Tejexoszómából származó mikroRNS{1}} elnyomja a melanogenezist az Akt-GSK3 útvonalon keresztül

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae és Sang Hoon Kim

Absztrakt:Az exoszómák az intercelluláris kommunikációban vesznek részt azáltal, hogy molekulákat visznek át a donor sejtekből a recipiens sejtekhez. Az exoszómák különféle testnedvekben találhatók, beleértve a vért, a vizeletet, a cerebrospinális folyadékot és a tejet. A tejexoszómák sok endogén mikroRNS-molekulát tartalmaznak. A mikroRNS-ek kicsi, nem kódoló RNS-ek, és fontos szerepet játszanak a biológiai folyamatokban. A tejexoszómák specifikus biológiai funkciói nem teljesen ismertek. Ebben a tanulmányban a hatásait vizsgáltuktejexoszómáka melanintermelésre a melanomasejtekben és a melanocitákban. Azt találtuka tejexoszómák csökkentekmelanintartalom, tirozináz aktivitás, valamint a melanogenezishez kapcsolódó gének expressziója az inmelanoma sejtek és melanociták között. A szarvasmarha-specifikus miR-2478 exoszómákban gátolta a melanintermelést. Azt találtuk, hogy a Rap1a a miR-2478 közvetlen célgénje melanomasejtekben és melanocitákban. A MiR-2478túlexpresszió csökkentette a Rap1a expresszióját, ami a melanintermelés leszabályozásához és a melanogenezishez kapcsolódó gének expressziójához vezetett. A Rap1a expresszió gátlása csökkentmelanogenezisaz Akt-GSK3 jelútvonalon keresztül. Ezek az eredmények alátámasztják a milkexoszómákból származó miR-2478 szabályozó szerepétmelanogenezisa Rap1a közvetlen célzásával. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a tejexoszómák hasznos kozmetikai összetevők lehetnek a javításrafehérítés.

Kulcsszavak: melanogenezis;tej exoszóma; miR-2478; Rap1a

gyógynövényes tartályokmelanin gátló összetevő

1. Bemutatkozás

A Cosmeceutical egy összetett szó, amely a kozmetikai és gyógyszerészeti összetevőket egyesíti, és olyan funkcionális összetevőket tartalmazó kozmetikumokra utal, amelyek gyógyászati ​​hatást fejtenek ki [1]. Korábban bőrgyógyászati ​​eljárások révén javították a bőr állapotát, de az utóbbi időben a kozmetikai szerek iránti érdeklődés megnőtt, mivel a fogyasztók vágynak arra, hogy ezeket a hatásokat kozmetikumokkal érjék el. A kozmetikai ipar az elmúlt években is fokozott érdeklődést mutatott az új kozmetikai összetevők alkalmazása iránt. 2]. A funkcionális kozmetikumok közé tartoznak azok a termékek, amelyek segítik a bőr fehérítését azáltal, hogy megakadályozzák a melanin lerakódását a bőrön.

A melanin, a bőr és a haj színét meghatározó fontos elem, védi a bőrt az ultraibolya sugaraktól [3]. A melanin túlzott képződése azonban egyenetlen bőrtónust, például foltokat és szeplőket okoz [4]. A Microphthalmia transzkripciós faktor (MITF) a melanociták fejlődésének fő szabályozója. A tirozináz (TYR) a melaninszintézis legfontosabb enzime. A melaninszintézis folyamatát a TYR aktiválása indukálja a MITF-en keresztül, amely a melanin szintézis folyamatának kezdeti szakaszában részt vevő fontos enzim, és a tirozin L-formáját vagy a DOPA-t használja szubsztrátként a melanin képzéséhez [5].

