Hogyan akadályozza meg a Cistanche a májbetegséget

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Absztrakt

A poliszacharidok előzetes jellemzésének, antioxidáns és májvédő hatásának kutatása.Cistanche deserticola (CDP), három poliszacharid frakciót, a CDP-A-t, CDP-B-t és CDP-C-t egymás utáni membránszűréssel (mikroszűrés, ultraszűrés és nanoszűrés) kapták. Elemeztük a három frakció molekulatömegét, monoszacharid-összetételét, tisztaságát és IR-spektrumát. Az eredmények azt mutatták, hogy a CDP-C nagyobb arányban tartalmaz galakturonsavat (GalUA), mint a CDP-B és CDP-A. Az antioxidáns aktivitást is elemezték, és az eredmények azt mutatták, hogy a CDP-C rendelkezik a legmagasabb aktivitással. Így a CDP-C hepatoprotektív aktivitását tovább vizsgálták. In vitro kutatások során a CDP-C elősegítette a HepG2 sejtek életképességét. Az in vivo kutatások a CDP-C javította az alkohol által kiváltott változásokat, beleértve a szerológiai indexeket (alanin-transzamináz, savas foszfatáz, -glutamil-transzpeptidáz és triglicerid) és a májindikátorokat (szuperoxid-diszmutáz, malondialdehid, glutation-S-transzferáz és triglicerid modell). állatokat. A modellállatok májszövettani vizsgálatában a kiemelkedő mikrovezikuláris steatosis és enyhe nekrózis szintén gyengült a CDP-C adagolásával. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a CDP-C májvédő hatással rendelkezik az alkohol által kiváltott krónikus májkárosodással szemben. A mögöttes mechanizmus az lehet, hogy a CDP-C csökkentheti az MDA és TG tartalmát, és módosíthatja a relatív enzim aktivitását. Ez a tulajdonság a CDP-C GalUA-val társítható.

Tárgyszó: Cistanche deserticola; poliszacharidok; Előzetes jellemzések; Antioxidáns; Hepatoprotektív aktivitás.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Bemutatkozás

A Cistanche egy évelő holoparazita, és főleg Kína északnyugati részén, a sivatagi régióban található [1, 2]. A Cistanche faj (Orobanchaceae) szárát először Shen Nong kínai Materia Medica című művében jegyezték fel. A Cistanche-t régóta használják hagyományos gyógynövényként veseelégtelenség, impotencia, időskori székrekedés, derék- és térdfájdalom és gyengeség, valamint vérhiány kezelésére [3, 4]. A farmakológiai kutatások kimutatták, hogy a Cistanche gyulladáscsökkentő [5, 6], csontritkulás elleni aktivitása [7, 8], nyugtató hatása [9], fáradtság gátló hatása [10], neuroprotektív hatása [11]. Emellett a Cistanche deserticola (CDP) poliszacharidjai antihiperglikémiás és hipolipidémiás hatással [12], immunológiai aktivitással [13], valamint limfociták proliferációs hatással [14].

Az alkohol, egy világszerte fogyasztott ital és élelmiszer-adalékanyag évente közel 2,5 millió halálesetet okoz a világon [15, 16]. Ezek a halálesetek főként az alkoholfogyasztás által kiváltott májbetegséggel kapcsolatosak [17, 18]. Az alkohol által kiváltott májbetegség összetett, többlépcsős krónikus progresszió, amely általában alkoholos steatosistól alkoholos hepatitisig, végül alkoholos cirrhosisig fejlődik [19]. Így az aktív természetes termékek azonosítása az alkoholfogyasztók számára az alkoholos májsérülés korai szakaszában történő megelőzésére vagy lelassítására előnyös kezelési stratégia.

