A Morin enyhíti az Aflatoxin B{0}}kiváltotta máj- és vesekárosodást azáltal, hogy gátolja a heterofil extracelluláris csapdák felszabadulását, az oxidatív stresszt és a gyulladásos reakciókat csirkékben

További információért forduljontina.xiang@wecistanche.com

ABSZTRAKTAz aflatoxin B1 (AFB1) az Aspergillus favus és a parazita aspergillusok által termelt másodlagos metabolit, amely főleg gabonafélékben, földimogyoróban, kukoricában és más terményekben található, és súlyosan veszélyezteti a baromfit, az emberi egészséget és a környezetet. A Morin, a Moraceae növényekből kivont flavonoid vegyület, antioxidáns, antibakteriális ésgyulladáscsökkentőhatások. Azonban, hogy a morinnak van-e védő hatása az AFB{0}}indukáltakramájésvesekárosodáscsibékben nem jelentettek konkrétan. Ebben a vizsgálatban elsősorban a morin AFB{0}}indukált máj- és vesekárosodásra gyakorolt ​​védőhatását erősítettük meg csirkékben, és tisztáztuk a mechanizmusát. Azt találták, hogy a morin jelentősen csökkentheti az alanin-aminotranszferáz (ALT), az aszpartát-aminotranszferáz (AST), valamint a vese kreatinin (CRE) és karbamid-nitrogén (BUN) szintjének májbiokémiai mutatóit. Eközben a kórszövettani vizsgálat kimutatta, hogy a morin hatékonyan enyhítette az AFB1-májkárosodást, beleértve a májsejtek szétesését, duzzanatát és gyulladásos sejtbeszűrődését, és hatékonyan enyhítette a vesekárosodást, beleértve a vesesejtek nekrózisát, hámlását és vakuolizációját. Mechanizmusának további vizsgálata kimutatta, hogy a morin jelentősen gátolta az AFB1-indukált heterofil extracelluláris csapdák (HET) felszabadulását, és csökkentette a malondialdehid (MDA) szintjét, de növelte a szuperoxid-diszmutáz (SOD), a glutation-peroxidáz (GSH-) szintjét. Px) és kataláz (CAT) in vivo. Ezenkívül a kvantitatív valós idejű PCR (qRT-PCR) elemzés azt mutatta, hogy a morin jelentősen csökkentette a tumornekrózis faktor (TNF-), interleukin-6 (I{10}) AFB1-indukálta mRNS-expresszióját is. }) és interleukin-1 (IL-1), indukálható nitrogén-monoxid-szintáz (iNOS), ciklooxigenáz-2 (COX-2), kaszpáz-1, kaszpáz{ {16}} és kaszpáz-11. Összefoglalva, minden eredmény megerősítette, hogy a morin megvédheti az AFB1-máj- és vesekárosodást azáltal, hogy gátolja a HET-ek felszabadulását, szabályozza az oxidatív stresszt és gátolja a gyulladásos választ, ami arra utal, hogy A morin potenciális gyógyszerként használható az aflatoxikózis megelőzésére és kezelésére a baromfitenyésztésben.

Kulcsszavak:morin, aflatoxin B1, heterofil extracelluláris csapdák, gyulladásos válasz, oxidatív stressz

