II. RÉSZ: Az emberi primer vese fibroblaszt szerepe tgf-β1-mediált fibrózis-utánzó eszközökben

Kapcsolattartó: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

II. RÉSZ: Az emberi primer vese fibroblaszt szerepe a TGF-β1 által közvetített fibrózis-utánzó eszközökben

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee és mtsai.

Elvont

Vese fibrózisegy progresszív krónikus vesebetegség, amely végül végstádiumú veseelégtelenséghez vezet. Annak ellenére, hogy számos megközelítés van a harcbanvesefibrózis, a jelenleg rendelkezésre álló gyógyszerek értékelésére szolgáló kísérleti modell nem ideális. B-utánzó modelleket fejlesztettünk ki háromdimenziós (3D) ko-tenyészetető eszközökkel, amelyeket három különálló tubulus interstitiumréteggel, nevezetesen epithelialis, fibroblasztos és endothel rétegekkel terveztek. Bevezettük a humán vese proximális cső alakú epiteliális sejtjeit (HK-2), humán köldökvéna endoteliális sejtjeit és a betegből származó vese fibroblasztokat, és értékeltük atváltságformáló növekedési faktor-β(TGF-β)ésTGF-βgátló kezelés ezenveseFibrózismodell. AFibrózismarker alfa-simaizom aktin onTGF-β1a kezelést egyrétegű tenyésztett HK-2 sejtekben növelték egy 3D-s betegségmodellben. Az érrekeszbenveseFibrózismodellekben az edények sűrűsége nőtt és csökkent aTGF-β-kezelt csoport ésTGF-β-gátló kezelési csoport. Multiplex ELISA a természetfeletti anyagok felhasználásával aTGF-β-stimuláló 3D modellek kimutatták, hogy a gyulladást elősegítő citokin és növekedési faktor szintek, beleértve az interleukin-1 béta, a tumor nekrózis faktor-alfa, az alapvető fibroblaszt növekedési faktor, ésTGF-β1,TGF-β2ésTGF-β3megnövekedtek, ami utánozta az emberi vesék fibrotikus mikrokörnyezetét. Ez a tanulmány lehetővé teheti egy ember építésétveseFibrózis-a hagyományos kulturális kísérleteken túlmutató eszközmodell utánzása.

kulcsszavak: vese fibroblaszt; fibrózis; TGF-β1

cistanche tubolosa egészségügyi előnyök: krónikus vesebetegségek kezelése

KATTINTSON IDE AZ I. RÉSZHEZ.

3. Megbeszélés

TGF-β1fontos szerepet játszik a vese fibrogenezis mátrixfelhalmozódásában, és gátolja a proliferációt a legtöbb sejtben, beleértve a glomeruláris epiteliális és endoteliális sejteket, valamint a cső alakú hámsejteket 【1】. A TGF-ß1 azonban proliferációt indukál az emberi vese fibroblasztokban a bázikus fibroblaszt növekedési faktor (FGF-2) indukciójával [8].

Ebben a tanulmányban megállapítottuk, hogyFibrózis-utánzó készülék, amely három alapvető sejtkomponenst használ, beleértve az emberi primer vese fibroblasztokat, a vesecsöves hámsejteket és az emberi endoteliális sejteket, és úgy értékelte, hogyveseFibrózismodell alapjánTGF-β1serkentés. GenerálásveseFibrózis-on-a-chipen létrehoztunk egy új 3D-s tenyészetrendszert, amelyet a szövet három különálló részéből terveztünk, és amelynek célja a vesebetegség modellezésével kapcsolatos akadályok leküzdése. Tanulmányunk kimutatta, hogyTGF-β1indukált sejtválaszok, beleértve a hámsejtek tubuláris epiteliális-mezenchimális átmenetét (EMT), az endoteliális sejtek mikrovaszkuláris elváltozását és a citokinváltozásokat a vese fibroblasztokban. Ez az első tanulmány, amely bevezette aFibrózis-utánzó készülék, amely az emberi veséből származó primer fibroblasztokat és stimulált fibroblasztokat tartalmaz, amelyeket olyan betegektől izoláltak, akiknélTGF-β1, a fibrotikus válaszok ismert induktorja, amelyet általában a mimikálás standardjaként használnakFibrózissejttenyészetekben [9]. Ezek az eredmények arra utalnak, hogyTGF-β1-a kezelt hámsejtek mesenchymális sejtszerű fenotípussá alakulnak át. MikorTGF-β1fibroblasztoknak adják be, különböző citokinek módosulnak, hogy tükrözzék a fibrotikus folyamatok indukcióját. Nyilvánvaló, hogy aveseFibrózismodell, a fibroblasztok jelentik a fő erőt a kialakult tenyésztési rendszer TGF stimuláción keresztüli fejlesztése mögött.

