Fenolvegyület-tartalom és genetikai sokféleség a populáció szintjén a medveszőlő (Arctostaphylos Uva-ursi, Ericaceae) természetes elterjedési tartományában az Ibériai-félszigeten

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Absztrakt:A medveszőlő (Arctostaphylos uva-ursi) egy gyógynövény, amelyet hagyományosan húgyúti fertőzések kezelésére alkalmaznak, mivel magasarbutin(hidrokinon-D-glükozid), amelyet ma már főleg természetes bőrfehérítő szerként használnak a kozmetikumokban. A medveszőlőt természetesként is javasoltákantioxidánsadalékanyag a levelek fenolvegyületeinek magas tartalma miatt. A fenolvegyületek változását 42 vadon élő medveszőlő populációban vizsgáltuk, hogy tisztázzuk, hogy a belső biológiai, éghajlati és/vagy földrajzi tényezők befolyásolják-e a fenoltartalmat az Ibériai-félsziget természetes elterjedésében. A medveszőlő leveleit ősszel, több mint hároméves periódusban (2014–2016) gyűjtötték szélességi és magassági gradiens populációiban. A metanolos kivonatok széles tartományban változtak az összes fenoltartalomban, és különböző fenolprofilokat mutattak.arbutin(ennek a fő alkotóelemnek a szintje 87 és 232 mg/g dr wt között változott), de a katechin- és miricetintartalom is, amelyet földrajzi és éghajlati tényezők befolyásoltak. Mérsékelt szintű eltéréseket mutattak ki a genom méretében – áramlási citometriával értékelve – és két plasztid DNS-régióban is a populációk között. A populációk genetikai és citogenetikai differenciálódása gyenge, de szignifikánsan összefüggésbe hozható a fitokémiai diverzitással. Elit medveszőlő genotípusok magasabbantioxidánskapacitást ezt követően azonosították.

Kulcsszavak: arbutin; genetikai és fitokémiai változékonyság; genom mérete; haplotípusok;természetesantioxidánsok

A cistanche természetes antioxidáns

1. Bemutatkozás

A növényspecifikus metabolitok szintézise időben (azaz ontogén, fenológiában és indukált védekezésben) és térben változik, mivel döntő szerepet játszik a növények környezeti feltételekhez való alkalmazkodásában, miközben a genetikai variáció is felelős a kémiai sokféleségért [1]. Ezen vegyületek közül a fenolok sokféle mono- és polimer szerkezettel rendelkeznek, amelyek fiziológiai szerepek széles skáláját teljesítik [2]. A speciális metabolitok bioszintézisét nagymértékben befolyásolják a környezeti tényezők, például a hőmérséklet, a csapadék vagy a napsugárzás, amelyek viszont gyakran vannak kitéve szélességi, hosszirányú vagy magassági gradienseknek. A fenolvegyületek felhalmozódása különösen általános válasz az UV-B (280–315 nm) sugárzás fokozott szintjére. A mediterrán térségben nyáron és nagy tengerszint feletti magasságban termő növényekben specifikus vegyületvariációról számoltak be, ahol nagyobb az UV-B előfordulási gyakorisága, és a fahéjsavak és a flavonoidok mutatták a legmagasabb UV-abszorpciós arányt [3].

Arbutin(hidrokinon-D-glükozid) egy egyszerű fenolvegyület, amely korlátozottan fordul elő néhány olyan nemzetségbe tartozó fajok leveleiben, mint az Arbutus, Arctostaphylos, Pyrus vagy Vaccinium. Az arbutin fő természetes forrása, a medveszőlő (Arctostaphylos uva-ursi () L.) Spreng.) évszázadok óta használják húgyúti fertőzések és egyéb vesebetegségek kezelésére [4], gyógynövénykészítményeket pedig még ma is készítenek [5]. Az elmúlt években az alkalmazások spektrumaarbutinkiszélesedett, főként természetes bőrfehérítő szerként a kozmetikai iparban [6] és a klinikai terápiákban, köszönhetőenantioxidáns, antibiotikus, gyulladáscsökkentő és daganatellenes tulajdonságokkal [7]. Következésképpen egyre nagyobb az érdeklődés további természetes források felkutatása irántarbutin, valamint biotechnológiai folyamatok, amelyek helyettesíthetik a kémiai szintézist [8,9]. Ebben az összefüggésben az arbutin in vitro előállítása Datura inoxia sejttenyészetekkel elérte a kísérleti skálát [10].

Továbbáarbutin, más fenolos vegyületek is hozzájárulnak az A. uva-ursi aktív tulajdonságaihoz, mint például a flavonoidok és a tanninok [11,12], amelyek közül a katechin és a corilagin a legrelevánsabb levelek [13]. Az élelmiszeriparban a természetes vegyületek, mint a növényi fenolok helyettesítik a szintetikus anyagokatantioxidánstartósítószerek [14]. Az A. uva-ursi-t adalékanyagként használták, különösen húskészítményekben [15–19], de aktív csomagolásban is [20]. Végül, az A. uva-ursi potenciálját a bőriparban cserzőszerek forrásaként a közelmúltban javasolták [21].

Az Európai Gyógyszerügynökség „medveszőlőlevél” monográfiája [5] legalább 7 százalékot javasoltarbutintartalom a szárított levelekben, mint a növényi készítmények követelménye. Az elmúlt évtizedekben végzett tanulmányok szerint a medveszőlő leveleinek arbutintartalma 0 százalék és 18 százalék között változott, amit analitikai eljárások, természetes variabilitás, növekedési feltételek és a betakarítás időpontja magyaráztak [4]. Az arbutintartalmat általában nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával határozzák meg [4,12,22–24], és a korábbi tanulmányok magasabb értéket mutattak ki.arbutinAz ősszel gyűjtött medveszőlő növények tartalmi értékei nagyobbak, mint a tavasszal gyűjtötteké [4]. A medveszőlő változatos kemotípusait írtak le, amelyek az A. uva-ursi alfajok földrajzi elterjedéséhez és fajokon belüli differenciálódásához kapcsolódnak. A legszembetűnőbb közölt fitokémiai variáció az arbutin hiánya az A. uva-ursi subsp. stipitata Packer és Denford, de utaltak a metil-arbutin, az ellagsav vagy a miricetin tartalom különbségeire is. A kvercetin a medveszőlő levelében is megtalálható, amelyben mindkét aglikon, valamint 3-O-glikozidjaik a leggyakrabban előforduló flavonoidok [4]. A legtöbb ilyen vizsgálatot azonban több évtizeddel ezelőtt végezték, és napjainkban a medveszőlő fajokon belüli változása folyamatosnak tekinthető. A leírt 14 alfaj, köztük egy Spanyolországból származó (A. uva-ursi subsp. crassifolius (Braun-Blanq.) Rivas Mart. ex Torre, Alcaraz és MB Crespo), jelenleg nem elfogadott nevek, és az A. uva-ursi szinonimája. 25]. Ezért új vizsgálatokra van szükség, hogy bővítsük ismereteinket a különböző helyekről ipari célokra betakarított nyersanyagokban ténylegesen jelen lévő vegyületekről, mivel az A. uva-ursi leveleinek kémiai profilja fenolok, tanninok, és flavonoidsin újabb tanulmányok, amelyeket az interspecifikus szintű különbségek vizsgálatára végeztek [23,26,27].

A populáció szintű genetikai (beleértve a citogenetikai) diverzitás elősegíti a különböző környezeti feltételekhez való alkalmazkodást [28]. A közelmúltban áttekintették a poliploidizáció hatásait a speciális metabolitok gyógy- és aromanövényekben történő előállítására [29]. Ebben az összefüggésben a genom mérete a növényi variabilitás felmérésében széles körben használt paraméter, mivel az intraspecifikus variációt gyakran észlelik ([30] és hivatkozások), sok más biológiai tulajdonsággal korrelál, és releváns szerepet játszik az evolúciós folyamatokban [31–35 ]. A nukleáris DNS mennyisége (azaz a genom mérete) és a fitokémiai diverzitás közötti összefüggésekkel foglalkozó tanulmányok azonban nagyon ritkák [36,37]. A fitokémiai és genetikai diverzitás közötti kapcsolatot nukleáris, de különösen plasztidDNS-markerek [38] segítségével értékelték, különösen gyógynövény- [39] és kultúrnövény [40] esetében.

