A Crandell-Rees macska vesesejtek szaporodásának gátlása röntgensugárzás által kiváltott öregedéssel

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Manabu KOIKE^1,2)*, Yasutomo YUTOKU¹⁾és Aki KOIKE¹⁾

ABSZTRAKT.Radiorezisztenciát és radiotoxicitást jelentettek macskafélékben végzett rákkezelést követően. A sugárdózisok optimalizálása úgy, hogy csak a rákos sejtek citotoxikus hatását váltsa ki, és nem a normál sejtek, kritikus fontosságú a hatékony sugárterápia eléréséhez; azonban a macskasejtekben a sugárrezisztencia, a radiotoxicitás és a DNS-károsodási válasz (DDR) mechanizmusai még nem tisztázottak. DNS kettős szál szakadás (KÉT OLDALSÁV) a legmérgezőbb típusaDNSa rákos megbetegedések kezelésében használt röntgensugárzás és nehézion-sugarak által kiváltott károsodások. Crandell-Rees macskaVese(CRFK) sejtek az egyik legszélesebb körben használt macskasejtek az élettudományi kutatásokban. Itt beszámolunk rólaKÉT OLDALSÁV-a röntgensugárzás által kiváltott öregedés fontos a proliferáció gátlásábanCRFKsejteket. Sejtproliferációs vizsgálattal kimutattuk, hogy a 2 Gy és 10 Gy dózisú röntgensugarak toxikusakCRFKCRFK sejteket besugárzó sejtek gátolja azok proliferációját. X-besugárzott CRFK sejtekben a DSB által kiváltott öregedés dózisfüggő növekedését detektáltuk a morfológiai változásoknak megfelelően, és öregedéssel összefüggő galaktozidáz festési vizsgálatot alkalmaztunk. Sőt, adataink azt mutatták, hogy inCRFKsejtek, a fő DDR útvonal, amely magában foglalja a foszforilációtH2AXa Ser139-nél, általában az ATM kinázok aktiválták. Eredményeink hasznosak a röntgensugárzás által kiváltott sejtöregedés megértésében, valamint a sugárzás biológiai hatásainak, például a toxicitásnak a tisztázásában a macskasejtekben. Eredményeink továbbá arra utalnak, hogy a CRFK sejtvonal kiváló mátrix a macskasejtek radiorezisztenciájának és radiotoxicitásának feltárására.

KULCSSZAVAK:macska, társállat, DNS kettős száltörés, sugárzás, öregedés

Cistanche deserticola kivonat: erősíti az immunrendszert

A társállatok egyre fontosabb szerepet töltenek be az emberi társadalomban. A kísérő állatok élettartamának meghosszabbodásának köszönhetően nőtt az idős kutyák és macskák száma, és évente sok kutyánál és macskánál diagnosztizálnak újonnan rákot [26, 27]. A sugárterápiát, amely a rák három fő kezelésének egyike, egyre gyakrabban alkalmazzák az állatkórházakban a kutyák és macskák rákkezelésének alternatívájaként [24, 26]. A leghatékonyabb sugárterápia eléréséhez fontos egyensúlyba hozni a toxicitást a normál és a rákos sejtek között. Eközben, bár sugárrezisztenciát figyeltek meg macskákban és macskadaganatokban a rák sugárkezelését követően, az ilyen rezisztencia mechanizmusa még nem tisztázott [24].

Számos tanulmányt végeztek a sugárzásnak az emberekből és rágcsálókból származó sejtekre gyakorolt ​​hatásairól [6, 10, 23, 28]. A genomi DNS a fő biológiai célpontja a sugárzást, például röntgensugárzást és nehézion-nyalábokat alkalmazó terápiáknak. A kettős száltörés (DSB) a sugárzás által kiváltott DNS-károsodás legkritikusabb típusa. Különféle DNS-károsodási válasz (DDR) útvonalak aktiválódnak, beleértve a DNS-károsodás érzékelését, a DDR-jelátvitelt és a DNS-javítást, amikor DSB lép fel. Ennek eredményeként a sejtek felépülnek a sugársérülésből, és az érintett DNS pontosan és hatékonyan helyreáll [8, 25]. Kutya- és macskasejtekben a DSB-k főként nem homológ végcsatlakozó (NHEJ) javító mechanizmussal javíthatók, amely a Ku70-ből és Ku80-ból álló Ku heterodimer DSB-végeinek kötődését indukálja [14–17]; ennek tisztázásához azonban további vizsgálatok szükségesek. Ezenkívül a korai javítási szakaszban a kinázok, például a DNS-PK és az ATM kinázok aktiválódnak, és ezek a H2AX hiszton Ser139-ét foszforilálják a DSB helyek közelében [5, 6]. Valószínű, hogy a DSB-k programozott sejthalál mechanizmusokat aktiválnak, beleértve az apoptózist és az öregedést, amikor a sejtek nem javíthatók [9, 32]. A különböző DDR-ek molekuláris mechanizmusait, például a DNS-javítást macskasejtekben, kevéssé tanulmányozták.