A Cistanche deserticola YC Ma és a Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight két gyógyászati ​​faj a kínai gyógyszerkönyvben [3]. Számos tanulmány tisztázza a C. tubulosa [20-24] és a C. deserticola [25, 26] májvédő hatását. De ezek a hepatoprotektív kutatások mindig a szén-tetraklorid (CCl4) vagy D-galaktózamin és lipopoliszacharid által kiváltott akut májkárosodásra irányultak, de nem törődtek az alkoholfogyasztással összefüggő krónikus májkárosodással. Ezenkívül ezek a jelentések elsősorban a fenil-etanol-glikozidok (PhG-k) mechanizmusára összpontosítottak, nem pedig a CDP-kre. Ezért jelen tanulmányban a CDP-k előzetes jellemzését és antioxidáns aktivitásukat (in vitro) vizsgáltuk. Ezenkívül létrehozták az ICR egerek fehérborral indukált májkárosodás modelljét, hogy megvizsgálják a CDP-k májvédő aktivitását az alkohol által kiváltott krónikus májkárosodással szemben.

cistanche és tongkat ali herba kivonat

2. Anyagok és módszerek

2.1. Anyagok

A C. deserticola szárait a kínai Belső-Mongóliából, az Alashan League-ből gyűjtötték,és Prof. Xiaodong Wang azonosította (Biofinomító Mérnöki Osztály, Folyamatmérnöki Intézet, Kínai Tudományos Akadémia, Peking, PR Kína).

Dimetil-szulfoxid (DMSO), 2, 2-azinobisz (3-etilbenztiazolin-6-szulfonsav) (ABTS), 3-(4, 5-dimetil-tiazol{ A {8}}il)-2, a 5-difenil-tetrazólium-bromidot (MTT) és az 1, 1-difenil-2-pikril-hidrazilt (DPPH) a Sigma Chemical Co.-tól vásároltuk. (St. Louis, MO, USA). A Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) és a fetális szarvasmarha szérum (FBS) az Invitrogen, Inc.-től vásárolt. Az Er Guo-tou fehérbenzint a Beijing Red Star Co., LTD-től vásároltuk. A biciklolt a Beijing Union Pharmaceutical Factory-tól vásárolták. A vizes oldatokat ultratiszta vízzel állítottuk elő Milli-Q víztisztító rendszerből (Millipore, Bedford, MA, USA). Az összes többi reagens analitikai minőségű volt.

2.2. CDP-k extrakciója és frakcionált szűrése

A nyers CDP-ket csoportunk korábban ismertetett módszere szerint [27] állítottuk elő, kis módosítással. Röviden, a C. deserticola (50 kg) port (40 mesh) ultrahanggal (40 kHz és 6 kW) extraháltuk 1000 liter vizes etanollal (50 %, v/v) 60 °C-on 120 percig. A poliszacharidokat makropórusos gyantával (HPD 300) választottuk el az extraktumtól. A poliszacharid oldatot csökkentett nyomáson betöményítettük, Sevag módszerével [28] fehérjementesítettük, majd fagyasztva szárítottuk a terméket nyers CDP-knek neveztük.

Ezután 50 g nyers CDP-t feloldottunk 2,5 l ultratiszta vízben, és egymást követően elválasztottuk a mikroszűréssel, ultraszűréssel és nanoszűréssel (a névleges molekulatömeg határértéke 300 kDa, 10 kDa és 200 Da volt. Hatásos membrán területe 0,625 m2 volt). A visszatartott mikroszűrési oldatot liofilizáljuk, és CDP-A-nak nevezzük. A mikroszűrés átjárt oldatát ultraszűréssel szűrtük, míg a visszatartott oldatot liofilizáltuk és CDP-B-nek neveztük el. Az ultraszűrés átjárt oldatát nanoszűréssel szűrtük, a visszatartott oldatot liofilizáltuk és CDP-C-nek neveztük el.

2.3. A CDP-k előzetes jellemzése

A CDP-k molekulaméretét a korábban ismertetett módszer szerint értékeltük kicsoportunk [29]. A monoszacharid készítményeket P. Zhang és munkatársai [30] módszerével elemezték. A tisztaság meghatározása fenol-kénsav módszerrel történt [31]. A fehérjetartalmat Bradford és Maja Kozarski [32, 33] által említett módszerrel határoztuk meg. A CDP-k FT-IR spektrumát Fourier transzformációs infravörös spektrométerrel (FT/IR-660 Plus, JASCO) vettük fel 400-4000 cm{11}} tartományban.

