A bélbaktérium-konzorciumok in vivo beadása replikálja az A és B urolitin metabotípusokat egy nem urolitint termelő patkánymodellbenⅡ

Eredmények

Az Ellagibacter és Enterocloster számára tervezett primerek és szondák specificitásának és érzékenységének elemzése

Az Ellagibacter és Enterocloster primerek és próbák specifitását szekvenciáik feltöltésével a ProbeMatch szekvencia-illesztő programba igazoltuk.Az 1S. és 2S. táblázatban.† Ezt követően a primerek és a szonda specifitását qPCR-rel ellenőriztük, az Anyagok és Módszerek részben leírt optimalizált reakciókörülmények alkalmazásával. Az Eggerthellaceae és Lachnospiraceae családok reprezentatív baktériumfajait, amelyek a 16S rRNS génszekvenciájában a legnagyobb hasonlóságot mutattak az Ellagibacterrel és az Enteroclosterrel, az emberi bélben gyakran kimutatható más, közeli rokon fajok mellett (1S és 2S† táblázat). A 2. ábra a standard kvantifikációs görbéknek megfelelő amplifikációs diagramokat mutatja.

Kattintson a székrekedés kezeléséhez

A CT-értékeket a baktériumkoncentráció (Co) függvényében ábrázoltuk log 10 genomi ekvivalens/reakció formájában (6,25 × 10-6 ng, haploid genom esetén). A genomiális DNS-sel számított lineáris regressziós görbe meredeksége –3,78, az R2 érték pedig nagyobb, mint 0,99. Ami a qPCR rendszer érzékenységét illeti, 1,5 genom ekvivalensre volt szükség minimum a pozitív reakcióhoz a TaqMan móddal. Az E. isourolithinifaciens és E. csavarozott kalibrációs görbéjével kapott CT értékek 15,5± 0,7 és 37,8 ± 0,7 között változtak, míg a többi vizsgált törzsnél nem volt kimutatható DNS-amplifikáció.

Ezzel a módszerrel (qPCR) végeztük az Ellagibacte és Enterocloster mennyiségi meghatározását a patkányok székletmintáiban, három ismétlés átlagát figyelembe véve. Az eredményeket log 10 baktérium/g ürülékben fejeztük ki, és összehasonlítottuk a 16S rRNS-szekvenálással kapott relatív abundancia értékekkel. Pozitív korrelációt figyeltünk meg az Ellagibacter (r=0.660, p < 0,001) és az Enterocloster (r=0.459, p) módszerrel kapott eredmények között.< 0.001) (data not shown).

Orálisan beadott bakteriális konzorciumok hatása az urolitin in vivo termelésére

A székletben végzett Uro-analízis azt mutatta, hogy kezdetben (T{{0}}) a patkányok nem termeltek Uros-t az EA-por lenyelése után (3A–C. ábra). Az A bakteriális konzorcium beadása után azonban (3A. ábra) ) és B (3B. ábra), a patkányok képesek lettek Uros termelésére. Az első három hétben, amikor az A és B csoportba tartozó patkányok csak EA port fogyasztottak, az Uro koncentrációja (tartomány: 0–1,43 µg g-) 1) és EA prekurzoruk (tartomány: 0,07–4,54 µg g-1) székletben alacsony volt. Azonban a 21. naptól kezdve, amikor a dió fogyasztása megkezdődött, mint második EA-forrás, nagyon jelentős mértékben megnőtt a széklet EA (3A–C. ábra) és az Uro termelése az A (3A. ábra) és B csoportban (3B. ábra). ).

Ezenkívül különbségeket figyeltek meg az Uro profilban az A és B csoport között. Az A csoportban a széklet Uro-C, Uro-M6, Uro-M7 és a végső Uro-A metabolit volt a domináns. Ezzel szemben a B csoportban a három utolsó Uro (Uro-A, UroB és IsoUro-A) jelen volt, míg a köztes termékek alig voltak jelen. A közelmúltban leírt Uro-G magasabb koncentrációja volt kimutatható a székletben a B csoportban, mint az A csoportban. Ezenkívül az Uro-B koncentrációja alacsonyabb volt, mint az Uro-A és IsoUro-A B csoportban. IsoUro-A, de Uro-B nem termelődött a B csoport összes patkányában (3B. ábra). Amikor diót adtunk a kontroll patkányok (C csoport) étrendjéhez a 21. napon, az EA magasabb koncentrációját is megfigyeltük a székletben. mint a diófogyasztás előtt, ahol a fecalEA koncentráció nagyon alacsony volt (3C. ábra). Azonban sem az EApor bevitele, sem a dió fogyasztása nem segítette elő az Uros termelődését a kontroll patkányok bélrendszerében (vagyis bakteriális konzorcium nélkül).