A mikroRNS-ek (miR-ek) rövid, nem kódoló RNS-ek, amelyek számos biológiai folyamatban vesznek részt azáltal, hogy szabályozzák a poszt-transzkripciós génexpressziót [6]. A vizsgálatok azt is feltárták, hogy a melanin bioszintézisét mikroRNS-ek szabályozzák. Például arról számoltak be, hogy a miR-143-5p a Tak1 gént célozza meg, és csökkenti a MITF expresszióját, ezáltal gátolja a melaninszintézist [7]. MiR-125b, negatív szabályozójamelanogeneziskimutatták, hogy szabályozza az SH3BP4 pigmentációs gént [8], és a miR-675 a keratinocitákból kiválasztott exoszómákban gátoljamelanogenezisa MITF célzásával [9].

Az exoszómák 30-200 nm méretű, membránnal határolt vezikulák, amelyek DNS-t, RNS-t és peptideket tartalmaznak [10]. Az exoszómák belső komponensei biztonságosan továbbíthatnak információt a szomszédos vagy távoli sejtekbe anélkül, hogy a biológiai folyadékokban lévő enzimek lebontanák őket, így befolyásolva a különböző sejtek körüli mikrokörnyezetet [11].Tej exoszómáktejből származó extracelluláris vezikulák, amelyek stabilak az emberi emésztési folyamatokban [12]. A szarvasmarhatejből kivont exoszómák nemcsak számos fehérjét, például kazeint és laktoglobulint tartalmaznak, hanem mikroRNS-eket is, amelyek rakományként működnek [13–15]. A szarvasmarhatej immunrendszerrel kapcsolatos mikroRNS-eket tartalmaz, például miR-15b, miR-27b, miR-34a és miR-10. Ezek a mikroRNS-ek különösen nagy mennyiségben fordulnak elő a kolosztrumban [16].

Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a tej összetevői gátoljákmelanogenezismelanocitákban; például olyan fehérjék, mint a tejben lévő -laktoglobulin és κ-kazein szabályozzák a melanogenezist [17,18]. A Lactobacillus helveticus NS8-erjesztett tej felülúszójáról kiderült, hogy gátolja az UV-károsodást és a bőr hiperpigmentációját [19]. Arról azonban még nincs jelentés, hogy a szarvasmarhatejben lévő mikroRNS-ek részt vesznek-e a bőrbenfehérítés, bár 79 mikroRNS léteziktej exoszómák[13]. Ezért ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy a mikroRNS-t tartalmazó tejexoszómák gátolják-e a melanin szintézist egér és humán melanoma sejtekben és melanocitákban.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Sejtkultúra

Egér melanoma B16F10 sejteket Dulbecco módosított Eagle tápközegben (DMEM, Hyclone, Logan, UT, USA) tenyésztettünk. A humán melanoma MNT-1 sejteket Minimum Essential Medium (MEM, Hyclone) tápközegben tenyésztettük. Az összes tápközeget 10% borjúmagzati szérummal (FBS, Hyclone, USA) és 1% penicillin-sztreptomicin oldattal egészítettük ki. Normál humán epidermális melanocitákat (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Németország) az 5. vagy 6. passzázsnál melanocita-tenyésztő tápközegben (PromoCell) tartottunk fenn. Ezeket a sejteket 37 °C-on, 5% CO2-t tartalmazó, párásított atmoszférában inkubáltuk.

2.2. Exoszómák tisztítása

A kereskedelmi forgalomban kapható tejet (1 ml) 2000× g-vel centrifugáltuk 10 percig, majd a felülúszót 10,000× g-vel 10 percig centrifugáltuk. A tej felülúszóját egy 0,45 µm-es szűrőn, majd egy 0,2 µm-es szűrőn vezettük át. A kapott oldatot (300 µl) összekeverjük foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) és 300 µl Exoquick exosome precipitációs oldattal (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, USA), és 30 percig inkubáljuk. Az elegyet 10 000 x g-vel 30 percig centrifugáltuk, hogy exoszómapelletet kapjunk, amelyet ezután PBS-ben újraszuszpendáltunk. Az exoszómák méreteloszlását Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Franciaország) készüléken határoztuk meg. Az exoszómákat –80 ◦C-on tároltuk további felhasználás céljából.