A megörökített Crandell-Rees macskaVese(CRFK) sejtvonal az egyik legszélesebb körben használt macska sejtvonal. A CRFK sejtvonalat először 1964-ben hozták létre aveseegy 12-hetes nőstény cica kérge [3]. Crandell és mtsai. [3] leírták, hogy a CRFK sejtvonal hasznos a macskavírus-kutatásban és a diagnosztikai gyógyászatban, és különösen érdekessé vált a rákkutatásban. Jelenleg a CRFK sejtvonal nélkülözhetetlen az élettudományi kutatásokban, beleértve a rák- és víruskutatást is. Ezért fontos megérteni a CRFK sejtek sugárérzékenységét, amelyek különböző molekuláris útvonalait elemezték, hogy elsődleges kutatási információkat szerezzünk a sugárzás biológiai hatásainak molekuláris mechanizmusainak tisztázásához macskákban. Jelenleg azonban nincsenek jelentések a sugárzásnak a CRFK sejtek proliferációjára gyakorolt ​​hatásairól és mechanizmusairól.

Ebben a tanulmányban a röntgensugárzásnak a CRFK sejtek proliferációjára gyakorolt ​​biológiai hatásait vizsgáltuk. Eredményeink azt mutatják, hogy a röntgensugarak jelentősen elnyomták a CRFK sejtek proliferációját. Ezen túlmenően eredményeink azt sugallták, hogy a proliferáció elnyomása a DSB-k által kiváltott megnövekedett sejtöregedés következménye. Továbbá CRFK sejtekben megerősítettük, hogy a fő DDR útvonalat normálisan aktiválják az ATM kinázok.

cistanche tubolosa kivonat: vesebetegségek kezelése

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Sejtkultúrák, vegyszerek és röntgensugarak

A CRFK sejteket (HSRRB, Osaka, Japán) Dulbecco módosított Eagle tápközegében tenyésztettük, amelyet 10% magzati szarvasmarha-szérummal egészítettünk ki a korábban leírtak szerint [17]. Az adherens sejteket röntgensugárzással sugároztuk be 1, 2 vagy 10 Gy erővel és 0,71–0,77 Gy/perc (200 kV/20) dózisteljesítmény mellett. mA 05-mm Al és 05-mm Cu szűrőkkel) Pantak HF320S (Shimadzu, Kyoto, Japán) segítségével szobahőmérsékleten, a korábbi tanulmányokban leírtak szerint [17]. A KU-55933 ATM-kináz inhibitort a Wako Pure Chemical-tól (Oszaka, Japán) vásároltuk. A KU-55933-t DMSO-val (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) hígítottuk, és közvetlenül felhasználás előtt tenyésztőközegben hígítottuk.

Életképes sejtszám meghatározása

Az életképes sejtek számának meghatározására tripánkék kizárási tesztet alkalmaztunk. A sejteket edényenként 2,2 × 104 sejt sűrűséggel oltottuk be 60- mm-es edényekbe. Másnap a sejteket röntgensugárzással besugároztuk, és a besugárzás után 5 napig inkubáltuk. Ezt követően a sejteket foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) mostuk, tripszin-EDTA oldatban (T3924, Sigma-Aldrich) szuszpendáltuk, összegyűjtöttük, centrifugáltuk, és 0,4 tömeg/térfogat százalékos tripánkék oldattal festettük. Wako Pure Chemical) vagy 0,4% Trypan Blue (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), és TC10™ Automated Cell Counter (Bio-Rad) segítségével számoltuk. Minden besugárzást három párhuzamosban végeztünk.

