Megfertőzni. Immun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Willing, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; A Fairweather, NF Clostridium difficile felszíni fehérjék a sejtfalhoz vannak rögzítve CWB2 motívumok segítségével, amelyek felismerik a PSII anionos polimert. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shone, CC; A Clostridium difficile-ből származó Acharya, KR Cwp2 in vitro kiterjesztett három doménredőt és sejtadhéziót mutat. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. A Clostridium difficile adhezív tulajdonságokkal rendelkező sejtfelszíni fehérjéjének jellemzése. Megfertőzni. Immun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Hé.; Yu, W.; Cui, G.; et al. A cwp66 gén befolyásolja a Clostridioides difficile sejtadhézióját, stressztűrését és antibiotikum-rezisztenciáját. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Storck, EM; Gyógyulj, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW A felszíni réteg biogenezisének kémiai szondái Clostridium difficile-ben. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; A Shone, CC Cwp84, egy felülethez kapcsolódó cisztein proteáz, szerepet játszik a Clostridium difficile felszíni rétegének érésében. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. A Cwp84, a Clostridium difficile felülethez kapcsolódó fehérje, egy cisztein proteáz, amely lebontja az extracelluláris mátrix fehérjéket. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Miheliˇc, M.; Lindiˇc, N.; Borišek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. A CWB2 sejtfal-rögzítő modult a Clostridium difficile sejtfalfehérjék Cwp8 és Cwp6 kristályszerkezetei tárják fel. Struktúra 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR A lokális szekvencia-illesztés valószínűségi modellje, amely leegyszerűsíti a statisztikai szignifikancia-becslést. PLoS Comput. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, főigazgatóság; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Enteropatogén Escherichia coli intimin-receptor komplex kristályszerkezete. Természet 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Willing, SE; Tate, EW; Fairweather, NF A Cwp84 és Cwp13 cisztein proteázok szerepe a Clostridium difficile sejtfalának biogenezisében. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domének: Komplexitás mértékkel. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Novel Roles of SH2 and SH3 Domains in Lipid Binding. Cells 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF A Clostridium difficile sejtfalprotein CwpV törzsek között antigénesen variálható, de konzervált aggregációt elősegítő funkciót mutat. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shone, CC; Acharya, KR A Clostridium difficile-ből származó Cwp19 glikozid-hidroláz doménjének molekuláris szerkezete. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; Hé.; Sun, X. A Cwp22, egy új peptidoglikán térhálósító enzim, pleiotróp szerepet játszik a Clostridioides difficile-ben. Environ. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; et al. A Pfam fehérjecsaládok adatbázisa: Egy fenntarthatóbb jövő felé. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Várj, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Clostridium difficile sejtfelszíni fehérjéinek proteomikai elemzése. Proteomics 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL A cwp lókuszok sokfélesége a Clostridium difficile klinikai izolátumaiban. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; et al. A Clostridium difficile S-réteg rekombinációs váltása és egy új glikozilációs génklaszter, amelyet nagyszabású teljes genom szekvenálás tárt fel. J. Infect. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Strukturális betekintés a Clostridium difficile S-rétegének molekuláris szerveződésébe. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF A Clostridium difficile két párhuzamos és esszenciális Sec szekréciós rendszerrel rendelkezik. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmee, M.; Collignon, A. A Clostridium difficile felszíni fehérjéinek immunológiai tulajdonságai. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Humán szérummal azonosított Clostridium difficile immunreaktív sejtfalfehérjék. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP A precíziós antimikrobiális szerek új osztálya újradefiniálja a Clostridium difficile S-réteg szerepét a virulenciában és életképességben. Sci. Ford. Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. A Clostridium difficile felszíni réteg prekurzorának immunogén tulajdonságai és vakcinációs vizsgálatok állatmodellekben. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Shone, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. A Clostridium difficile-specifikus antigénekre adott humorális immunválaszok profilozása fehérjemikroarray-analízissel. Clin. Vaccine Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné S.; Janoir, C.; Collignon, A. A Clostridium difficile felszíni fehérjék variabilitása és a specifikus szérum antitest válasz Clostridium difficile-vel összefüggő betegségben szenvedő betegeknél. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. A felszíni réteg fehérje A (SlpA) főként hozzájárul a Clostridium difficile gazdasejt-adherenciájához. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Járványos és hipervirulens Clostridium difficile törzsekből nyert felületi réteg fehérjék immunmoduláló hatásai. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. A Clostridium difficile felszíni rétegbeli fehérjéi gyulladásos és szabályozó citokineket indukálnak humán monocitákban és dendritikus sejtekben. Mikrobák fertőznek. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE A Clostridium difficile-ből izolált felszíni réteg fehérjék kiürülési válaszokat indukálnak a makrofágokban. Mikrobák fertőznek. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ membránkoleszterin kulcsfontosságú a Clostridium difficile felszíni rétegbeli fehérjemegkötődéséhez és a gyulladásos aktiváció kiváltásához. Elülső. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Meg tudjuk-e azonosítani azokat a betegeket, akiknél magas a recidív Clostridium difficile fertőzés kockázata? Clin. Microbiol. Megfertőzni. 2012, 18 (6. melléklet), 21–27. [CrossRef]

61. Wullt, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. IgG antitest válasz az A és B toxinokra Clostridium difficile fertőzésben szenvedő betegeknél. Clin. Vaccine Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; et al. A szérum anti-toxin B antitest korrelál a visszatérő Clostridium difficile fertőzés (CDI) elleni védelemmel. Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. A Clostridium difficile felszíni fehérjéire adott szérum immunglobulin G válasz immunblot-analízise antibiotikummal összefüggő hasmenésben szenvedő betegeknél. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Humán antitest válasz a felszíni réteg fehérjéire Clostridium difficile fertőzésben. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Hörcsögök passzív immunizálása Clostridium difficile fertőzés ellen felszíni réteg fehérjéi elleni antitestek felhasználásával. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Hörcsögök aktív immunizálása Clostridium difficile fertőzés ellen felületi fehérje segítségével. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 és SLP{2}}kDa fokozza az immunválaszt az együtt adott antigénnel szemben. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. A Clostridium difficile felszíni fehérjéi ellen irányuló rekombináns antitestek izolálása. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Hörcsögök immunizálása Clostridium difficile fertőzés ellen a Cwp84 proteáz antigénként történő alkalmazásával. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Felszíni rétegbeli fehérjék célzása egydoménes antitestekkel: Egy lehetséges terápiás megközelítés a Clostridium difficile társult betegség ellen. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]