A makrofágok kimerülése csökkenti a H-faktortól függő immunkomplex-mediált glomerulonephritis betegségpatológiáját Ⅱ

3. Eredmények

Egerekben CSS-t indukáltunk lólép apoferritinnel végzett ismételt immunizálással. Az állatok aktív antiapoferritin IgG humorális immunrendszert hoznak létreválaszt, és IgG-t raknak le a glomerulusokban. Korábbi vizsgálataink kimutatták, hogy megnövekedett Mϕbeszivárgás a vesékbeebben a beállításban.

3.1. A makrofág génexpresszió fokozódik az FH-függő ICGN vesékben. Az FH-dependens ICGN vesékben az Mϕs jelenlétének értékelésére qRT-PCR-t végeztünk M2 makrofág markerekkel, CD204-gyel (Mϕ scavenger receptor 1) és CD206-tal (Mϕ mannóz receptor 1) [21–24]. Mindkét gén expressziója a vesében szignifikánsan megnövekedett az apoferritin kezelést követően FHKO egerekben (1. ábra), ami arra utal, hogya makrofágok fokozott jelenléte a vesében.

KATTINTSON IDE, HOGY TERMÉSZETES SZERVES CISTANCHE KIVONATOT SZEREZZE MEG 25% ECHINAKOZIDOT ÉS 9% AKTEOZIDOT A VESEMŰKÖDÉSÉRT

A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszterna exportőre:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Vásároljon további specifikációkért:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Időbeli változás a klodronátkezelés hatására vese-makrofág-infiltrációban apoferritinnel kezelt FHKO egerekben. Az FH-függő ICGN-ben az Mϕs csökkentésének hatékony módszerének meghatározásához fh-/- egerekben kimerítettük az Mϕs-t.

3. ábra: Kiegészítő adatok. Adjuk az F4/80+ monociták áramlási citometriai profilját a kontroll és a klodronáttal kezelt egerekből. Az F4/ 80+ sejtek jelentősen, kevesebb mint 10%-kal csökkennek klodronátos kezelés hatására. Minden n időpontban=6.

3.4. A makrofágok kimerülése csökkenti a glomerulárist

Patológia az FH-közvetített ICGN-ben. A kísérlet végén értékeltük az immunkomplex lerakódásokat a vesében és az ICGN hisztopatológiai jellemzőit. A C3 és IgG immunfluoreszcens festése azt mutatta, hogy az Mϕ kimerülése nem modulálta az immunkomplexeket ebben a helyzetben. A reprezentatív immunfluoreszcens festődést és a hisztopatológiát az 5. ábra mutatja be. Az elsődleges hisztopatológiai jellemző a glomerulus csomók diffúz hipercellularitása volt CSS-ben szenvedő fh-/- egerekben, amely szignifikánsan csökkent az Mϕs kimerülésekor.

3.5. A makrofágok modulálják a citokineket FH-függő ICGN-ben.

Egyszer Mϕsbeszivárog a vesébeés gyulladásos ingereknek vannak kitéve, citokineket szabadítanak fel. Sóoldattal, apoferritinnel vagy apoferritinnel és klodronáttal kezelt FHKO egerekben ELISA-val értékeltük a plazmában keringő TNF és IL-6, valamint a vese mCSF szintjét. A keringő IL-6 szintje nagyon alacsony volt a vad típusú egerekben, és emelkedett az FHKO egerekben, és csökkent a klodronáttal kezelt FHKO egerekben (6. ábra). A három citokin, a TNF , az IL-6 és az mCSF szignifikánsan megemelkedett az apoferritinnel kezelt egerekben a sóoldattal kezelt kontrollokhoz képest. A klodronát által okozott Mϕ kimerülés jelentősen korlátozta a citokinek növekedését ebben a helyzetben

3.6. Profibrotikus makrofágok modulálják

Molekulák és laminin az FH-függő ICGN-ben. Egyszer aa vesékben betegség alakul ki, hajlamosak fibrotikussá válni. Az Mϕ-k profibrotikus molekulák túltermelésével vesznek részt a fibrotikus folyamatban. A valós idejű PCR a transzformáló növekedési faktor-béta1 (TGFbeta1) mRNS expressziójának 75%-os növekedését, a metalloproteináz-9 (MMP9) expressziójának 100%-os növekedését és a laminin mRNS 230%-os növekedését mutatta ki. Az mRNS expresszióval összhangban a laminin fehérje expressziója szignifikánsan megnövekedett a CSS-ben szenvedő fh-/- egerekben, ami Mϕs hiányában csökkent (7. ábra).