Immunblot vizsgálat

A teljes fehérje extrakciót és a Western blot analízist a korábban ismertetett módszereink szerint [11, 17] végeztük, az alábbi módosításokkal. Az összes fehérjét Extra PAGE One Precast Gel 5-20 százalékos (Nacalai Tesque, Kyoto, Japán) vagy Super Sep ACE Gel 5-20 százalékos (Wako Pure Chemical) elektroforézissel végeztük. A frakcionált termékeket elektroforetikusan Hybond-P membránokra vittük (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, USA). Ezután a membránokat Blocking One-ban (Nacalai Tesque) blokkoltuk 60 percig szobahőmérsékleten, és egér anti-H2AX monoklonális antitesttel (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, USA) vagy egér-aktin monoklonális antitesttel inkubáltuk. Sigma-Aldrich). Mosás után a membránokat anti-egér IgG HRP-Linked Whole Ab-vel (birkákból) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) inkubáltuk 60 percig szobahőmérsékleten. Az immunoblotot Select Western Blotting Detection System (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) segítségével végeztük. A fehérjesávokat ChemiDoc XRS rendszerrel (Bio-Rad) tettük láthatóvá.

Immuncitokémia

Az immunfestést a korábban leírtak szerint [12, 17] végeztük, a következő módosításokkal. Röviden, a tenyésztett sejteket 4 százalékos paraformaldehidben fixáltuk 30 percig, permeabilizáltuk 0,5 százalék Triton X-100 PBS-ben 5 percig, blokkolt oldattal blokkoltuk, majd inkubáltuk. egér anti-H2AX monoklonális antitesttel (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) 60 percig szobahőmérsékleten. A sejtek PBS-sel történő mosása után a kimutatást Alexa Fluor 568-konjugált másodlagos antitesttel (Molecular Probes, Eugene, OR, USA) vagy fluoreszcein-izotiocianáttal konjugált másodlagos antitesttel (Cappel Laboratories, Durham, NC, USA) végeztük. ). Ezután a sejtmagokat megfestettük 0,025 µg/ml 4,6-diamino-2-fenil-indol (DAPI) fluoreszcens festékkel (Boehringer Mannheim, Mannheim, Németország). A sejtek képeit Olympus Fluorescence Microscope BX51 (Olympus, Tokió, Japán) segítségével készítettük digitális kamerával (Olympus DP50, Olympus).

Az öregedéssel összefüggő galaktozidáz (SA- -gal) festési vizsgálat

Ehhez a vizsgálathoz a sejteket (5 × 103) 35- mm-es lemezekre szélesztettük, és Senescence-Galactosidase Staining Kit-tel (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, USA) 5 nappal azután megfestettük. besugárzás a gyártó utasításai szerint, az alábbi módosításokkal. A sejtmagokat 0,025 µg/ml DAPI fluoreszcens festékkel festettük. A festett sejtek képeit 18 óra elteltével digitális kamerával felszerelt Olympus CKX41 Microscope (Olympus DP12, Olympus) vagy digitális kamerával felszerelt Olympus BX51 fluoreszcens mikroszkóp (Olympus DP50) segítségével készítettük. A pozitívan festődött sejtek százalékos arányát három, egyenként legalább 100 sejtből álló véletlenszerű mező elemzésével határoztuk meg az Image J szoftver segítségével. A sejtmag méretét három, egyenként 10 sejtből álló véletlenszerű mező elemzésével határoztuk meg az Image J szoftver segítségével. Minden besugárzást három párhuzamosban végeztünk.

Annexin V/propidium-jodid (PI) apoptózis vizsgálata

A sejteket (2,2 × 104) 60- mm-es lemezekre szélesztettük, és a következő napon röntgensugárzással sugároztuk be. Öt nappal a besugárzás után a sejteket összegyűjtöttük és Annexin V Alexa Fluor 488-PI-oldattal (Tali™ Apoptosis Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) megfestettük a gyártó utasításainak megfelelően. A PI festőoldat 200-szeres hígítását használtuk a festéshez. Ezenkívül az Annexin V-vel jelölt apoptotikus sejteket Tali Image-based Cytometer (Invitrogen) segítségével detektáltuk. Minden besugárzást három párhuzamosban végeztünk.