2.3. Krio-elektron mikroszkópia

A friss exoszóma-szuszpenzió 3 µl-es aliquot részét adszorbeáltuk egy izzó kisülésű, perforált szénbevonatú rácson (2/2-3 C C-lapos; Protochips, Morrisville, NC, USA), amelyet azután 3 másodpercig blottoltunk. 4 ◦C és mélyhűtött Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, USA) segítségével. A rácsokat folyékony nitrogénben tároltuk, majd átvittük egy Gatan 626 kriomintatartóba (Gatan, Pleasanton, CA, USA). A mintákat 29,000×-es névleges nagyítású krioelektronmikroszkóppal (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, USA), szabványos terepi emissziós pisztollyal (s-FEG) és egy K2Summit kamera (Gatan) 200 kV-os gyorsítófeszültségen.

2.4. Sejtéletképességi vizsgálat (WST Assay)

A melanomasejteket (B16F10, MNT-1) és a humán melanocitákat (NHEM) 4 × 103 sejt/lyuk arányban oltottuk be 96-lyukú lemezekre, és kezeltüktej exoszómák(20 és 50 µg/ml) vagy mikroRNS-utánzót (RNS kétszálú oligonukleotidok) minden kísérlethez. A megjelölt időpontokban a sejtek életképességét az EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Szöul, Korea) fokozott sejtéletképesség vizsgálati kittel mértük a gyártó utasításai szerint. Az abszorbanciát 450 nm-en mértük Vmax mikrolemezes spektrofotométeren (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).

2.5. Melanintartalom mérése

Melanoma sejteket és melanocitákat kezeltünktej exoszómák(20 és 50 µg/ml) 48 órán át. Jéghideg PBS-sel kétszeri mosás után a sejteket 2500 × g-vel centrifugáltuk 10 percig. A sejtpelleteket 90 °C-on 30 percig 10% dimetil-szulfoxidot tartalmazó 1 N NaOH-ban szuszpendáltuk. A teljes melanintartalmat Vmax mikrolemez-spektrofotométeren (Molecular Devices) mértük 405 nm-en.

2.6. Tirozináz aktivitási vizsgálat

A melanoma sejteket és a melanocitákat együtt inkubáltuktej exoszómák48 órán keresztül. A sejteket kétszer mostuk PBS-sel, és 1% Triton X-100-ot és 0,1 mM fenil-metánszulfonil-fluoridot tartalmazó PBS-sel lizáltuk. Centrifugálás után a felülúszót összegyűjtöttük, és egy 96-lyukú lemezre vittük. 0.1 ML-3,4-dihidroxifenilalanin hozzáadása után a mintákat 37 ◦C-on 1 órán át inkubáltuk. A tirozináz aktivitást a 475 nm-en mért abszorbancia alapján, mikrolemezes spektrofotométerrel (Molecular Devices) végeztük.

gyógynövényes tartályok

2.7. Emberi bőrszövetek

A melanocitákat tartalmazó epidermális ekvivalenseket (MelanoDerm, MEL-300B) a MatTek cégtől (Ashland, MA, USA) szereztük be, és EPI-100-NMM-113- táptalajban tartottuk.Tej exoszómákMelanoDerm szövetekre az 1., 3., 7., 9. és 12. napon alkalmaztuk. Negatív kontrollként PBS-t használtunk. A szöveteket a 3., 7., 9., 12. és 14. napon fényképeztük. A pigmentációt az L érték változásainak összehasonlításával mérték (Adobe PhotoshopCC 2015). Az emberi bőrszövet melanintartalmát a 14. napon Solvablemelanin vizsgálattal mértük. Röviden, a MelanoDerm szöveteket Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) segítségével szolubilizáltuk, és egy éjszakán át 60 ◦C-on inkubáltuk. A mintákat vortexeltük, majd 16 500 × g-vel centrifugáltuk 5 percig. A felülúszót egy 96-üregű lemez lyukaiba vittük, és spektrofotométerrel 490 nm-en olvastuk le.