BEVEZETÉS

Az aflatoxin egy nagy toxicitású és alacsony molekulatömegű másodlagos metabolit, amelyet olyan gombák termelnek, mint az Aspergillus flavus, a parazita aspergillus és a specifikus aspergillus, amelyek erős toxicitást, mutagenitást és karcinogenitást mutatnak, amelyek közül az aflatoxin B1 (AFB1) a legerősebb toxicitású. (Rawal et al, 2010). Az AFB1-szennyezés a takarmánybiztonsággal, az állattenyésztéssel és az élelmiszerbiztonsággal volt összefüggésben, sőt az emberi egészséget is veszélyezteti. Ezért fontos megoldani a takarmány AFB1 szennyezettségét, valamint az állatok és állati termékek maradékanyag-problémáját. A terhesség alatti aflatoxinoknak való kitettség veszélyt jelent a magzat egészségére, ami a köldökzsinórvérrel és az anyatejjel átadható anyáról a magzatra (Denning et al., 1990). Beszámoltak arról, hogy az újszülöttek 6-foszfoglükóz-dehidrogenáz-hiányával járó sárgaság szérumában az AFB1-szintet, és azt találták, hogy az újszülöttek 58 százaléka és az anyák 75 százaléka pozitív lett (Raafat et al, 2021). Mint a legfontosabb hepatocelluláris karcinogén, az AFB1 a hepatocelluláris karcinóma (HCC) fő okozója a világon, és a vizsgálatok kimutatták, hogy az AFB1 és a hepatitis B vírus (HBV) együtt fejtik ki a HCC előfordulását (Rushing és Selim, 2019). ).AFB1-indukáltoxidatív stressza toxicitás kifejtésének egyik fontos módja (Abdel-Wahhab és Aly, 2003). Az aflatoxikózis hátterében rejlő mélyebb mechanizmusok és a megelőzésre és kezelésre szolgáló hatékonyabb gyógyszerek azonban még mindig kutatásra várnak.

A Morin (a kémiai szerkezete az 1. ábrán látható) egyfajta természetes pigment, amelyet Moraceae növényekből vonnak ki, és amely a flavonoidokhoz tartozik, és biológiai tulajdonságokkal rendelkezik, beleértve a gyulladáscsökkentőt (Wei és mtsai), (Li et al, 2020), és antioxidáns 2015), antibakteriális (Wei és mtsai, 2015), érelmeszesedés elleni (Zhou et al, 2017), csökkenti a vércukorszintet és antistressz, és széles körben alkalmazzák a szívkoszorúér-betegség, a cukorbetegség és a rák klinikai kezelésében. Beszámoltak arról, hogy a morin antibakteriális hatást fejthet ki a Staphylococcus aureusra, a Bacillusra és a Micrococcus flavusra azáltal, hogy megzavarja a bakteriális DNS-szintézist, és gátolja az adenozin-trifoszfát (ATPáz) aktivitását (Xu et al. 2001). Egyes tanulmányok azt mutatják, hogy a morin gátolhatja a TLR4/NF-xB-t, és aktiválhatja az Nrf2 és HO jelátviteli útvonalakat, hogy megvédje az LPS által kiváltott akutmájsérülésegerekben (Tian et al, 2017). A Morin hatékonyan javíthatja a dietil-ammónium-nitrát által kiváltott májfibrózist patkányokban a Hippo/YAP és a TGF- 1/Smad jelátvitel mérséklésével (Perumal et al, 2017). Jelenleg a jelentések szerint számos vegyület, például az A-vitamin, a Cand E (Alpsoy és Yalvac, 2011) és az eugenol ellenáll aoxidatív stresszaz AFB1 válasza. Hagyományos antioxidáns gyógyszerként azonban a morin védő szerepet is betölthet-e a máj ésvese sérülésaflatoxicosisban szenvedő csirkékben nem jelentettek.

A neutrofil extracelluláris csapdák (NET-ek) jelentik a szervezet első védelmi vonalát az elmúlt években talált külső kórokozókkal szemben. A NET-ek olyan hálózati struktúrák, amelyeknek a csontváza a DNS, amelyet citrullinált hiszton 3 (citH3) és elasztáz módosított (Wei et al.,