2.4. Antioxidáns tevékenység

A CDP-k hidroxil-, szuperoxid-anion-, DPPH- és ABTS-gyökökre gyakorolt ​​​​megkötő hatását Sun [34], Wang [35], Yap [36] és Fatiha [37] módszerei szerint értékelték.

cistanche merevedési zavarszámáravese

2.5. A CDP-C májvédő aktivitása in vitro

Az antioxidáns vizsgálat eredményei alapján a CDP-C-t választottuk ki a májvédő aktivitás vizsgálatára. A HepG2 sejteket (a China Center for Type Culture Collection, Peking, Kína) DMEM-ben tenyésztettük, amely hővel inaktivált FBS-t (10%), sztreptomicint (0,1 ug/ml) és penicillint tartalmazott. (100 NE/ml), és nem esszenciális aminosav. A sejteket párásított, 5 százalékos CO2 atmoszférában, 37 fokon inkubáltuk, az exponenciális növekedési fázisban begyűjtöttük, 96-lyuklemezekre oltottuk (4×104 sejt/lyuk, 100 μL), és 24 órán át inkubáltuk. A negatív csoport sejtjeit alkohollal kezeltük (végső koncentráció 3,5% v/v), míg a naiv csoportot vízzel. A pozitív csoport sejtjeit alkohollal és biciklollal kezeltük (a végső koncentráció 200 ug/ml volt). A négy tesztcsoport sejtjeit alkohollal és CDP-C-vel kezeltük (a CDP-C végső koncentrációja 0,11, 0,3333, 1,00 és 3,00 mg/ml volt). Minden sejtet további 48 órán át tenyésztettünk.

A HepG2 sejtek életképességét a J. Tong és munkatársai [38] által említett MTT vizsgálati módszerrel határozták meg, kis módosítással. Röviden, MTT-t (5 mg/ml, 20 μL per lyuk) adtunk a sejtbeoltott 96-lyukú lemezekhez, és a sejteket 4 órán át inkubáltuk. Az oldatokat eltávolítottuk, és DMSO-t (150 µl/lyuk) adtunk hozzá. Az egyes lyukak abszorbanciáját 492 nm-en mértük 96-lyuklemez-leolvasóval (Thermo Scientific, Amerika). A sejt életképességét a következő képlettel számítottuk ki:

Sejtéletképesség ( százalék )=(Egy minta – üres) × 100/ (A naiv – üres)

ahol A minta a kísérleti csoport abszorbanciája; A minta nélküli kontrollcsoport abszorbanciája naiv volt; Vakpróba a tenyésztőközeg abszorbanciája volt minta és beoltott sejt nélkül.

2.6. A CDP-C májvédő aktivitása in vivo

2.6.1. Állatok

Felnőtt nőstény ICR egereket (22-25 g, a Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd.-től vásároltak. Az állatengedély száma 11400700128) használtunk. Az állatokat környezetileg ellenőrzött helyiségben helyezték el, ahol ad libitum takarmány és víz biztosított (a relatív páratartalom 40-60 százalék volt, 22-26 fok), a levegő szellőztetése 12-18-szer/óra, és a fény besugárzása. 12 órás fény/sötét ciklus volt, 150-300 lux. Az egereket a kísérletek előtt 7 napig akklimatizáltuk az állati szoba körülményeihez. A kísérletek során az állatokkal végzett összes eljárást szigorúan az Egyesült Államok Nemzeti Egészségügyi Intézete által elfogadott és kihirdetett, a laboratóriumi állatok használatára vonatkozó szabályokkal összhangban végezték.

2.6.2. Kísérleti terv

Az ICR egereket véletlenszerűen hat csoportra osztották (naiv csoport, negatív kontrollcsoport, pozitív kontrollcsoport és három tesztcsoport), mindegyik csoportban 10 állattal. A naiv csoportot orálisan, desztillált vízzel adtuk be. A negatív kontrollcsoportnak szájon át alkoholt adtunk (Er Guo-tou lakkbenzin, 56%, 6 ml/kg). A pozitív kontrollcsoportot orálisan biciklollal (300 mg/kg), majd 5 órával később alkohollal adtuk be. Három tesztcsoportot orálisan adtunk be CDP-C-vel 200, 600, 1800 mg/kg dózisban, majd 5 órával később alkohollal. Minden egeret 31 egymást követő napon keresztül adtunk be.