A medveszőlő széles körben elterjedt a környező területen, de Európában a begyűjtött vadon élő populációk nagy része a keleti országokban, Ausztriában, Svájcban, Olaszországban és Spanyolországban található. Az Arctostaphylos uva-ursi Spanyolország keleti középső részén, hegyvidéken, 550-2350 m tengerszint feletti magasságban (tszf). Északon gyakoribb, mivel az alacsonyabb szélességi fokokon elhelyezkedő populációk ritkábban fordulnak elő, és általában kevesebb egyedük van. A spanyolországi arbutintartalom változékonyságára vonatkozó jelenlegi tanulmányok az északkeleti populációk 8 százalékától [41] és a spanyol növényi anyagok 19 százalékáig terjedő értékekre utaltak, amelyeket egy Németországban végzett vizsgálat [42] értékelt. Vizsgálatunk célja olyan tényezők feltárása, mint például a genom mérete és a genetikai diverzitás, amelyek megmagyarázzák a spanyolországi medveszőlő természetes elterjedésének fitokémiai eltéréseit. Eredményeink hozzájárulhatnak a növényi anyagok kiválasztásához a gyógyszer-, kozmetikai és élelmiszeripar számára.

bőrfehérítő étel: CISATNCHE

2. Eredmények és megbeszélés

2.1. A kémiai sokféleség elemzése

A medveszőlő levelei összesen 249 növényről vettek mintát 42 spanyolországi helyen, és a hároméves periódusban, 2014–2016 között (1. ábra, S1 táblázat), eltérő száraztömeg-százalékot mutattak, a következőktől: 46,7 (LO) és 55,1 százalék (CP), átlagosan 50,1 ± 2,7 százalék (az adatok nem láthatók). Az összes fenol és arbutintartalom meghatározásához 2014-ben és 2015-ben gyűjtött mintákból készített metanolos kivonatokat használtunk. Folyamatos eltérések széles skáláját figyeltük meg mindkét paraméter esetében, szignifikáns különbségekkel (p < 0,001)="" a="" növények="" között.="" 80="" növény="" levélkivonatai,="" amelyekből="" 2014="" őszén="" mintát="" vettek="" (2a.="" ábra),="" 103,3="" ±="" 4,8="" mg="" gae/g="" dr="" wt="" (li-4)="" és="" 206,4="" ±="" 6,5="" mg="" gae/g="" dr="" wt="" (sr)="" közötti="" összes="" fenoltartalmat="" mutattak.="" -2),="">arbutina tartalom 92.0 ± 3.0 mg/g dr wt (AN-6)-ról 194,2 ± 5,6 mg/g dr wt-re (SE-8) ingadozott. 2015 94 növényből gyűjtött levelekből készített kivonatok elemzése (2b. ábra) szintén széles fitokémiai eltérést mutatott, 110,5 ± 3,6 mg GAE/g dr wt(PI-4) és 200,9 ± 9,8 között. mg GAE/g dr wt (LO-4) az összes fenoltartalomban, míg az arbutintartalom 87,1 ± 0,4 mg/g dr wt (ET-2) és 211,5 ± 5,9 mg/g dr wt (LI) között volt. -2). Továbbá a gyűjtés évétől függetlenül jelentős különbségek mutatkoznak az összes fenolban ésarbutintartalmát a legtöbb populációban ugyanazon a helyen termő medveszőlő növények között mutatták ki (az adatokat nem mutatjuk be). Az arbutinszintek szignifikánsan korreláltak a medveszőlő levélkivonatainak összes fenoltartalmával, mivel szignifikáns Pearson-koefficienseket becsültünk a következőre: {0}} 0,332 (p=0,003) 2014-re, és 0,289 a 2015-ös adatokra (p=0,005). A mindkét évben mintavételezett 48 növény arbutintartalma nem változott szignifikánsan (p=0,380).

A populációkon belüli változékonyság ellenére és a betakarítás évétől függetlenül a varianciaanalízis kimutatta, hogy a medveszőlő levélkivonatainak arbutintartalma is függött (p < {0}}.00="" 1)="" onpopulációs="" hely="" (3a,="" b="" ábra),="" amint="" a="" medveszőlő="" leveleinek="" összes="" fenoltartalma="" a="" 2015-ben="" elemzett="" (p="">< 0.001,="" 3b.="" ábra).="" ezzel="" szemben="" az="" összes="" fenoltartalomban="" nem="" figyeltek="" meg="" szignifikáns="" különbségeket="" (p="0,080)" a="" 2014-ben="" mintavételezett="" 10="" populáció="" között,="" amelyek="" viszonylag="" kis="" területen="" helyezkedtek="" el,="" de="" széles="" magassági="" tartományban="" oszlanak="" el,="" 424-től="" (ba)="" népesség)="" 1410="" m="" tengerszint="" feletti="" magasságra="" (pa="" népesség).="" ez="" a="" magasságváltozás="" az="" éghajlati="" viszonyok="" közötti="" különbségekkel="" függött="" össze="" (s1="" táblázat),="" mivel="" a="" magasabban="" fekvő="" helyeket="" alacsonyabb="" átlaghőmérséklet="" (pearson-féle="" korrelációs="" együttható,="" r="−0,666," p="">< 0,001)="" és="" magasabb="" éves="" csapadékmennyiség="" jellemezte="" (="" r="0.485," p="">< 0,001),="" ami="" alacsonyabb="" globális="" sugárzási="" szintet="" eredményezett="" (r="−0,390," p="">< 0,001).="" ezen="" túlmenően="" ebből="" az="" adatsorból="" alacsony,="" de="" szignifikáns="" pozitív="" korrelációt="" becsültünk="" meg="" az="" éves="" csapadék="" és="" a="" medveszőlő="" növények="" összes="" fenoltartalma="" között="" (spearman-féle="" együttható="" rho="0.256," p="0.022)," míg="" a="" 2015-ös="" adatsorból="" amikor="" nagyobb="" területen="" vettünk="" mintát="" a="" populációkból,="" szignifikáns="" pozitív="" korrelációt="" észleltünk="" az="" éves="" csapadék="" és="" az="" arbutintartalom="" között="" (rho="0.246," p="0.017)." ez="" a="" szignifikáns="" összefüggés="" arra="" utal,="" hogy="" az="" északi="" helyeken="" és="" viszonylag="" magasabb="" tengerszint="" feletti="" magasságban="" termő="" medveszőlő="" növények="" gyakran="" magasabb="" értéket="">arbutintartalommal (rho=0.217, p=0.035 és rho=0.269, p=0.009). Mint már említettük, ezek a magasabb arbutintartalom szignifikánsan korrelált a medveszőlő leveleinek magasabb összes fenoltartalmával, amely hasonló volt (átlagosan 154,4 ± 19,6 mg GAE/g dr wt) a más növényfajokból származó vizes kivonatokhoz, amelyeket pl.antioxidánsadalékanyagok az élelmiszeriparban [43], mint az arozmaring (185.0 mg GAE/g dr wt), tea (149,3 mg GAE/g dr wt) vagy guava (154,4 mg GAE/g dr wt). Ezek az eredmények megegyeznek a korábbi hivatkozásokkal, és Wrona és munkatársai által végzett tanulmány is megerősítette. [20] néhány 2015-ben gyűjtött spanyol medveszőlő levélmintát használva, amelyeknél magasabbantioxidánskapacitás magasabb voltarbutintartalmat. E célból elit medveszőlő genotípusok is azonosíthatók, például az LO populáció 1., 4., 7. és 8. egyedei, amelyek átlagosan 183,3 ± 16,4 mg GAE/g dr wt halmozódtak fel a két év alatt.

A fenolvariáció mintázatait befolyásoló éghajlati és földrajzi tényezők további tisztázása érdekében 2016:140 őszén 29 helyen termő medveszőlő növények kimerítőbb mintagyűjtését végeztük, és öt fenolos vegyületet számszerűsítettünk. (S1a ábra), amelyeket standardokkal együtt eluálva azonosítottak acetonitril/víz gradiensben (S1b ábra). Az analízis az arbutin-, kávésav-, katechin-, miricetin- és kvercetin-glükozid-tartalmak folyamatos változásának széles tartományát mutatta ki, szignifikáns különbségekkel a növények között, amelyeket általában a populációkon belül is megfigyeltek (az adatokat nem mutatjuk be). A fő fenolos összetevők esetében azt találtuk, hogy az arbutintartalom 91,1 ± 5.0 (LB{{10}}) és 232,4 ± 2,8 mg/g dr wt (PT{{15) }}), míg a katechintartalom 4,1 ± 0,1 (AF{{20}}) és 45,5 ± 1,4 mg/g dr wt (LB-5) között változott. A másik két flavonoid esetében a miricetin nem volt kimutatható egyes növényekben több populációból, míg a PO{{30}}-ban elérte a 21,2 ± 1,2 mg/g dr wt értéket, a kvercetin-glükozid pedig 3,8 ± 0,1 (CO) között változott. -3) 22,8 ± 0,8 mg/g dr wt (BT-3) értékre. A medveszőlő levélkivonatokban alacsonyabb kávésavtartalmat határoztunk meg, amely 1,8 ± 0,0 (IZ-1) és 7,1 ± 0,3 mg Növény/g dr wt (SI-4) között változott.