Orálisan beadott baktériumok bélrendszeri kolonizációja Kezdetben, mielőtt az A és B csoportba tartozó patkányok elkezdték volna fogyasztani a bakteriális konzorciumot, a Gordonibacter vagy az Ellagibacter kimutathatósági határa alatt volt a székletmintákban, amikor a metagenomikus szekvenciaanalízist a MiSeq-Illumina platformon végezték (3D ábra – 3D ábra). ). Amikor qPCR-t használtak,A patkányokban a Gordonibacter szint alacsony volt (<5.8 log bacteria per g faeces), and Ellagibacter levels were under the limit of detection (data not shown). In contrast, Enterocloster was detected using the MiSeq-Illumina and qPCR in the faeces of rats from all groups (A, B, and C) at the baseline (Fig. 3D–F). 

Az Enterocloster relatív abundanciája (átlag ± SD) az A, B és C csoportban {{0}} volt.03 ± 0.02, {{10 }},04 ± 0,06, illetve 0,13 ± 0,17%, de szignifikáns különbségek nélkül (p=0,570). Az A és B bakteriális konzorcium beadása a Gordonibacter és az Ellagibacter megjelenését és fokozatos növekedését eredményezte a megfelelő A és B csoport székletében (3D. és E. ábra). Ezenkívül a széklet Enterocloster szintje a vizsgálat során az A és B csoportban növekedett (3D és E ábra).

A LEfSe analízis azonban csekély eltéréseket mutatott más bélbaktérium-csoportokban, amikor az A és B csoport metagenomikus szekvenálási adatai a kontrollcsoportéhoz képest (4A és B ábra). Érdekes módon a Streptococcus nemzetség és a Streptococcaceae család csökkenése figyelhető meg az A csoportban. és B a kontrollcsoporthoz képest (4A és B ábra). Öt nappal a bakteriális konzorciumok orális adagolásának leállítása után (a vizsgálat vége) a B csoportban az Ellagibacteand Enterocloster mennyiségének csökkenését észlelték, ami az Uro termelés jelentős csökkenését is eredményezte (3B. és E. ábra). Az A csoportban a Gordonibacter, de nem az Enterocloster mennyiségének csökkenését is megfigyelték (3A. ábra), ami az Uro-koncentráció csökkenését eredményezte, de kevésbé volt kifejezett, mint a B csoportban (3D és E ábra). A kontrollcsoportban az Ellagibacter a kimutatási határ alatt volt a vizsgálat során, az Enterocloster és a Gordonibacter pedig nagyon alacsony szinten maradt (3F. ábra).

Az orálisan beadott bélbaktériumok toxicitásának vizsgálata

Megvizsgálták a bakteriális konzorciumok lenyelésének lehetséges mellékhatásait. Nem figyeltek meg káros hatást a növekedésre, a testtömeg-gyarapodásra, a táplálékfelvételre és a létfontosságú szervekre 4 hetes orális adagolást követően az A és B csoportba tartozó patkányokban a kontrollcsoporthoz képest. Azonban a hím patkányok 107,4 ± 2,4 g-ot, míg a nőstények kevesebbet híztaktesttömeg (25,7 ± 5 g) volt a vizsgálat végén, különbségek nélkül a kontrollcsoporthoz képest. A ketrecben elfogyasztott táplálékfelvétel hím patkányoknál 63,1 ± 1,4 g, nőstény patkányoknál 33,8 ± 1,8 g volt. A vízfelvétel azonban 136,1 ± 37,2 g és 76.{16}} ± 12,6 g volt, hím és nőstény patkányoknál ketrecenként. .