2019b), antibakteriális (Brinkmann és mtsai, 2004), antivirális (Saitoh és mtsai, 2012) és parazitaellenes (Wei és mtsai, 2016) hatással. A heterofil extracelluláris csapdák (HET-ek) a NET-ekhez hasonló funkcióval rendelkeznek, kivéve, hogy a HET-ek nem expresszálják a mieloperoxidázt (MPO) (Chuammitri és mtsai, 2009). Kimutatták, hogy az N. canine in vitro képes indukálni a kutya NET-ek felszabadulását, hogy ellenálljon a fertőzésnek (Wei és mtsai, 2016). Egy tanulmány is megerősítést nyert, amely csökkentheti a légúti kitöréseket az abamektin (AVM) pontyban azáltal, hogy gátolja a PI3K-ERK jelátviteli útvonal aktiválását, így gátolja a NET-ek felszabadulását pontyban (Zheng et al, 2020). Az abamektinhez hasonlóan a morin is elismert terápiás gyógyszer, hogy terápiás hatása összefügg-e a NET-ek felszabadulásával, ez további kutatásokat igényel.

Ezért vizsgálatunkban megvizsgáltuk a morin mechanizmusát az AFB{0}}indukált máj- és vesekárosodásra csibékben, és feltártuk védő hatásait. Várhatóan kísérleti alapot biztosít a morin állatorvosi klinikai megvalósításához, valamint kísérleti adatokat és referenciákat szolgáltat a mikotoxinmérgezés megelőzésére és ellenőrzésére.

ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK Reagensek és anyagok

AFB1 (A6636, tisztaság 98 százalék vagy annál nagyobb, Sigma-Aldrich [Shang-hail Trading Co., Ltd., Shanghai, Kína). A Morint (98 százalék vagy annál nagyobb tisztaság) a Chengdu Pusi Biological Co., Ltd.-től (Chengdu, Kína) vásároltuk. Pico Green dsDNS Assay kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Az AST, ALT, BUN és CRE készletét a Nanjing Jiancheng (Nanjing, Kína) Biológiai Mérnöki Intézettől szereztük be. A GSH-Px SOD, CAT és MDA készletét a Nanjing Jiancheng Biológiai Mérnöki Intézetétől (Nanjing, Kína) szereztük be. A RevertAid First Strand cDNS szintéziskészletet a Thermo cégtől szereztük be.qPCR master mixet a Roche-tól (Mannheim, Németország) szereztünk be.

Állatmodellek felállítása

Huszonöt egynapos csibét vásároltak a foshani tenyésztelepről (Foshan, Guangdong), és a fiókákat egy napig adaptívan etették. A második napon megkezdődött a fertőzött csibe modell felállítása. A kísérleti csirkéket véletlenszerűen 5 csoportba osztották: kontrollcsoport, AFB1 csoport (5 mg/kg), morin kezelési csoport (20 mg/kg, 40 mg/kg, 80 mg/kg). A modellezés első napján a kezelés csoport intraperitoneálisan morin injekciót kapott megelőzés céljából, majd 16 órával később ismét beadták. 24 órával később vért vettünk, a csirkéket leöltük, és a máj- és veseszöveteket vettük. A kísérlet teljes végrehajtása a Foshan Egyetem Állatkutatási Etikai Bizottságának (FSUeae2019112501) irányelveinek megfelelően történt.

HET-ek kimutatása a szérumban

Az összegyűjtött vért álló helyzetbe állítottuk, 12, 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig, majd a felső szérumot extraháltuk, 5--szeresére hígítottuk TE festékkel, majd ugyanannyi Pico Greent adtunk hozzá. Végül a kísérleti eredményeket fluoreszcens mikrolemez-leolvasóval figyeltük meg.

Az ALT és AST kimutatása a szérumban

A kittel a szérumban az ALT és AST szintjének mérését és a kísérleti eredményeket 510 nm-es hullámhosszon detektáltuk a mikrolemez-leolvasóval.

BUN és CRE kimutatása a szérumban

A szérum CRE és BUN szintjét a megfelelő kitekkel vizsgáltuk, és a kísérleti eredményeket 510 nm-es hullámhosszon detektáltuk a mikrolemez-leolvasóval.