Az egyének között megfigyelt eltérések ellenére a populációk közötti szignifikáns különbségeket is becsülték ezen öt vegyület esetében (Kruskal–Wallis tesztek, p < {{0}}.001="" és="" p="0)." 009="" forkávésavtartalom).="" átlagosan="" magasabb="" arbutintartalmat="" határoztak="" meg="" az="" ab,="" gu,="" ln="" és="" lo="" természetes="" populációiból="" származó="" növényekben="" (4a.="" ábra),="" ami="" szignifikánsan="" eltért="" (a="" bonferronikorrekciót="" követően)="" az="" lb="" populációból="" származó="" növények="" alacsony="" tartalmától="" (186,7="" ±="" 22,3,="" 193,9="" ±="" 12,1,="" 169,5="" ±="" 10,0="" és="" 169,2="" ±="" 5,2="" mg/g="" dr="" wt="" elöl="" 111,8="" ±="" 16,0="" mg/g="" drwt).="">arbutina 2015-ben is mintavételezett növények tartalma nem változott szignifikánsan az évek között (p=0.821). Az LB populáció viszont magasabb átlagos katechinszintet mutatott (4b. ábra), ami szignifikánsan eltért ennek a flavonoidnak az AF és LC populációkban kimutatott alacsony átlagos tartalmától (32,8 ± 9,8 fronttól 5,7 ± 1,9-ig és 5,3 ± {{2{{62}). }}},5 mg/g dr wt). Az átlagos miricetin és kvercetin glükozidtartalom a 4c. ábrán látható, szignifikáns különbségekkel az AB, CG, LB és PO populációk között, magasabb miricetintartalom mellett (15,1 ± 4.0, 14,6 ± 5,7, 10). 0,7 ± 2,8, illetve 17,2 ± 3,9 mg/g dr wt), összehasonlítva a CO és OD populációk átlagos növényekén felhalmozódott alacsony szintekkel (1,2 ± 1,5 és 2,4 ± 3,6 mg/g dr wt). , és azt is jelenti, hogy az AA, BT, CP, IZ és LB populációkban meghatározott kvercetin-glükozid-tartalom (15,2 ± 3,7, 15,9 ± 4,6, 11,8 ± 2,3, 15,7 ± 3,4, illetve 13,1 ± 4,6 mg/g spektivikusan drasztikusan) szignifikánsan különbözött. a populációban lévő CO-tól (4.0 ± 0,1 mg/g dr wt). Ezzel szemben az átlagos kávésavtartalom 2,1 ± 0,2 mg/g dr wt értékről az AB, CE, PT és SA populációban 3,5 ± 1,2 mg/g drwt értékre ingadozott az AF populációban vagy 3,4 ± 2,2 mg/g dr wt népesség SI; ezért a populáción belüli variáció miatt nem figyeltek meg szignifikáns különbségeket (átlagos tartalom 2,7 ± 0,8 mg/g dr wt). Ezek az eredmények kiegészítik a Wrona et al. által megfigyelt fenolos metabolitok változását. [20], a 2015-ben mintavételezett medveszőlő nyolc helyére vonatkozóan, amelyeket az UPLC®-ESI-Q-TOF withMSE technológiával elemeztek.

A 2014-es és 2015-ös medveszőlő mintákkal végzett elemzés eredményeivel ellentétbenarbutina 2{{10}}16 mintában meghatározott tartalom alacsony, de szignifikáns pozitív korrelációt mutatott a sugárzással (rho=0.256, p=0.002) és a maximális középhőmérsékletekkel (rho{ {5}}.183, p=0.030), és ezért fordítottan korreláltak az éves csapadékértékekkel (rho=−0,265, p=0,002). Ezeket a különbségeket a tengerszint feletti magasság változásai is összefüggésbe hozták (rho=−0,192, p=0,023), de ezt a negatív összefüggést az említett alacsony szint magyarázta.arbutinaz LB populációból származó növények tartalma, amelyek 1720 méteren helyezkednek el. Hasonló változási mintát figyeltek meg a miricetin-tartalom esetében is, mivel ennek a vegyületnek a magasabb szintjei szignifikánsan összefüggésbe hozhatók a magasabb sugárzási szint mellett termő medveszőlővel (rho=0.226, p=0.{{1{{ 12}}}}07). Az arbutinnal ellentétes mintát figyeltek meg a katechin esetében, mivel pozitív korrelációt becsültek e flavonoid és az éves csapadék között (rho=0.398,p < 0.0{{23)="" }}1),="" és="" ennek="" megfelelően="" negatív="" korrelációkat="" észleltünk="" a="" sugárzással="" és="" a="" maximális="" átlagos="" hőmérséklettel="" (rho="−0,307," p="">< 0,001="" és="" rho="−0,470," p="">< 0,001,="" illetőleg).="" ez="" az="" éghajlati="" tényezők="" változása="" megmagyarázta,="" hogy="" a="" tengerszint="" feletti="" magasság="" és="" a="" szélesség="" egyaránt="" befolyásolta="" a="" medveszőlőlevelek="" katechin="" tartalmát="" (rho="0,410" és="" 0,490,="" p="">< 0,001).="" a="" 2016-ban="" mintavételezett="" 29="" helyszínnek="" megfelelő="" növénykémiai,="" éghajlati="" és="" földrajzi="" adatokkal="" végzett="" főkomponens-elemzés,="" amelyben="" az="" első="" két="" komponens="" a="" megfigyelt="" eltérések="" 60="" százalékát="" magyarázta,="" megerősítette="" ezeket="" az="" eredményeket="" (5.="" ábra).="" nem="" észleltünk="" szignifikáns="" korrelációt="" a="" medveszőlő="" növények="" kávésav-="" vagy="" kvercetin-glükozid-tartalma="" és="" sem="" az="" éghajlati,="" sem="" a="" földrajzi="" tényezők="" között,="" bár="" enyhe,="" de="" szignifikáns="" korrelációt="" becsültünk="" a="" miricetin="" és="" a="" kvercetin-glükozid-tartalom="" között="" (rho="0.184," p="" {{31}="" },030),="" valamint="" a="" medveszőlő="" növények="" miricetin="" és="" kávésav="" tartalma="" (rho="−0,176," p="">

A megfigyelt eltérő éghajlati mintázatok ingadozásaarbutinA medveszőlő növények tartalma arra utal, hogy bár ennek a metabolitnak a bioszintézise valószínűleg megnövekszik magasabb sugárzás és hőmérséklet mellett, valószínűleg a vízhiány korlátozza az A. uva-ursi-t a Földközi-tenger és a déli régiókban. Del Valle et al. [44] a spanyolországi Silene littorea (Caryophyllaceae) flavonoidok felhalmozódásának szélességi mintázatáról számolt be, ahol a déli populációkban magasabb flavonoidtartalmat határoztak meg, mivel a szélesség negatívan korrelált az UV-B sugárzással és a hőmérséklettel, valamint pozitívan a csapadékkal. A globális sugárzás egyértelmű szélességi gradienst mutat, nagyobb incidenciával az Ibériai-félsziget déli és keleti részén, és jelentős a meteorográfiai hatás is, mivel a felhőperzisztencia modulálja ennek a sugárzásnak a nagyobb magasságokban történő előfordulását. Spanyolország UV-sugárzási térképe [45] magas korrelációra hivatkozott (r > 0,9) az UV-B és a globális sugárzási adatok között. E hivatkozás szerint a magasabb mutatót mutató medveszőlő populációk átlagaarbutinVizsgálatunk tartalma többnyire 2403–2451 J/m2 UV-B sugárzás alatti területeken található.

A medveszőlő katechin-variációjára vonatkozó eredményeink földrajzi mintázatot mutattak (5. ábra), és megegyeznek az Európa északi országaiból származó más növényfajokon végzett vizsgálatokkal. A speciális metabolitok, például a flavonoidok és az antocianinok magasabb tartalmáról számoltak be a magasabb szélességi fokon növekvő növényekben, valószínűleg a hosszabb nappali fényperiódusok és az alacsonyabb éjszakai hőmérséklet miatt [46]. Ezáltal a Juniperus communis tűlevelekben az oldható fenoltartalom a szélességi fok és a tengerszint feletti magasság növekedésével nőtt a finn populációkban [47], és 10-19 százalékkal magasabb fenoltartalom is volt magasabb szélességi fokon a három Ribes spp. két finnországi helyen elemzett fajták [48]. Ezek a szerzők az alacsonyabb fenoltartalmat a magasabb sugárzási szinttel és magasabb hőmérséklettel hozták összefüggésbe. A Vaccinium két fajának (szintén az Ericaceae családból származó) gyümölcseinek flavonoid tartalma földrajzi gradienst mutatott, az északi szélességi körökön nagyobb mennyiségű offlavonoid [49,50].

A magassági ingadozással összefüggésben a flavonoidok magasabb szintjét más Ericaceae fajok, a Calluna vulgaris nagyobb magasságban növekvő populációiban határozták meg [51]. A magassági gradiensek a spanyol Arnica montana [52] és Quercus robur[53] populációinak speciális anyagcseréjét is befolyásolták. Ez utóbbi munka szignifikáns pozitív összefüggést mutatott ki az összes levélfenol koncentrációja és a magasság között, mivel a gradiens csak a flavonoidoktól függ, ami arra utal, hogy ezek vegyületek határozták meg a kapcsolatot a teljes fenolok között. Ezek az eredmények megegyeznek a katechintartalom mintázatára vonatkozó becsléseinkkel. Végül, a csapadék gradiens jelentős különbségeket mutatott a polifenolok összetételében egy afrikai gyógycserben (Myrothamnus flabellifolia), amelynél az anyagcsere-különbségek megegyeztek a populációk genetikai szerkezetével [54].

