A jujube poliszacharidok mérsékelték a vérszegénységet krónikus vesebetegségben szenvedő patkányokban

Kapcsolatfelvétel: emily.li@wecistanche.com

Shiying Huang és mtsai

Absztrakt

A zsidótövisbogyó poliszacharidjai (JP) a Ziziphus jujuba étrendi gyümölcsében található aktív, élelmiszer-eredetű glikánok egyike, amelyet a vérhiány kezelésére gondolnak. Ebben a tanulmányban akrónikusvesebetegség(CKD) patkánymodellt használtunk a JP és mechanizmusának a CKD-vel összefüggő vérszegénységre gyakorolt ​​hatásának értékelésére. CKD patkányokban a JP kezelés jelentősen javultvesefunkció, vesekórossérülésés hematológiai paraméterek, beleértve a vörösvértestek, a hemoglobin, a hematokrit és a vérlemezkeszám növekedését. Ezenkívül az LC-MS/MS célzott metabolomikai eredmények azt mutatták, hogy a JP elősegítette a rövid láncú zsírsavak (SCFA-k) felszabadulását CKD patkányokban. Emellett a JP felváltotta a szérum eritropoetin (EPO) szintjét, a vese EPO mRNS-ét ésveseEPO fehérje HIF-jelátvitelen keresztül. Ezek az eredmények együttesen bizonyítékot szolgáltatnak arra vonatkozóan, hogy a JP hatása a CKD-asszociált vérszegénységre szerepet játszhat az SCFA-felszabadulás és az eritropoetintermelés szabályozásában, támogatva a JP táplálékkiegészítőként történő továbbfejlesztését a CKD-asszociált vérszegénység kezelésében.

Kulcsszavak: Jujube poliszacharidokKrónikusvese betegségVérszegénység Eritropoetin Hypoxia-indukálható faktor- Rövid szénláncú zsírsavak

Kattintson ide, ha többet szeretne megtudni Cistanche-ról

1. Bemutatkozás

Krónikusvese betegségA (CKD) a veseszerkezeti rendellenességek vagy funkcionális károsodások klinikai tünetegyütteseként definiálható, és világszerte egyre nagyobb közegészségügyi terhet jelent (Webster, Nagler, Morton és Masson, 2017). A vesevérszegénység a krónikus vesebetegség egyik leggyakoribb szövődménye, amely hozzájárul a halálozás fokozott kockázatához (Locatelli et al., 2019). Az eritropoetin (EPO) termelés elégtelensége a krónikus vesebetegségben az anémia egyik elismert fő hajtóereje (Pappa, Dounousi, Duni és Katopodis, 2015). Az EPO a májban termelődik ésvese, ami elengedhetetlen a vörösvértest-termeléshez (Lappin & Lee, 2019). Hipoxiás körülmények között a hipoxia-indukálható faktor (HIF) aktiválhatja az EPO expresszióját (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). A HIF megcélzása az EPO-termelés indukálására tehát új terápiás stratégiának tekinthető a CKD-vel összefüggő vérszegénység kezelésére.

A jujuba a Ziziphus jujuba Mill termése. (Rhamnaceae), más néven kínai datolya. A zsidótövisbogyót hagyományosan, több ezer éve használják gyógynövényként és étrend-kiegészítőként. A jujube-t egészségügyi kiegészítőként használják olyan emberek számára, akik hematogén vagy krónikus alultápláltságban szenvedtek. A zsidótövisbogyó poliszacharidjai (JP), egy vízben oldódó komponens, amely különböző arányú monoszacharidból és uronsavból áll (Ji, Hou, Yan, Shi és Liu, 2020), a jujube egyik hatóanyaga (Ji et al., 2017). ), amely jól elfogadott, hogy májvédő és immunmoduláló hatást fejt ki, és fokozza a bélgát funkcióját (Liu és mtsai, 2015, Yue és mtsai, 2015). Valójában a JP-ről általában úgy gondolják, hogy potenciális hatással van a vérszegénységre. Azonban a JP molekuláris mechanizmusa a vérszegénység kezelésében még kevésbé ismert.

Az elmúlt években a metabolomikát széles körben alkalmazták a betegség progressziójához hozzájáruló lehetséges tényezők megértésére. A célzott metabolomikát széles körben alkalmazzák összetett emberi betegségek, például a CKD molekuláris markereinek azonosítására. Bebizonyosodott, hogy az indoxil-szulfát (IS) és a p-krezil-szulfát (PCS) a CKD progressziójának biomarkere (Meijers & Evenepoel, 2011), és a megnövekedett trimetilamin-N-oxid (TMAO) mértéke közvetlenül vezethet vese tubulointersticiális fibrózisához és diszfunkciójához. (Tang et al., 2015). A rövid szénláncú zsírsavak (SCFA-k), a bélmikrobiától függő metabolitok olyan energiaszubsztrátok, amelyek képesek különböző fiziológiai folyamatokat befolyásolni (LeBlanc et al., 2017), és az SCFA-k csökkenése a jelentések szerint hozzájárul a CKD progressziójához. (Koh, De Vader, Kovatcheva-Datchary és B¨ ackhed, 2016, Wang et al., 2019). Ezenkívül az SCFA-k képesek voltak megvédeni a vese szerkezetét a károsodástól az oxidatív stressz gátlásán keresztül (Li, Ma és Fu, 2017). Ezzel egyidejűleg az SCFA-k jótékony hatást mutatnak a vas felszívódására és fokozzák az embrionális/magzati globin expresszióját, ami eritropoézist indukál és korrigálja a vérszegénységet (Tako, Glahn, Knez és Stangoulis, 2014). Az SCFA-k mechanizmusát vese anémiában azonban még tisztázni kell.

Ebben a tanulmányban azt feltételezzük, hogy a JP szabályozhatja az SCFA-k felszabadulását és serkentheti a HIF által közvetített EPO-termelést, aminek eredménye a vese anémia korrekciója. Itt megvizsgáljuk a JP hatását a vese anémia enyhítésére 5/6 nephrectomized-indukált CKD patkányokban, beleértve a vesefunkciókat és a hematológiai paramétereket. Az LC-MS/MS segítségével célzott metabolomikai megközelítést dolgoztak ki nyolc SCFA meghatározására, beleértve az ecetsavat, propánsavat, izovajsavat, vajsavat, 2-metil-vajsavat, izovaleriánsavat, valeriánsavat és hexánsavat a székletben és a hexánsavat. vesemintákat, és a célzott SCFA-k szintjét egészséges és CKD patkányokban értékelték. Ezen túlmenően, a HIF jelátvitel érintettsége is kiderült JP-vel kezelt patkányokban.

1. ábra: JP tipikus GC–MS kromatográfiája. (A) Monoszacharid szerkezeti képletek aldononitril-acetátos származékképzés után; (B) A standard monoszacharid keverék és a JP hidrolizált monoszacharidok reprezentatív GC-MS vegyes ionkromatográfiás (MIC) profilja. A kromatográfiás profilok csúcsai az (A)-ban látható kémiai markernek feleltek meg: 1. ramnóz, 2. arabinóz, 3. fukóz, 4. xilóz, 5. mannóz, 6. glükóz, 7. galaktóz, 8. inozit (ISTD) ).

2. Anyagok és módszerek

2.1. Jujube poliszacharid előállítása

A Z. jujuba termését a Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd.-től vásárolták. Az anyagokat Dr. Jianping Chen hitelesítette a Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyve 2015-ös kiadása szerint. Az utalványmintákat a Sencsen Hagyományos Kínai Orvoslási Kórházban őrizték 18100601-es számmal.

A nyers JP-t a korábban leírtak szerint extraháltuk a zsidótövisbogyóból, kisebb módosításokkal (Ji et al., 2020). Röviden, a jujubákat 10 térfogat (v/w) vízzel inkubáltuk 80 °C-os vízfürdőben 3 órán át, majd háromszor extraháltuk. Szűrés után a szűrleteket egyesítjük, és ezt a keveréket rotációs bepárlóban, szabályozott vákuumban kondenzáljuk. A koncentrátum oldatot tovább csaptuk négyszeres etanol (v/v) hozzáadásával 4 °C-on 12 órán át. A csapadékot centrifugálással összegyűjtjük, és csökkentett nyomáson szárazra szárítjuk, így nyers JP-t kapunk. A JP tisztaságát kalorimetriával 80 százalékosnak határoztuk meg.