2.6.3. Szerológiai indexek meghatározása

Körülbelül 4 órával az utolsó alkoholos kezelés után vért vettünk a szemüregből, és 3000 g-vel centrifugáltuk 15 percig. A szérum elválasztása után az alanin-transzamináz (ALT), a savas foszfatáz (ACP), a -glutamil-transzpeptidáz (-GTP) és a triglicerid (TG) enzimaktivitását diagnosztikai kitekkel határoztuk meg.
2.6.4. A májmutatók meghatározása

A vérvétel után az összes egeret kivégezték. Mindegyik egér máját azonnal kivágtuk, fiziológiás sóoldattal mostuk. Egy darab májszövetet választottunk el a bal lebenytől. Ezután a szövetet felaprítottuk, és 1,15 tömegszázalékos vizes kálium-klorid-oldattal homogenizáltuk üveghomogenizátorban (Potter Elvehjem Teflon) 60 másodpercig, hogy májhomogenizátumot kapjunk (10 tömeg/térf.%). A szuperoxid-diszmutáz (SOD), malondialdehid (MDA), glutation S-transzferáz (GST), valamint triglicerid (TG) enzimaktivitását a diagnosztikai kittel mértük.

2.6.5. Hisztopatológiai vizsgálatok

A máj maradék részét Bouin-féle fixálóban fixáltuk 24 órán keresztül, majd vizes etanolos oldattal (50-100 % , v/v) végzett dehidratálást követően a májszövetet xilolban tisztítottuk és paraffinba ágyaztuk. A májmetszeteket (5 mm) timsó hematoxilinnel és eozinnal (HE) festettük. A májmetszetek és a kórszövettani elváltozások képeit fénymikroszkóppal (Nikon-DS-L1-5M) rögzítettük.

2.7. Statisztikai analízis

Az adatokat három (kémiai összetétel-elemzés és antioxidáns-vizsgálat), öt (sejtéletképesség) vagy tíz (in vivo kutatás) független kísérlet átlag ± standard hibája (SEM) formájában fejeztük ki. A csoportok közötti különbségek statisztikai szignifikanciáját egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, majd Student-Newman-Keuls-féle többszörös tartományteszttel SPSS 19.0 szoftverrel. Valamennyi elemzésben p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Eredmények és megbeszélés

3.1. A CDP-k jellemzése

Amint az 1A. ábrán látható, a CDP-A két csoportot tartalmaz, a molekulatömege 4000 kDa és 3946 kDa. A CDP-B és CDP-C molekulatömege 2400 kDa és 1300 kDa. A monoszacharid összetételeket az 1B. ábra mutatja. A CDP-A, CDP-B és CDP-C hat esszenciális monoszacharidot tartalmaz különböző arányban, beleértve a mannózt (Man), a ramnózt (Rha), a galakturonsavat (GalUA), a glükózt (Glc), a galaktózt (Gal) és az arabinózt ( Ara). A fent említett hat monoszacharidon kívül a xilóz (Xyl) is megjelenik a CDP-C-ben. Ezenkívül a CDP-C nagyobb arányban tartalmaz GalUA-t, mint a másik két frakció.

A CDP-k tisztasága és fehérjetartalma az 1. táblázatban látható. Az 1. táblázat azt mutatja, hogy a CDP-A a legmagasabb tisztaságú, ami 75,57%, míg a CDP-B és a CDP-C tisztasága 74,72%, illetve 68,92%. A CDP-A, CDP-B és CDP-C fehérjetartalma 1,27 százalék, 1,24 százalék, illetve 1,05 százalék.

Asztal 1.A CDP-k tisztasága és fehérjetartalma. Az adatok három ismétlés átlagai ± SEM.