3. Eredmények

3.1. A tejből izolált exoszómák jellemzése

A tehéntejből kinyert exoszómák jellemzőinek vizsgálatához először dinamikus fényszórás segítségével mértük meg az exoszómák méretét. Ennek eredményeként a tejből kivont exoszómák átmérője 80-190 nm (1A ábra). MerttejexoszómaA tisztítás során az Exoquick-tej felülúszó keveréket centrifugáltuk, hogy tejexoszóma-pelletet kapjunk. A CD9, a TSG101 és a HSP70 exoszomális markerek expresszióját pelletekben detektáltuk, de ezek a fehérjék nem voltak jelen a felülúszóban (1A. ábra). Ezenkívül az exoszómák szférikus morfológiáját és méretét krio-elektronmikroszkóppal igazoltuk (ábra). 1B). Megállapították, hogy az exoszómák kerek formájúak, akár 200 nm átmérőjűek is. Ezt követően azt vizsgáltuk, hogy a tejből kinyert exoszómákat felvették-e a sejtek. Egér B16F10 sejteket inkubáltunktej exoszómákPKH26 lipofil fluoreszcens festékkel jelöltük. Ennek eredményeként megfigyeltük, hogy a jelölt exoszómák a sejtek belsejében voltak jelen (S1 ábra).

3.2. A tirozináz aktivitást és a melanintermelést a tej exoszómái elnyomják a B16F10 sejtekben

Ezt követően megvizsgáltuk a kivont exoszómák hatását a sejtek életképességére. A 2A. ábrán látható módon kimutattuk, hogy nincs szignifikáns különbség a sejtek életképességében, függetlenül az exoszóma koncentrációjától.

A lehetséges bőrsejt vizsgálatafehérítéshatásatej exoszómák, a sejteket tejexoszómákkal kezelték. Azt találtuk, hogy a 20 vagy 50 µg/ml koncentrációjú milkexoszómáknak kitett sejtekben a tirozináz aktivitás 43, illetve 59 százalékkal csökkent (2B. ábra). Mivel a tirozináz enzim aktivitásának csökkenése gátolhatja a melanin bioszintézisét, a melanintartalmat tejexoszómákkal végzett kezelés után mérték. Megfigyeltük a melaninszintézis gátlását a kitett sejtekbentej exoszómák(20 vagy 50 µg/ml) 45 százalékkal, illetve 55 százalékkal (2C. ábra). Továbbá a MITF mRNS expressziója csökkent, a tejexoszómák koncentrációja nőtt. A MITF mRNS szintje 59 százalékkal csökkent a 20 µg/ml exoszómákkal kezelt sejtekben, illetve 84 százalékkal az 50 µg/ml exoszómákkal kezelt sejtekben (2D ábra). A tirozináz (TYR) mRNS expressziója szintén 49%-kal és 76%-kal csökkent azokban a sejtekben, amelyek exoszómák ilyen koncentrációjának voltak kitéve (2D. ábra). Az MITF és a tirozináz fehérje szintje is csökkent a tej koncentrációjávalexoszómáknőtt (2E. ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a tejexoszómák gátolják a melanogenezist egér B16F10 sejtekben.

3.3. Szarvasmarha-specifikus miR-2478 a tejexoszómákból elnyomja a melanogenezist

Annak megállapításához, hogy a miR{0}} származéka-etej exoszómákközvetlenül befolyásolják a melanogenezist, a miR-2478 inhibitor transzfektálódott a tejexoszómáknak kitett sejtekbe (50 µg/ml). Tejexoszómák jelenlétében a themiR-2478 inhibitorral transzfektált B16F10 sejtek szignifikánsan magasabb tirozináz aktivitást mutattak, mint a kontrollé (4A. ábra). A melanintartalom magasabb volt a miR-2478 inhibitorral kezelt sejtekben, mint a kontrollsejtekben (4B. ábra). A MITF mRNS expressziója –25-szer magasabb volt a miR 2478-inhibitorral kezelt sejtekben, mint a kontrollsejtekben, és a TYR mRNS expressziója –2-szer magasabb volt, amikor a miR-2478 gátolt (4C. ábra). ). A MITF és TYR fehérjék szintje szintén helyreállt a kitett sejtekbentej exoszómákmiután ezeket a sejteket miR-2478 inhibitorral transzfektáltuk (4D. ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a tej exoszómáiból származó miR-2478 közvetlenül gátolta a melanogenezist az egér melanoma sejtekben.