2.2. A jujube poliszacharid monoszacharid összetételének jellemzése

Shimadzu GC–MS rendszer (Shimadzu GC–MS TQ8040, amely a Shimadzu GC 2010 plusszal csatlakozik), EI forrással, SH-Rxi-5Sil MS kapilláris oszloppal (30 m) × 0,25 mm átmérőjű, 0,25 µm filmvastagság, Shimadzu) használtuk a származékképzéssel hidrolizált monoszacharidok meghatározására 10:1 osztási aránnyal. Az injektálás, az ionforrás és a határfelület hőmérséklete 250 ◦C, 200 ◦C és 250 ◦C volt. Az oszlop kezdeti hőmérsékletét 1 percig 120 °C-on tartottuk, majd 15 °C/perc sebességgel 160 °C-ra emeltük, és 4 percig, 2 °C/perc-en 165 °C-ig tartottuk, és 2 percig, 20 °C-on tartottuk. /

min 195 ◦C-ig, 5 ◦C/perc 250 ◦C-ig, és 3 percig tartjuk. A hélium hordozógáz áramlási sebességét 46 cm/s értéken tartottuk, és minden mintából 2 μl-t fecskendeztünk a műszerbe. Az analitokat a kiválasztott ionfigyelő (SIM) módban határoztuk meg, a célion: ramnóz (m/z 129.00), arabinóz (m/z 115.00), fukóz (m/ z 103.{11}}), xilóz (m/z 115.{13}}), mannóz (m/z 115.{15}}), glükóz (m/z 115.{17}} ), galaktóz (m/z 115.{19}}), inozit (m/z 126.{21}}). A monoszacharid standardokat a következőképpen sorolták fel: L ( plusz )-arabinóz (1506–200202), fukóz (112014–201902), D-xilóz (111508–201605), D-glükóz (110833–201908), ramnóz (1101502) ), a galaktózt (100226–201807), a D-mannózt (140651–201805) a National Institutes for Food and Drug Controltól vásárolták. Az inozitot a Sigmától szereztük be (I7508-50 g).

Az extrahált JP-t (10 mg) monoszacharidokká hidrolizáltuk 10 ml 2 mol/l-es trifluor-ecetsavval (TFA) 105 °C-on 3 órán át, majd a JP-ből származó hidrolizált monoszacharidokat betöményítettük és csökkentett nyomáson 60 °C-on mostuk. eltávolítjuk a TFA-t, és a maradékokat 2 ml vízzel feloldjuk. 250 µl 20 mg/ml töménységű hidroxil-amin-hidroklorid/piridin oldatot adtunk 100 µl hidrolizált monoszacharid oldathoz, és 45 percig 90 ◦C-os vízfürdőben tartottuk. Ezután 250 µl ecetsavanhidridet adtunk hozzá, és további 45 percig 90 °C-os vízfürdőben tartottuk. A reakció végén az elegyet 1 ml ciklohexánnal ötször extraháltuk, és a ciklohexános réteget 1 ml-re betöményítettük. 1 µL felülúszót injektáltunk GC–MS-be elemzés céljából (Li & Shi, 2013).

2.3. Állatok

Minden kísérletet a Guangzhou Kínai Orvostudományi Egyetem Intézményi Állatgondozási Felhasználási Bizottsága által jóváhagyott protokollokkal végeztünk. A 180–220 g súlyú, hím és nőstény Sprague–Dawley patkányokat a Guangdong Medical Laboratory Animal Centertől (Foshan, Kína, SCXK (Yue) 2008–0002 engedélyszám) szereztük be, és specifikus kórokozó-mentesen (SPF) tartották. ) állatlétesítmény 12 órás világos-sötét ciklus alatt, étellel és vízzel szabadon.

Az indukált veseelégtelenség miatt 5/6-os nefrektómiát végeztünk a korábbi leírás szerint (Chen et al., 2019). Az összes műtéti beavatkozást altatásban, 10 százalékos klorálhidráttal végeztük. Az álműtét csoport (n=6) ugyanezeket a lépéseket tette a hasüreg kinyitására és a vese feltárására. Az 5/6 nefrektómiás patkányokat véletlenszerűen két csoportra osztottuk. Kezelés nélküli patkányok (CKD csoport, n=6) és JP-t kapó patkányok (CKD plusz JP csoport, n=6) ​​szájon át szondán keresztül 1,2 g/kg/nap dózisban. 90 napos működés után 90 napos kezelés kezdődött. A 90. nap volt a JP végső beadási ideje patkányoknak, majd 24 óra elteltével az állatokat a hasi aortából vérvétellel leöltük, és minden patkánytól vizelet-, széklet-, szérum- és vesemintát vettünk. Minden mintát –80 ◦C-on tároltunk a további elemzés előtt.

2.4. Biokémiai elemzés

A gyártó utasításait követve a vér karbamid-nitrogénjét (BUN) és a szérum kreatinint (Scr) kreatinin szérum-detektáló készlettel és BUN-detektáló készlettel (WAKO, Ginza, Japán), a vizeletfehérjét pedig Elisa kittel (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institution, Nanjing, Kína). A vörösvértesteket (RBC), a hemoglobint (Hb), a hematokritot (HCT) és a vérlemezkeszámot (PLT) a Hematology Systems (Siemens 2021i, Erlangen, Németország) elemezte a gyártó utasításai szerint.

2.5. Szövettani vizsgálat

Periodikus sav-Schiff (PAS) és Masson festést alkalmaztak a vesepatológiás károsodás értékelésére, köztük a PAS festést a vesetubuláris atrófia és a glomeruláris terület feltárására, Masson festést pedig a vese intersticiális fibrózisára (Xie et al. , 2020). A kvantitatív elemzési módszert korábbi tanulmányok (Chen et al., 2019) szerint végeztük. Röviden, a tubuláris atrófia pontszámát a PAS festésben a következőképpen határoztuk meg: 1. ritka egyetlen atrófiás tubulus; 2. atrófiás tubulusok több csoportja; 3. masszív sorvadás. A glomeruláris terület mérését ZEN 3.1 szoftverrel végeztük (Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Németország). A Masson-festés fibrotikus területét Image J szoftverrel (NIH, Bethesda, MD, USA) mértük. Csoportonként legalább tíz mikroszkopikus mezőt (200×) 6 patkányból véletlenszerűen befogtunk, hogy megmérjük az atrófiás pontszámot, a glomeruláris területet és a fibrotikus területet, minden mikroszkopikus mezőben legalább egy glomerulussal.

2.6. Immunhisztokémiai elemzés

Minden mintából a vese paraffin metszetét (4 μm) fokozatosan xilollal kétszer dehidratáltuk, és a gradiens etanolt (100–95–90–80–70 százalék), az antigént citromsav pufferrel (pH 6,0) nyertük ki. ) 30 percig, 3 százalékos hidrogén-peroxiddal 10 percig és kecskeszérummal 30 percig szobahőmérsékleten blokkolva. A szövetmetszeteket külön-külön inkubáltuk elsődleges antitest HIF-1 (Bioss, bs-0737R, 1:500, tétel: BA01279129), HIF-2 (Bioss, bs-1447) segítségével. R, 1:500, tétel: BJ2044786) 4 ◦C-on 10 órán át és HRP-vel konjugált kecske antinyúl szekunder antitest (Abcam, ab6712, 1:1000) szobahőmérsékleten 30 percig, DAB-t (diaminobezid in) használtunk kimutatták a HRP aktivitást, a sejtmagot hematoxilinnel ellenfestettük. az. Az immunhisztokémiát 400-szoros mikroszkópos mezőben elemeztük minden csoportból, és rögzítettük a skálasávot=20 μm az Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Németország. A sejtmag hematoxilinnel kékre festődött, a DAB immunpozitivitása pedig barna volt, a mélyebb DAB festődés erősebb immunhisztokémiai pozitívumot jelent.