Davis és munkatársai arról számoltak be, hogy az endoteliális sejtek 3Dculture-je elegendő ahhoz, hogy a sejtek behatoljanak, és lumen- és csőhálózatot képezzenek, egy ép organizmust követve in vivo [10,11]. Több csoport arról számolt be, hogy a 3D-tenyésztés modelljei magasabb szintű nefrotoxicitást mutatnak, mint a 2D sejttenyészetes modellek [12]. Ezenkívül a nefrotoxicitással és gyulladással kapcsolatos gének expressziója szignifikánsan magasabb volt a vese 3D-s sejttenyészet modelljében, mint egy tipikus2D tenyészetben[13].

Ebben a tanulmányban az emberi kultúra médiaveseFibrózis-az on-a-chipen a citokinek szintje lényegesen magasabb volt, mint a 2Dculture-nél. Csoportunk kimutatta, hogy a betegekből származó fibroblasztok képesek újra létrehozni az őshonos veseszöveteket, beleértve az endoteliális és epiteliális sejtrétegeket is, a javasoltunkon keresztülFibrózis-on-a-chip modell. Következésképpen ezek a megállapítások azt mutatják, hogy aveseFibrózis-az-on-a-chip modell pontosan szimulálja az emberi vese mikrofizikai környezetét. Ezenkívül, mivel a chipben tenyésztett fibroblasztok betegektől származnak, más klinikailag releváns betegmodellek könnyen és egyértelműen, biztonságos módon beszerezhetők. Ezért az emberveseFibrózis-az-on-a-chip modellrendszer lehetővé teszi a személyre szabott orvoslás fejlesztését az epiteliális és endoteliális funkciók érzékeny mérésével. KísérleteinkbenFibrózisés az angiogenezis csökkent aTGF-βgátlóval kezelt csoportok. A TGF-β inhibitorok a TGF-β természetes antagonistái, amelyeket különböző vesebetegség-modellekkel mutattak ki. Úgy tűnik, hogy kísérleteket lehet végezni a kezelés hatékonyságának megerősítésére olyan terápiás szerekkel, mint ez a TGF-β inhibitor. Ezért ez a chip eszközt biztosított a vesefibrózis továbbfejlesztett modelljének kifejlesztéséhez a sejtek morfológiájának és működésének mérésére, és hasznos lehet a gyógyszerek nefrotoxicitási értékelésének elvégzésében.

TGF-βa különböző vesebetegségek domináns jártassági tényezője [14], és szerepet játszik az angiogenezisben [15]. A TGF-β angiogén hatásai nagyon összetettek, és a beállítástól és a különböző szabályozó tényezőktől függően proangiogén vagy antiangiogén aktivitással rendelkezhetnek [16]. Úgy tűnik, hogy az angiogén növekedési faktorok, mint például a VEGF és az FGF-2indukálják az angiogenezis in vivo modulációját, központi szerepet játszanak az angiogenezis in vivo modulációjában [17-20]. Egyes bizonyítékok arra utalnak, hogy ez a két tényező szinergikusan hathat az endoteliális sejtes morfogenetikai események elősegítésére [21,22]. Bizonyítékot szolgáltattunk arra, hogy a VEGF mRNS expresszióját és az FGF-2 fehérjeszekréciót a TGF-β1 jelentősen megemelte a 3D chipekben a 2D kultúrához képest.