A szénhidrátok FT-IR spektrumait szerkezeti jellemzőik meghatározására használják, és jellemzően szerves funkciós csoportok kvalitatív elemzésére használják, különösen az OH, CO és C=O [39]. A CDP-k FT-IR spektrumait az 1C. ábra mutatja. Mindegyik spektrum erős és széles nyújtási csúcsot mutat 3293 cm-1 körül az OH nyújtórezgésnél, valamint gyenge abszorpciós csúcsot 2939 cm-1-nél a CH nyújtórezgésnél. Az abszorpciós sávot 1650 cm−1-nél a C=O aszimmetrikus nyújtórezgés okozza. A széles abszorpciós sáv 1418 cm-1-nél a CH kötés deformáló rezgésének tulajdonítható. Minden egyes poliszacharidnak van egy meghatározott sávja a 1000-1200 cm-1 régióban, amelyet a (C-OH) oldalcsoportok nyújtó rezgésével átfedő gyűrűrezgés és a (COC) glikozidos sáv vibrációja ural. Az 1036 cm-1-nél mért abszorpció a cukor piranóz formájára utal. A közel 829 cm-1-es abszorbancia a -glikozidok kapcsolódására utal a CDP-k molekulaszerkezetében. Amint az 1C. ábrán látható, a CDP-C abszorpciós sávja 1650 cm-1-nél erősebb, mint a CDP-A és a CDP-B, ami azt jelenti, hogy a CDP-C C=O tartalma több, mint a CDP-A és CDP-B. Ez az eredmény összhangban van az 1A. ábra eredményeivel, amely azt mutatja, hogy a GalUA aránya a CDP-C-ben nagyobb, mint a CDP-A és CDP-B esetében.

3.2. A CDP-k antioxidáns hatásai

3.2.1. Hidroxilgyök vizsgálat

A reaktív oxigénfajták közül a hidroxil gyök a legreaktívabb, és súlyos károsodást okoz a szomszédos biomolekulákban [40]. A hidroxilgyökök esetében kétféle antioxidációs mechanizmus létezik: az egyik a már keletkezett hidroxilgyököt eltávolítja, a másik pedig a hidroxilgyök képződését gátolja. Ez utóbbi esetében hidroxilgyök keletkezik a Fe(II) komplex hidrogén-peroxiddal való reakciójával. A CDP-k antioxidáns hatásai ligálódhatnak a fémionokhoz, amelyek nem reagálnak a H2O2-vel és hidroxilgyököt termelnek, hanem kelátot képeznek CDP-kkel és fémkomplexet alkotnak. A fémkomplex nem tud tovább reagálni H2O2-vel, így hidroxilgyököt képez [41-43]. Ezért a CDP-k hidroxil gyökfogó hatást mutatnak.

A 2A. ábra a CDP-k hidroxilgyökön lévő megkötő kapacitását mutatja koncentrációfüggő módon. A CDP-A, CDP-B és CDP-C tisztítási aránya 29,56 százalék, 33,44 százalék, illetve 38,22 százalék. A CDP-C nagyobb hidroxilgyökfogó aktivitást mutat. Tekintettel arra, hogy a CDP-C nagyobb arányban tartalmaz GalUA-t, mint a CDP-A és CDP-B, a CDP-k antioxidánsai nemcsak a fémionok ligáló tulajdonságára vonatkozhatnak, hanem a GalUA, Ara és Gal tartalmára is [{{15] }}].

3.2.2. Szuperoxid anion gyökös vizsgálat

A szuperoxid anion gyök egy toxikus faj, amely számos biológiai és fotokémiai reakció során keletkezik, és ezáltal szövetkárosodást okoz [47]. Bár a szuperoxid-anion viszonylag gyenge oxidálószer, fontos szerepet játszik más erősebb reaktív oxidatív anyagok, például szingulett oxigén és hidroxilgyök képződésében [48]. A 2B. ábra a szuperoxid-anion gyökökön lévő CDP-k koncentrációja és megkötő kapacitása közötti összefüggést mutatja. A koncentráció növekedésével a CDP-C nagyobb tisztítókapacitást mutat, mint a CDP-B és CDP-A.