2.7. EPO kimutatás

A szérum EPO-tartalmát az ELISA kit (Abcam, ab274398) detektálta, és a kísérlet az ELISA kit protokollra vonatkozott. Összefoglalva, EPO antitest koktélt adtunk a mintához, és 1 órán át inkubáltuk. inkubálás után mindegyik lyukat háromszor mossuk mosópufferrel, TMB-t adunk a második inkubációhoz 15 percig, és leállítjuk a reakciót.

A vese össz-mRNS-ét a fagyasztott veseszövetből Trizol alkalmazásával extraháltuk, és az mRNS-t cDNS-vé fordítottuk. A valós idejű PCR-t Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix-szel (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA, K0223) végeztük a gyártó protokollja szerint. A SYBR zöld jelet az ABI Prism 7300 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA) segítségével vettük és mértük. A primerek a következők voltak: 5′-CCG TCC CAG ATA CCA AAG TC-3′ és 5′-ACC CGA AGC AGT GAA GTG-3′ patkányoknál EPO (214 bps, NM_017001). 2); 5′- GTC GGT GTG AAC GGA TTT G-3′ és 5′-TCC CAT TCT CAG CCT TGA C- 3′ a GAPDH-hoz (181 bps, NM_017008.3), a háztartási gens mint belső ellenőrzés minden esetben. A génexpresszió relatív mennyiségi meghatározását pedig a normalizált génexpressziós módszerrel (2− ΔΔCT) számítottuk ki.

A vesekéreg-lizátumokból azonos mennyiségű fehérjét töltöttünk fel, és 10%-os SDS-géllel választottuk el, majd nitrocellulóz membránokra vittük át. Miután 2 órán át szobahőmérsékleten 5%-os zsírmentes tejben blokkoltuk, a membránokat elsődleges antitesttel inkubáltuk 4 ◦C-on egy éjszakán át. Ezután a membránokat HRP-vel (torma-peroxidáz) konjugált anti-egér IgG-vel (Life Technologies) inkubáltuk szobahőmérsékleten 45 percig. A HRP aktivitást Clarity Western ECL Substrate segítségével vizualizáltuk, és a Tanon képalkotó rendszerrel elemeztük. Ebben a vizsgálatban a következő elsődleges antitestet használtuk: egerekből származó monoklonális EPO (B- 4) (Santa Cruz Biotechnology, sc-5290, 1/500 hígítás), monoklonális -aktin egerekből (Cell signaling technológia, 8H10D10, 1/1000 hígítás).

2.8. Rövid szénláncú zsírsavak elemzése

Shimadzu UHPLC-LCMS/MS rendszer (Shimadzu LC-MS 8045 Shimadzu LC-20AD-vel interfész), ESI-forrással.

A kromatográfiás elválasztást Shim-pack GIST C18 (2,1 × 100 mm, 2 μm) oszlopon végeztük, {{10}},1% hangyasav vízben ( A) oldószer és acetonitril (B oldószer) 0,3 ml/perc áramlási sebességgel gradiens elúcióval: 0-9 perc, 25-30% B; 9–11 perc, 30–40 százalék B; 11–20 perc, 40–50 százalék B; 20–20,1 perc, 50–100 százalék B; 20,1–23 perc, 100 százalék B; 23,1 perc – 25 százalék B az újraegyensúlyozáshoz. Az oszlophőmérséklet 35 ◦C volt, és az automatikus mintavevőt 4 ◦C-on tartottuk az analízis során, minden mintából 1 μl-t fecskendeztünk a műszerbe. Az analit-detektálás többreakciós monitorozás (MRM) módban, pozitív ion üzemmódban történt. Az MS paraméterek: Porlasztógáz áramlása: 3,0 L/perc; Szárítás Gázáram: 10 L/perc; Fűtés Gázáram: 10 L/perc; DL hőmérséklet: 250 ◦C; interfész hőmérséklet: 300 ◦C; Fűtőblokk: 400 ◦C. Az MRM átmeneteket és az ütközési energiát (CE) az egyes standard származékok közvetlen infúziójával választottuk ki és optimalizáltuk. Az MRM átmenetek analit mennyiségét az S1 táblázatban foglaltuk össze.

Széklet SCFA-k: Adjunk 100 µl 50 százalékos acetonitrilt 3 mg liofilizált széklethez, és vortexeljük 2 percig. Ezután a keveréket 12000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig 4 °C-on, és pipettáztuk a felülúszót.

Vese SCFA-k: 100 mg veseszövetet lemérünk, és jégen vortexeljük a normál sóoldat négyszeresével (100 mg/400 μL) a szövethomogenizátum elkészítéséhez. 3-szor hideg metanolt adtunk 300 μl szövethomogenizátumhoz, és 2 percig vortexeltük, majd a keveréket 12000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig 4 ◦ C-on, és pipettáztuk a felülúszót. A felülúszót nitrogénnel szárítottuk, és 100 µl 50%-os acetonitrillel rekonstituáltuk.

Hozzáadott 500 mmol/l N-(3-dimetil-aminopropil)-Ń-etil-karbodiimid-hidroklorid (EDC, Aladdin, Shanghai, Kína), 50 mmol/l 3H-[1,2,3]-triazolo[4, 5-b] piridin-3-ol (HOAT, Aladdin, Shanghai, Kína) és 50 mg/ml 12C-Danzilhidrazin (12C-DnsHz, J&K, Peking, Kína) 20 μl mintaextrakcióba sorozat azonos hangerővel. Az EDC-t és a HOAT-ot friss 500 mmol/L 2-(N-morfolino)-etánszulfonsavval (MES, Macklin, Shanghai, Kína) készítettük. 20 °C-on 90 percig tartó inkubálás után 20 μL 50 mmol/l CuCl2-t (Macklin, Shanghai, Kína) adtunk az elegyhez, hogy a származékképzési reakciót 40 °C-on 30 percig leállítsuk (Zhao & Li, 2018). A származékképzés végén az elegyet 10-szer hígítottuk 25%-os acetonitrillel. Az elemzés előtt 100 µl felülúszót kevertünk össze 100 µl belső standard oldattal. A 13C-DnsHz-es címkét belső standardként (ISTD1-8) alkalmaztuk ugyanezen származékképzési reakciónak megfelelően. Az SCFA-k szabványa: ecetsav (AA, A116173), propánsav (PA, P110446), izovajsav (IBA, I103524), vajsav (BA, B110438), 2-metil-vajsav (2-) A BA, M107377), az izovalersavat (IVA, I108280), a valeriánsavat (VA, V108271), a hexánsavat (HA, H103632) az Aladdintól (Sanghaj, Kína) szállították.

2.9. Statisztikai analízis

Az egyes csoportok adatait átlag ± standard deviációval (SD) fejeztük ki. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát egyutas ANOVA és post hoc analízissel, Student-Newman-Keuls (SNK) teszttel vagy Dunnett T3 teszttel végeztük. A P < 0.05="" értékét="" statisztikailag="" szignifikánsnak="" tekintettük.="" az="" összes="" adatot="" spss="" statisztikai="" szoftverrel="" (22.0-s="" verzió,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="" usa)="">

3. Eredmények

3.1. A JP javította a CKD patkányok veseműködését

A JP monoszacharidját állatokon végzett kezelés előtt jellemeztük. A jelen tanulmányban használt JP hét monoszacharidból állt, azaz ramnózból (1,62 százalék), arabinózból (15,79 százalék), fukózból (0,21 százalék), xilózból (4,56 százalék), mannózból (3. 00 százalék), glükózt (73,44 százalék) és galaktózt (4,99 százalék) (1. ábra). Elemzési módszerünket a linearitás, a pontosság, az ismételhetőség, a stabilitás és a visszanyerés alapján validáltuk (S2–S3 táblázatok). Megerősítették, hogy az analitok szobahőmérsékleten 24 órán át stabilak. A JP hozamának 8,63 százaléknál magasabbnak kell lennie, a tisztaságnak pedig legalább 77,16 százaléknak kell lennie. A JP fent említett kémiai elemzése minőségellenőrzési megközelítésként szolgált az alábbi állatkísérletek reprodukálhatóságának biztosítására.

