Sok tanulmány megerősítette, hogy az allergiás betegségek nem csak a veleszületett immunrendszer aktiválódásának következményei

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

Absztrakt:A hízósejtek nagyon fontos szerepet játszanak a bőrallergiákban és -gyulladásokban, beleértve az atópiás dermatitist és a pikkelysömört is. Korábban azt találták, hogy a referencia gyulladáscsökkentő és öregedésgátló hatással bír a bőrön, de a hízósejtekre gyakorolt ​​hatását még nem vizsgálták részletesen. Ebben a tanulmányban hízósejteket (RBL-2H3 sejtek) és egérmodelleket használtunk a referencia antiallergiás és gyulladásos hatásainak tanulmányozására. Először is azt találtuk, hogy a referencia gátolja a hízósejtek degranulációját és a citokinek expresszióját. Ezenkívül megfigyeltük, hogy amikor a hízósejteket A23187/forbol-12-mirisztát-13--acetáttal (PMA) stimulálták, az intracelluláris kalciumszint emelkedése referenciaként gátolt. A MAPK/NF-KB útvonal foszforilációja szintén csökken a referencia előkezeléssel. Az in vivo vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy a referencia javíthatja a dinitroklór-benzol (DNCB) által okozott dermatitis és hízósejt-infiltráció megjelenését. Ezen túlmenően a védőfehérjék expressziója is helyreáll a bőrben.cisztanchVégül azt találtuk, hogy a referencia csökkentheti a 48/80 vegyület által okozott karcolási viselkedést. Eredményeink összességében azt mutatják, hogy a referencia egy nagyon jó allergia- és gyulladáscsökkentő természetes termék. A hízósejtekre gyakorolt ​​hatása hozzájárul farmakológiai mechanizmusához.

Kulcsszavak:referencia; természetes termék; hízósejt; bőrgyulladás; viszkető

További információért kattintson ide

1. Bemutatkozás

Számos tanulmány megerősítette, hogy az allergiás betegségek nemcsak a veleszületett immunaktiváció, hanem az adaptív aktiváció eredménye is. Közülük a hízósejtek nagyon fontos szerepet játszanak számos allergiás betegségben, például allergiás rhinitisben, asztmában és allergiás dermatitisben. A hízósejtek IgE receptorokat (FceRI) expresszálnak sejtmembránjaikon, az FceRI receptorok pedig nagy affinitást mutatnak az IgE antitestekhez [1,2]. Amikor az antigén-specifikus IgE az FceRI-hez kötődik, kölcsönhatás lép fel, és allergiás reakció lép fel. Az FceRI aggregációja aktiválhatja a receptor tirozin kinázokat, lefelé irányuló reakciókat indíthat el, és elősegítheti a különböző kulcsfontosságú fehérjék (mint például a mitogén által aktivált protein kináz; MAPK-k) foszforilációját, ami végső soron kalciumionok (Ca2 plusz) beáramlásához vezet, ami egy kulcsfontosságú esemény a hízósejtek degranulációjában [3].cistanche AusztráliaAz aktivált hízósejtek degranulálódnak és kémiai mediátorokat szabadítanak fel. Ezek az allergiás reakciókban használt kémiai mediátorok gyulladást okozhatnak [4], így az allergiás tünetek kezelése hízósejt-degranuláció-gátlókat foglal magában. Ezért az IgE által közvetített hízósejtek degranulációjának gátlását gyakran használják új vegyületek azonosítására az allergiás betegségek megelőzésére és kezelésére. Megállapítást nyert, hogy az anti-dinitrofenil (DNP)IgE antitestek és antigének passzív bőr túlérzékenységi (PCA) reakciókat válthatnak ki, mint az azonnali túlérzékenység tipikus in vivo modelljeként és az anti-antigén allergiák lehetséges kutatási gyógyszereként [5,6 ]. Ezenkívül a hízósejtek degranulációját nem immunstimulánsok is okozhatják, például a 48/80 és az A23187 vegyületek. Az A23187 kalcium-ionofórról régóta ismert, hogy serkenti a hízósejtek szekrécióját előre kialakított mediátorok, például hisztamin felszabadulásával a granulátumokból, példaként szolgálva [4] A 48/80 vegyület p-metoxi-N-metil-fenetil-amin vegyes polimere. formaldehiddel térhálósítják, amelyet széles körben használnak hízósejtek független stimulálására [7,8]Ezért megfelelő mennyiségű 48/80 és A23187 vegyületet gyakran használnak reagensként az allergiás reakciók mechanizmusának tanulmányozására. Statisztikai értékelések szerint a lakosság körülbelül 15-20 százaléka szenved atópiás dermatitiszben. Legyen szó akár gyermekekről, akár felnőttekről, akik ebben a betegségben szenvednek, megfelelő kezelés nélkül az atópiás dermatitis pszichés szorongást okozhat a betegeknek, és megterhelheti családi és szociális egészségügyi költségeiket [9]. Sajnos nincs megfelelő kezelési módszer az allergiás dermatitisz gyógyítására. A jelenlegi kezelési lehetőségek továbbra is elkerülik a betegséget okozó allergéneket, és a szteroidok folyamatos alkalmazása a kezelés aranystandardja. Az elkerülhetetlen allergének és a gyógyszerek mellékhatásai új terápiás gyógyszerek sürgős kifejlesztését késztették. A gyógynövényekből és növényekből izolált természetes vegyületek potenciális terápiás szerek forrásai a gyulladásos betegségek megelőzésében és kezelésében, valamint az allergiás betegségekben szenvedő betegek életminőségének javításában.