3.4. A tejexoszómák elnyomják a melanogenezist az Akt-GSK3 útvonalon keresztül

Ezután megvizsgáltuk, hogyan kelltej exoszómákszabályozmelanogenezismelanoma sejtekben a releváns érintett útvonal azonosítása. Bár nem ismert, hogy a Rap1a közvetlenül szabályozza-e a melanogenezist, arról számoltak be, hogy a Rap1a gátolja az Akt foszforilációs rákos sejteket [20]. Ezen információk alapján megvizsgáltuk, hogy a Rap1a modulálja-e az Akt útvonalat a promóció érdekében.

Az Akt-val kapcsolatosmelanogenezisAz aktivált Akt a Gsk3 foszforilációját indukálja a Ser9-nél, és így inaktiválja azt; ez a változás gátolja az MITF transzkripciós aktivitását és leszabályozza a tirozinázt [21,22]. Jelen tanulmányban az Akt és a GSK3 expresszióját értékeltük Rap1a siRNS-sel kezelt sejtekben. Ezekben a sejtekben az Akt-foszforiláció aktiválása megnőtt, és a pGSK3 mennyisége is nőtt (7A. ábra). A GSK3 inaktiválódott az Akt koncentrációtól függő aktiválásával a 20 vagy 50 µg/ml koncentrációjú sejtekben.tej exoszómák(7B. ábra). Az Akt és GSK3 fehérjék szintje a miR-2478utánzóval kezelt sejtekben összhangban volt a fenti eredményekkel (7C. ábra). Ezt követően megvizsgáltuk, hogy a tejexoszómákból származó miR{4}} befolyásolja-e az Akt-GSK3 útvonalat. Tejexoszómák jelenlétében az Akt és GSK3 fehérjék foszforilációja alacsonyabb volt a themiR-2478 inhibitorral kezelt sejtekben (7D. ábra). Ezenkívül a GSK690693 AKT-gátlóval végzett kezelés növelte amelanogenezistejexoszómával kezelt sejtekben. (7E. ábra). Ezek a megállapítások azt jelentették, hogy miR-2478 intej exoszómákleszabályozza a Rap1a-t és elnyomja a melanogenezist az Akt-GSK3 útvonalon keresztül.