A miénk korlátozásaFibrózismodellek lehetnek, hogy viszonylag rövid idő alatt jöttek létre, 24 óra. A TGF-béta profibrotikus és gyulladáscsökkentő tulajdonságokkal rendelkezik egy korai időszakbanFibrózisfolyamat, nem a krónikus folyamatban. HagyományosanTGF-βelsősorban citokin által indukáltában használták felFibrózisModellek. Mivel azonban csak egy citokin nem ábrázolható in vivo,Fibrózisindukciós modellek, amelyek számos további jelölt anyagot használnak, például:TGF-βés BMP7-et javasoltak. Két vagy három citokin azonban még mindig nem elegendő az in vivo szaporodáshoz. HasználtukTGF-βmint kiindulópont; azonban megpróbáltunk in vivo mikrokörnyezetet megvalósítani a chipen egy változatosabb citokinvihar kiváltásával. Fibroblaszt, aFibrózis, bevezették, és a változatosabb citokinek (IL-1β, TNF-α, b-FGF) másodlagos stimulálását,TGF-β1,TGF-β2ésTGF-β3) aTGF-β. Így egy olyan környezet, amely hasonló a következőhöz:Fibrózisaz emberi testben reprodukálták.

cistanche deserticola kivonat: vesebetegségek kezelése

4. Anyagok és módszerek

4.1.Sejttenyészetek

A vese fibroblasztokat (KF-eket) a vesesejtes karcinómában szenvedő betegek normál szövetrészének biopsziáiból izolálták, becsült glomeruláris filtrációs sebességgel (eGFR)>60 ml/perc/1,73 m2, miután a betegek hozzájárultak egy második biopsziához kutatási célokra. A KF-eket fibroblasztos növekedési közegben tenyésztettük (FGM-2, Lonza, Svájc), és a kísérletekhez a 3-4. részt használtuk. A vese fibroblasztokat 1-2 hétig kapartuk ki a tenyészetből, amíg a sejtek monoréteget nem képeztek. A tenyészetet szennyező hámsejtek kiküszöbölése érdekében a fibroblasztokat mágneses antifibrlaszt gyöngyökkel (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) választottuk ki az első áthaladás után. A sejteket 0,05% tripszin-etilén-diamin-tetraecetsavval (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Korea) választtuk le, fibroblasztellenes gyöngyökkel inkubáltuk, mágneses oszlop segítségével elválasztottuk, és az átfolyó áramlást összegyűjtöttük. A tisztított primer fibroblasztokat fluoreszcencia-aktivált sejtválogatási (FACS) elemzés jellemezte PE-konjugált anti-fibroblaszt antitestek felhasználásával. A gyengéd mágneses aktiválású sejtválogatást (MACS)Disszociátort gyengéd veseszövet-darálásra használtuk. A Miltenyi Biotec Inc.-től (Auburn, CA, USA) vásároltak egy Octo MACSTM mágneses szeparátort MACS LS oszlopokkal (dugattyúkkal), amelyet mikrogyöngy-címkével ellátott sejtek tisztítására alkalmaztak. Gyengéd MACS C csöveket (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) használtak vese daráláshoz a sejtek elválasztásához. A MACS Smart Strainers (70 um) a Miltenyi Biotec Inc.-től (Auburn, CA, USA) származik. Oszloppuffert használtunk az oszlopok mosására és a sejt pelletek újraszuszpendálására. A puffert 0,5 % szarvasmarha szérumalbumint (BSA) tartalmazó oldat formájában állítottuk elő 2 mM EDTA-val foszfátpufferes sóoldatban (PBS) (pH7,4), és a Miltenyi Biotec Inc.-től (Auburn, CA, USA) vásároltuk meg. Zöld fluoreszcens fehérjét expresszív humán köldök-véna endothelsejteket (GFP-HUVEC-k, Lonza, Svájc) tenyésztettünk endoteliális növekedési közegben (EGM-2, Lonza, Svájc), és a 3-4. átkelő részekben lévő sejteket használtunk. Az emberi proximális cső alakú sejtvonal (humán vese-2(HK-2) sejteket az American Type Culture Collection (ATCC) gyűjtöttük be. A sejtvonalat magas glükóztartalmú Dulbecco módosított Eagle's mediumjában (DMEM) növesztettük, kiegészítve 10% magzati szarvasmarha szérummal (FBS), penicillinnel (100 U/ml) és streptomicinnel (100 ug/ml). A reagenseket a Gibco-tól (Rockville, MD, USA) vásárolták. Az összes sejtet 0,05% tripszin-EDTA alkalmazásával leválasztottuk, és párásított inkubátorban tartottuk 37 °C-on és 5% CO2-n. A KF-eket FGM-2-ben újraszuszpendáltuk 4×10°-os sejt/ml sejtkoncentráció mellett. Az emberi vese tubuláris hámsejteket (HK-2) 2×10° sejt/ml koncentrációban újraszuszpendáltuk magas glükóz DMEM-ben. A GFP-HUVEC-eket 2×10° sejt/ml koncentrációban újraszuszpendáltuk EGM-2-ben.