A Scr, a BUN és a vizeletfehérje a vesefunkciókat leginkább reprezentálta. Az Scr, BUN és vizeletfehérje szintjei CKD patkányokban szignifikánsan magasabbak voltak, mint az ál-csoportban (P < {{0}},01).="" 90="" napos="" jp-kezelés="" után="" a="" scr,="" bun="" és="" vizeletfehérje="" szintje="" csökkent="" a="" ckd="" csoporthoz="" képest="" (p="">< 0,01)="" (2a–c.="">

3.2. A JP javította a vese patológiás károsodását CKD patkányokban

A teljes jobb vese súlyát az ál-csoportban és a maradék jobb vesét a CKD és a CKD plusz JP csoportban használtuk a vesemorfológiai értékeléshez vesetömeg (KW) és vesetömeg/testtömeg (KW/BW) alapján. A kísérletek végén a CKD csoport KW és KW/BW értéke megnőtt az ál-csoporthoz képest (minden P < {{0}}.05).="" az="" 5/6-os="" nephrectomia="" által="" kiváltott="" ckd="" modellben="" a="" vese="" proteináz="" aktivitásának="" csökkenése="" kompenzáló="" vese="" növekedést="" okozott,="" a="" vese="" hipertrófiában="" szenvedő="" vállalatoknál="" (morton="" &="" griffiths,="" 1985),="" és="" ezt="" az="" állítást="" megerősítettük.="" jp="" kezelés="" után="" a="" kw="" szignifikánsan="" csökkent="" (p="">< 0,05),="" és="" az="" ál-csoportba="" zárult="" (p="" ˃="" 0,05);="" míg="" a="" kw/bw="" enyhén="" csökkent="" (p="" ˃="" 0,05).="" (2d–e.="">

2. ábra. A JP védte a veseműködést CKD patkányokban. Scr (A), BUN (B) és vizeletfehérje (C) szintje a különböző csoportokban. (D) vese tömege, (E) KW/BW. Az adatok átlag ± SD, n=6 csoportonként (**P < 0.01="" összehasonlítva="" a="" hamis="" csoporttal;="" #p="">< 0,05)="" ,="" ##p="">< 0,01="" a="" ckd="" csoporthoz="">

A CKD csoportban a vesetubuláris masszív atrófiát mutatott az ál-csoporthoz képest (P < {{0}}.01),="" és="" a="" glomerulus="" területe="" és="" a="" vese="" intersticiális="" fibrózisa="" csaknem="" kétszerese="" volt,="" mint="" a="" az="" álcsoporté="" a="" kvantitatív="" elemzésben="" (p="">< 0.01).="" a="" jp-kezelést="" követően="" a="" tubulus="" atrófia="" pontszáma="" közel="" kétszeresére="" csökkent="" (p="">< 0,01),="" a="" glomerulus="" terület="" majdnem="" visszanyerte="" a="" hamis="" csoportot="" (p="">< 0,01),="" és="" a="" vese="" interstitialis="" fibrózisa="" egyharmaddal="" csökkent="" (p="">< 0,01),="" mivel="" ckd="" csoporthoz="" képest="" (3.="">

3. ábra. A JP megvédte a vese szerkezetét CKD patkányokban. (A) PAS festés. (B) Masson-festés. (C) Tubuláris atrófia pontszám. (D) Glomeruláris terület (E) Fibrotikus terület. Minden kép azonos nagyítással, 200×, léptéksáv=100 μm. Az adatokat átlag ± SD, n=6 csoportonként mutattuk be (**P < 0,01="" a="" hamis="" csoporthoz="" képest;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" a="" ckd="" csoporthoz="" képest="">

3.3. A JP modulálta a hematológiai paramétereket CKD patkányokban

A hematológiai paraméterekhez biokémiai analízist, vörösvértestet, Hb-t, HCT-t és PLT-t mértünk. CKD patkányokban a vörösvértestek szintje 9.06-ról 7,20 × 1012 /L-re, a Hb 15,28-ról 13,22 g/dl-re, a HCT 47,1-ről 40,4 százalékra, a PLT pedig emelkedett 1012-ről 1526 × 109 /L-re egy ál-csoporthoz képest (P < 0,01),="" ami="" azt="" jelzi,="" hogy="" a="" vérszegénység="" jeleit="" figyelték="" meg="" ckd="" patkányokban.="" a="" csökkent="" vörösvértest-,="" hb-,="" hct-="" és="" plt-szintek="" a="" jps-kezelt="" ckd-patkányokban="" helyreálltak="" (p="">< 0,01)="" (4.="">

4. ábra: JP rehabilitálta a hematológiai paramétereket CKD patkányokban. A PLT (A), RBC (B), Hb (C), HCT (D) szintje. Az adatok átlag ± SD, n=6 csoportonként (**P < 0.01="" összehasonlítva="" a="" hamis="" csoporttal;="" #p="">< 0,05)="" ,="" ##p="">< 0,01="" a="" ckd="" csoporthoz="">

3.4. JP stimulálta az EPO expressziót

A szérum EPO szint és a vese EPO mRNS mennyisége szignifikánsan csökkent CKD-anémiás patkányokban (P < 0.01).="" western="" blot="" analízis="" kimutatta,="" hogy="" az="" epo="" fehérje="" szintje="" enyhén="" csökkent="" a="" ckd="" csoportban,="" szignifikáns="" különbség="" nélkül.="" a="" jp-kezelést="" követően="" a="" szérum="" epo-szint,="" a="" vese="" epo="" mrns-e="" és="" a="" fehérje="" jelentősen="" javult="" a="" ckd-csoporthoz="" képest="" (p="">< 0,01="" vagy="" p="">< 0,05)="" (5a–b.="">

A vesekéregben a HIF-1-t főként a vese tubuláris epiteliális sejtjei termelték, a HIF-2 pedig főként az endothelsejtekben és a vese intersticiális fibroblasztjaiban expresszálódott (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Az immunhisztokémiai elemzés azt mutatta, hogy a HIF-1-hoz hasonlóan a CKD patkányokban a tubulusok erősebben festődtek, mint az ál-csoportban. A JP-kezelést követően a vese tubulusának erősebb és nagyobb területű festődése volt a CKD-csoporthoz képest, amint az 5E. ábrán látható piros nyíl. A HIF-2 viszonylag gyenge immunhisztokémiát mutatott pozitívnak a vese intersticiális szakaszában a Sham csoportban. A CKD csoportban a HIF-2 immunhisztokémiája pozitív volt. A JP-kezelés után a HIF-2 erősebb immunhisztokémiát mutatott, mint a CKD-csoportban (5F. ábra).

5. ábra: A JP stimulálta az EPO expressziót. (A) A szérum EPO-tartalma. (B)VeseEPO relatív mRNS. A GAPDH-t háztartási génnek tekintették. (C) Az EPO fehérje expressziójának reprezentatív Western blot képei. (D) Az EPO denzitometriás elemzése. (E) A HIF immunhisztokémiája{{0}}. (F) A HIF- 2 immunhisztokémiája -aktintartalomra normalizálva. Az immunhisztokémiai képek azonos nagyításban, 400×, léptéksáv=20 μm. A sejtmag hematoxilinnel kékre festődött, a DAB immunpozitivitása pedig barna volt, a mélyebb DAB festődés erősebb immunhisztokémiai pozitívumot jelent. A piros nyíl az immunhisztokémia pozitívra mutat. Az adatokat átlag ± SD, n=6 csoportonként mutattuk be (*P < 0,05="" a="" hamis="" csoporthoz="" képest;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" a="" ckd="" csoporthoz="">

3.5. JP indukálta az SCFA-k felszabadulását

Egy LC-MS-alapú célzott metabolomikai megközelítést fejlesztettek ki nyolc SCFA székletmintákban történő felszabadulásának számszerűsítésére. A kialakított módszert a linearitás, az érzékenység, a precizitás, a mátrixhatás, a pontosság és a stabilitás értékelésével validáltuk. Az alacsony, közepes és magas koncentrációjú minőségellenőrző mintákat (LQC, QMC, HQC) az érzékenység, a precizitás, a pontosság és a stabilitás validálása céljából a mátrix standard görbe legalacsonyabb, közepes és legmagasabb koncentrációs pontja szerint választottuk ki, és az eredményeket. az S4–S6. Megerősítettük, hogy az analitok 4 ◦C-on 48 órán át stabilak. Az SCFA-k LC-MS/MS kromatogramja a 6. ábrán látható.