A máj és a veseszövet kórszövettani értékelése

Az összegyűjtött máj- és veseszövetmintákat 10 százalékos formalinban fixáltuk. Ezután a szövetet dehidratáltuk, beágyaztuk, és hematoxilinnel és eozinnal festették (Wet al, 2021). Végül egy forgó hibrid mikroszkópot használtak a kóros elváltozások megfigyelésére.

Az oxidáz aktivitás és az antioxidáns enzimaktivitás kimutatása

Az oxidáz MDA és az antioxidáns oxidáz GSH-Px, SOD és CAT szintjét a megfelelő kitekkel vizsgáltuk (Guo et al, 2021). Közülük a SOD-t és a CAT-t szérummal, az MDA-t és a GSH-Px-et májszövettel mértük. Ezenkívül TBD-reagenseket kell használnunk a minták fehérjekoncentrációjának kvantitatív elemzéséhez (Cao et al., 2020).

Kvantitatív valós idejű PCR-elemzés

Az mRNS expressziójának kimutatására QRT-PCR-t alkalmaztunkgyulladásostényezők TNF-a, IL-1, IL-6, gyulladásos közvetítő COX-2, iNOS és kaszpáz jelátviteli út kulcstényezők kaszpáz-1,kaszpáz{{6} } és a kaszpáz-11. A valós idejű PCR fluoreszcencia mennyiségi meghatározásához CFX Connect Real-Time System műszert használtunk. A célgén primerjeit az 1. táblázat tartalmazza. A qRT-PCR detektálás Roche 25 μL rendszert alkalmaz, a feltétel 50 fok ,2 perc;95 fok ,10 perc;95 fok ,15s;60 fok, 60-as évek, összesen 40 ciklus. A GAPDH belső referenciaként szolgált, és az adatok feldolgozásának módszere az 2-AACT (Qianru et al., 2021).

Statisztikai analízis

Az összes adatot a GraphPad Prism 5.{1}} szoftverrel számítottuk ki, egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) és Tukey többszörös összehasonlító teszttel. A csoportok közötti különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintették a P szintjén<>

EREDMÉNYEK

A csibék testtömegének és májegyütthatójának változása

Minden csirke testtömegét feljegyeztük, és kiszámítottuk a máj együtthatóját (máj együttható =májtömeg/testtömeg]×100). Az eredmények azt mutatták, hogy a morinnal kezelt csoportban (20 mg/kg, 80 mg/kg) a testtömeg növekedési üteme szignifikánsan megnőtt az AFB1 csoporthoz képest (2A ábra), ami megerősíti, hogy a morin bizonyos hatással van a testsúlyra. csajok. Azonban az egyes csibékcsoportok májkoefficiense nem változott szignifikánsan (2B. ábra).

A Morin jelentősen csökkenti az ALT és az AST szintjét a szérumban

Az ALT és az AST a májkárosodás indikátorai. Az adatok azt mutatták, hogy az AFB1 szignifikánsan növeli az ALT és AST szintet, míg a morin teljesen ellentétes tendenciát mutatott az AFB1-hez képest (3A és B ábra), ami előzetesen azt sugallja, hogy a morin jótékony hatással van az AFB1-indukált májkárosodásra csibékben. .

Morin jelentősen enyhíti az AFB{0}}májkárosodást a csibékben

A morin AFB{0}} által okozott májkárosodásra gyakorolt ​​hatásának további megerősítésére kórszövettani vizsgálatot végeztek. Amint a 4. ábrán látható, az AFB1 kezelés által kiváltott hepatocita duzzanatot, fragmentációt és gyulladásos sejtbeszűrődést okozott a májban, de a morin (20, 40, 80 mg/kg) hatékonyan enyhítette a májszövet károsodását, ami tovább erősítette, hogy a morinnak van enyhíti az AFB1-indukált májkárosodást csirkékben.