4.2.Reagensek

A mátrix fibrin gélekből állt, beleértve a kereskedelemben kapható, a szarvasmarha plazmájából származó fibrinogént, a szarvasmarha-tüdőből származó aprotinint és a szarvasmarha plazmájából származó trombint. A fent említett három anyagot a Sigma-tól (St. Louis, MO, USA) vásárolták. A fibrinogént l×PBS-ben oldottuk vízfürdőben (37°C) 30 percig 10 mg/ml koncentrációban. A trombint és az aprotinint ionmentes vízben oldottuk 50 egység/ml és 4 TIU/ml koncentrációban. A három oldatot egy 0,22 μm-es szűrőn keresztüli szűréssel sterilizáltuk. Rekombináns emberTGF-β1a PeproTech EC Ltd.-től (London, Egyesült Királyság) szerezték be. A TGF-béta receptor kináz specifikus inhibitorát, az SB431542-t a Tocris Cookson, Inc.-től (Ellisville, MO, USA) vásárolták.

4.3. Sejtmintavétel az eszközben

A sejtek vetése előtt a szoros kötés megkönnyítése érdekében a készüléket 1 percig kezelték egy plazmagépben (Femto Science Inc., Suwon, Korea), amelynek teljesítménye 70 W, 50 Hz. A plazmakezelés által kiváltott felületi hidrofilitás megkönnyítette a gélmintázást és a közegterhelést. A hidrofilitás változásának elkerülése érdekében a kísérleteket a plazmakezelést követő 30 percen belül végeztük el. Az eszközökön belüli különböző cellás minták nagymértékben testreszabható módon végezhetők el. Fontos volt, hogy előzetesen meghatározzuk a különböző mintázandó sejttípusok összetételét és koncentrációját. A sejtes hidrogél szuszpenziókhoz 37,5 μL sejtszuszpenziót és egy 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogén oldatból (250 μL 10 mg/ml fibrinogén oldat 40 μL 4 TIU/ml aprotininnel) elválasztott aliquotát készítettünk el, hogy közvetlenül a berakodás előtt összekeverjük. Közvetlenül a betöltés előtt a 37,5 μl sejtszuszpenziót 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogénnel kevertük, amíg homogenizálódtunk. Az 50uL hidrogélt összekevertük egy 1 ml-es trombincseppel (0,5 egység/ml). Közvetlenül a keverés után trombint fecskendeztünk a külső csatorna külső szélébe gFP-HUVEC-k fibrin szuszpenziójával (2×10' sejt/ml sejtkoncentrációval) (3. ábra, Gel A). 3 percet vártunk, hogy a fibrinogén keresztkötés befejeződjön. Közvetlenül a keverés után a trombint KF-ek fibrin szuszpenziójával (4×10° sejt/ml sejtkoncentráció) a tartály padlójának mindkét oldalára helyeztük vájatonként (3. ábra, Gel C). A KF-ek fibrin szuszpenziója szobahőmérsékleten 3 percig keresztkötésre került. 10 μL humán vese proximális tubuláris epiteliális sejt (HK-2) sejtszuszpenzióját fecskendeztük be a belső csatorna befecskendező nyílásába (3. ábra, Gel B). Ahhoz, hogy a HK-2-t a GFP-HUVEC csatornában lévő fibrin gél falához rögzítsük, a készüléket 90 fokkal elforgattuk, és az 5% CO-ba, egy 30 percig tartó inkubátorba helyeztük 37 °C-on. A HK-2 leülepedett, és sejtlapot képezett a fibrin gél oldalán.