6. ábra: SCFA-k UHPLC-MS/MS kromatográfiája. (A) A felső az SCFA-k származékképzési kémiai egyenlete; az SCFA-k szerkezeti képlete a danzilhidrazin származékképzés után; (B) A keverékstandardok és a székletminta UHPLC/MRM-MS kromatogramja, a (B) pontban szereplő kromatográfiás csúcsok az (A):1 kémiai markernek felelnek meg. 12C-ecetsav; 2. 13C-ecetsav (ISTD1); 3. 12C-propánsav; 4. 13C-propánsav (ISTD2); 5. 12C-izovajsav; 6. 12C-vajsav; 7. 13C-izovajsav (ISTD3); 8. 13C-vajsav (ISTD4); 9. 12C-2-metil-vajsav; 10. 12C-izovaleriánsav; 11. 12C valeriánsav; 12. 13C-2-metil-vajsav (ISTD5); 13. 13C-izovaleriánsav (ISTD6); 14. 13C-valeriánsav (ISTD7); 15. 12C-hexánsav; 16. 13C-hexánsav (ISTD8).

Ami a székletmintát illeti, a CKD-s csoportban az AA és PA szintje jelentősen, csaknem 4-szeresére és 5-szörösére csökkent az ál-csoporthoz képest (P < 0.01);="" míg="" a="" jp-kezelés="" után="" az="" aa="" és="" pa="" mennyisége="" visszaállt="" a="" hamis="" csoport="" 4/5-ére="" (p="">< {{10}}.01).="" hasonlóképpen,="" a="" ba="" és="" va="" szintje="" erőteljesen,="" csaknem="" 30-szeresére="" és="" 4-szeresére="" csökkent="" a="" ckd-csoportban="" az="" ál-csoporthoz="" képest="" (p="">< 0,01).="" a="" jp-kezelés="" növekvő="" tendenciát="" mutatott,="" de="" nem="" szignifikáns="" javulást.="" az="" iba,="" iva="" és="" 2-ba="" tartalma="" nem="" mutatott="" jelentős="" változást="" a="" ckd="" és="" az="" ál-csoport="" között.="" a="" jp="" kezelés="" után="" az="" iba,="" iva="" és="" 2-ba="" szint="" emelkedett="" (p="">< 0,01).="" a="" ha="" azonban="" nem="" mutatott="" nyilvánvaló="" változást="" a="" három="" csoport="" között="" (7a.="" ábra).="" továbbá,="" ami="" a="" veseszövetet="" illeti,="" a="" ckd="" csoportban="" nyolc="" scfa="" mennyisége="" szignifikánsan="" csökkent="" (p="">< 0,01),="" míg="" a="" jp="" kezelés="" után="" az="" scfa-k="" szintje="" emelkedett,="" kivéve="" a="" ba="" és="" ha="" (p="">< 0,01="" vagy="" p="">< 0,01).="" 0,5).="" a="" ba="" kismértékben="" megemelkedett,="" de="" nem="" szignifikánsan,="" és="" a="" ha="" nem="" mutatott="" változást="" a="" jp="" kezelés="" után="" (7b.="">

7. ábra: SCFA-tartalom különböző csoportokban. (A) Széklet SCFA-k. (B) vese SCFA-k. Az adatok átlag ± SD, n=6 csoportonként (**P < 0.01="" összehasonlítva="" a="" hamis="" csoporttal;="" ##p="">< 0).="" 01,="" #p="">< 0,05="" a="" ckd="" csoporthoz="">

4. Megbeszélés

A jelenlegi 5/6 nephrectomia CKD patkánymodellben avesefunkcióAz indikátorok (Scr, BUN és vizeletfehérje) szignifikánsan megemelkedtek, megjelent a vesemaradék hypertrophia és a vesepatológiás károsodás, amit a hematológiai paraméterek változása kísért. Ezek az adatok összhangban voltak a korábbi tanulmányokkal (Garrido et al., 2015, Morton & Griffiths, 1985). A fenti mutatók azt mutatták, hogy az 5/6-os nephrectómia által kiváltott CKD-anémiás patkányokat sikeresen megállapították, és igazolni lehetett a JP jótékony hatását a CKD-anémiás patkányok kezelésében. A ... valvesefunkcióTovább romlott, a vérszegénységet ismert opportunista CKD szövődményként ismerték fel, amely negatívan befolyásolta a betegek életminőségét (Locatelli, Fishbane, Block és Macdougall, 2017). A vese anémia előrehaladásával kapcsolatos kockázati tényezők megértése segít a terápiás megközelítések kidolgozásában. Napjainkban egyre nagyobb figyelmet kap a betegség és a bélmikrobióta metabolizmusa közötti kapcsolat, miközben az SCFA-k és a vese anémia közötti kapcsolat még kevésbé ismert. A főként Clostridium, Coprococcus és Bacteroides által metabolizált SCFA-k (Koh et al., 2016) specifikus membránhoz kötött receptorokat céloznak meg, amelyek fontos szerepet játszanak a bélkörnyezet egyensúlyának és az egész test egészségének megőrzésében. Az SCFA-król már bebizonyosodott, hogy elválaszthatatlan kapcsolatban állnak a CKD-vel, és az ecetsav, a propionsav és a vajsav szintje csökkent a CKD-ben (Wang et al., 2019). Az adenin-indukált CKD patkányokban a bél mikrobiota abundanciája és diverzitása jelentősen megváltozott, a vállalatok csökkentették a propánsav, a vajsav és a valeriánsav szintjét (Lakshmanan, Al, Ali és Terranegra, 2021). Korábbi vizsgálatunk alapján a 16S rDNS szekvenálás azt mutatta, hogy a bélmikrobióta dysbiosis 5/6-ában volt kimutatható nefrektomizált CKD-s patkányokban, összehasonlítva az ál-csoporttal. Egyes SCFA-k, különösen a Clostridium, Coprococcus vajsavat termelő nemzetségei, eltéréseket mutattak CKD patkányokban (Zheng et al., 2020). Ezzel összhangban eredményeink azt mutatták, hogy az ecetsav, propionsav, vajsav, valeriánsav mennyisége körülbelül 60 százalékkal, 80 százalékkal, 85 százalékkal és 60 százalékkal csökkent CKD patkányokban, ami azt jelzi, hogy az SCFA-k csökkenése megfelelt. a bélkörnyezet egyensúlyhiányával. Megjegyzendő, hogy a CKD által kiváltott bélkörnyezeti rendellenesség a bél mikrobiota metabolizmusát rendellenesen váltotta ki (Feng és mtsai, 2019). Ezenkívül azt találtuk, hogy a CKD-anémiás patkányokban nyolcféle SCFA-szint csökkent. Például a metabolikus végtermékek, azaz az SCFA-k rendellenességei a CKD progressziójából származhatnak.

A poliszacharidokat, az egyik hatóanyagot különféle gyógynövényekben találták meg, mint például a Dioscoreae Rhizoma, Schisandra Chinensis, Astragali Radix és Jujubae Fructus. A poliszacharidokat a bél mikrobiota fermentálhatja és lebonthatja. Ennek eredményeként a poliszacharidok a bélmikrobióta szubsztrátjaként jelennek meg, hogy SCFA-kká metabolizálódjanak, vagy úgy tekintik, hogy prebiotikum-szerű hatást fejtenek ki, hogy javítsák a bélmikrobióta összetételét, megkönnyítve az SCFA-termelést (Cai et al., 2019). Eredményeink feltárták, hogy a jujubából származó poliszacharidok serkentik az SCFA-k, például ecetsav, propánsav, izovajsav, 2-metil-vajsav felszabadulását a bélben CKD-patkányokban. Továbbá a JP kezelést követően a CKD-anémiás patkányvesékben javult az SCFA-szint, és a változási tendencia összhangban volt a székletmintával. A meglévő kutatások alapján az SCFA-k és a CKD közötti kapcsolat fokozatosan világossá vált. Például az ecetsavról számoltak be, hogy modulálja az immunrendszert és enyhíti az akutvesesérülésa NADPH-oxidáz jelátvitel gátlásával T-sejtekben (Al-Harbi et al., 2018). Bebizonyosodott, hogy a propánsav megakadályozza az adenin által kiváltott CKD progresszióját a szabad zsírsav receptor 2-en (FFA2) és az FFA3-on keresztül (Mikami et al., 2020). Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a vese SCFA-szintjének visszanyerése előnyös volt a beteg vese számára. Beszámoltak arról, hogy a JP növelte a bél mikrobióta diverzitását és növelte az SCFA-k aktív mikrobiótájának (Bacteroides) relatív abundanciáját vastag- és végbélrákos egerekben (Ji et al., 2020). Emellett a JP növelte az összes SCFA koncentrációját a székletmintákban (Ji et al., 2019). Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a JP serkentheti az SCFA-termelést, hogy elérje a CKD progressziójának késleltetését. A JP az SCFA-k domináns mikrobiótájának metabolizmusának szubsztrátja is lehet, hogy serkentse az SCFA-k termelését CKD-ben, vagy egy prebiotikum-szerű komponens a bélkörnyezet helyreállításához, különösen az SCFA-k domináns mikrobiótájának sokféleségének helyreállításához, és tovább elősegítheti az SCFA-k felszabadulását, hogy megakadályozzák a CKD progresszióját.

