II. rész:Cistanche Tubulosa A fenil-etánoid glikozidok apoptózist indukálnak a hepatocelluláris karcinóma sejtekben mitokondriumfüggő és MAPK útvonalakkal, és fokozzák a tumorellenes hatást ciszplatinnal kombinálva

Kapcsolattartó: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Tovább értékeltük a CTPG immunstimuláló hatását(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok) egereken. I.p. injekció, s.c. injekció és pl. CTPG beadása után (200 és 400 mg/kg) nem volt szignifikáns változás az egerek állapotában a kezeletlen csoporthoz képest. Az egerek testsúlyában sem volt szignifikáns különbség a CTPG-vel kezelt csoportok és a kezeletlen csoportok között (7A ábra). Az egerek szív-, máj-, lép-, tüdő-, vese- és csecsemőmirigy-indexei minden csoportban hasonlóak voltak, kivéve a 400 mg/kg-os CTPG i.p. injekciós csoportba tartozó egerek lépindexeit (1. táblázat). Az eredmények azt sugallták, hogy a CTPG kiválasztott dózisainak nem volt mellékhatása egerekben. A lép az emlősök fontos immunvédelmi szerve, és fejlődése közvetlenül befolyásolja az egyén immunfunkcióját és a betegségek ellenálló képességét. Az immunszervi index tükrözi az immunszervek fejlődését és immunfunkcióját. A lép számos immunsejtet tartalmaz, köztük T-sejteket, B-sejteket, természetes gyilkos sejteket (NK-sejteket), makrofágokat, dendritikus sejteket (DC) és másokat, amelyek fontos szerepet játszanak az immunrendszerben.30 Arról számoltak be, hogy a poliszacharidok növelhetik az immunsejtek számát, hogy fokozzák a szervezetImmunitás.31 Mivel a CTPG injekciója jelentősen megnövelte a lépindexet (0,55-szeresére nőtt), tovább elemeztük a lépben lévő különböző immunsejtek számát. Az eredmények azt mutatták, hogy a CTPG injekció szignifikánsan növelte a T-sejtek (CD3 +CD19− sejtek) (0,49-szeresére nőtt), a B-sejtek (CD3−CD19+ sejtek) (0,49-szeresére nőtt) és az NK-sejtek (CD3−CD19−CD49b+ sejtek) (1,63-szorosára nőtt) számát a kezeletlen csoporthoz képest. A CD4+ és CD8+ T-sejtek, mint a T-sejtek fő altípusai, fontos szerepet játszanak az antigén-specifikus sejtes immunválaszban.32 Ezért tovább elemeztük a lépben lévő CD4+ és CD8+ T sejtek számát és aktiválási állapotát. Az eredmények azt mutatták, hogy pl. a CTPG injekció nemcsak jelentősen megnövelte a CD4+ és CD8+ T sejtek számát (0,55, illetve 0,34-szeresére nőtt), hanem javította a CD4+ T-sejtek (CD4 + CD44 + sejtek) aktiválási állapotát is (0,84-szeresére nőtt) (7B ábra), ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CTPG immunjavító funkcióval rendelkezik.

A CTPG kombinációja(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok)és ciszplatin erős tumorellenes hatást mutatott a H22 tumor egérmodellre

Általánosan elfogadott, hogy a kemoterápia vagy a sugárterápia rossz prognózishoz vezethet, és számos nemkívánatos eseményt idézhet elő, amelyek az immunrendszer elnyomásának és a normál szövetek és szervek károsodásának tudhatók be. A TCM poliszacharidjai immunerősítő hatásúak, és enyhítik az immunszervek és az immunsejtek kemoterápia által okozott károsodását, például a kitozán33 és a Lycium barbarum poliszacharidok.34 A fenti eredmény azt mutatta, hogy a CTPG(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok)enyhítheti a ciszplatin immunrendszerre gyakorolt mellékhatásait. Ezért a CTPG és a ciszplatin tumorellenes hatását a H22 tumor egérmodellben értékeltük. Amint azt a 8A ábra mutatja, a CTPG önmagában, a ciszplatin önmagában, valamint a CTPG és a ciszplatin (CTPG + ciszplatin) kombinációja szignifikánsan elnyomta a H22 tumor növekedését a kontrollcsoporthoz képest. A CTPG+ciszplatin erősebb gátló hatást mutatott, mint a CTPG és a ciszplatin önmagában. A 20. napon a kontroll, a ciszplatin önmagában, a CTPG és a CTPG +ciszplatin csoportok tumormennyisége körülbelül 1707,8, 722,5, 1033,8 és 367,5 mm3 volt. Ugyanezen a napon a daganatokat vizuális megfigyelésre (8B ábra) és súly-összehasonlításra (8C. ábra) gyűjtöttük össze. A CTPG+ciszplatin jobb terápiás hatást mutatott a H22 tumor egérmodellre, mint a CTPG vagy a ciszplatin önmagában. A CTPG+ciszplatin csoportban a tumor súlya alacsonyabb volt, mint más csoportoké. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CTPG és a ciszplatin tumorellenes aktivitása szinergikus hatásokat eredményez.