A CISTANCHE AZ ÖREGEDÉS ELLENI

2.2. Genomméret és szekvencia adatok elemzése

A medveszőlő növények genomméretének 2C értékei 2,50 és 3,15 pg között változtak (1. táblázat). Kisebb eltéréseket találtak a nukleáris DNS mennyiségében a populációk között (Kruskal–Wallis χ2=87.639, df=36,p=3.39 × 10−6). Dunn-teszt Bonferroni korrekcióval statisztikailag szignifikáns különbségeket mutatott ki a következők között: AL és SI populációk (Z=-3,972, p=0,024), LE és SI (Z=-4,196, p {{ 21}}.009), valamint SE és SI (Z=−4.236, p=0.008). A Pontils (PO) populáció az A. uva-ursi var.crassifolius típushelye, amelyet később A. uva-ursi subsp. crassifolius, és jelenleg taxonómiailag nem tekinthető (lásd a bevezetőt), közepes értéke (2,88 pg), a faj más populációiban kapott értékek tartományán belül. Ez az első kiterjedt populációs tanulmány a nukleáris DNS mennyiségéről a fajban és az egész nemzetségben, mivel a mai napig egyetlen elérhető információ ugyanazon taxon egy balkáni populációjából származik [55]. Az ott közölt 2C érték, 2,49 pg, éppen az itt vizsgált adatkészlet variációs tartományának alsó határán van. Nem találtunk összefüggést a genom mérete és a populáció magassága között. Az egyedek DNS mennyisége gyenge pozitív szignifikáns korrelációt mutatott aarbutintartalom, amikor 158 medveszőlő növény adatait hasonlították össze (rho=0.187, p=0.018), míg más szignifikáns korrelációt nem találtunk a genomméret és más változók között. Ez az eredmény összhangban van a speciális metabolitok termelésének növekedésével, amelyet általában a gyógy- és aromanövényekben figyeltek meg a poliploidizálást követően [29].

Az rpl{{0}}trnL és psbE-petN intergenikus távtartók újonnan előállított szekvenciáit két mátrixban állítottuk össze (566 és 874 bp-t tartalmaztak), amelyeket egyetlen 1440 bp méretű mátrixba fűztünk össze. Mérsékelt variációs szintet mutattak ki ezekben a plasztid régiókban (hat nukleotid szubsztitúció és négy indel). Tíz különböző haplotípust találtunk 0,468 haplotípus diverzitással (Hd) (1. táblázat). A legtöbb populáció (21) csak egy haplotípust tartalmazott, míg közülük ötben az egyedek közötti sokféleség mutatkozott. A leggyakrabban előforduló 1-es haplotípus mutatta a legmagasabb gyakoriságot (71,4 százalék), ezt követte a 2-es haplotípus (15,2 százalék), míg a többiek sokkal alacsonyabb gyakoriságot mutattak (0,04-0,01 százalék). A haplotípusok földrajzi megoszlása ​​a 6. ábrán látható. Az 1-es haplotípust 32 populációban találták meg – ezek közül 18-ban rögzítették –, a legdélibb lelőhelyek kivételével az összes mintaterületen elosztva. A 2-es haplotípust tíz populációban találták meg, és ez volt a kizárólagos haplotípus a két legdélibb populációban (HU és LV), valamint a PR-ben. A 4-es haplotípus három Pireneusi populációtól származott, míg a 8-as haplotípus két populációban jelent meg az Ibériai-félsziget keleti részéből. Az evolúciós kapcsolatokat tekintve a parszimónia hálózatban (6. ábra) a legtöbb haplotípust egy vagy két mutációs lépés köti össze. Az 1-es haplotípus központi helyet foglal el, hét haplotípus kapcsolódik hozzá.

Egy Mantel-teszt a pDNS genetikai és kémiai páronkénti távolságmátrixai között gyenge, de szignifikáns korrelációt (r=0.301; p=0.048) mutatott ki a genetikai differenciálódás és az öt kémiai komponens koncentrációja között, amelyet mértek. 2016-os adatsor. A Mantel-teszt nem mutatott ki szignifikáns összefüggést a 2016-ban mintavételezett 25 populáció genetikai és földrajzi távolsága között (r=0.103, p=0.207), illetve ezek között a kémiai és földrajzi távolságok között. 25 populáció (r=0.191, p=0.050). A spanyolországi medveszőlő populációira itt közölt fitokémiai variabilitást ezért a pDNS haplotípus-variáció mérsékelt szintje egészíti ki, ami a medveszőlő populációkban található észak-déli genetikai differenciálódás, amely összevethető más növények filogeográfiai mintázatával (pl. [56–58]). Mindez a homogenitás várhatóan alacsony szaporodási képességű növényekben [59], mint például az A. uva-ursi, amely gyenge csírázási arányt és magas elhullási arányt mutat a fiatal palántákon [4], ennek ellenére a pDNS által mutatott szerény genetikai differenciálódás korrelált a biokémiai adatokkal. 6. ábra: A pDNS haplotípusok földrajzi megoszlása ​​az Arctostaphylos uva-ursi ibériai populációiban. A populációkódok megfelelnek az S1 táblázatban szereplőknek, a kördiagramok pedig az egyes haplotípusokat mutató egyedek százalékos arányát mutatják az egyes populációkban. téglalap, a te evolúciós kapcsolatait bemutató statisztikai takarékossági hálózat Az A. uva-ursi populációban n plasztid haplotípus képviselteti magát. A haplotípusokat összekötő vonalak mentén minden csík egy mutációs lépést jelez a vizsgálatban szekvenált pDNS régiókban. A pDNS genetikai és kémiai páronkénti távolságmátrixai közötti Mantel-teszt gyenge, de szignifikáns korrelációt mutatott (r=0.301; p {{28) }}.048) a genetikai differenciálódás és az öt kémiai komponens 2016-os adatsorra mért koncentrációja között. A Mantel-teszt nem mutatott ki szignifikáns összefüggést a genetikai és földrajzi távolság között a 2016-ban vett 25 populáció között (r=0.103, p=0.207), vagy a kémiai és földrajzi páronkénti távolság között a 25 populáció között ( r=0.191, p=0.050). A spanyolországi medveszőlő populációkra vonatkozóan itt közölt fitokémiai variabilitást ezért a pDNS haplotípus variáció mérsékelt szintje egészíti ki, ami a medveszőlő populációkban található észak-déli irányú genetikai differenciálódás, amely összehasonlítható más növények filogeográfiai mintázataival (pl. [56–58]. Mindez a homogenitás alacsony szaporodási képességű ültetvények várhatók [59], mint például az A. uva-ursi, amely gyenge csírázási arányt és a fiatal palánták magas mortalitási arányát mutatja [4]. Mindazonáltal a pDNS által mutatott szerény genetikai differenciálódás korrelált a profilokból becsült biokémiai páronkénti távolságokkal Ez a genetikai és fitokémiai változatosság (amely, mint említettük, nem a földrajzi távolságokkal volt összefüggésben), valamint a genomméret és az arbutintartalom közötti gyenge, de szignifikáns korreláció arra utalhat, hogy a természetes genomi variabilitás befolyásolja a fenolvegyületek hozamát A. uva-ursi Azonban a hipervariábilis molekuláris m Arkerek egy kiterjedtebb populációs mintavételben szükségesek ezeknek a filogeográfiai mintáknak és a genetikai és biokémiai variabilitás közötti összefüggésnek a megerősítéséhez.