Általában a kis molekulatömegű és nagy kémiai polaritású SCFA-kat (6-nál szénmentes) nehéz közvetlenül kromatográfiás módszerekkel elemezni. Az SCFA-k izotóppal jelölt kémiai származékképzése javíthatja a műszer érzékenységét és csökkentheti az elemzési hibákat, ami hasznos stratégiát jelentett az SCFA-k meghatározásához az LC-MS/MS analízisben (Higashi és Ogawa, 2016). A közelmúltban a danzil-hidrazinnal jelölt megközelítéseket kielégítően alkalmazták a karbonsavat tartalmazó, megcélzott humán plazma metabolitok kimutatására (Chen és Zhang, 2020). Ennek alátámasztására ebben a tanulmányban továbbfejlesztettük az LC-MS/MS megközelítésen alapuló kémiai származékképzést 8 SCFA meghatározására patkányürülékben. Az SCFA-kat a bél mikrobiota termeli, és az SCFA-k közel 10 százaléka a széklettel ürül (Boets et al., 2015). Ezért az SCFA-k székletmintájának elemzése közvetlenül tükrözheti a bélkörnyezet változásait, és nagyobb jelentőséggel bír az SCFA-k és a bélmikrobióta közötti multi-omika együttes elemzésben. Az instabilitás validálása során azt találtuk, hogy a danzil-hidrazinnal jelölt SCFA-k szobahőmérsékleten instabilak voltak, és intenzitásuk a tömegspektrumon idővel csökkenő tendenciát mutatott, de 4 ◦C-on 48 óráig stabil maradhatott. Így az SCFA-k származékképzése után az analitokat 4 ◦C-on kell tartani az analízis előtt.

Az előrehaladott CKD 4–5. szakaszában az EPO-termelés hiánya korlátozza az eritropoézist, ami hozzájárul a vese anémia kialakulásának legkritikusabb tényezőjéhez (Sakashita, Tanaka és Nangaku, 2019). A klinikai gyakorlati irányelvek javasolják a vérszegénység esetén az eritropoézist stimuláló szerekkel (ESA) végzett rutin kezelést. Mindazonáltal a fokozott halálozási kockázattal és a szív- és érrendszeri eseményekkel kapcsolatos ESA-k biztonságosságával kell foglalkozni (Thavarajah & Choi, 2019). Vesevérszegénységben szenvedő betegeknél az EPO-expressziónak konzisztensnek vagy láthatóan emelkedettnek kellett lennie az egészséges testekhez képest (Babitt & Lin, 2012). A korai szakaszban az EPO szintje a frissítési trendet mutatta, míg a késői szakaszban az EPO szint csökkenő tendenciát mutatott a korai szakaszhoz képest, még a normálnál is alacsonyabbat (Panjeta, Tahirovi´c, Sofi's, ´Cori's és Derviˇsevi c, 2017). A korábbi kísérleteknek megfelelően (Chen és mtsai, 2019; Wang et al., 2020) eredményeink azt mutatták, hogy a szérum EPO szintje csökkent CKD-anémiás patkányokban. A vese EPO mRNS és fehérje szintjét CKD patkányokban detektáltuk, a vese EPO fehérje szintje pedig kismértékben csökkent az ál-csoporthoz képest, míg a vese EPO mRNS mennyisége degradált és mértéke nagyobb volt, mint a szérum EPO szint. A vese az EPO-szintézis elsődleges forrása felnőtteknél és ERSD-betegeknélvesetovábbra is képes eritropoetint termelni (Bernhardt et al., 2010). Az endogén szérum EPO-szintek korrigálására és a vese anémiához való alkalmazkodásra a vese EPO-termelését aktiválták, bárvesesérüléscsökkent EPO mRNS expresszió (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). A JP kezelés után a szérum EPO szint emelkedett, valamint a vese EPO mRNS és fehérje szintje egyaránt javult. Korábbi vizsgálatunkban a JP stimulálhatta a HRE transzkripciós aktivitását és fokozta az EPO gént (Chen et al., 2014). Ezért azt feltételeztük, hogy a JP képes helyreállítani a CKD patkány szérum EPO szintjét a szabályozott vese anémiához, amihez hozzájárulhat a stimulált vese EPO gén mRNS-szintű expressziója.

A kéregben a HIF{0}} főként a tubulárisban, a HIF-2 pedig a vese interstitiumában volt megtalálható. Mivel az EPO-t főként fibroblasztok termelik, amelyekben a HIF-2 egy helyen található, ez alátámasztja, hogy a HIF-2 szerepet játszhat az EPO-termelés szabályozásában (Maxwell, 2003). Vizsgálatunk során azt találtuk, hogy a HIF-1 és HIF-2 a CKD által aktiválható, a JP-kezelés pedig stimulálhatja a HIF-1 és HIF-2 aktivitást a CKD patkányokhoz képest. . Bebizonyosodott, hogy a HIF{10}} jelentős szerepet játszik az EPO-termelés szabályozásában (Kapitsinou és mtsai, 2010), míg a HIF{12}}-upreguláció vesevédő hatást fejthet ki a vesében (Jiang et al. al., 2020), amely közvetve javítja az EPO-termelést. A vese EPO termelést először mRNS szinten szabályoztuk, vérszegénység vagy hipoxia esetén az EPO mRNS expresszióját HIF fehérje stimulációval lehetett fokozni. Korábban farmakológiai kutatások kimutatták, hogy a jujube a sejtmodellben a HIF-fehérje szintjének szabályozásán keresztül serkenti az EPO expressziót (Chen és mtsai, 2014, Lam és mtsai, 2016). Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a JP növelheti az EPO mRNS expresszióját a HIF-fehérjén keresztül, hogy elérje a vese anémia enyhítésének célját.

Ezen túlmenően a jelenlegi eredmények alapján azt feltételezzük, hogy az SCFA-k csökkenése döntő szerepet játszhat a HIF által közvetített EPO-expresszióban, amely hozzájárul a CKD-anémiához. Ezzel ellentétben kimutatták, hogy a megnövekedett ecetsavszint jótékony hatással volt a HIF-2 acetilációra és a CREB-kötő fehérje-HIF 2 komplex létrehozására, és tovább indukálta az EPO expressziót (Xu et al., 2014). A propionsav a HIF-1 /ERK útvonalon keresztül mérsékelte a mitokondriális zavarokat, a hippocampális apoptózist és a neurológiai hiányokat (Cheng és mtsai, 2019). Ezenkívül azt találták, hogy a vajsav stabilizálja a HIF-1 aktív HIF célgéneket a vastagbélsejteken, és enyhíti a vastagbél gyulladásos választ (Kelly et al., 2015). Vizsgálatunk során azt találtuk, hogy az ecetsav, a propánsav és a vajsav szintje szignifikánsan csökkent a HIF-fehérje abnormális expressziójával CKD patkányokban, ami arra utalt, hogy a HIF- stabilitása összefüggésben lehet az SCFA-k csökkenésével, és az SCFA-k a HIF stabilizáló hatása az EPO expresszió szabályozására.