3.2.3. DPPH gyökvizsgálat

A DPPH, az egyik stabil nitrogénközpontú vegyület, amely 517 nm-en jellegzetes abszorpciójú protonmentes gyököt tartalmaz, a protongyökfogók hatására jelentősen csökken, ezért széles körben használják az antioxidánsok szabad gyökfogó aktivitásának becslésére. Közismert tény, hogy az antioxidánsok által megköttetett DPPH szabad gyökök hidrogén donor képességüknek köszönhető. Az antioxidánsok vagy elektronokat, vagy hidrogénatomokat adnak át a DPPH-gyöknek, és DPPH-H-t képeznek, amely nem gyökös képződmény [49].

Az összes minta teljes DPPH-fogó hatását teszteltük, és az eredményeket a 2. C. ábra mutatja. A CDP-k DPPH-gyökön végzett megkötő képessége koncentrációfüggő módon jelenik meg. Ahogy a koncentráció 1.0-ról 5.{5}} mg/ml-re növekszik, a CDP-C megkötő képessége 52,5 százalékról 58,7 százalékra nő, ami magasabb, mint a CDP-B (34,2 százalékról 56,8 százalékra). százalék ) és a CDP-A (12,5 százalékról 52,8 százalékra). A CDP-C DPPH-fogó hatása összefüggésbe hozható a GalUA karbonilcsoportjaival.

3.2.4. ABTS gyökvizsgálat

Az ABTS gyökvizsgálatot gyakran használják a vizsgált minták egy erős antioxidánsának teljes antioxidáns erejének mérésére [50]. Az összes minta ABTS-megkötő hatásait a 2D. ábra mutatja. A CDP-k ABTS-gyökök megkötő képessége dózisfüggő. A CDP-A, CDP-B és CDP-C IC50 értéke körülbelül 4,0 mg/ml, 2,5 mg/ml és 1,2 mg/ml. Az eredmények azt mutatják, hogy a CDP-k ABTS-eltávolító aktivitással rendelkeznek.

Összefoglalva, a CDP-C antioxidáns aktivitása magasabb volt, mint a CDP-A és CDP-B. Beszámolt arról, hogy a poliszacharidok néhány farmakológiai hatása összefügg a GalUA-val[51]. Ebben a kísérletben a GalUA aránya a CDP-C-ben nagyobb volt, mint a CDP-A-ban és a CDP-B-ben, a CDP-C-t az alkohol által kiváltott krónikus májbetegség elleni hepatoprotektív hatás vizsgálatára választottuk ki.

3.3. A CDP-C hatása a HepG2 sejtek életképességére

A sejtek életképességének mérése általános módszer a természetes gyógyszerek hatékonyságának felmérésére [52]. Azon eredmények alapján, hogy a CDP-C rendelkezik a legmagasabb antioxidáns hatással, értékelték a CDP-C HepG2 sejtek életképességére gyakorolt ​​hatását. Az eredményeket a 3. ábra mutatja. Az alkoholos kezelés által kiváltott jelentős csökkenés a HepG2 sejtek életképességében. De a CDP-C jelentősen javíthatja a túlélési arányt a negatív csoporthoz képest. Amint a 3. ábrán látható, a sejtek életképessége nem mutat pontosan koncentrációfüggő módot CDP-C esetén. Ezzel szemben, amikor a CDP-C koncentrációja eléri a 300 mg/ml-t, a HepG2 sejt életképessége drámaian csökken. A sejtek életképességének csökkenésének oka az lehet, hogy a CDP-C alacsony koncentrációja elősegítette a HepG2 sejtek túlélését. Ha azonban a poliszacharidok koncentrációja a tápközegben elég magas volt ahhoz, hogy megváltoztassa a sejtek mikrokörnyezetét, a HepG2 sejtek életképessége gátolt.