A HK-2 csatlakoztatása után a készüléket EGM-2-vel töltötték fel. A készüléket 3 napig inkubálták 37 °C-on, 5% CO-s inkubátorban. A közeget 5ng/ml-rel vagy anélkül cseréltükTGF-β1és 5ng/ml-lelTGF-β1és 10 umTGF-β1inhibitor három napos inkubálás után (3. ábra).

mi az a cistanche

4.4. Imunocitofluoreszcencia

A készülékben lévő kotenyált szöveteket 4%(m/v) paraformaldehid oldattal (Biosesang, Seongnam, Korea) rögzítettük PBS-ben (Welgene, Gyeongsan, Korea) 20 percre, majd permeabilizációt 20 perces bemerítéssel 0,15% Triton X-100-ban (Sigma, St.Louis, MO, USA). A mintákat ezután 3%BSA-val (Sigma, USA)kezeltük 1 órán keresztül. A sejteket az Abcam-tól vásárolt antitestekkel inkubáltuk. Az elsődleges antitestek az anti-citokkeratin 8 és az anti-o-SMA voltak, amelyeket 2 napig szobahőmérsékleten (RT) hagytak. Másodlagos antitestként Alexa Fluor 647 konjugált szamár anti-nyúl IgG(H+L) használtuk. A DNS-címkézést a Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) 1:250 arányú hígításával végeztük 3 órán keresztül RT-nél. Az átlagos fluoreszcencia-intenzitást (MPI) ImageJ és fluoreszcencia-intenzitás analizátor segítségével mértük.

4.5. Citokinek multiplexanalízise

Az MSD V-Plex citokin és angiogenezis Panel 1 Humán készlet (Rockville, MD, USA) az interleukin-1 béta (IL-1ß) és az alapvető fibroblaszt növekedési faktor (b-FGF) koncentrációk mérésére szolgált egyetlen mintában, a gyártó utasításai szerint. Minden mintát az IL-1β és a b-FGF összes fehérjeszintjére mértünk. A mennyiséget (pg/ml-ben) számszerűsítettük az egyes mérések standard görbéjéből.

4.6. Multiplex gyöngy immunvizsgálat

A citokin koncentrációkat multiplexgyöngy immunvizsgálati rendszerrel elemeztük (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, KALIFORNIA, USA), többplexes technológián alapuló (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA), a gyártó utasításai szerint. Az adatokat egy Luminex-kompatibilis munkaállomás és annak kezelőszoftvere (Bio-Plex munkaállomás és 6.0-s verzió; Bio-Rad, Tokió, Japán), a gyártó utasításai szerint. Humán TGF-β1, TGF-β2 és TGF-β3 aFibrózisa folyamatot egyidejűleg elemeztük a hígított mintákban. Az izoformákTGF-βa Bio-Plex 200 Systems és a kereskedelmi forgalomban kapható Bio-Plex ProTM Human segítségével észleltékTGF-βvizsgálatok (Bio-Rad Laboratories, Inc);; a gyártó által szolgáltatott információk alapján. A multiplex vizsgálati készlet kvantitatívan képes mérni a felülúszó több citokinját, alacsonyabb kimutatási határral, citokinonként 1 pg/ml-rel. Minden mintát egyetlen mérésként futtattunk le az összegyűjtött felülúszó korlátozott mennyiségére.