A Morin jelentősen csökkenti a BUN és CRE szintjét a szérumban

A BUN és a CRE, mint a vesekárosodás fontos mutatói, azt találtuk, hogy az AFB1 szignifikánsan növelte a BUN és CRE szintet a kontrollcsoporthoz képest, míg a morin teljesen ellentétes tendenciát mutatott az AFB1-hez képest (5A és B ábra), ami szintén arra utal, hogy a morinnak van jótékony hatása az AFB1-vesekárosodást okozta csibékben.

Morin jelentősen enyhíti az AFB{0}}a csibék vesekárosodását

A morin AFB{0}} által okozott vesekárosodásra gyakorolt ​​hatásának további megerősítésére kórszövettani vizsgálatot végeztek. Az AFB1 kezelt csoport veséjében vesesejtes nekrózis, hámlás és vakuolizáció, míg a morinnal kezelt csoport a morin koncentráció növekedésével (20,40,80 mg/kg) hatékonyan enyhítette a veseszövet sérülését (6. ábra). ).

MorinJelentősen csökkentette az AFB{0}}indukált HET-ek szintjét a szérumban

A morin AFB{0}}indukált szöveti sérülésekkel szembeni védelmének mechanizmusának vizsgálata érdekében a szérumban felszabaduló HET-eket a Pico Green detektálta. Vérmintákat vettünk a HET szintjének kimutatásáraszérum. A kísérleti eredmény azt mutatta, hogy az AFB1 jelentősen indukálta a HET-ek képződését a szérumban, míg a morin jelentősen gátolta a HET-ek képződését az AFB1-csoporthoz képest (7. ábra). Így először megerősítettük, hogy a morin enyhítette az AFB1-máj- és vesekárosodást a HET-ek felszabadulásának gátlásával.

A Morin jelentősen enyhíti az AFB{0}}okozta oxidatív stresszt a csibékben

Beszámoltak arról, hogy az oxidatív stressz az AFB1 toxikus hatásainak kulcsfontosságú mechanizmusa, kimutatták a morin funkcióját az AFB1- által okozott oxidatív stresszben. Az eredmény azt mutatta, hogy az AFB1 jelentősen növelte a szint szintjétoxidáz MDA, miközben jelentősen csökkenti a GSH-Px, SOD és CAT antioxidáns enzimek szintjét. Az AFB1-hez képest azonban a morin hatékonyan enyhítette az oxidáz és az antioxidáns enzimek közötti egyensúlyhiányt (8. ábra).

A morin AFB{0}}indukált szöveti sérülésekkel szembeni védelmének mechanizmusának vizsgálata érdekében a szérumban felszabaduló HET-eket a Pico Green detektálta. Vérmintákat vettünk a HET szintjének kimutatására

Morin jelentősen gátolta az AFB{0}}indukált gyulladásos mediátorok és gyulladásos faktorok mRNS-szintjét a májban

Azgyulladásosa válasz fontos mechanizmus az AFB1 toxikus hatásaiban; megvizsgálták a morin hatását az AFB1-kiváltotta gyulladásos válaszokra. qRT-PCR analízist alkalmaztunk a COX-2 és iNOS gyulladásos mediátorok, valamint a TNF- gyulladásos faktorok expressziójának kimutatására. IL-1 . IL-6. A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az AFB1 jelentősen javította ezen citokinek expressziós szintjét, míg a morin jelentősen gátolta e citokinek expresszióját (9. ábra).

A Morin jelentősen gátolta az AFB-t1-indukálta a kaszpáz-1, a kaszpáz-3 és a kaszpáz mRNS-expresszióját-11

A kaszpáz jelátviteli útvonalról beszámoltak arról is, hogy részt vesz az oxidatív stressz és a gyulladásos válaszok folyamatában. A ROS károsíthatja a mitokondriális membránt, ami citokróm c kiáramláshoz vezethet, és aktiválhatja a kaszpáz jelátviteli útvonalat. Ezért kimutattuk a kaszpáz jelátviteli útvonal kulcstényezőinek mRNS expresszióját. Az eredmény megerősítette, hogy az AFB1 jelentősen növelte a kaszpáz-1, kaszpáz-3 és a kaszpáz-11 mRNS expresszióját, míg a morin jelentősen csökkentette ezen faktorok expresszióját (10. ábra).