Az egerek testtömegét úgy mértük, hogy tükrözzék az egerek egészségi állapotát. A ciszplatin kezelés után a testtömeg jelentősen csökkent, ami ciszplatin által kiváltott súlyos szisztémás toxicitásra utal.35 Ehhez képest a CTPG ciszplatinnal kombinálva jelentősen enyhítette a ciszplatin által kiváltott testsúlycsökkenést, míg a CTPG(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok)önmagában nem volt jelentős hatása az egerek testtömegére (8D ábra). A szerveket, köztük a lépet, a szívet, a májat, a tüdőt, a vesét és a csecsemőmirigyet is izolálták a szervindexek kiszámításához. A kezeletlen csoporthoz képest a lépindexek jelentősen csökkentek, illetve növekedtek a ciszplatinnal és a CTPG-vel. A CTPG + ciszplatin visszanyerte a lépindexeket, összehasonlítva a ciszplatinnal önmagában. Más szervindexek nem mutattak szignifikáns különbséget az összes csoport között (2. táblázat). CTPG(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok) Ciszplatinnal kombinálva Továbbfejlesztette aImmunitástumor egerekből.

A fenti eredmények azt mutatták, hogy a CTPG(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok) fokozta az immunitástegereken, és gátolta a ciszplatin által indukált splenociták apoptózisát. Azt is megvizsgáltuk, hogy a CTPG+ciszplatin tumorellenes hatása korrelált-e a fokozott immunitással. A tumor előfordulásának és fejlődésének folyamatában a szervezet immunrendszere fontos immunfelügyeleti funkciót játszik, és a T-sejtek által közvetített sejtimmunitás kulcsszerepet játszik. A CD4+ T-sejtek feladata a sejtes immunitás és a humorális immunválasz segítése, a CD8+ T-sejtek pedig az immunválasz fő effektorsejtjei, amelyek kifejezetten megölhetik a célsejteket, és fontos szerepet játszhatnak a tumor immunitásában és a vírusellenes immunitásban.32 A tumoros egerek lépeit összegyűjtöttük, hogy áramlási citometriával kimutassák a T-sejtek és a B-sejtek számát. A CTPG+ciszplatin csoportban a T-sejtek, köztük a CD4+ és CD8+ T sejtek frekvenciája és száma szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (0,55-szeres, illetve 0,7-szeres növekedés) és a ciszplatin-csoportokban (0,92-szeres, illetve 1,16-szor nőtt) (9A és B ábra). A kontrollcsoporthoz képest a CTPG önmagában is részben növelte a CD4+ és CD8+ T sejtek számát, bár nem volt szignifikáns különbség. A B sejtek gyakoriságának és számának nem volt szignifikáns különbsége az összes csoport között.

A mieloid eredetű szuppresszor sejtek (MDSC-k) és a szabályozó T-sejtek (Tregs) kitágulnak a daganatokban és gátolják a tumorellenes immunválaszt; elnyomják a CD4+ T sejtek aktiválódását és tágulását, az effektor T-sejtek működését, a CD4+ és CD8+ T sejtek aktiválását és/vagy proliferációját, valamint citokinképződését, a B-sejt proliferációt és immunglobulin termelést és osztálykapcsolót, az NK és a természetes gyilkos T-sejtek (NKT) citotoxikus funkcióit, valamint a DC-k működését és érését.36-38 Az MDSC-k frekvenciája és száma (CD11b +Gr-1+), makrofágokat (CD11b+Gr-1−) és Tregs-t (természetes Tregs: CD4+CD25+Foxp3+; indukált Tregs: CD4+CD25−Foxp3+) tumor egerek lépeiben áramlási citometriával elemeztük. A kontrollcsoporthoz képest az MDSC-k gyakorisága és száma jelentősen csökkent a ciszplatinnal történő befecskendezés után (1,56-szor csökkent) vagy CTPG-vel kombinálva(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok)(0,62-szer csökkent). A CD11b+Gr-1− makrofágok száma is jelentősen csökkent, bár frekvenciáikban nem történt jelentős változás (9C ábra). Ezenkívül a CTPG(Cistanche Tubulosa fenil-etánoid glikozidok)önmagában és a CTPG+ciszplatin kezelés jelentősen csökkentette az indukált Tregs gyakoriságát (0,33-szor, illetve 0,37-szer csökkent) (9D ábra). Ezek az eredmények arra utaltak, hogy a CTPG + ciszplatin tumorellenes hatása korrelálhat a fokozott immunitással, amelyet a T-sejtek megnövekedett száma, valamint az MDSC-k és tregek számának csökkenése jellemez.