4.7.Valós idejű PCR

Az RNS-extrakciót TRIzol reagenssel (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) végeztük. A Master Mixet és a Revert Aid First Strand cDNA szintetizátorkészletet használtuk a teljes RNS fordított transzkripciójához.qPCR-t az Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.) segítségével végeztük. A specifikus primereket a Bioneer (Daejeon, Korea) készítette, és ebben a kísérletben az alábbiak szerint használtuk fel. Az alapozó szekvenciákat az 1. táblázat foglalja össze.

Tíz PowerUp SYBR Green Master Mix mikroliterét, 4 μL cDNS-t és 2 pmol-t használtunk fel valós idejű PCR-hez 20 μL végső térfogatban. A reakciót 95°C-on 1 másodpercig és 60 °C-on 20 másodpercig 45 cikluson keresztül 45 cikluson keresztül 20 másodpercig végeztük el, miután 95 °C-on 20 másodpercig denaturáltuk a PCR-t. A PCR-t minden egyes mintára duplikáltan vagy három példányban végeztük. a cDNS-szinteket a ciklusküszöbök standard görbéjének felhasználásával határoztuk meg. Az egyes cDNS-ek összes adata a megfelelő standard görbén belül volt. A kapott adatokat normalizáltuk β-aktin cDNS-re.

4.8. Statisztikai elemzés

A kvantitatív adatokat legalább három független kísérlet átlagos ±SD-jeként vagy SE-jeként kell bemutatni. A statisztikai elemzéseket kétfarkú Student t-teszttel végeztük. Csak 95%-os vagy annál magasabb konfidenciaszinten tartottunk jelentős különbséget (p<>

5. Következtetések

Összefoglalva, a tanulmányban szereplő protokollok lehetővé tették az emberiveseFibrózis-modellként utánozta az eszközöket, és különböző hatásokat mutatott be, amelyek a 2D-s tenyésztési kísérletekben nem lehetségesek. Úgy véljük, hogy az ebben a tanulmányban javasolt értékelési stratégia a részletesFibrózisa patológiás változásokban részt vevő mechanizmusokVesebetegség. A kifejlesztett 3D vesefibrózis-on-a-chip potenciális in vitro modellként használható, ami közelebb visz minket egy továbbfejlesztett vese-on-a-chip modell létrehozásához.

cistanche phelypaes: vesebetegségek kezelése

Hivatkozások

1. Határ, W.; Nemes, N. Átalakító növekedési faktor a szövetekbenFibrózis.N. Engl. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.; Huang, X.R.; Li,A.G.; Liu, F; Li,J.; Truong, L.D.; Wang, X.J.; Lan, H.Y.A TGF-betal jelátviteli mechanizmusa a vesegyulladás megelőzésében: A Smad szerepe. I. Am. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [Kereszthivatkozás]

3. Liu,Y.VeseFibrózis: Új betekintés a patogenezisbe és a terápiákba. Vese Int.2006,69,213-217. [Kereszthivatkozás] [PubMed]

4. Andes, D.; Craig, W.A. Állati modell farmakokinetika és farmakodinamika: Kritikus áttekintés. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [Kereszthivatkozás]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip és a vese. Vese Resztri. Gyakorlat.2015, 34, 165-169. [Kereszthivatkozás] [PubMed]