5. Következtetések

Összefoglalva, bebizonyítottuk, hogy a JP javította a CKD-t és a kapcsolódó vérszegénységet, melynek mechanizmusa szerepet játszik az SCFA-k felszabadulásában és az EPO-termelésben. A JP pedig a zsidótövisbogyó bioaktív összetevője lehet a vérszegénység kezelésére. Ezek az eredmények bizonyítékot szolgáltathatnak a JP táplálék-kiegészítőként történő továbbfejlesztésére a CKD-vel összefüggő vérszegénység kezelésére.

Etikai nyilatkozat

Kutatásunkban minden állatkísérletet a Guangzhou Kínai Orvostudományi Egyetem Etikai Bizottsága által jóváhagyott protokollok szerint végeztünk, összhangban a National Institutes of Health Laboratóriumi állatok gondozására és felhasználására vonatkozó iránymutatásaival (NIH kiadványok száma: 80-23, átdolgozva 1996). Kutatásunk során nem sérti a fenti irányelveket.

Köszönetnyilvánítás

Ezt a munkát a Guangdong tartomány Természettudományi Alapítványa (2018A030313305), a Kínai Természettudományi Alapítvány (81804052, 81973577 és 82004248), a Shenzheni Tudományos és Technológiai Terv Projektje (JSGG2012010. Kínai Professzionális Gyógyszerészeti és Technológiai Terv) (JSGG2012010. Kínai Professzionális Medicine Bur619112910221663171919112910221663) támogatja. 20201320).

Hivatkozások

Al-Harbi, NO, Nadeem, A., Ahmad, SF, Alotaibi, MR, AlAsmari, AF, Alanazi, WA, … Ibrahim, KE (2018). A rövid szénláncú zsírsav, az acetát enyhíti a szepszis által kiváltott akutvesesérülésa NADPH-oxidáz jelátvitel gátlásával a T-sejtekben. International Immunopharmacology, 58, 24–31.
Babitt, JL és Lin, HY (2012). A vérszegénység mechanizmusai CKD-ben. Journal of the American Society of Nephrology, 23(10), 1631–1634.
Bernhardt, WM, Wiesener, MS, Scigalla, P., Chou, J., Schmieder, RE, Günzler, V., …Eckardt, KU (2010). A prolil-hidroxilázok gátlása növeli az eritropoetin termelést ESRD-ben. Journal of the American Society of Nephrology, 21(12),
2151–2156.
Boets, E., Deroover, L., Houben, E., Vermeulen, K., Gomand, SV, Delcour, JA, … Verbeke, K. (2015). Az inulinból származó vastagbél rövid szénláncú zsírsavtermelésének mennyiségi meghatározása in vivo. Nutrients, 7(11), 8916–8929.

Cai, Y., Liu, W., Lin, Y., Zhang, S., Zou, B., Xiao, D., … Xie, Z. (2019). A vegyület poliszacharidok javítják a kísérleti vastagbélgyulladást a bél mikrobiota összetételének és funkciójának modulálásával. Journal of Gastroenterology and Hepatology, 34(9),1554–1562.

Chen, G. és Zhang, Q. (2020). A szabad zsírsavak és acilkarnitinek egyidejű mennyiségi meghatározása plazmamintákban danzilhidrazin jelöléssel és folyadékkromatográfiás-hármas kvadrupólus tömegspektrometriával. Analitikai és bioanalitikaiChemistry, 412(12), 2841–2849.

Chen, J., Lam, CT, Kong, AY, Zhang, WL, Zhan, JY, Bi, CW, … Tsim, KW (2014). A Ziziphus jujuba gyümölcs (jujuba) kivonata az eritropoetin expresszióját indukálja hipoxiával indukálható faktor-1 révén tenyésztett Hep3B sejtekben. PlantaMedica, 80(17), 1622–1627.

Chen, J., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Li, Z., Qi, A., … Li, S. (2019). A Jian-Pi-Yi-Shen főzet enyhíti a vese anémiát 5/6 nefrektomizált patkányokban: Eritropoetin termelés hipoxia által indukálható faktor jelátvitel útján. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2019, 1–8.
Cheng, Y., Mai, Q., Zeng, X., Wang, H., Xiao, Y., Tang, L., … Ding, H. (2019). A propionát enyhíti a pentiléntetrazol által kiváltott rohamokat, az ebből következő mitokondriális zavarokat, a neuronnekrózist és a neurológiai hiányosságokat egerekben. Biochemical Pharmacology, 169, 113607. cikk.
Feng, YL, Cao, G., Chen, DQ, Vaziri, ND, Chen, L., Zhang, J., … Zhao, YY (2019). A mikrobiom-metabolomika feltárja a glicin-konjugált metabolitokhoz és a poliamin-anyagcseréhez kapcsolódó bélmikrobiótát krónikus vesebetegségben. Cellular and Molecular Life Sciences, 76(24), 4961–4978.
Garrido, P., Ribeiro, S., Fernandes, J., Vala, H., Bronze-da-Rocha, E., Rocha-Pereira, P., … Reis, F. (2015). Vas-hepcidin dysmetabolizmus, vérszegénység és vese hipoxia, gyulladás és fibrózis a maradék vese patkány modellben. PLoS ONE, 10. cikk (4), e124048. cikk.
Higashi, T. és Ogawa, S. (2016). Izotópkódolt ESI-t fokozó derivatizáló reagensek biológiai mintákban lévő metabolitok differenciálanalíziséhez, mennyiségi meghatározásához és profilálásához LC/MS segítségével: Áttekintés. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 130, 181–193.
Ji, X., Hou, C., Gao, Y., Xue, Y., Yan, Y. és Guo, X. (2020). Jujuba (Ziziphus jujuba Mill.) poliszacharidok bélmikrobiótát moduláló hatásainak metagenomikus elemzése vastagbélrák egérmodellben. Food & Function, 11(1), 163–173.
Ji, X., Hou, C., Yan, Y., Shi, M. és Liu, Y. (2020). A zsidótövisbogyó (Ziziphus jujuba Mill.) terméséből származó poliszacharidok szerkezeti jellemzésének és antioxidáns hatásának összehasonlítása. International Journal of Biological Macromolecules, 149, 1008–1018.

Ji, X., Hou, C., Zhang, X., Han, L., Yin, S., Peng, Q., … Wang, M. (2019). A Zizyphus jujuba cv. hatásának mikrobiometabolomikus elemzése. Muzao poliszacharidok fogyasztása vastag- és végbélrákos egereken a széklet mikrobiotája és metabolitjai.International Journal of Biological Macromolecules, 131, 1067–1076.