Statisztikai analízis

A statisztikai eredményeket átlag ± szórások (n{{0}}) formájában mutatjuk be. A nukleáris méret kivételével a statisztikai elemzést ANOVA és Ryan többszörös összehasonlító tesztjével végeztük (ANOVA4 a weben, https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/). A magméretet Student-féle t-próbával értékeltük. A 0,05-nél kisebb P-értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.

sivatagban élő cistanche

EREDMÉNYEK

A CRFK sejtproliferáció gátlása röntgensugárzással

A röntgensugárzásnak a CRFK sejtek proliferációjára gyakorolt ​​hatásának vizsgálatára 2 és 10 Gy besugárzást végeztünk. Amint az 1. ábrán látható, a sejtproliferáció dózisfüggő módon jelentősen gátolt (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">

DSB-k indukciója CRFK sejtekben röntgensugárzással

A H2AX foszforilációja a Ser139-ben az egyik fő és korai sejtes DDR-nek a DSB-k felé [8, 20, 28]. A H2AX egy arany standard biomarker a DSB-k számára [8, 20, 28]. Korábban Western blot segítségével meghatároztuk a H2AX expresszió változását CRFK sejtekben 1 óra és 24 óra között egyszeri 10 Gy dózisú röntgensugárzással [17]. Ennek eredményeként a H2AX expressziós szintje 1 óra elteltével volt a legmagasabb [17]. Annak vizsgálatára, hogy a H2AX foszforiláció indukálódott-e dózisfüggően a CRFK sejtek teljes kivonatában 1 órával a besugárzás után, Western blot analízist végeztünk az anti-H2AX antitesttel. Amint a 2A. ábrán látható, a Western blot analízis azt mutatta, hogy a H2AX expressziója a röntgensugár dózisától függően nőtt. Ezt követően megvizsgáltuk, hogy a H2AX fókusz kimutatható-e besugárzott sejtekben az anti-H2AX antitesttel végzett immunfestési vizsgálattal. Eredményeink azt mutatták, hogy a CRFK sejtek magjában H2AX gócok képződtek 1 órával a besugárzás után (2B. ábra).

A H2AXat Ser139 ATMkináz-függő foszforilációja CRFK sejtekben, melléksugarak

Az ATGM kináz vagy DNS-PK egyik fontos szerepe a röntgensugárzás által kiváltott DDR-ben, hogy foszforilálja a H2AX-et a DSB helyeket körülvevő különböző humán és rágcsálósejtekben [18, 29]; azonban ezt a szerepet még nem vizsgálták macskasejtekben, beleértve a CRFK sejteket is. Annak igazolására, hogy az ATM kináz felelős-e a röntgensugárzás által kiváltott H2AX foszforilációért a Ser139-nél CRFK sejtekben, a sejteket ATM kináz inhibitort KU-55933 (10 µM) vagy oldószert (DMSO) tartalmazó tápközegben inkubáltuk 1 percig. órával a besugárzás előtt (10 Gy). Ahogy a 3. ábrán látható, a H2AX gócok kialakulása gátolt volt a KU- 55933 jelenlétében besugárzott sejtekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az ATM a fő kináz a H2AX foszforilációjában a Ser139-en, amelyet besugárzás indukál CRFK sejtekben.

Öregedés indukálása CRFK sejtekben röntgensugárzással

Annak vizsgálatára, hogy a CRFK sejtszaporodás gátlása besugárzás hatására összefüggésben áll-e az öregedéssel és az apoptózissal, a sejteket 2 és 10 Gy-es röntgensugárzással sugároztuk be. Először is, 5 nappal a besugárzás után, a sejteket SA- -gal festéssel elemeztük, amely az öregedés arany standard vizsgálata. Megfigyeltünk öregedés-specifikus morfológiákat, például nagy és lapos sejtformát (4A. ábra) és rendellenes sejtmagokat, beleértve a megnagyobbodott vagy többmagvú sejtmagokat (4B. ábra), a besugárzott sejtekben. Ezenkívül a besugárzott CRFK sejtekben az SA- -gal-pozitív sejtek dózisfüggő módon jelentősen megnövekedtek (4A–C. ábra). Kvantitatívan elemeztük a sejtmag méretének megnagyobbodását is, amely az öregedő sejtek másik markere. Amint a 4D. ábrán látható, a sejtmag mérete szignifikánsan nagyobb volt a besugárzott CRFK sejtekben (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">