A CISTANCHE ANTIOXIDÁCIÓS HATÁSA VAN

3. Anyagok és módszerek

3.1. Növényi anyag

Fitokémiai elemzéshez 2014, 2015 és 2016 őszén összesen 249 medveszőlő növényből vettek mintát 42 populációban, amelyek reprezentálják e növényfaj természetes elterjedését az Ibériai-félszigeten (1. ábra és S1. táblázat). Először 2014 őszén 80 növény véghajtásait gyűjtöttük össze tíz spanyol populációban (AG, AN, BA, LI, LO, PE, PÁ, SR, SC és SE), amelyek viszonylag kis területen (körülbelül 80 × 50 km) találhatók. Észak-Spanyolországban, de széles tengerszint feletti magassági tartományban (424–1410 m tengerszint feletti magasságban). Másodszor, 2015 őszén ezek közül hat populációból (AG, LI, LO, PA, SE és SR) 48 növényt és 46 medveszőlő növényt gyűjtöttünk be hat alacsonyabb szélességi körökön található populációból (AL, CH, ET, HU, LV). és PI). Minden populációból nyolc, legalább 5 m-re elválasztott növényt vettünk mintát, kivéve Magyarországot, ahol csak hat egyedet találtunk. Harmadszor, 2016 őszén összesen 140 növényből vettek mintát 29 különböző helyen (egyenként 1–6 egyedből), köztük 26 új spanyol helyről (IZ, CE, BT, MO, AA, GU, SI, AF, SA, PT, AB, CG, OD, PS, LB, CO, LE, MA, CP, PO, MZ, AV, LC, AY, LN és ZU). Mintavételünk 534 és 1750 m közötti magassági tartományt ölel fel. Összességében a 42 populáció az éghajlati viszonyok széles skáláját képviseli (S1 táblázat): a maximális középhőmérséklet 2-szoros változást mutatott (13–26 ◦C), az éves csapadékmennyiség pedig 399 (ZU) mm-ről 1589 mm-re (PT) ingadozott. A globális sugárzás 4,2 és 5,1 kWh/m2d között mozgott. Minden növényről hat-tíz (15–20 cm hosszú) véghajtást gyűjtöttünk, hogy 6–15 g egészséges levelet kapjunk, amelyeket ezt követően kimetszettünk, és 60 ◦C-on állandó súlyig szárítottuk (3–4 nap). A száraz tömeg meghatározása után a leveleket kézzel homogenizáltuk mozsárban, és elemzésig 4 ◦C-on tároltuk. Ezt a növényi anyagot használtuk az összes fenol és a HPLC meghatározásához.

Az áramlási citometriás értékeléshez szükséges levélanyagokat 178, összesen 37 populációhoz tartozó egyed friss leveleiből nyertük (1. táblázat). A fent említett populációk közül 33-ból és négy új populációból (Spanyolországban BE, JO és PR, valamint Andorrában ENSZ-ből) vettek mintát, ahol 2017 tavaszán gyűjtötték a leveleket, és ezért nem szerepeltek a fitokémiai elemzésben (1. ábra és S1 táblázat). Populációnként 1-6 egyedtől ismétlődő példányokat mértünk. A DNS-kivonáshoz szükséges levélanyagokat szilikagélen szárítottuk és szobahőmérsékleten tároltuk. A DNS-diverzitás-elemzéseket összesen 105 növényen végeztük 35 helyről (1. táblázat).

A 46 vizsgált medveszőlő-populáció növényi utalványait a BC herbáriumban, az Institut Botànic de Barcelona, ​​a BCN herbáriumban, a Centre de Documentació de BiodiversitatVegetal, Universitat de Barcelona vagy a JACA herbáriumban helyezik el, az Instituto Pirenaico de Ecología. CSIC).

3.2. Levélkivonatok készítése és összes fenol meghatározása

A medveszőlőlevél-kivonatból három ismétlést állítottunk elő 50 mg szárított minta és 10 ml 80 százalékos metanol felhasználásával. A csöveket 3 0 percig inkubáltuk ultrahangos fürdőben, majd kiszűrtük (0,45 mm) és 4 ◦C-on tároltuk az elemzésig. A teljes fenoltartalmat a 2014-ben és 2015-ben gyűjtött mintákból készített kivonatokban határoztuk meg. Folin-Ciocalteumet [60,61] követtük kis módosításokkal: 0,1 ml kivonat, 0,4 ml metanol (80%), 0,5 ml Folin– Ciocalteu reagenst és 8 ml ultratiszta vizet adunk hozzá. 5 perc ultrahangos fürdőben 1 ml Na2CO3 20% (w/v) adtunk hozzá. A mintákat 30 percig sötétben hagytuk, majd UV-látható spektrofotométerrel (CARY 50 BIO, Varian, AgilentTechnologies) 760 nm-en mértük az abszorbanciát. Az eredményeket galluszsav-ekvivalensben (GAE) fejeztük ki; azaz mg galluszsav/g dr wt, galluszsav standard görbét használva (40-340 µg/g).

3.3. Arbutin és egyéb fenolos metabolitok meghatározása

A medveszőlőlevél metanolos kivonatának fenolos tartalmát RP-HPLC-vel határoztuk meg HPLC-UV/Vis rendszer (LaChrom Merck Hitachi L-7400) és Kinetex 5 µm-EVO C18 (250 mm × 4,6 mm) segítségével. ) oszlop és abszorbancia meghatározása 280 nm-en. A 2014-ben és 2015-ben gyűjtött minták kivonatait 1:10 (v/v) arányban hígítottuk, és metanolt és acetonitrilt tartalmazó mozgófázissal injektáltuk. A gradiens program 0-5 percet tartalmazott, 25% metanolt; 5–6 perc, 100 százalék ; 6-10 perc, 100 százalék; és 10-20 perc, ismét 25 százalék metanol. Az áramlási sebesség 1 ml/perc, az injekció térfogata 20 µl. Ilyen körülmények között a retenciós idő aarbutin2,6 perc volt, lehetővé téve ennek a vegyületnek a koncentrációjának meghatározását egy standard 6 hígításával felállított kalibrációs görbe segítségével, 40-tól 340 µg/g-ig, r=0 korrelációs együtthatóval. 9997. A 2016-ban gyűjtött minták kivonatait metanol és víz mozgófázisával elemeztük a következő gradiens programmal: 0–5 perc, 10 százalék metanol; 5-6 perc, 20 százalék ; 6-10 perc, 20 százalék ; 10–11 perc, 30 százalék ; 11–15 perc, 30 százalék; 15–16 perc, 40 százalék; 16–20 perc, 40 százalék ; 20–21 perc, 50 százalék ; 21–25 perc, 50 százalék ; 25–26 perc, 60 százalék ; 26-30 perc, 60 százalék ;30-31 perc, 10 százalék ; és 31-36 perc, ismét 10 százalék metanol. Ilyen körülmények között határoztuk megarbutin éstovábbi 4 fenolos vegyület: kávésav, katechin, miricetin és kvercetin-3-O-glükopiranozid, a megfelelő kalibrációs görbéket használva, amelyeket a standard 5 hígításával (25–500 µg/mL) állapítottak meg. , amely {{10}},9992 korrelációs együtthatót mutatott a katechinnél (retenciós idő 12.0 perc), 0,9924 a kávésavnál (retenciós idő 13,4 perc), 0,9981 a kvercetinnél{{16} }O-glükozid (retenciós idő 23,4 perc), és 0,9997 miricetin (retenciós idő 25,1 perc).

A metanol és az acetonitril HPLC minőségű volt, és a Panreactól (Barcelona, ​​Spanyolország) vásárolták.arbutin, kávésavat és gallussavat, valamint a Folin-Ciocalteu reagenst a Sigma-Aldrich-től (Barcelona, ​​Spanyolország) vásároltuk. A katechint és a kvercetin-3-O-glükopiranozid standardokat az Extrasynthese-től (Genay Cedex, Franciaország), míg a miricetint az Alfa Aesartól (Karlsruhe, Németország) vásárolták.

A kémiai meghatározások eredményeit az SPSS v. 25 szoftver és az R 3.5.2 segítségével elemeztük. A normalitás és homoszkedaszticitás vizsgálata után elvégeztük a különböző adathalmazok és átlagok elválasztási tesztek (Tukey és Tamhane) vagy nem paraméteres tesztek varianciaanalízisét. mint Kruskal–Wallis és Dunn többszörös összehasonlító teszt Bonferroni korrekcióval. Megbecsültük a korrelációs együtthatókat is (Pearson vagy Spearman attól függően, hogy az adatok normális eloszlást követtek-e) a változók között, beleértve a genomméretet is.

A CISTANCHE ANTIOXIDÁCIÓS HATÁSA VAN

3.4. Genomméret-becslések és DNS-szekvenálás

A medveszőlő növények genomméretét áramlási citometriával becsülték meg a Centers Científicsi Tecnològics, Universitat de Barcelona (CCiTUB) Pellicer et al. [62].Petunia hybrida Vilm. A 'PxPc6' (2C=2.85 pg) belső szabványt használtuk. A standard magjait a Plateforme de cytométrie d'Imagerie-Gif, CNRS-I2BC (Gif-sur-Yvette, Franciaország) biztosította. A nukleáris DNS-tartalmat (2C) úgy számítottuk ki, hogy a standard ismert DNS-tartalmát megszoroztuk a standard DNS-tartalmának hányadosával. a célfaj csúcspozíciói (módja) és a standard a fluoreszcencia intenzitásának hisztogramjában, lineáris korrelációt feltételezve az ismeretlen minta festett magjaiból származó fluoreszcens jelek, az ismert belső standard és a DNS mennyisége között [63].