A Cistanche öregedésgátló hatású

A hivatkozás a Nelumbo nucifera növény lótuszmagjából (a mag embriójából) származik, és egy fő biszbenzil-izokinolin alkaloid. Bizonyítékok állnak rendelkezésre arra vonatkozóan, hogy a referencia számos betegségben számos farmakológiai tulajdonsággal rendelkezik, például rákellenes, antioxidáns, gyulladásgátló és neuroprotektív hatásokkal [10-15].cistanche előnyeiKhan et al. azt találta, hogy a referencia öregedésgátló hatásokat fejt ki azáltal, hogy gátolja a ROS és malondialdehid (MDA) szintjének UV-közvetített növekedését a humán keratinocitákban és a fibroblasztokban[16,17]A közelmúltban azt találtuk, hogy a referencia alternatív gyógyszerként szolgálhat az atópiás betegségek kezelésére. dermatitis vagy más bőrrel összefüggő gyulladásos betegségek[18]. Továbbra is bizonytalan azonban, hogy a hivatkozásnak van-e bőrallergia elleni hatása a hízósejtekben. Ebben a tanulmányban az volt a célunk, hogy megvizsgáljuk a referencia hatását a hízósejtek által közvetített allergiás betegségekre, humán hízósejtvonalak (RBL-2H3 sejtek) és egy 48/80- vegyület és DNCB által kiváltott anafilaxia felhasználásával. egér modell.

La referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un svare alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la referencia tiene una amplia gama de propiedades farmacológicas, como efectos anticancerígenos, antioxidantes, antiinflamatorios y neuroprotectores, en muchas enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et al. encontró que la referencia production efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descubrimos almiento tiemedicina potenciál de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones con anafilaxia 8compuestoy 4NCuestoy 4NCuestoy .

2. Eredmények

2.1. Neferin citotoxicitási teszt patkány hízósejteken (RBL-2H3)

Mivel a patkány bazofil leukémia (RBL)-2H3 sejtek, egy hisztamint felszabadító hízósejt analóg, alkalmas sejtek a hízósejtek által közvetített gyulladás hatásainak vizsgálatára [19], ezeket a sejteket használtuk az antiallergiás hatás vizsgálatára. referencia hatásai. Először azt teszteltük, hogy a referencia képes-e citotoxicitást okozni hízósejtekben. Ha a sejteket 1 és 30 μM közötti referenciával előkezeljük 24 órán keresztül, a sejtek életképességét nem befolyásolja a referencia kezelés (1. ábra).