cistanche herbafehérítő hatás a bőrön, antioxidáns

3.8. A tejexoszómák gátolták a melanogenezist humán melanoma sejtekben, melanocitákban és melanoderm szövetekben

Tekintettel arratej exoszómákgátoltmelanogenezisegérsejtekben ezután meghatároztuk, hogy a tejexoszómák ugyanolyan hatékonyak-e az emberi sejtekben. Először az MNT{0}} humán melanoma sejtek és az NHEM humán melanociták életképességét vizsgáltuk 20 vagy 50 ug/ml tejexoszómákkal végzett inkubáció után. A 8A. ábrán látható módon nem volt különbség az életképességben. A tirozináz aktivitás 43%-kal, illetve 85%-kal gátolt a 20 ug/ml vagy 50 ug/ml tejexoszómák hatásának kitett MNT-1 sejtekben (8B. ábra). Az NHEM 34 százalékkal, illetve 66 százalékkal csökkent a 20 µg/ml vagy 50 µg/ml tejexoszómákkal végzett kezelés révén (8B. ábra). Ezenkívül a tejexoszómáknak kitett MNT-1 sejtekben és NHEM-ben mértük a melanintartalmat. Ennek eredményeként a melaninszintézis MNT{16}} sejtekben 20 ug/ml vagy 50 ug/mltej exoszómák37%-kal, illetve 58%-kal gátolt, a NHEM-sejtekben pedig a tejexoszóma-kezelés 36%-kal, illetve 62%-kal akadályozta a melaninszintézist (8C. ábra). Ezen kívül a bőrvilágosító hatása atej exoszómákemberi bőrszövetek felhasználásával is megerősítették. Tejexoszómákkal végzett kezelés után emberi szövetekben, relatívfehérítés A hatásokat a 3., 9., 12. és 14. napon figyelték meg. Ennek eredményeként azt találtuk, hogy a tejexoszómának kitett szövetekben a bőr színe világosabbnak tűnt, mint a kontrollszövetekben (8D. ábra). A pigmentáció mértékét L értékként számítottuk ki, amely a fényességet jelző érték. A pigmentáció lassabban haladt előre a tejexoszómával kezelt bőrszövetekben, mint a kontroll bőrszövetekben (8D. ábra). A kísérleti csoport kezelttej exoszómákkisebb melanin részecskeméretet és alacsony mennyiségű melanin pigmentet mutatott a kontrollcsoporthoz képest (8E. ábra). A melanintartalom 14 napos tej utáni mérésének eredményeként az exoszómák gátolták a melaninszintézist az emberi szövetekben (8F. ábra). Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a milkexoszómák gátoljákmelanogenezisaz emberi sejtekben és szövetekben.

4. Megbeszélés

Tanulmányok az exoszómák szabályozásárólmelanogenezisbeszámoltak arról, hogy a keratinocitákból származó exoszómák fehérítő hatásúak. A melanociták és a környező keratinociták funkcionálisan összekapcsolódnak, melanin egységeket képezve a bőr epidermiszében [23,24]. A keratinocitákból származó oldható faktorok szabályozzák a szomszédos melanociták melanogenezisét. A normál keratinocitákból kiválasztott exoszómák elősegítik a melanogenezist azáltal, hogy fokozzák az expressziójátmelanogenezisrokon fehérjék [23–25]. Ezen kívül afehérítésA sejtekből kinyert exoszómákkal végzett tanulmányban nemrégiben arról számoltak be, hogy a humán zsírszövetből származó ős-/strómasejtekből kivont exoszómák bőrvilágosító hatást mutattak egérmelanoma sejtekben [26]. Arról is beszámoltak, hogy a növényekből kivont exoszómák fehérítő hatásúak. A D. morbifera növény leveleiből és száraiból kivont extracelluláris hólyagok melanogén ellenes hatást mutattak az egér melanoma sejteken és az egészséges emberi bőrön [27]. Vizsgálatunkban a tejből származó exoszómák fehérítő hatását vizsgáltuk.

A vérplazmából vagy tenyészfolyadékból kinyert exoszómákkal összehasonlítva a tejből származó exoszómák azzal az előnnyel rendelkeznek, hogy nem csak térfogategységenként nagy mennyiségű extrahálható exoszómát tartalmaznak, hanem alacsony árat is tartalmaznak [26,27]. Merttej exoszómákkémiai összetételük hasonló a sejtmembránokéhoz, alacsonyabb immunogenitást és citotoxicitást mutatnak, valamint nagy a biokompatibilitásuk [28,29]. A közelmúltban, amikor tejexoszómákat etettek DSS (dextrán-szulfát-nátriumsó) által kiváltott vastagbélgyulladás modell egerekkel, a proinflammatorikus citokinek IL-6 és TNF expressziója csökkent a kontrollcsoporthoz képest, ezáltal csökkentve a gyulladást és javítva a nekrotizáló enteritist [30, 31]. Ezenkívül a tejexoszómák bevitele az oszteoporózis betegség egérmodelljében javította az ízületi gyulladást azáltal, hogy növelte a csontsűrűséget és csökkentette a gyulladást elősegítő citokinek mennyiségét [32,33]. A tejexoszómák hatása eddig a gyulladásos citokineket csökkentő immunológiai jelenségekre és a csontfejlődésre összpontosult, mint például a bélgyulladás enyhítése és a csontritkulás javulása. Ebben a tanulmányban a szedési mód melletttej exoszómák, megerősítést nyert, hogy a bőrre alkalmazva hatásos volt a bőrbenfehérítés. Ez arra utal, hogy a jövőben a tejexoszómák segítségével a fiziológiai aktivitás fokozásával különféle betegségek kezelésére is alkalmazható.