VITA

Az AFB1 a legmérgezőbb mikotoxin, amely az aspergillózis fő okozója. Számos tanulmány készült az AFB1 toxicitásával kapcsolatban, beleértve a hepatotoxicitást, a neurotoxicitást és a karcinogenitást. A máj, mint a fő méregtelenítő szerv és az állatok anyagcsere-transzformációjának fő helyszíne, rendkívül érzékeny az AFB1 károsodásra, amelyet főként 4 mechanizmus közvetít: citokróm P450 (CYP450) enzimrendszer, mitokondriumok, immunrendszer és szabad gyökök. . Miután az AFB1 bejutott a szervezetbe, felszívódik az emésztőrendszer duodenumából, és a portális vénán keresztül a májba kerül, ahol a CYP1A2 és a CYP3A4 által a májsejtekben a CYP450 enzimrendszerben az I. fázisú metabolizmus enzimrendszerében AFBO-vá alakul (Yang et al. ..2013). A fenti folyamat a legjelentősebb oka annak, hogy az AFB1 szervezeti rendellenességeket okoz, és toxicitást és rákkeltő hatásokat vált ki. Az AFB1 hepatocita apoptózist is indukálhat azáltal, hogy fokozza az FAS és TNFR1 halálreceptorok expresszióját, valamint csökkenti a XIAP és Bcl{18}} antiapoptotikus receptorok expresszióját (Mughal et al., 2017). Az előző kísérletekben , megerősítettük, hogy az AFB1 máj- és vesekárosodást okozhat csibékben, és előzetesen tisztáztuk a mechanizmust.

A Morin egyfajta természetes flavonoid, amely természetes antioxidáns szerkezettel rendelkezik. Az oxidációjával képződő kinon erős antioxidáns hatással rendelkezik, amely megvédheti a sejtmembránon található telítetlen zsírsavakat az oxidációtól (Xie et al, 2003). Tanulmányok megerősítették, hogy a morin bizonyos védő szerepet játszhat az IFOS okozta májkárosodás ellen egerekben az oxidatív stressz gátlásával. gyulladás, valamint sejtapoptózis (Ozdemir et al2020). A Morin az LPS okozta tőgygyulladást is enyhítheti a PI3K/AKT, MAPK, NF-kB gátlásával. és NLRP3 jelátviteli útvonalak (Jiang et al..2020). A morinnak az AFB-re kifejtett védőhatásai1-a okozott károk azonban továbbra sem ismertek. Ezért ez a kísérlet főként a morin AFB1-máj- és vesekárosodást okozó védőhatását tárta fel, és megvilágította annak mechanizmusát.

A morin adagolásának és hatásainak pontosabb felmérése alapján az intraperitoneális injekciót választottuk. Ezenkívül a morin adagolási módja összhangban volt az egereknél és patkányoknál alkalmazott módszerrel (Jiang et al., 2020;

Khamchai et al, 2020). Először is megvizsgálták az AST, ALT, BUN és CRE szintjét a szérumban annak megerősítésére, hogy az AFB1 toxicitási modellt sikeresen létrehozták. Az AFB1 csoport máj- és vesekárosodási indexe szignifikánsan megemelkedett, míg a morin csoportok jelentősen gátolták ezen enzimek expresszióját, ami előzetesen megerősítette a morin szerepét az AFB1- okozta máj- és vesekárosodás elleni védekezésben a csibékben. Ugyanakkor azt találtuk, hogy bár a májindexben nem volt jelentős különbség a csoportok között, a testtömeg növekedési üteme jelentősen javult a morinnal kezelt csoportban (20 mg/kg, 80 mg/kg), ami megerősíti a morin a fiókák súlyára. Ezenkívül a kórszövettani vizsgálat megerősítette, hogy a morin hatékonyan enyhítette az AFB-t . Ezt követően a morin védőmechanizmusát kutattuk az AFB1-máj- és vesekárosodást okozó csibék ellen.