4. Megbeszélés

Legutóbbi vizsgálataink kimutatták, hogy FH hiányában az egerek diffúz állapotba kerülnekproliferatív glomerulonephritis(GN) F4/80+ Mϕ-vel az IC-k helyei körül [10]. Vizsgálataink továbbá azt mutatják, hogy a Cd11b−/− fh−/− egereknél a glomerulonephritis súlyosbodott [26]. Tekintettel arra, hogy a megnövekedett gyulladásos M1 makrofágok jelenléte és tartós aktiválódása szöveti patológiát okozhat, és gyulladásgátló fenotípusba való repolarizációjuk segít a betegség patológiájának feloldásában, a jelenlegi vizsgálat célja az Mϕs szerepének további megértése a fh-ben. -/- egerek ICGN-nel. Az Mϕs megnövekedett jelenléte a vesében és a betegség patológiájának feloldása a makrofágok kimerülése révén az FH-mediált ICGN során, azt mutatják, hogy az Mϕ-k kritikus szerepet játszanak ebben a környezetben, és ezért fontos terápiás célpontok lehetnek ebben a környezetben.

5. ábra: Az Mϕs kimerülése csökkenti a glomeruláris patológiát FH-függő ICGN-ben. Adott reprezentatív kép a glomerulusokról sóoldattal kezelt (a), apoferritinnel (b) és apoferritin+klodronáttal kezelt FH-hiányos egerekből. Az (A) szakaszban a metszetek C3-mal (zöld) és IgG-vel (piros) festettek, míg a (B) a PAS-szal festett metszeteket mutatja. Az apoferritin-kezelés hatására megnövekedett IgG-lerakódások változatlanok maradtak, míg a glomerulusok a makrofágok kimerülése miatt a normálishoz közelítettek.

Az FH hiánya megnövekedett C5a termeléshez vezet. A C5a kötődik a C5aR1-hez, jelezve a Mos-t a vesében, ahol hozzáadódik a gyulladásos környezethez. Ezen túlmenően, vizsgálataink azt is kimutatták, hogy ebben a túlzott C5a-termelésben a C5a inaktiválása korlátozza a betegséget [10]. A Mos aktiválása polarizálódik, de kontinuum állapotban maradnak [27]. Eredményeink ebben a tanulmányban azt mutatják, hogy a CSS-ben a glomeruláris betegségek csökkentek azokban az fh-/- egerekben, amelyekben az Mϕs kimerült, összehasonlítva a makrofág-kiürülés nélküli fh-/- egerekkel. Így az Mϕs által okozott ICGN megszüntetése fh-/- egerekben csökkenti a betegség patológiáját. Az Mϕ-k azonban a helyreállítási folyamathoz is szükségesek, és mivel az Mϕ-k állapotát pro-gyulladáscsökkentő állapotba változtatják, és fordítva, a jövőbeni törekvésünk lesz annak megértése, hogy a Mϕs táj megváltoztatása anélkül, hogy kimerítené, megváltoztathatja-e a betegség patológiáját.

Az Mϕ-k fontos szerepet játszanak a fibrózis beindításában és fenntartásában, valamint részt vesznek a fibrózis elnyomásában, megszüntetésében és visszafordításában [28]. Eredményeink a CD204+ és CD206+ Mϕ markerek fokozott kifejeződését mutatják, ami arra utal, hogy megnövekedett jelenlétük ebben a beállításban. Mivel ezek az Mϕ-k a profibrotikus molekulák fő forrásai, a TGF -1 és az MMP9 növekedését mutató eredményeink arra utalnak, hogy ezek az Mϕ-k különböző mechanizmusokon keresztül közvetlenül és közvetve is hozzájárulhatnak a fibrotikus folyamatokhoz az FH-közvetített ICGN-ben ( 1,3,8,44). A TGF -1 a citokinszabályozás révén megváltoztathatja a fibrózist. Ezenkívül a TGF -1 modulálja a C3 és a B faktor bioszintézisét és expresszióját a monocitákban [29], és a komplement megváltozása az immunsejtekben és a vesesejtekben elősegítheti a szöveti fibrózist [30]. A makrofágok és a komplement közötti pontos kölcsönhatásokat, az érintett mechanizmus(oka)t, szerepüket és a szöveti kompartmentalizációt azonban meg kell fejteni [31]. Vizsgálataink azt mutatták, hogy a laminin csökkent expressziója az Mϕs-hiányos egerekben az Mϕ-elégséges egerekhez képest. Ahhoz, hogy jobban megértsük, hogyan szabályozza az FH a fibrotikus folyamatot, meg kell határoznunk az FH által közvetített ICGN-ben jelen lévő specifikus Mϕ alcsoportokat, és meg kell tisztáznunk az egyes alcsoportok hozzájárulását. Ezek a vizsgálatok fontosak, mivel a kiegészítő terápiák klinikai valósággá váltak. A komplement kaszkád különböző célpontjai ellen gátlókat fejlesztettek és fejlesztenek, amelyek blokkolják az aktiválási útvonal(ok) downstream lépéseit. Jelenleg az egyik klinikai használatban lévő komplement inhibitor az anti-C5 antitest, az Eculizumab [32]. Ezért a patogén komplement komponensek azonosítása a betegségben és ennek kiegészítése a Mϕs populáció szabályozásával nem triviális szempont.