3.4. A CDP-C farmakológiai hatásai

3.4.1. A CDP-C hatása a szerológiai indexekre

Az alkohollal való visszaélés az összes halálozási arány közel 4 százalékáért felelős, ami súlyos társadalmi problémává vált a világon. Az emberi szervezetben az alkohol a májban metabolizálódik, miután felszívódik a gyomor és a vékonybél nyálkahártyáján [53-55]. Az alkoholos májbetegségek általában évekig tartó alkoholfogyasztás után jelentkeznek [56]. Általában kóros állapotok, mint például zsírmáj, hepatitis, fibrózis és cirrhosis [57], vagy akár rákos megbetegedések, például hepatocelluláris karcinóma és vastagbélrák [58] is megfigyelhetők az alkohollal összefüggő májbetegségekben. Ezért az alkohol tipikus hepatoxikus, és tudományos kutatásokban széles körben használják májkárosodás indukálójaként [59]. Tekintettel arra, hogy az alkohol által kiváltott májbetegségeket gyakran alkoholos italok és élelmiszer-adalékanyagok okozzák, nem pedig ipari etanol, ezért Er Guo-tou lakkbenzint használtak az ICR egerek májkárosodási modelljének felállításához ebben a tanulmányban. A biciklol egy gyakori szer, amelyet krónikus májsérülések kezelésére használnak, ezért pozitív kontroll modell beállításához használták.

A májsejtek magasabb ALT-koncentrációt tartalmaznak a citoplazmában és a mitokondriumokban. A különböző májsejt-károsodások miatt a citoszol szivárgása az ALT növekedését okozza a szérumban. Így az ALT fokozása a sejtszivárgás és a máj funkcionális rendellenességeinek mutatója [60]. Ezért a szérum ALT-szintet általában a máj egészségi állapotának felmérésére szolgáló indikátorként állítják be [61]. Hasonló okokból a -GTP-t, az ACP-t és a TG-t indikátorként is használják a máj egészségi állapotának felmérésére [62].

Jelen tanulmányban a CDP-C hepatoprotektív aktivitását az ALT, ACP, -GTP és TG szintjének meghatározásával értékelték. Az eredményeket a 4. A, B, C és D ábra mutatja. Négy szérumindikátor, amelyet drasztikusan elősegített az alkoholos kezelés a negatív csoportban. De a CDP-C mérsékelheti ezeket az alkoholos adagolás által kiváltott változásokat. Azonban nem minden szerológiai index mutat dózisfüggő módon CDP-C-vel. A 4. A és B ábrán a CDP-C alacsony koncentrációban szignifikáns hatással van az ALT és az ACP helyreállására, de a CDP-C hatása a legmagasabb koncentrációban nem volt szignifikáns. Valójában sok természetes termék alacsony dózisban jótékony hatással van az egészségre, de nagy dózisban ártalmas az egészségre [60]. Ennek oka az lehet, hogy a poliszacharidok túlzott fogyasztása befolyásolja a szervezetek normál anyagcseréjét, ígyhogy károsan befolyásolja a szervezet egészségét. A részletes mechanizmus azonban további kutatásra szorul.

3.4.2. A CDP-C hatása a májmutatókra

Az oxidatív stressznek kitett szervezetek általában antioxidáns védekező mechanizmust fejlesztettek ki, a SOD pedig egy tipikus enzim alapú antioxidáns rendszer [63]. A SOD katalizálja a szuperoxid-anion O2-vé és H2O2-vé történő dismutációját [64]. A GST, a citoszolban található oldható fehérje szintén fontos szerepet játszik a máj méregtelenítésében. A fent említett okok miatt az SOD és a GST az alkohol által kiváltott hepatotoxicitás mutatói. A májban az MDA-t és a TG-t a hepatotoxicitás indikátoraként is használják [65].

Jelen tanulmányban a CDP-C májfunkcióra gyakorolt ​​hatásait az 5. ábra mutatja. Az A, B, C és D képen a CDP-C SOD, MDA, GST és TG hatásai láthatók. Ez a négy kép azt mutatja, hogy az alkohollal kezelt egerek jelentősen csökkentik az SOD- és GST-szinteket, valamint növelik az MDA- és TG-szinteket, de a CDP-C nyilvánvalóan tompíthatja ezt a változást. A 3.4.1. fejezetben bemutatott jelenségekhez hasonlóan a májindikátorok sem voltak dózisfüggőek a CDP-C esetében. Ennek oka hasonló lehet a 3.4.1. szakaszban bemutatott mechanizmushoz. Korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a poliszacharidok SOD-ra és katalázra gyakorolt ​​hatása összefüggésbe hozható az SOD és a kataláz génexpressziójának indukciójával [66]. Azonban további vizsgálatokra van szükség a CDP-C hepatoprotektív mechanizmusának, valamint szerkezete és funkciója közötti kapcsolat tisztázásához.