2.2. A neferin csökkenti a különböző aktivátorok által stimulált RBL-2H3 degranulációs hatását

Az RBL-2H3 sejteket általában a degranuláció in vitro vizsgálatára használják [20-22]Az RBL-2H3 sejtek stimulálása anti-dinitrofenol (DNP)IgE és DNP-konjugált humán szérumalbumin segítségével. (HSA) degranulációt vált ki. Ezenkívül ismert, hogy a hízósejtek degranulálódnak a szintetikus vegyületek hatására, mint például a 48/80 vegyület és az A23187 kalcium-ionofór, és ezeket a vegyületeket kényelmes reagensként használták az in vitro allergiás reakciók mechanizmusának közvetlen tanulmányozására [23, 24]. Az eredmények azt mutatták, hogy az RBL-2H3 citoplazmája, amelyet nem aktivált az aktivátor, korlátozott mennyiségű szekréciós granulátumot tartalmazott.cistanche koleszterinA referencia (10 μM) önmagában végzett kezelése nem befolyásolta az RBL-2H3 aktivitását (2A, B ábra). Különböző aktivátorok, köztük a 48/80 vegyület, az A23187 és az anti-DNP/IgE plusz DNP/HSA hozzáadása azonban egyértelműen megtöltötte a citoplazmát szekréciós szemcsékkel. Elektronmikroszkóp alatt látható, hogy a citoplazmában nagyszámú szekréciós granulátum található, és egyes szekréciós szemcsék még a sejtmembránnal is összeolvadnak, ami degranulációhoz vezet (2C-E ábra). A 10 uM referenciaértékkel végzett előkezelést követően a citoplazmában lévő szekréciós szemcsék száma jelentősen csökkent (2F-H ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a referencia hatékonyan gátolja az RBL-2H3 aktivátor által stimulált aktiválódását és degranulációját.

2.3. A neferin gátolja a PMA/A23187-indukált intracelluláris kalciumszint emelkedését RBL-ben-2H3

A kalciumionok másodlagos hírvivő szerepet töltenek be a sejtaktiválás folyamatában. Az A23187 a leghatékonyabb módja a kalciumionok sejtmembránon keresztüli penetrációjának fokozásának és a hízósejtek aktiválásának serkentésének. A forbol-mirisztát-acetát (PMA) aktiválhatja a Cand protein-kinázt, és növelheti az intracelluláris kalciumionokat, hogy fokozza az A23187 hatását. A hízósejtekben a kalciumionok növekedését szintén fontos tényezőnek tekintik a hízósejtek aktivációjának kiváltásában, így befolyásolja a hízósejtek degranulációját, és több gyulladást okozó citokint és kemokint szabadít fel.cistanche deserticola mellékhatásai,Ezért ez a tanulmány azt kívánta feltárni, hogy a referencia képes-e gátolni a kalciumion-koncentrációt az RBL-2H3-ban, ha gátolja a gyulladást. A kísérleti csoportot 20 percre referencia előkezeléssel vagy anélkül osztottuk, és 1 mM CaClz-t és PMA/A23187-et adtunk hozzá az RBL-2H3 stimulálására és aktiválására. A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az RBL-2H3 különböző koncentrációjú referencia-kezelése önmagában nem befolyásolta az intracelluláris kalciumion-koncentráció növekedését. A PMA/A23187-indukált Ca2t influx csoportban az intracelluláris kalciumion koncentráció szignifikánsan megemelkedett. Az RBL-2H3 sejteket 20 percig előkezeltük referenciával (3 μM és 10 μM), és a kalciumion-koncentráció jelentősen csökkent (3. ábra).

2.4. A neferin csökkentette a gyulladást elősegítő citokinek mRNS-expresszióját a PMA/A23187-ben, amelyet RBL-2H3 stimulál