7. ábra: Laminin lerakódás beFH-hiányos vesékICGN esetén az Mϕs kimerülése csökkenti. (a) qRT-PCR a TGFB, MMP9 és laminin esetébenvese mRNSegerekből izoláltuk 5 hét sóoldat és apoferritin és 3 hét klodronát után. A kifejezés GAPDH-ra van normalizálva (n=6/csoport). (b) Reprezentatív IF-mikroszkópos felvételek laminin festéshez ugyanazon egércsoportok veséjében. ∗P < 0:01.

Összefoglalva, itt megvizsgáltuk az Mϕs szerepét az FH-függő ICGN modellben. Az eredmények alkalmazhatók szabályozatlan immunkomplexekkel történő komplementaktiváció esetén is, mint például a különböző betegségekben megfigyelteknél, beleértve a lupus nephritist, az IgA nephropathiát és a membranosus nephropathiát. Megmutatjuk mind az FH általi komplement szabályozás, mind az Mϕs státusz fontosságát a betegségben. Így a komplement kaszkád farmakológiai célzása és az Mϕs státusz IC-közvetített GN-ben potenciális klinikai jelentőséggel bír.

Hivatkozások

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni és I. Colmegna,"Autoimmun szenzorineurális halláskárosodás: a fülgyógyászat-reumatológia interfész," Reumatológia, vol. 52. sz. 5, 780. o–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin és AP Robertson,"A kolinomimetikus morantel az Ascaris suum ACR-16 nAChR nyílt csatorna blokkolójaként," Gerinctelen idegtudomány, vol. 16. sz. 2016. 4.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath és FC Fer venza,"A komplement alternatív útvonalának diszregulációja által okozott vesebetegség: etiológiai megközelítés," Az American Society of Nephrology folyóirata, vol. 26. sz. 12., 2917. o– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Komplementer és autoimmun glomeruláris betegségek," Aktuális irányok az autoimmunitásban, vol. 7, 165. o– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"A komplement rendszer az adaptív immunitás szabályozásában," Természet Immunológia, vol. 5, sz. 10., 981. o– 986, 2004. [6] MV Carroll és RB Sim,"Kiegészítés az egészségben és a betegségekben," Haladó gyógyszer szállítás vélemények, vol. 63. sz. 12., 965. o–975, 2011. 

[7] M. Noris és G. Remuzzi,"A komplement aktiválásának és szabályozásának áttekintése," Nefrológiai szemináriumok, vol. 33. sz. 6., 479. o–492, 2013. 

[8] Ferreira alelnök, AP Herbert, C. Cortes és társai,"A sejteken lévő fiziológiás polianionok és C3b komplexéhez a H faktor kötődése károsodott atípusos hemolitikus urémiás szindrómában," Immunológiai folyóirat, vol. 182. sz. 11., 7009. o–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe és RJ Quigg,"A h komplement faktor korlátozza az immunkomplex lerakódását és megakadályozza a bejutástFlammáció és hegesedés krónikus szérumbetegségben szenvedő egerek glomerulusaiban," Az American Society of Nephrology folyóirata, vol. 16. sz. 1, 52. o–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang és RJ Quigg,"A C5a receptor kulcsszerepet játszik az immunkomplex glomerulonephritisben a H-de komplement faktorbanFirégi egerek," Vese Nemzetközi, vol. 82. sz. 9, 961. o–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph és PM Henson,"Monocita differeenciációs és antigénbemutató funkciók," Természet Vélemények. Immunológia, vol. 17. sz. 6., 349. o–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang és DC Harris,"Makrofágok heterogenitása, fenotípusai és szerepei a vesébenFiBrosis," Vese Nemzetközi. Kiegészítés, vol. 4, sz. 1, 16. o–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang és társai,"A vese F4/80+ CD11c+ mononukleáris fagocitái a makrofágok fenotípusos és funkcionális jellemzőit mutatják egészségben és adriamicin nefropátiában," Az American Society of Nephrology folyóirata, vol. 26. sz. 2, 349. o–363, 2015.