A NET-ek, mint a veleszületett immunitás első védelmi vonala, kétélű fegyvert jelentenek a szervezet számára. Egyrészt fontos szerepet játszik a szervezet kórokozók elleni védekezésében. Másrészt szövetkárosodást okoz, és részt vesz egyes betegségek kialakulásában, mint például az érelmeszesedés és a trombózis (Moschonas és Tselepis, 2019). A tanulmány megerősítette, hogy a NET-ek és a hisztonok fontos szerepet játszanak a szarvasmarha emlőhámsejtek (BMEC) sérülésében, és a túlzott NET-ek képződésének gátlása enyhítheti a tőgygyulladással összefüggő sérüléseket (Wei et al. 2019a). Azt is megállapítottuk, hogy az AFB1 máj- és vesekárosodást okozhat csirkékben a HET-ek felszabadulásának indukálásával. Kísérletünk fontos célja, hogy a morin AFB1-re gyakorolt ​​védő hatása összefüggésben van-e a HET-ekkel. A HET-ek a csirkék létfontosságú veleszületett immunválaszaiként működnek, és a szérumban a HET-ek kimutatásának legjobb ideje 24 óra, ezért választottuk ki a vizsgálat időpontját. Azt találták, hogy a morin szignifikánsan csökkentette a HET-ek képződését a szérumban, és először megerősítették, hogy a morin enyhítette az AFB{7}}károsodást a csirkékben azáltal, hogy gátolta a HET felszabadulását.

A szervezet normál anyagcsere-folyamataiban a redox dinamikus egyensúlyban van, de ha a szervezetben a reaktív oxigénfajták (ROS) termelése meghaladja az antioxidánsok mennyiségét, oxidatív stressz lép fel. Az oxidatív stressz számos májbetegségben szerepet játszik, például a máj fibroproliferatív betegségében, az alkoholos májbetegségben és a nem alkoholos zsírmájbetegségben (Cichoz-Lach és Michalak, 2014). Az MDA a ROS által termelt lipidperoxidáció végterméke, és függetlenül képes tükrözni a membránrendszer károsodásának mértékét és a szabad gyökök sejteket érő támadási fokát, ezért jó markernek tekinthető az oxidatív stressz értékelésében (Wang et al. , 2019). Az SOD egy specifikus antioxidáns enzim, amely megköti a szuperoxid-aniont a ROS szabad gyökökben, amelyek közvetve a szervezet oxigénmentes gyökök eltávolítási képességét vizsgálják, és rendkívül fontos szerepet tölt be a májkárosodás vizsgálatában (Zhang et al., 2018). . A GSH-Px fontos indikátor a sejtek redoxállapotának mérésére, amely képes ellensúlyozni az oxigéngyökök toxicitását azáltal, hogy közvetlenül H pluszt szolgáltat, és csökkenti.

a máj oxidatív károsodása. A CAT az állatok különböző szöveteiben található, különösen a májban magas koncentrációban, amely hatékonyan képes lebontani a hidrogén-peroxidot szén-dioxiddá és vízzé, hogy megvédje a sejteket az oxidatív károsodástól (Alfonso-Prieto et al., 2009). Az eredmény azt mutatta, hogy az AFB1 jelentősen csökkentette a GSH-Px, SOD és CAT antioxidáns enzimek szintjét, növelte az MDA antioxidáns enzimek szintjét is, míg a morin csoport ezzel ellentétes tendenciát mutatott, hatékonyan enyhítve az oxidáz és az antioxidáns enzimek közötti egyensúlyhiányt, jelezve. hogy a morin hatékonyan gátolja az AFB1-okozta oxidatív stresszt.