A bőr immunválasza növeli a hízósejtek számát a szervezetben, majd a hízósejtek gyulladást elősegítő citokineket termelnek, és felgyorsítják a betegség előrehaladását. A gyulladást elősegítő citokinek, különösen a TNF-a, IL-6, IL-1 és IL-8 nemcsak gyulladást váltanak ki, hanem leukocita infiltrációt, granulomaképződést és szöveti fibrózist is okoznak. A PMA/A23187 a hízósejtekre hat, és IL-16, IL-6, TSLP és TNF- termelésére készteti őket, allergiával összefüggő gyulladást okozva. Ezért 20 percig előkezeltük az RBL-2H3-at referenciával, majd 6 órán át PMA/A23187-tel stimuláltuk, hogy megállapítsuk, a referencia képes-e csökkenteni az IL-1, IL{{ mRNS expresszióját. 19}}, TSLP és TNF-a. Az eredmények azt mutatták, hogy a csak referenciával kezelt csoportban a citokin mRNS expressziója nem változott, és a PMA/A23187 gyulladást kiváltó csoportban az mRNS expressziója jelentősen megnőtt. A referenciaként kezelt csoportban azt figyelték meg, hogy az IL-1, IL-6, TSLP és TNF-a mRNS expressziós szintjei szignifikánsan elnyomtak (4. ábra).

2.5. A neferin gátolja a PMA/A23187-MAPK-útvonal indukált foszforilációját RBL-ben-2H3

Korábbi tanulmányok rámutattak arra, hogy a hízósejteknek intracelluláris kalciumionokat kell felszabadítaniuk a MAPK aktiválásához. Ezenkívül a MAPK jelátviteli útvonal szabályozza a monociták, T-limfociták, B-limfociták, citokinek és kemokinek expresszióját, és autoimmunitást indukál. Ez a mechanizmus hasonló a PMA/A23187 aktiválási útvonalához. Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy a referencia részt vehet-e a MAPK útvonalak szabályozásában. Különböző referenciakoncentrációkat (1, 3 és 10 uM) kezeltünk RBL-2H3-mal 20 percig, majd 30 percig PMA/A23187-tel stimuláltuk, hogy gyulladást váltsunk ki. Az eredmények azt mutatták, hogy ha az RBL-2H3-at különböző referenciakoncentrációkkal kezelték, a p38, JNK és ERK fehérjék aktiválódása nem volt hatással. Az egyedül PMA/A23187-tel kezelt csoportban azt találtuk, hogy a p38, JNK és ERK fehérjék aktiválódtak, és jelentős foszforilációt mutatnak. A referenciaként előkezelt csoportban azt figyelték meg, hogy magasabb referenciakoncentráció esetén a p38, JNK és ERK fehérjék foszforilációja jelentősen csökkent (5A-C. ábra).

2.6. A neferin gátolja a PMA/A23187-NF-B útvonal indukált foszforilációját RBL-ben-2H3

A pro-inflammatorikus citokinek expressziója az NF-kB transzkripciós faktor hízósejtekben történő aktiválásától függ. Amikor az IKB fehérje foszforilálódott és lebomlott, az NF-kB felszabadult és a sejtmagba vándorolt, megkötve a megfelelő DNS-re reagáló elemekkel és elősegítve a proinflammatorikus mediátorok transzkripcióját. Számos citokin és kemokin keletkezett, amelyek szabályozzák az immunválaszt, a differenciálódást és a gyulladást. Ezért megvizsgáltuk, hogy a referencia előkezelés befolyásolja-e a PMA/A23187 által indukált fehérje foszforilációt. Különböző referenciakoncentrációkat (1, 3 és 10 μM) kezeltünk RBL-2H3-ra. 20 perc elteltével a PMA/A23187 1 vagy 2 órán keresztül stimulálta az RBL-2H3-at, hogy gyulladást váltson ki. Az eredmények azt mutatták, hogy az RBL-2H3 különböző referenciakoncentrációkkal végzett kezelése önmagában nem befolyásolta az IKBa és az NF-KB foszforilációját. Amikor PMA/A23187-et használtak stimulációra, az IkBo és az NF-KB foszforilációjának jelentős növekedését figyelték meg. A referenciaként előkezelt csoportban azt találták, hogy az IkBa (6A. ábra) és az NF-KB (6B. ábra) foszforilációja jelentősen csökkent.