A cistanche egészségügyi előnyei: rákellenes

VITA

A sugárzás macskasejtekre gyakorolt ​​biológiai hatásának megértése fontos a radiotoxicitás tisztázásában és a rákkezelés új terápiás protokolljainak kidolgozásában. Jelen tanulmányban azt találtuk, hogy a macska elszaporodásaveseA CRFK sejtvonal szignifikánsan elnyomta a röntgensugárzást 2 és 10 Gy dózisban. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a röntgensugarak mérgezőek a CRFK-sejtek növekedésére a vizsgálatban alkalmazott körülmények között. Ezenkívül az öregedő sejtek jelentősen megnövekedtek a besugárzott CRFK sejtekben. Eközben a CRFK sejtekben feltárt eredményeink szerint az ATM kináz indukálja a H2AX foszforilációját a Ser139-nél, amely a röntgensugárzás által termelt DSB-k egyik fő DDR-je. A sugárzás által kiváltott DSB-k állítólag öregedést és apoptózist válthatnak ki emberi és rágcsálósejtekben [4, 22]. Eredményeink arra utalnak, hogy a DSB-k által aktivált öregedési mechanizmus hozzájárult a CRFK sejtek röntgensugárzással történő proliferációjának elnyomásához.

Az emberek, kutyák és macskák sugárérzékenységében mutatkozó különbségek hátterében álló mechanizmus, valamint a macskasejtek javítási mechanizmusa még nem tisztázott. Mint fentebb említettük, adataink azt mutatták, hogy az ATM kináz-függő DDR-t a röntgensugárzás aktiválja a CRFK sejtekben. Ezen túlmenően ez a tanulmány és korábbi tanulmányok azt mutatják, hogy a CRFK sejtekben a röntgensugárzás által kiváltott DSB-k kimutathatók Western blot analízissel és immuncitokémiával a kereskedelemben kapható anti-H2AX antitest felhasználásával [17]. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CRFK sejtek hasznosak a DDR molekuláris mechanizmusainak tisztázásában macskasejtekben. Moor [24] leírta, hogy a macskák sugárterápiája eltér a kutyákétól a daganatos válaszok és a normál szöveti toxicitás tekintetében. Fujii et al. [7] kimutatta, hogy a macskák fibroblasztjai sugárrezisztensebbek, mint az embereké, és a sugárzás által kiváltott H2AX gócok gyorsabban és hatékonyabban helyreállíthatók macskafibroblasztokban. Ezenkívül felvetették annak lehetőségét, hogy a röntgensugárzás által kiváltott DNS- és kromoszómakárosodás hatékonyabban helyreáll a macska limfocitáiban, mint az emberi vagy a kutya limfocitáiban. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy az emberek, kutyák és macskák sugárrezisztenciájában mutatkozó különbségek összefügghetnek a DNS javíthatóságának különbségével. Nemrég CRFK sejtek segítségével kimutattuk, hogy az NHEJ magjavító fehérjék, azaz a macska Ku70, Ku80 és XLF felhalmozódnak a 405-nm mikrolézerrel indukált DSB helyeken [17]. Azt is feltártuk, hogy a macska XLF, az emberi XLF vagy a kutya XLF toborzása a Ku jelenlététől függ [13, 14, 17]; Ezek az eredmények erősen alátámasztják, hogy a mag NHEJ-tényezők, köztük a Ku70, Ku80 és XLF spatiotemporális szabályozása fontos szerepet játszik az NHE javítás szabályozásában [10, 19]. A CRFK sejtek együttesen hasznosak lehetnek azon molekuláris mechanizmusok feltárásában, amelyek nemcsak a macska-, kutya- és emberi sejtek közötti sugárrezisztencia különbségei mögött állnak, hanem a DDR-ek, beleértve a bennük konzervált Ku-függő NHEJ-javítást is.

Az epiteliális-mezenchimális átmenet (EMT) a rosszindulatú átalakulás fontos mechanizmusa, például megváltoztatja a rákos sejtek sugárzással és rákellenes gyógyszerekkel szembeni rezisztenciáját. A közelmúltban arról számoltak be, hogy a CRFK sejtekről a fibroblasztok jellemzői vannak, különösen a morfológia, a biokémia és a molekuláris biológia tekintetében, bár a CRFK sejteket hámsejtvonalként hozták létre [21]. Ezenkívül van Beusekom et al. [31] arról számolt be, hogy a TGF- 1 megváltoztatta a CRFK sejtek morfológiáját epiteliális fenotípusról fibroblaszt fenotípusra, és szignifikánsan indukálta egyes EMT markergének expresszióját CRFK sejtekben, ami arra utal, hogy a CRFK sejtek áteshetnek EMT-n. Jelen tanulmányban az öregedés fontosabbnak tűnt, mint az apoptózis a besugárzott CRFK-sejtek növekedésének gátlásában. Összességében a CRFK sejtvonal kiváló módszer lehet nem csak a röntgensugárzás által kiváltott öregedés, sugárrezisztencia és/vagy radiotoxicitás közötti összefüggések tisztázására macskákban.vesehámsejtek, hanem az EMT sugárzás és kemoterápiás szerek elleni hatásának tisztázása is.