Beszámoltak arról, hogy a ROS gyulladásos citokinek expresszióját, valamint a nukleáris faktor kappa B (NF-xB) és a mitogén által aktivált protein kináz (MAPK) útvonalak aktiválását okozhatja (Li et al. 2014). Az NF-xB fehérje általában homo/heterodimereket képez p65-ből és p50-ből, és inaktív állapotban van a citoplazmában az IkB gátló fehérjével kialakuló trimerkomplex miatt (Pantano et al., 2006). A kórokozó általi stimuláció után az IkB disszociál a trimerről, és az NF-kB dimer nukleáris lokalizációs szekvenciáknak (NLS) van kitéve, amelyek gyorsan bejutnak a sejtmagba a citoplazmából, és a sejtmag DNS-én lévő specifikus szekvenciákhoz kötődnek, elősegítve a rokon gének transzkripciója (Zhang és Ghosh, 2001). A TNF- a legfontosabb gyulladást elősegítő citokin, amely részt vesz az NF-B aktiválásában, indukálja az IL-18, IL-6, COX expresszióját -2, iNOS és más downstream gyulladásos mediátorok (Rajendran et al 2018). Eredményeink azt mutatták, hogy az AFB1 szignifikánsan elősegítette a TNF-, IL-1, IL-6 gyulladásos faktorok, valamint a COX-2 és iNOS gyulladásos mediátorok mRNS expresszióját, de a morin csoport szignifikánsan gátolta az expressziót. ezen tényezők közül, ami azt jelzi, hogy a morin hatékonyan gátolja az AFB{21}}indukálta gyulladásos választ csirkékben.

Tanulmányok kimutatták, hogy az oxidatív stressz az egyik apoptózist indukáló faktor (Chandra et al., 2000), és sok olyan anyag, amely apoptózist indukál, általában oxidáns vagy stimulus a sejt oxidatív metabolizmusában. Az NF-kB aktiválása elősegítheti a proapoptotikus faktor gének transzkripcióját vagy gátolja az anti-apoptotikus fehérjék expresszióját. Eközben a kaszpáz jelátviteli út és a gyulladásos válasz párhuzamosan zajlik. A kaszpáz-1 fontos szerepet játszik az Il-1 szekrécióban, a kaszpáz pedig-11 az emberi gyulladásos kaszpáz-4 és a családtagok kaszpáz-4 kaszpáz{{9} homológja }} (Van Opdenbosch és Lamkanfi, 2019). Megerősítettük, hogy az AFB1 jelentősen fokozza a kaszpáz-1, kaszpáz-3 és kaszpáz-11 expresszióját, míg a morin jelentősen csökkentette ezen faktorok expresszióját, megerősítve, hogy a morin hatékonyan gátolja a AFB1-indukált kaszpáz jelátviteli útvonal csibékben.

A fenti eredmények alapján megerősítettük, hogy a morin hatékonyan enyhítheti az AFB1- okozta máj- és vesekárosodást csibékben, ami kísérleti alapot és elméleti hivatkozást jelenthet a morin gyakorlati alkalmazásához. A következő kutatás során a morin etetési módot kell választani, például ivóvizet, és több csibére és idősebb csirkére van szükség a morin baromfitenyésztési hatásának igazolására.

KÖVETKEZTETÉS

A morint, mint a kínai gyógynövénykészítményekben és étrend-kiegészítőkben általánosan előforduló természetes vegyületet, teljes körűen kutatták és megerősítették annak biztonságosságát, és kielégítő eredményeket ért el. Kísérleteink továbbá bebizonyították, hogy a morin hatékonyan enyhítheti az AFB{0}} által okozott máj- és vesekárosodást azáltal, hogy gátolja a HET-ek felszabadulását, az oxidatív stresszt és a gyulladásos választ. Ezért ez a tanulmány azt mutatja, hogy a morin takarmány-adalékanyagként képes megvédeni a baromfi máját és veséjét, megakadályozni a takarmányban található káros anyagokat, és javítani a baromfi teljesítményét.