Körülbelül 20 mg szilícium-dioxiddal szárított levélszövetet használtunk fel DNS-kivonáshoz CTAB-protokoll [64] alkalmazásával, kisebb módosításokkal. A teljes DNS minőségét NanoDrop 1000 spektrofotométerrel (ThermoScientific, Wilmington, DE, USA) ellenőriztük. Az rpl32-trnLand psbE-petN plasztid intergenikus régiókat, valamint a nukleáris riboszómális DNS-régiót, az ITS-t populációnként három egyedben amplifikáltuk és szekvenáltuk. Az ITS szekvenciái nem mutattak variabilitást a 105 elemzett egyeden belül, kivéve néhány, intragenomikus nukleotid polimorfizmust mutató pozíciót. Ezért ezt a nukleáris riboszómális DNS-régiót kizártuk a további elemzésből. Más plasztid DNS-régiókat (pl. ndhF; ndhF-rpl32; psbA-trnH; psbD-trnT; rps16; és trnL-trnF) is teszteltünk, de ezeket elvetettük az alacsony variabilitás vagy szekvenálási problémák miatt. Az amplifikációs eljárást a Vitales és mtsai. [65]. Az amplifikált DNS-szegmensek közvetlen szekvenálását a Big Dye Terminator Cycle Sequencing v 3.1-gyel (PE Biosystems, Foster City, California, USA) végeztük a Unitatde Genòmica, CCiTUB-ban, egy ABI PRISM 3700 DNS-analizátoron (PE Biosystems). Az rpl32-trnL andpsbE-petN szekvenciákat a BioEdit 7.1.3.0-s verziójával [66] állítottuk össze, a ClustalW MultipleAlignment v1.4-hez igazították [67], és manuálisan állítottuk be. A GenBank csatlakozási számokat az S2 táblázat tartalmazza.

3.5. Genomméret és genetikai elemzés

Nem-paraméteres Kruskal–Wallis tesztet végeztünk a 2C értékek statisztikailag szignifikáns különbségeinek ellenőrzésére a populációk között. A Dunn többszörös összehasonlító teszteket is elvégezték annak meghatározására, hogy mely populációk mutattak szignifikáns különbséget közöttük. A Bonferroni-korrekciót az I. típusú hiba (hamis pozitív) minimalizálására alkalmazták.

A genetikai diverzitás paramétereit (polimorf helyek, parszimónia információs helyek, haplotípusok száma és teljes haplotípus diverzitás) a DnaSP v6 segítségével becsülték meg [68]. A plasztid haplotípusokat egy kombinált adathalmazban határoztuk meg, amely mind az rpl32-trnL, mind a psbE-petN régiót tartalmazta. Az indeleket a FastGap v.1.2 [69] kódolásával kodifikáltuk, és egymutációs eseményekként kezelték. A haplotípusok közötti evolúciós kapcsolatokra a PopArt [71]-ben megvalósított TCS [70] segítségével felépített szűkös hálózat alapján következtettek ki. A haplotípusok közötti egyszeri szubsztitúciókból adódó különbségek maximális számát 95 százalékos megbízhatósági határokkal számítottuk ki.

A genetikai és kémiai adatok közötti kapcsolat elemzésére Mantel-tesztet végeztünk. Először megbecsültük a fenotípusos távolságot 25 populáció között a 2016-ban gyűjtött medveszőlő növények adatainak felhasználásával, amelyeket öt fenolos komponensre (pl.arbutin, katechin, kávésav, kvercetin és miricetin). Az R Commander segítségével standardizáltuk ezeket az adatokat [72], majd kiszámítottuk a szabványosított mátrixból származó kémiai távolságot a "Dist" onR függvénnyel az euklideszi távolságok alapján. Másodszor, a Nei populáció genetikai páronkénti távolságmátrixát kiszámítottuk a 25 populáció között a DnaSP v6 használatával. Végül kiszámítottuk a páronkénti földrajzi távolságokat ezen populációk között a "geodista" csomag segítségével R-ben. A távolságmátrixok közötti páronkénti korrelációkat egy Mantel-teszttel számítottuk ki 10,000 permutációval a "vegan" R csomagban elérhető Functionmantel-el [ 73].

4. Konklúziók

Minden vizsgált medveszőlő növény kimutattaarbutin7 százaléknál magasabb tartalom; ezért ez a növényi anyag alkalmas gyógynövénykészítményekhez. Elemzésünk magasabb arbutintartalmat mutatott ki, mint a Parejo és munkatársai által hivatkozott (akár 9 százalék). [40], aki négy populációt elemzett a Pireneusok északkeleti részén, 1580–2030 m magasságban, és alacsony különbségeket mutatott ki a populációk arbutintartalmában. Ezenkívül az itt meghatározott értékek többsége a lengyelországi termesztésre kiválasztott növényi anyag tartományába esik [74], és összhangban van a magasarbutinSonnenschein és Tegtmeier [42] által a németországi termesztésre szánt növények kiválasztásakor közölt spanyol medveszőlő levélminták tartalma. Az A. uva-ursi elit genotípusai vegetatív úton is szaporíthatók, de a kapott klónok többsége meghibásodott a szántóföldi telepítés során, ami korlátozta ezen erőforrások kiaknázását. Leírtuk továbbá a három flavonoid (katekin, miricetin és kvercetinglükozid), valamint a kávésav tartalmának meglévő eltéréseit a spanyol medvebogyó populációi között, valamint azt, hogy az éghajlati tényezők (főleg a globális sugárzás és csapadékmennyiség) hogyan korrelálnak a szélességi és magassági viszonyokkal. színátmenetek, befolyásolják ezt a variációt. Ugyanakkor az ibériai A. uva-ursi-ban meghatározott alacsony haplotípus- és genomméret-variabilitás ellenére a populációk genetikai és citogenetikai differenciálódása gyengén, de szignifikánsan összefüggött a fitokémiai diverzitással. Összességében ezek az eredmények rávilágítanak arra, hogy mind a genetikai, mind az abiotikus tényezők hatását figyelembe kell venni a vadon élő populációkból származó növényekben található fajokon belüli fitokémiai variabilitás magyarázata érdekében.

CISTANCHE HATÁSOK

Hivatkozások

1. Moore, BD; Andrew, RL; Külheim, C.; Foley, WJ A növényi másodlagos metabolitok intraspecifikus diverzitása ökológiai kontextusban. Új Phytol. 2014, 201, 733–750. [CrossRef] [PubMed]

2. Cheynier, V.; Comte, G.; Davies, KM; Lattanzio, V. Növényi fenolok: bioszintézisük, genetikájuk és ökofiziológiájuk legújabb eredményei. Plant Physiol. Biochem. 2013, 72, 1–20. [CrossRef]

3. Bernal, M.; Llorens, L.; Julkunen-Tiitto, R.; Badosa, J.; Verdaguer, D. A fenolos vegyületek magassági és szezonális változásai a Buxus sempervirens leveleiben és kutikulájában. Plant Physiol. Biochem. 2013, 70, 471–482.[CrossRef] [PubMed]

4. Upton, R. (szerk.) Uva-ursi Leaf. Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. Az elemzés, a minőség-ellenőrzés és a terápia szabványa; American Herbal Pharmacopoeia: Scotts Valley, CA, USA, 2008; 30 p.

5. Európai Gyógyszerügynökség. Értékelő jelentés az Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. Folium. EMA/HMPC/750266/2016; Európai Gyógyszerügynökség: Amszterdam, Hollandia, 2018.6. Kanlayavattanakul, M.; Lourith, N. Növények és természetes termékek a bőrhiperpigmentáció kezelésére – Áttekintés. Planta Med. 2018, 84, 988–1006. [CrossRef]

7. Migas, P.; Krauze-Baranowska, M. Az arbutin és származékainak jelentősége a terápiában és a kozmetikában.Phytochem. Lett. 2015, 13, 35–40. [CrossRef]

8. Seo, DH; Jung, JH; Lee, JE; Jeon, EJ; Kim, W.; Park, CS Arbutin ( - és -arbutin), bőrvilágosító szerek és származékaik biotechnológiai előállítása. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2012, 95, 1417–1425.[CrossRef]

9. Zhu, X.; Tian, ​​Y.; Zhang, W.; Zhang, T.; Guang, C.; Mu, W. Az -arbutin biológiai termelésének legújabb eredményei. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2018, 102, 8145–8152. [CrossRef] [PubMed]

10. Davey, M. Másodlagos anyagcsere növényi sejttenyészetekben. In Encyclopedia of Applied Plant Sciences, 2. kiadás; Thomas, B., Murphy, DJ, Murray, BG, szerk.; Elsevier: London, Egyesült Királyság, 2017; 2. kötet, 462–467. [CrossRef]

11. Kurkin, VA; Ryazanova, TK; Daeva, ED; Kadentsev, VI. Az Arctostaphylos uva-ursi leveleinek összetevői. Chem. Nat. Compd. 2018, 54, 278–280. [CrossRef]

12. Panda, A.; Petrucci, R.; Marrosu, G.; Multari, G.; Romana-Gallo, F. Arctostaphylos pungens és Arctostaphylos uva-ursi HPLC-PDAESI-TOF/MS metabolicprofiling: A levél metabolikus kivonatának fenolos vegyületek összehasonlító vizsgálata. Fitokémia 2015, 115, 79–88. [CrossRef]