Ji, X., Peng, Q., Yuan, Y., Shen, J., Xie, X. és Wang, M. (2017). A poliszacharidok izolálása, szerkezete és bioaktivitása a zsidótövisbogyó gyümölcséből (Ziziphus jujuba Mill.): Áttekintés. Élelmiszer-kémia, 227, 349–357.
Jiang, N., Zhao, H., Han, Y., Li, L., Xiong, S., Zeng, L., … Sun, L. (2020). A HIF-1 javítja a tubuláris sérülést diabéteszes nephropathiában a mitokondriális dinamika HO-1-közvetített szabályozásával. Sejtburjánzás, 53. cikk (11), e12909. cikk.
Kapitsinou, PP, Liu, Q., Unger, TL, Rha, J., Davidoff, O., Keith, B., … Haase, VH (2010). A máj HIF-2 szabályozza az eritropoetikus válaszokat a hipoxiára vesevérszegénységben. Blood, 116(16), 3039–3048.
Kelly, CJ, Zheng, L., Campbell, EL, Saeedi, B., Scholz, CC, Bayless, AJ, … Colgan, SP (2015). A mikrobiotából származó rövid láncú zsírsavak és a bélhám HIF közötti áthallás növeli a szöveti gát funkcióját. Cell Host & Microbe, 17 (5), 662–671.
Koh, A., De Vadder, F., Kovatcheva-Datchary, P., és B¨ ackhed, F. (2016). Az élelmi rostoktól a gazdaszervezet fiziológiájáig: A rövid szénláncú zsírsavak kulcsfontosságú bakteriális metabolitok. Cell, 165(6), 1332–1345.
Lakshmanan, AP, Al, ZM, Ali, BH és Terranegra, A. (2021). A prebiotikus gumi akác hatása a bél mikrobiom összetételére kísérleti krónikus vesebetegségben szenvedő patkányokban. Biomedicine & Pharmacotherapy, 133, cikk
110992.
Lam, C., Chan, PH, Lee, P., Lau, KM, Kong, A., Gong, A., … Tsim, K. (2016). Jujube (Ziziphus jujuba) tartalmú gyógynövényfőzetek kémiai és biológiai értékelése: Eritropoetin expresszió indukciója tenyészetekben. Journal of Chromatography BAnalytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 1026, 254–262.
Lappin, TR és Lee, FS (2019). Frissítés a HIF mutációiról: EPO útvonal és szerepük az eritrocitózisban. Blood Reviews, 37, 100590. cikk.
LeBlanc, JG, Chain, F., Martín, R., Bermúdez-Humaran, ´ LG, Courau, S., & Langella, P. (2017). Jótékony hatások a rövid szénláncú zsírsavak és a kommenzális és probiotikus baktériumok által termelt vitaminok gazdaszervezet energiaanyagcseréjére. Mikrobasejtgyárak, 16 (1), 79.
Li, L., Ma, L. és Fu, P. (2017). Bél mikrobiotából származó rövid szénláncú zsírsavak és vesebetegségek. Drug Design Development and Therapy, 11, 3531–3542.
Li, L. és Shi, JY (2013). A fahéjkéreg poliszacharid- és lipidkomponenseinek elemzése GC-MS-sel. Zhong Yao Cai, 36(4), 578–580.
Liu, G., Liu, X., Zhang, Y., Zhang, F., Wei, T., Yang, M., … Zhao, Z. (2015). Zizyphus jujube cv.-ből kinyert poliszacharidok májvédő hatása. Huanghetanzao. International Journal of Biological Macromolecules, 76, 169–175.

Locatelli, F., Fishbane, S., Block, GA és Macdougall, IC (2017). A hipoxia megcélzása Indukálható faktorok anémia kezelésére krónikus vesebetegeknél. American Journal of Nephrology, 45(3), 187–199.

Locatelli, F., Hannedouche, T., Fishbane, S., Morgan, Z., Oguey, D. és White, WB (2019). A metoxi-polietilén szív- és érrendszeri biztonsága és minden okozta halálozás

Glikol-epoetin béta és más eritropoézist serkentő szerek a CKD vérszegénységében: Randomizált noninferiority vizsgálat. Az American Society of Nephrology klinikai folyóirata: CJASN, 14(12), 1701–1710.
Maxwell, P. (2003). HIF-1: A vese szempontjából különleges jelentőségű oxigénválaszrendszer. Journal of the American Society of Nephrology, 14(11), 2712–2722.
Meijers, BK és Evenepoel, P. (2011). A bél-vese tengely: Indoxil-szulfát, p-krezil-szulfát és a CKD progressziója. Nephrology Dialysis Transplantation, 26(3), 759–761.
Mikami, D., Kobayashi, M., Uwada, J., Yazawa, T., Kamiyama, K., Nishimori, K., … Iwano, M. (2020). A rövid szénláncú zsírsav enyhíti az adenin által kiváltott krónikus vesebetegséget az FFA2 és FFA3 útvonalakon keresztül. Biochimica Biophysica Acta-Molecular and Cell Biology Lipids, 1865(6), 158666. cikk.
Morton, DB és Griffiths, PH (1985). Útmutató a fájdalom, szorongás és kényelmetlenség felismeréséhez kísérleti állatokban és hipotézis az értékeléshez. Állatorvosi jegyzőkönyv, 116(16), 431–436.
Panjeta, M., Tahirovi´c, I., Sofi´c, E., Cori ´´´c, J., & Derviˇsevi´c, A. (2017). Az eritropoetin és a hemoglobin szintjének értelmezése a krónikus vesebetegség különböző szakaszaiban szenvedő betegeknél. Journal of Medical Biochemistry, 36(2), 145–152.
Pappa, M., Dounousi, E., Duni, A., & Katopodis, K. (2015). Az anémia kevésbé ismert patofiziológiai mechanizmusai diabéteszes nephropathiában szenvedő betegeknél. International Urology and Nephrology, 47(8), 1365–1372.
Sakashita, M., Tanaka, T. és Nangaku, M. (2019). Hypoxia-indukálható faktor-Prolil-hidroxiláz domén inhibitorok a vérszegénység kezelésére krónikus vesebetegségben. Contributions to Nephrology, 198, 112–123. https://doi.org/10.1159/000496531.
Schodel, ¨ J. és Ratcliffe, PJ (2019). A hipoxia jelzésének mechanizmusai: új következmények a nefrológiában. Nature Reviews Nephrology, 15(10), 641–659.
Tako, E., Glahn, RP, Knez, M. és Stangoulis, JC (2014). A búza prebiotikumok hatása a vashiányos brojlercsirkék bélbaktérium-populációjára és vasállapotára. Táplálkozási Lap, 13, 58.
Tang, WH, Wang, Z., Kennedy, DJ, Wu, Y., Buffa, JA, Agatisa-Boyle, B., … Hazen, SL (2015). A bélmikrobióta-függő trimetilamin-N-oxid (TMAO) útvonal hozzájárul mind a veseelégtelenség kialakulásához, mind a halálozási kockázathoz krónikus vesebetegségben. Circulation Research, 116(3), 448–455.
Thavarajah, S. és Choi, MJ (2019). Az eritropoézist stimuláló szerek alkalmazása CKD-s és rákos betegeknél: klinikai megközelítés. American Journal of Kidney Diseases, 74(5), 667–674.
Wang, F., Yu, H., Huang, S., Zheng, L., Zheng, P., Zhang, S., … Chen, J. (2020). A Jian-PiYi-Shen szabályozza az EPO és a vas-újrahasznosító fehérje expresszióját krónikus vesebetegségben szenvedő vérszegény patkányokban: A hipoxia indukálható faktor-2 felhalmozódása ERK jelátvitelen keresztül. Bizonyítékokon alapuló kiegészítő és alternatív gyógyászat, 2020, 8894257.
Wang, S., Lv, D., Jiang, S., Jiang, J., Liang, M., Hou, F., … Chen, Y. (2019). A rövid szénláncú zsírsavak, különösen a butirát mennyiségi csökkenése hozzájárul a krónikus vesebetegség progressziójához. Clinical Science, 133(17), 1857–1870.
Webster, AC, Nagler, EV, Morton, RL és Masson, P. (2017). Krónikus vesebetegség. Lancet (London, Anglia), 389(10075), 1238–1252.
Xie, X., Yang, X., Wu, J., Ma, J., Wei, W., Fei, X., … Wang, M. (2020). A Trib1 hozzájárul az ischaemia/reperfúzió által kiváltott akut vesekárosodásból való felépüléshez a vese makrofágok polarizációjának szabályozásával. Frontiers in Immunology, 11, 473.
Xu, M., Nagati, JS, Xie, J., Li, J., Walters, H., Moon, YA, … Garcia, JA (2014). Az acetát kapcsoló szabályozza a stressz eritropoézist. Természetgyógyászat, 20(9), 1018–1026.
Yue, Y., Wu, S., Li, Z., Li, J., Li, X., Xiang, J., … Ding, H. (2015). A vadon élő zsidótövisbogyó poliszacharidjai védenek a kísérleti gyulladásos bélbetegségek ellen azáltal, hogy lehetővé teszik a fokozott bélgát funkciót. Food & Function, 6(8), 2568–2577.

Zhao, S. és Li, L. (2018). Danzilhidrazin izotóp jelölés LC-MS az átfogó karbonsav szubmetabolom profilalkotáshoz. Analytical Chemistry, 90(22), 13514–13522.

Zheng, L., Chen, S., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Yang, X., … Chen, J. (2020). A bélmikrobióta különböző válaszai a Jian-Pi-Yi-Shen főzetre a nefrektomizált patkányok 5/6 részében javult klinikai eredményekkel járnak. Frontiers in Pharmacology, 11, 604.