Bár ez a tanulmány azt sugalltatej exoszómákgátoljákmelanogenezis, már ismert, hogy a tejsavófehérjék, mint a kazein, -laktoglobulin és -laktalbumin fehérítő hatásúak. A laktoglobulin csökkenti a tirozináz aktivitást az emberi melanocitákban [18], a k-kazein pedig gátolja a melanogenezist egér B16 melanoma sejtekben [17]. Érdekes módon ezen komponensek közül sok a tej exoszómáiban is jelen van. A tejexoszómák proteomereredményei szerint a kazein, -laktoglobulin és -laktalbumin az exoszómákban oszlik meg [15,34,35]. A tejexoszómák mikroRNS-eket és fehérjéket tartalmaznak. Izumi és munkatársai tejexoszómákat használó miRNS microarray eredményeként miR-2478, miR-1777b,miR-1777a, let-7b és miR{{16 }} nagymértékben eloszlottak a tej exoszómáiban [13]. Ebben a vizsgálatban a miR-2478 kivételével ezen mikroRNS-ek közül a miR-1777b, miR-1777a, let-7b és miR-1224 mutatott nincs különbség a tirozináz aktivitásban a kontrollcsoporthoz képest (S2 ábra). miR-2478 volt a legnagyobb mennyiségbentej exoszómákés csökkent tirozinázaktivitás. A fehérítéshez kapcsolódó MITF és TYR gének expressziója azonban jobban csökkent a kezelt sejtekbentej exoszómákmint az egyedül miR{0}}utánzóval kezelt sejtekben. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy számos komponens, köztük a milkexoszómákban lévő mikroRNS-ek részt vesznek afehérítésakció.

A tej exoszómáiban található mikroRNS-ek többsége biológiai funkciókat fejt ki azáltal, hogy gátolja a célgének expresszióját a recipiens sejtekben. Ebben a vizsgálatban a miR{0}} a melaninszintézist is gátolta azáltal, hogy a Rap1a-t célzott génként célozta meg. Bár nem tejből származó mikroRNS-ek voltak, a fehéredéssel kapcsolatos gének expresszióját szabályozó mikroRNS-ekről már beszámoltak. Amikor a humán miR-27a-3p mimikát egérmelanocitákon alkalmazták, gátolta a Wnt3a expresszióját, és ezáltal a melaninszintézist [36], az ektopiás miR-218 pedig az MITF expressziójának csökkentésével gátolta a TYR aktivitást. egér melanoma melanocitákban [37]. miR{10}} reklámozzamelanogenezisa CREB1/MITF/Rab27apathwayen keresztül, melanomában a Kif5b-t célozva [38]. A tej exoszómáiban 79 mikroRNS található

mikroRNS-ek bennetej exoszómáktehenekből származik [13]. Ezért a tejexoszómák élettani aktivitásának további kutatására van szükség.

5. Következtetések

Eredményeink arra utalnaktej exoszómákjelöltek olyan anti-melanogén szerekre, amelyek csökkentik a pigmentációt azáltal, hogy gátolják a melaninnal rokon gének expresszióját (10. ábra). Melanoma sejtekben és melanocitákban a tej exoszómái TYR gátlást és melanintartalom csökkenést mutattak a negatív kontrollhoz képest. Ezenkívül ezeket a hatásokat a miR-2478 közvetítettetej exoszómák. Ezért a tejexoszómák hasznosak lehetnek a funkcionális fejlődéshezfehérítésalacsony citotoxicitású kozmetikumok.

cistanchefehérítő hatás a bőrön, antioxidáns