A pro-senescence terápia egy új rákellenes stratégia, amely a rákos sejtek öregedésének indukálásán alapul. Annak érdekében, hogy ezt a stratégiát a macskák kezelésére alkalmazzuk, tisztázni kell a macskasejtek öregedési indukciójának molekuláris mechanizmusát. Másrészt Li et al. [22] leírták, hogy a szenolitikus szerek, a kis molekulák egy osztálya, amelyek szelektíven elpusztíthatják az öregedő sejteket, nagy potenciállal bírnak a sugárterápia által okozott mellékhatások jelentős csökkentésében, miközben ésszerűen elkerülik a karcinogenezist. Nemrég kimutatták, hogy az ABT-737 szenolitikus szer eltávolítja az ionizáló sugárzás által kiváltott öregedő sejteket besugárzott egerek tüdejéből [35]. Mint fentebb említettük, adataink azt mutatták, hogy az öregedő sejtek jelentősen növekedtek a besugárzott CRFK sejtekben. Eredményeink és a CRFK sejtekkel végzett további vizsgálataink alapkutatások rendelkezésére állnak nemcsak a macskaproseneszcencia terápia, hanem a szenolitikus szerek kifejlesztésére is, a sugárterápia okozta mellékhatások csökkentésére.

CRFKaz egyik legfontosabb emlős sejtvonal, és széles körben használják kísérletekben, beleértve a vírusokon végzett kísérleteket, mint például a súlyos akut légúti szindróma koronavírus (SARS-CoV) vagy SARS-CoV-2; DNS-javítás és rákkutatás macskákban;krónikusvese betegség; valamint a vakcinák előállítása [1, 2, 17, 30, 33, 34]. A CRFK sejtek különféle vírusokkal fertőzhetők, beleértve az onkovírusokat is [1–3, 34]. Ezek alapján feltételezzük, hogy a CRFK sejtvonal alkalmas lehet a vírusfertőzés által kiváltott sugárérzékenység-változások és a sugárkezelés vírusfertőzés által kiváltott daganatokra gyakorolt ​​hatásának alapkutatására.CRFKA sejtek felhasználhatók a macskavese hámsejtjeinek radiorezisztenciájának és radiotoxicitásának hátterében álló mechanizmusok, valamint a vírusfertőzés sugárérzékenységre gyakorolt ​​hatásának tisztázására. Végső soron a CRFK sejtek kiváló sejtvonalak lehetnek a macskákban végzett radiotoxicitási kutatásokhoz és az új rákkezelési módszerek kifejlesztéséhez szükséges alapkutatásokhoz.

cistanche tubolosa egészségügyi előnyei

ÉRDEKÜLÉKENYSÉG.A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.

KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS.Ez a munka a Nemzeti Kvantum- és Radiológiai Tudományos és Technológiai Intézet, valamint a Saitama Egyetem Természettudományi Karának Szabályozásbiológiai Tanszékének támogatásával valósult meg.

IRODALOM

1. Altamura, G., Power, K., Martano, M., Degli Uberti, B., Galiero, G., De Luca, G., Maiolino, P. and Borzacchiello, G. 2018. Felis catus

Az E6 típusú -2 papillomavírus kötődik az E6AP-hez, elősegíti az E6AP/p53 kötődését és fokozza a p53 proteaszómális lebomlását. Sci. Rep. 8: 17529.