13. Olennyikov, DN; Chekhirova, GV 60-Galloilpicein és más fenolos vegyületek az Arctostaphylos uva-ursi.Chem. Nat. Compd. 2013, 49, 1–7. [CrossRef]

14. Brewer, MS Természetes antioxidánsok: források, vegyületek, hatásmechanizmusok és lehetséges alkalmazások. Rev. Food Sci. Food Saf. 2011, 10, 221–247. [CrossRef]

15. Amarowicz, R.; Pegg, RB; Rahimi-Moghaddam, P.; Bare, B.; Weil, JA A kanadai prérikről származó kiválasztott növényfajok szabad gyökfogó képessége és antioxidáns aktivitása. Food Chem. 2004, 84, 551–562.[CrossRef]

16. Carpenter, R.; O'Grady, MN; O'Callaghan, YC; O'Brien, NM; Kerry, JP A szőlőmag és a medveszőlő kivonat antioxidáns potenciáljának értékelése nyers és főtt sertéshúsban. Meat Sci. 2007, 76, 604–610. [CrossRef][PubMed]

17. Mekini'c, IG; Skroza, D.; Ljubenkov, I.; Katalinic, V.; Šimat, V. A hagyományosan használt mediterrán gyógynövények és fűszerek fenolos metabolitjainak antioxidáns és antimikrobiális potenciálja. Foods 2019, 8, 579. [CrossRef]

18. Mohd Azman, NA; Gallego, MG; Segovia, F.; Abdullah, S.; Shaarani, SM; Almajano, MP A medveszőlő levélkivonat mint természetes antioxidáns tulajdonságainak tanulmányozása mintaélelmiszerekben. Antioxidánsok 2016, 5, 11.[CrossRef] [PubMed]

19. Pegg, RB; Amarowicz, R.; Naczk, M. Medveszőlő levél (Arctostaphylos uva-ursi L. Sprengel) kivonatból származó polifenolok antioxidáns hatása húsrendszerekben. Fenolvegyületekben élelmiszerekben és természetes egészségtermékekben; Shahidi, F., Ho, CT, szerk.; American Chemical Society: Washington, DC, USA, 2005; 67–82. oldal.[CrossRef]

20. Wrona, M.; Blasco, S.; Becerril, R.; Nerín, C.; Sales, E.; Asensio, E. Az UPLC®–ESI-Q-TOF-MSE antioxidáns és antimikrobiális markerei egy új, Arctostaphylos uva-ursi alapú többrétegű aktív csomagoláshoz. Talanta2019, 196, 498–509. [CrossRef]

21. Maier, M.; Olbermann, AL; Renner, M.; Weidner, E. Európai gyógynövények cserzőanyag-tartalmának szűrése – Új potenciális cserzőszerek a bőripar számára. Ind. Crop. Prod. 2017, 99, 19–26. [CrossRef]

22. Boros, B.; Jakabová, S.; Madarász, T.; Molnár, R.; Galambos, B.; Kilár, F.; Fellinger, A.; Farkas, A. ValidatedHPLC módszer a bergenin, arbutin és galluszsav egyidejű kvantitatív meghatározására különböző Bergenia fajok leveleiben. Chromatographia 2014, 77, 1129–1135. [CrossRef]

23. Miaw-Ling, C.; Chur-Min, C. Hidrofil fehérítőszer szimultán HPLC meghatározása kozmetikai termékben. J. Pharm. Biomed. Anális. 2003, 33, 617–626. [CrossRef]

24. Parejo, I.; Viladomat, F.; Bastida, J.; Codina, C. Egyetlen extrakciós lépés az arbutinin medveszőlő (Arctostaphylos uva-ursi) leveleinek kvantitatív elemzésében nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával. Phytochem. Anal.2001, 12, 336–339. [CrossRef]

25. ERŐ. A világ növényei online. Elérhető online: http://www.plantsoftheworldonline.org/ (letöltve 2020. április 29-én).

26. Saleem, A.; Harris, CS; Asim, M.; Cuerrier, A.; Martineau, L.; Haddad, PS; Arnason, JTRP-HPLC-DAD-APCI/MSD módszer az Eeyou IstcheeCree First Nations által használt gyógyászati ​​Ericaceae jellemzésére. Phytochem. Anális. 2010, 21, 328–339. [CrossRef] [PubMed]

27. Stefanescu, BE; Szabó, K.; Mocan, A.; Crisan, G. Fenolvegyületek öt Ericaceae faj leveleiből, valamint ezek kapcsolódó biológiai hozzáférhetősége és egészségügyi előnyei. Molecules 2019, 24, 2046. [CrossRef] [PubMed]

28. Onda, Y.; Mochida, K. A növények genetikai sokféleségének feltárása nagy áteresztőképességű szekvenálási technikákkal. Curr. Genom. 2016, 17, 358–367. [CrossRef] [PubMed]

29. Iannicelli, J.; Guariniello, J.; Tossib, VE; Regalado, JJ; Di Ciaccioa, L.; van Barene, CM; Pitta Álvarez, SI;Escandón, AS A "poliploid hatás" aromás és gyógyászati ​​fajok nemesítésében. Sci. Hortic. 2020,260, 108854. [CrossRef]

30. Leitch, IJ; Leitch, AR A genom méretének sokfélesége és evolúciója szárazföldi növényekben. In-Plant Genome Diversity, 2. kötet, A növényi genomok fizikai szerkezete, viselkedése és fejlődése; Leitch, IJ, Greilhuber, J., Doležel, J., Wendel, JF, szerk.; Springer: Bécs, Ausztria, 2013; 307–322. [CrossRef]

31. Bennett, MD; Leitch, IJ Nukleáris DNS mennyisége zárvatermőkben – Haladás, problémák és kilátások. Ann. Bot. 2005, 95, 45–90. [CrossRef]

32. Gregory, TR (szerk.) The Evolution of the Genome; Elsevier: San Diego, CA, USA, 2005.

33. Hoang, PN; Schubert, V.; Meister, A.; Fuchs, J.; Shubert, I. A genom méretének, a sejt- és sejtmagtérfogatnak, a kromoszómaszámnak és az rDNS-lókuszoknak a változása a békalencse között. Sci. Rep. 2019, 9, 3234. [CrossRef]

34. Knight, CA; Molinari, N.; Petrov, DA A nagy genom-korlátozás hipotézise: Evolúció, ökológia és fenotípus. Ann. Bot. 2005, 95, 177–190. [CrossRef]

35. Pellicer, J.; Hidalgo, O.; Dodsworth, S.; Leitch, IJ A genom méretének sokfélesége és hatása a szárazföldi növények evolúciójára. Genes 2018, 9, 88. [CrossRef]

36. Carev, I.; Rušˇci´c, M.; Skoˇcibuši´c, M.; Maravi´c, A.; Siljak-Jakovlev, S.; Politico, O. A horvátországi Centaurea solstitialis (Asteraceae) fitokémiai és citogenetikai jellemzése. Chem. Biobúvárok. 2017, 14, e1600213.[CrossRef]

37. Cole, IB; Cao, J.; Alan, RA; Saxena, PK; Murch, SJ A Scutellaria baicalensis, a Scutellarialateriflora és a Scutellaria racemosa összehasonlítása: genomméret, antioxidáns potenciál és fitokémia. Planta Med. 2008,74, 474–481. [CrossRef]

38. Carvalho, YGS; Vitorino, LC; de Souza, UJB; Bessa, LA A növények genetikai sokféleségével kapcsolatos kutatás legújabb trendjei: A megőrzésre gyakorolt ​​hatás. Sokszínűség 2019, 11, 62. [CrossRef]

39. Wei, S.; Yang, W.; Wang, X.; Hou, Y. Magas genetikai diverzitás egy veszélyeztetett gyógynövényben, a Saussureainvolucrata-ban (Saussurea, Asteraceae), a nyugati Tianshan-hegységben, Kínában. Conserv. Közönséges petymeg. 2017, 18,1435–1447. [CrossRef]

40. Chang, YJ; Cao, YF; Zhang, JM; Tian, ​​LM; Dong, XG; Zhang, Y.; Qi, D.; Zhang, XS Tanulmány a termesztett és vadkörte (Pyrus L.) kloroplaszt-DNS-diverzitásáról Észak-Kínában. Fa Genet. Genomok 2017, 13, 44 [CrossRef]

41. Parejo, I.; Viladomat, F.; Bastida, J.; Codina, C. Az arbutintartalom változása az Arctostaphylos uva-ursi különböző vadon élő populációiban Katalóniában, Spanyolországban. J. Herbs Spices Med. Plants 2002, 9, 329–333. [CrossRef]

42. Sonnenschein, M.; Tegtmeier, M. Kísérletek a medveszőlő (Arctostaphylos uva-ursi (L.)Spreng.) háziasítására. J. Med. Fűszernövények 2012, 17, 124–128.