3.5. A CDP-C hisztopatológiai hatásai alkohollal kiváltott egerekre

A májmetszeteken végzett hisztopatológiai megfigyelések alapján a naiv csoport normális sejtarchitektúrát mutatott, különálló májsejtekkel és szövettani eltérések nélkül (6. A ábra). Összehasonlításképpen, az alkoholos adagolás súlyos májkárosodást okozott a negatív csoportba tartozó egerekben. A májmetszeteken hepatocita zsírlerakódás, hepatocita nekrózis és duzzanat, vakuólumok keletkeztek a sejtekben, és a sejthatárok is eltűntek (6. B ábra). Azok az egerek májmetszetei, amelyeknek biciklollal (6. C. ábra), változó dózisú CDP-C-vel (6. ábra, DF) adagoltak, nyilvánvalóan helyreálltak azok a torzulások, amelyek a negatív kontrollcsoportban jelentkeztek. Ezek az eredmények igazolták, hogy az alkohol bizonyos mértékű torzulást okozott a negatív kontrollcsoport hepatocitáiban. A CDP-C azonban visszaállította ezeket a változtatásokat.

Közismert, hogy a poliszacharidok májvédő hatása antioxidáns aktivitásukkal függ össze [67, 68]. A magas uronsavtartalom jótékony hatásúnak bizonyult a poliszacharidok antioxidáns hatása szempontjából [44, 45]. A Gal-ban és Ara-ban gazdag poliszacharidokról szintén igazolták, hogy magasabb antioxidáns hatással rendelkeznek [46]. A nagy molekulájú poliszacharidok azonban nehezen jutnak be közvetlenül a bélhámsejtekbe. A CDP-C (1300 kDa molekulatömegű) esetében nem könnyű közvetlenül bejutni a szervezetbe és májvédő szerepet játszani. A publikált jelentések kimutatták, hogy a poliszacharidok molekulatömege csökkent gyomor- és bélemésztés után [69]. Feltételeztük tehát, hogy a CDP-C kis molekulatömegű poliszacharidokká bomlik le, és felszívódhat a bélhámsejtekben. A poliszacharidok redukáló végei megnövekedhetnek a glikozidos kötések felbomlása miatt [69, 70]. A CDP-C monoszacharid összetétele szerint az alacsony molekulatömegű lebontott poliszacharidoknak GalUA-t, Ara-t és Gal-t kell tartalmazniuk. Ezért ezek az alacsony molekulatömegű poliszacharidok, amelyek redukáló végekkel rendelkeznek, és GalUA-t, Ara-t és Gal-t tartalmaznak, májvédő szerepet játszhatnak a szervezetben. A részletes mechanizmus azonban további kutatásra szorul.

4. Konklúziók

A monoszacharid összetétel elemzések és az FT-IR spektrumok szerint a CDP mindhárom frakciója tartalmazott Man, Rha, GalUA, Glc, Gal és Ara frakciókat. A CDP-C nagy arányban tartalmazott GalUA-t. A CDP-C volt a legmagasabb antioxidáns aktivitással. Mind az in vitro, mind a vivo kutatások eredményei azt mutatták, hogy a CDP-C májvédő hatással rendelkezik az alkohol által kiváltott krónikus májkárosodással szemben. A mögöttes mechanizmus a relatív enzimaktivitások modulálásával, az MDA és a TG csökkentésével volt kapcsolatos a májban. A CDP-C fiziológiai aktivitása összefüggésbe hozható a GalUA-val. Ezek az eredmények új betekintést nyújtanak a C. deserticola farmakológiai célpontjaiba az alkoholos májbetegség megelőzésében.

Cistanche herbavédi amájésjavítja az immunitást.

További információért kattintson ide.