2. Chu, H., Chan, JF, Yuen, TT, Shuai, H., Yuan, S., Wang, Y., Hu, B., Yip, CC, Tsang, JO, Huang, X., Chai, Y., Yang, D., Hou, Y., Chik, KK,

Zhang, X., Fung, AY, Tsoi, HW, Cai, JP, Chan, WM, Ip, JD, Chu, AW, Zhou, J., Lung, DC, Kok, KH, To, KK, Tsang, OT, Chan, KH és Yuen, KY 2020. A SARS-CoV-2 és a SARS-CoV összehasonlító tropizmusa, replikációs kinetikája és sejtkárosodás-profilja a COVID klinikai megnyilvánulásaira, átvihetőségére és laboratóriumi vizsgálataira vonatkoztatva-19 : megfigyeléses tanulmány. Lancet Microbe 1: e14–e23.

3. Crandell, RA, Fabricant, CG és Nelson-Rees, WA 1973. Egy macskafélék (Felis catus) vesesejtvonal (CRFK) fejlesztése, jellemzése és vírusérzékenysége. In Vitro 9: 176–185.

4. d'Adda di Fagagna, F. 2008. Living on a break: celluláris öregedés, mint DNS-károsodási válasz. Nat. Rev. Cancer 8: 512–522.

5. Durocher, D. és Jackson, SP 2001. DNS-PK, ATM és ATR mint a DNS-károsodás érzékelői: variációk egy témára? Curr. Opin. Cell Biol. 13: 225–231.

6. Firsanov, DV, Solovjeva, LV and Svetlova, MP 2011. H2AX foszforiláció a DNS kettős szálú törések helyein tenyésztett emlőssejtekben és szövetekben. Clin. Epigenetics 2: 283–297.

7. Fujii, Y., Yurkon, CR, Maeda, J., Genet, SC, Kubota, N., Fujimori, A., Mori, T., Maruo, K. and Kato, TA 2013. Comparative study of radioresistance between macskasejtek és emberi sejtek. Sugárzás. Res. 180:70–77.

8. Huang, RX és Zhou, PK 2020. A DNS-károsodásra adott válasz jelátviteli útvonalai és célpontjai a sugárterápiás szenzibilizációhoz rák esetén. Jelátvitel. Cél. Ott. 5:60.

9. Jackson, SP 2002. DNS kettős száltörések érzékelése és javítása. Carcinogenesis 23: 687–696.

10. Koike, M. 2002. Ku70 és Ku80 fehérjék dimerizációja, transzlokációja és lokalizációja. J. Radiat. Res. (Tokió) 43: 223–236.

11. Koike, M. and Koike, A. 2008. Ku80 fehérjék felhalmozódása élő sejtekben bekövetkező DNS kettős szálú töréseknél. Exp. Cell Res. 314, 1061–1070 (1999)].

12. Koike, M., Shiomi, T. és Koike, A. 2001. Ku proteinek dimerizációja és nukleáris lokalizációja. J. Biol. Chem. 276: 11167–11173.

13. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2011. Ku70 felhalmozódása a DNS kettős szálú töréseknél élő epiteliális sejtekben. Exp. Cell Res. 317: 2429–2437.

14. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. Klónozás, lokalizáció és fókuszképzés a kutya XLF DNS-károsodási helyein. J. Vet. Med. Sci. 79: 22–28.

15. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. Klónozás, lokalizáció és fókuszképzés a kutya Ku70 DNS-károsodási helyein. J. Vet. Med. Sci. 79: 554–561.

16. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. Kutya Ku80 klónozása és lokalizációja és felhalmozódása a DNS-károsodás helyein. FEBS Open Bio 7: 1854–1863.

17. Koike, M., Yutoku, Y. és Koike, A. 2019. A macska XLF Ku-függő módon halmozódik fel a DNS-sérülési helyeken. FEBS Open Bio 9: 1052–1062.

18. Koike, M., Sugasawa, J., Yasuda, M. és Koike, A. 2008. Szövet-specifikus DNS-PK-függő H2AX foszforiláció és gamma-H2AX elimináció X-besugárzás után in vivo. Biochem. Biophys. Res. Commun. 376: 52–55. [Medline] [CrossRef]

19. Koike, M., Awaji, T., Kataoka, M., Tsujimoto, G., Kartasova, T., Koike, A. és Shiomi, T. 1999. Differential subcellular localization of DNA-dependent protein kinase komponensek Ku és DNS-PKcs mitózis során. J. Cell Sci. 112: 4031–4039. [Medline]

20. Kopp, B., Khoury, L. and Audebert, M. 2019. Validation of the H2AX biomarker for genotoxicity assessment: a review. Boltív. Toxicol. 93: 2103–2114. [Medline] [CrossRef]