43. Chen, HY; Lin, YC; Hsieh, CL Néhány kiválasztott gyógynövény vizes kivonatának antioxidáns hatásának értékelése. Food Chem. 2008, 104, 1418–1424. [CrossRef]

44. Del Valle, JC; Buide, ML; Casimiro-Soriguer, I.; Whitall, JB; Narbona, E. A flavonoid felhalmozódásról különböző növényi részekben: Variation patterns among individuals and populations in the shore campion (Silene littorea). Elülső. Plant Sci. 2015, 6, 939. [CrossRef]

45. Martínez-Cadenas, C.; López, S.; Ribas, G.; Flores, C.; García, O.; Sevilla, A.; Smith-Zubiaga, I.;Ibarrola-Villaba, M.; Pino-Yanes, MM; Gardeazabal, J.; et al. Egyidejű tisztító szelekció az ősi MC1R allélon és pozitív szelekció a melanoma kockázati allélen v60l dél-európaiakban.Mol. Biol. Evol. 2013, 30, 2654–2665. [CrossRef]

46. ​​Jakaaola, L.; Hohtola, A. A szélesség hatása a növények flavonoid bioszintézisére. Növényi sejt környezet. 2010, 33,1239–1247. [CrossRef]47. Martz, F.; Peltola, R.; Fontana, S.; Duval, RE; Julkunen-Tiitto, R.; Stark, S. A szélesség és magasság hatása a boróka (Juniperus communis) tűk terpenoid és oldható fenolos összetételére és antibakteriális aktivitásuk értékelése a boreális zónában. J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 9575–9584. [CrossRef]

48. Yang, B.; Zheng, J.; Laaksonen, O.; Tahvonen, R.; Kallio, H. A szélességi és időjárási viszonyok hatása a ribizli (Ribes spp.) fajták fenolos vegyületeire. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 3517–3532. [CrossRef][PubMed]

49. Lätti, AK; Jaakola, L.; Riihinen, KR; Kainulainen, PS Az antocianin és a flavonol variációja a bogárbogyókban (Vaccinium uliginosum L.) Finnországban. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 427–433. [CrossRef] [PubMed]

50. Lätti, AK; Riihinen, KR; Kainulainen, PS Az antocianin variáció elemzése finn áfonya (Vaccinium myrtillus L.) vadon élő populációiban. J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 190–196. [CrossRef]

51. Monschein, M.; Iglesias, J.; Kunert, O.; Bucar, F. A hanga (Calluna vulgaris (L.) Hull) fitokémiája és magasságváltozása. Phytochem. Rev. 2010, 9, 205–215. [CrossRef]

52. Perry, NB; Burgess, EJ; Rodríguez Guitián, MA; Romero Franco, R.; López Mosquera, E.; Smallfield, BM;Joyce, NI; Littlejohn, RP szeszkviterpén-laktonok az Arnica montana-ban: Helenalin és dihidrohelenalinkemotípusok Spanyolországban. Planta Med. 2009, 75, 660–666. [CrossRef] [PubMed]

53. Abdala-Roberts, L.; Assmann, S.; Berny-Mier, Y.; Terán, JC; Covelo, F.; Glauser, G.; Moreira, X. Biotikus andabiotikus faktorok, amelyek a növényi jellemzők és a herbivory magassági változásaihoz társulnak egy domináns tölgyfajban. Am. J. Bot. 2016, 103, 2070–2078. [CrossRef] [PubMed]

54. Bentley, J.; Moore, JP; Farrant, JM Metabolomics a filogenetika kiegészítéseként a kiszáradástűrő Myrothamnaceae (Myrothamnaceae) gyógycserje fajon belüli határainak felmérésére. Phytochemistry 2019, 159, 127–136. [CrossRef] [PubMed]

55. Siljak-Jakovlev, S.; Pustahija, F.; Šoli'c, EM; Boguni'c, F.; Muratovi'c, E.; Baši'c, N.; Catrice, O.; Brown, CST A balkáni flóra genomméretének és kromoszómaszámának adatbázisa felé: C-értékek 343 taxonban, 252 új értékkel. Adv. Sci. Lett. 2010, 3, 190–213. [CrossRef]

56. Garrido, JL; Alcántara, JM; Rey, PJ; Medrano, M.; Guitián, J.; Castellanos, MC; Bastida, JM; Jaime, R.; Herrera, CM Az ibériai columbines (gen. Aquilegia) földrajzi genetikai szerkezete. Plant Syst. Evol. 2017,303, 1145–1160. [CrossRef

57. Listl, D.; Poschlod, P.; Reisch, C. Phylogeography of a hard rock survivor in European dry grasslands.PLoS ONE 2017, 12, e0179961. [CrossRef]

58. Olalde, M.; Herrán, A.; Espinel, S.; Goicoechea, P. Fehértölgyek filogeográfiája az Ibériai-félszigeten.Ecol. Manag. 2002, 156, 89–102. [CrossRef]

59. Barrett, SCH A klonalitás hatása a növények ivaros szaporodására. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2015, 112,8859–8866. [CrossRef] [PubMed]

60. Skowyra, M.; Falguera, V.; Gallego, G.; Peiro, S.; Almajano, MP A Perilla frutescens kivonatok hatása a modell élelmiszer-emulziók oxidatív stabilitására. Antioxidánsok 2014, 3, 38–54. [CrossRef] [PubMed]

61. Pascoal, A.; Quirantes-Piné, R.; Fernando, AL; Alexopoulou, E.; Segura-Carretero, A. Kenaf levelek fenolos összetétele és antioxidáns aktivitása. Ind. Crop. Prod. 2015, 78, 116–123. [CrossRef]

62. Pellicer, J.; Garnatje, T.; Molero, J.; Pustahija, F.; Siljak-Jakovlev, S.; Vallès, J. A dél-amerikai Artemisia fajok (Asteraceae) eredete és fejlődése; molekuláris filogenetikai, riboszómális DNS- és genomezezési adatokból származó bizonyítékok. Aust. J. Bot. 2010, 58, 605–616. [CrossRef]

63. Doležel, J. A mag DNS-tartalmának áramlási citometriai analízise magasabb rendű növényekben. Phytochem. Anális. 1991, 2,143–154. [CrossRef]

64. Doyle, JJ; Doyle, JL Gyors DNS-izolációs eljárás kis mennyiségű friss levélszövethez. Phytochem. Bull.Bot. Soc. Am. 1987, 19, 11–15.

65. Vitales, D.; Feliner, GN; Vallès, J.; Garnatje, T.; Firat, M.; Álvarez, I. A mediterrán Anacyclus (Anthemideae, Asteraceae) nemzetség új körülírása plasztid és nukleáris DNS-markerek alapján.Phytotaxa 2018, 349, 1–17. [CrossRef]

66. Hall, TA BioEdit: Felhasználóbarát biológiai szekvencia-illesztő szerkesztő és elemző program Windows95/98/NT rendszerhez. Nukleinsavak Symp. Ser. 1999, 41, 95–98.

67. Thompson, JD; Higgins, főigazgatóság; Gibson, TJ CLUSTAL W: A progresszív többszekvenciás illesztés érzékenységének javítása szekvenciasúlyozás, pozíció-specifikus résbüntetések és súlymátrixválasztás révén. Nucleic Acids Res. 1994, 22, 4673–4680. [CrossRef]

68. Rozas, J.; Ferrer-Mata, A.; Sánchez-DelBarrio, JC; Guirao-Rico, S.; Librado, P.; Ramos-Onsins, SE; Sánchez-Gracia, A. DnaSP 6: DNS Sequence Polymorphism Analysis of Large Datasets. Mol. Biol. Evol.2017, 34, 3299–3302. [CrossRef] [PubMed]

69. Borchsenius, F. FastGap, 1.2-es verzió; Department of Biosciences, Aarhus University: Aarhus, Denmark, 2009;Elérhető online: http://www.aubot.dk/FastGap_home.htm (Hozzáférés: 2019. július 1.).

70. Kelemen, M.; Posada, DCKA; Crandall, KA TCS: Számítógépes program a gén genealógiák becslésére.Mol. Ecol. 2000, 9, 1657–1659. [CrossRef] [PubMed]

71. Leigh, JW; Bryant, D. Popart: Teljes funkcionalitású szoftver haplotípus hálózatépítéshez. Módszerek Ecol. Evol.2015, 6, 1110–1116. [CrossRef]

72. Fox, J. Ismerkedés az R vezérlővel: Az RJ Stat alapvető statisztikai grafikus felhasználói felülete. Softw.2005, 14, 1–42. [CrossRef]

73. Oksanen, J.; Blanchet, FG; Kindt, R.; Legendre, P.; O'Hara, RB; Simpson, GL; Solymos, P.; Stevens, M.; Wagner, H. Vegan: Közösségi ökológiai csomag. R csomag 1-es verziója.17-4. 2010. Elérhető online:http://CRAN.R-project.org/package=vegan (letöltve 2010. szeptember 19-én).74. Malinowska, H. A medveszőlő (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.) természetes populációiból Lengyelországban. Acta Soc. Bot. Pol. 1995, 64, 91–96. [CrossRef]