2.7. A neferin hatása a 2,4-dinitroklór-benzol (DNCB) által kiváltott atópiás dermatitiszre

A betegségkutatás állatmodellje, a DNCB reprezentatív irritáló anyag, amely atópiás dermatitiszt okoz[25]. Kísérletünkben 1 százalék dinitroklór-benzolt (DNCB) használunk 75 százalék alkoholban oldva a szenzibilizációs válasz első szakaszának kiváltására. Referencia (3 mg/kg és 10 mg/kg) és DMSO-ban oldott dexametazon (Dexa, {{10}},2 mg/kg) intraperitoneálisan adtuk be az ötödik napon 10 napig. . A 8., 1. és 14. napon 0,5 százalékos DNCB-t alkalmaztunk a gyulladás kiváltásának második szakaszaként. Az egereket négy csoportra osztották – kontrollcsoport, DNCB csoport, referencia-kezelt csoport és dexametazonnal kezelt csoport –, majd a csoportok közötti összehasonlítást követően a különbségeket feljegyezték. Megfigyeltük, hogy a DNCB atópiás bőrgyulladásos reakciót váltott ki az egerek bőrén. A DNCB alkalmazása után azt találták, hogy az egerek bőre fokozta a bőrpírt és a hámlást. Ezek mind a keratinocita rendellenes proliferációjának, infiltrációjának és az immunsejtek aggregációjának köszönhetők. A 3 mg/kg referencia- és 0,2 mg/kg dexametazonnal négy napon át kezelt csoportnál enyhült a bőrpír. Folytattuk az egerek háti bőrének állapotának megfigyelését a 15. napig. A kontrollcsoporthoz képest a DNCB-csoport bőre erősen kipirosodott és duzzadt volt, és voltak szőrösödések és sebek, amelyeket úgy tűnt, hogy viszketés és fájdalom okoztak. . A referencia- és dexametazon-kezelések után csökkenő mértékű tendenciát tapasztalhatunk (7A ábra). Toluidin kék festést használtunk az aggregált hízósejtek számának megfigyelésére. Mikroszkóp alatt megfigyelve a hízósejtek lilának tűntek. Kvantitatívan kimutatható, hogy a DNCB kísérleti csoportban sok hízósejt infiltrált és halmozódott fel a dermiszben, szignifikánsan megnövekedett a kontrollcsoporthoz képest. A referencia- és dexametazonnal kezelt csoportban az infiltráció, az aggregáció és a hízósejtek száma csökkent (7B, C ábra).

2.8. A neferin javítja az akadályhoz kapcsolódó molekulák mRNS expresszióját a DNCB kezelése után

Az AD által okozott bőrrel kapcsolatos gyulladás abnormális bőrgát funkciót okozhat. Ha a bőrgát hibás, az antigének vagy irritáló anyagok könnyebben behatolnak a bőr hámrétegébe, és bejutnak a szervezetbe, hogy immunrendszeri reakciókat váltsanak ki. Ugyanakkor a differenciálódó fehérjék, köztük a filaggrin, a loricrin és az involucrin termelése elnyomódik. Ezért a sérült bőrgát helyreállítása nagyon fontos az AD megelőzése és kezelése szempontjából [26]. Vizsgálatunkban hivatkozásokat használtunk a DNCB által kiváltott atópiás dermatitisz állatmodelljébe való beavatkozáshoz. Az egerek leölése után a háti bőrszövetet megalapoztuk az RI-qPCR analízishez, hogy kiértékeljük, hogy a referencia javíthatja-e a filaggrin, loricrin és involucrin mRNS expressziójának csökkenését a DNCB kezelése után. Az eredmények azt mutatták, hogy a DNCB kísérleti csoportban szignifikánsan csökkent a filaggrin, loricrin és involucrin mRNS expressziója a kontrollcsoporthoz képest. A filaggrin, loricrin és involucrin mRNS expressziója szignifikánsan megnövekedett a referencia- és dexametazonnal kezelt csoportban a DNCB csoporthoz képest (8. ábra).

Bebizonyítottuk továbbá, hogy a referenciának antiallergén karcolásgátló hatása van. Hízósejt-degranulációs szert, a 48/80-as vegyületet használtuk a karcolási viselkedés indukálására BALB/c egerekben. Amint a 9. ábrán látható, azt találtuk, hogy a referencia kezelés gátolta a 48/80 (50 ug/hely) vegyület által okozott karcolásos viselkedést. Kisebb és nagyobb dózisú referencia (3 és 10 mg/kg) ismételt beadása 5 egymást követő napon keresztül jelentősen csökkentette a 48/80 vegyület által okozott karcolások számát.