6. Jang, K. J.; Mehr, A.P; Hamilton, G.A.; McPartlin, L.A.; Csung, S.; Suh, K.Y; Ingber, D.E.Emberi vese proximális tubulus on-a-chipen a gyógyszerszállításhoz és a nefrotoxicitás értékeléséhez. Egész szám. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. "Orgona-on-chipek" mainstreammé válnak. Természet 2015, 523, 266. [Kereszthivatkozás]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, C. V.; MuLler, G.A.TGF-β1proliferációt indukál humán vese fibroblasztokban a fibroblaszt bázikus növekedési faktor (FGF-2) indukciójával. Vese Int. 2001, 59, 579-592. [Kereszthivatkozás] [PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M.A pirfenidon anti-fibrotikus hatása Duchenne izomdisztrófiás betegek izomból származó fibroblasztjaiban. Élet Sci. 2016, 145,127-136. [Kereszthivatkozás]

10. Davis, GE.:Camarillo. C, W. Az alfa-2 béta-1 integrin-függő pinocytikus mechanizmus, amely intracelluláris vakuolképződéssel és koaleszcenciával jár, háromdimenziós kollagén mátrixban szabályozza a kapilláris lument és a csőképződést. Exp. Cell Res. 1996, 224, 39-51. [Kereszthivatkozás]

11. Bayless, K. J.; Davis, G. A Cdc42 és a Race GTPases szükséges a kapilláris lumen kialakulásához háromdimenziós extracelluláris mátrixokban. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, T.M.; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, D.L. Biomérnöki 3D emberi veseszövet, a nefrotoxicitás meghatározásának platformja. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [Kereszthivatkozás]

13. Astashkina, A.I.; Mann, B.K. Prestwich, G.D.; Grainger, D.W. A prediktív gyógyszer nephrotoxicitás biomarkereinek összehasonlítása a vese 3-D primer organoid tenyészetben és a halhatatlan sejtvonalakban. Bioanyagok 2012, 33, 4712-4721. [Kereszthivatkozás] [PubMed]

14. Meng, X.M.; Nikolic-Paterson, D.J.; Lan, H.Y. TGF-beta: A fő szabályozójaFibrózis. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [Kereszthivatkozás]

15. Pardali,E.; Goumans, M. J.; tíz Dijke,P. A TGF-béta család tagjainak jelzése érrendszeri morfogenezisben és betegségben. Trendek Sejt Biol.2010, 20, 556-567. [Kereszthivatkozás] [PubMed]

16. Cunha, S.L; Pietras, K. ALK1, mint a rák antiangiogén terápiájának feltörekvő célpontja. Vér 2011,117,6999-7006. [Kereszthivatkozás]

17.Klagsbrun, M.;D" Amore, P.A. Az angiogenezis szabályozói. Annu. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [Kereszthivatkozás]

18. Folkman, J.; Shing, Y.Angiogenezis. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [Kereszthivatkozás]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. A hipoxia által indukált vaszkuláris endoteliális növekedési faktor közvetítheti a hipoxia által kezdeményezett angiogenezist. Természet 1992, 359, 843-848. [Kereszthivatkozás]

20. Kim, K. J.; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Phillips, H.S.; Ferrera, N. A vaszkuláris endoteliális növekedési faktor által kiváltott angiogenezis gátlása elnyomja a tumor növekedését in vivo. Természet 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Bors, M.S.; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Erős szinergizmus a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor és az alapvető fibroblaszt növekedési faktor között az angiogenezis in vitro indukciójában. Biokémia. Biofizs. Res. Commun.1992,189,824-831. [CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J.A vaszkuláris endoteliális növekedési faktor és az alapvető fibroblaszt növekedési faktor szinergikus hatásai a szarvasmarha kapilláris endoteliális sejtjeinek proliferációjára és zsinórképződésére a kollagén gélekben. Investig.1993,69, 508-551. [PubMed]

KATTINTSON IDE AZ I. RÉSZHEZ.