Hematológiai különbségeket figyeltek meg a hímek és a nőstények között néhány változóban, mint például a vörösvértest-eloszlás (RDW, p {0}}.005), a leukociták (p=0.005), a vérlemezke-eloszlási szélesség (PDW, p) tekintetében. =0,005), és a retikulocita hemoglobin tartalma (CHr, p=0,013) (2. táblázat). Ennek ellenére nem volt megfigyelhető különbség a baktériumkonzorciumot fogyasztó csoportok (A és B csoport) és a kontrollcsoport (C csoport) között. A biokémiai értékeket is elemezték, és csak a hímek és a nőstények között mutattak ki különbségeket néhány változóban, például a kreatinin indexben (p < 0,001), a foszforban (p=0,007), az alkalikus foszfatázban (ALP) (p {{13). }},003), és tiroxin (T4) (p=0,002) (3. táblázat). Azonban a baktériumkonzorciumot fogyasztó csoportok (A és B csoport) és a kontrollcsoport (C csoport) között egyik változóban sem figyeltek meg különbséget.

Természetes növényi gyógyszer a székrekedés enyhítésére-Cistanche

A Cistanche az Orobanchaceae családjába tartozó parazita növények nemzetsége. Ezek a növények gyógyászati ​​tulajdonságaikról ismertek, és évszázadok óta használják őket a hagyományos kínai orvoslásban (TCM). A Cistanche fajok túlnyomórészt Kína, Mongólia és Közép-Ázsia más részein találhatók száraz és sivatagi régiókban. A Cistanche növényeket húsos, sárgás száruk jellemzi, és potenciális egészségügyi előnyeik miatt nagyra értékelik. A TCM-ben úgy gondolják, hogy a Cistanche tonizáló tulajdonságokkal rendelkezik, és általában a vese táplálására, a vitalitás fokozására és a szexuális funkciók támogatására használják. Az öregedés, a fáradtság és az általános jóléti problémák kezelésére is használják. Míg a Cistanche-t régóta használják a hagyományos orvoslásban, a hatékonyságával és biztonságosságával kapcsolatos tudományos kutatások jelenleg is folynak és korlátozottak. Ugyanakkor tartalmaz különféle bioaktív vegyületeket, például fenil-etanol-glikozidokat, iridoidokat, lignánokat és poliszacharidokat, amelyek hozzájárulhatnak gyógyhatásaihoz.

Wecistanche-écisztanche por, cisztanche tabletta, cisztanche kapszula, és más termékek felhasználásával fejleszteneksivatagcistanchealapanyagként, melyek mindegyike jó hatással van a székrekedés enyhítésére. A konkrét mechanizmus a következő: A Cistanche a hagyományos felhasználása és bizonyos vegyületei alapján feltételezhetően potenciális előnyökkel jár a székrekedés enyhítésében. Míg a Cistanche székrekedésre gyakorolt ​​hatásával kapcsolatos tudományos kutatások korlátozottak, úgy gondolják, hogy számos olyan mechanizmusa van, amely hozzájárulhat a székrekedés enyhítésére. Hashajtó hatás:Cistanchea hagyományos kínai orvoslásban régóta használják székrekedés elleni gyógyszerként. Úgy gondolják, hogy enyhe hashajtó hatása van, ami elősegítheti a bélmozgást és székrekedést okozhat. Ez a hatás a Cistanche-ban található különféle vegyületeknek tulajdonítható, mint például a fenil-etanoid glikozidok és poliszacharidok. A belek nedvesítése: A hagyományos használat alapján a Cistanche hidratáló tulajdonságokkal rendelkezik, különösen a beleket célozza meg. A belek hidratálásának és kenésének elősegítése segíthet a szerszámok felpuhításában és megkönnyítheti az áthaladást, ezáltal enyhíti a székrekedést. Gyulladáscsökkentő hatás: A székrekedés néha emésztőrendszeri gyulladással járhat. A Cistanche bizonyos vegyületeket tartalmaz, köztük fenil-etanol-glikozidokat és lignánokat, amelyekről úgy gondolják, hogy gyulladásgátló tulajdonságokkal rendelkeznek. Azáltal, hogy csökkenti a bélgyulladást, javíthatja a bélmozgást és enyhítheti a székrekedést.