Fitokémiai elemzés, In-vitro antiproliferatív, antioxidáns 2. rész

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

a-glükozidáz gátló vizsgálat

A frakciókból hígítási sorozatot készítettünk, hogy 100, 200, 300, 400 és 500 mg/ml koncentrációt kapjunk. A reakcióelegyek 0,1 ml 1 U/ml-es glükozidáz oldatot tartalmaztak, 0,2 ml extraktumhígítással és 0,5 ml 100 mM foszfátpufferrel, pH 6,8. A keverékeket 37 °C-on 15 percig inkubáltuk. Ezután 0,2 ml 5 mM p-nitrofenil-oldatot-D-galaktopiranozidPNPG-t adtunk a reakcióelegyhez, és az inkubálást további 2 0 percig 37 °C-on meghosszabbítottuk. A reakciót 0,1 M NazC03 hozzáadásával állítottuk le. Az abszorbanciát 405 nm hullámhosszon rögzítettük minden mintánál. Az akarbózt pozitív kontrollként használtuk, ugyanolyan koncentrációban, mint a növényi kivonatokat. Az eredményeket százalékos gátlásban fejeztük ki a következő egyenlet szerint:

ahol Ag az abszorbancia enziminhibitor nélkül, és As az abszorbancia enziminhibitor jelenlétében [26].

Sejtvonalak és MTS vizsgálat

A HeLa és MCF7 rákos sejtvonalakat az ATCC-től szereztük be, a sejteket RPMI-1640 tápközegben tenyésztettük, amelyet 10% magzati szarvasmarha szérummal, 1% penicillin/sztreptomicin antibiotikummal és 1% L-glutaminnal egészítettek ki. A sejteket párásított atmoszférában, 5 százalékos CO2-tartalommal tenyésztettük 37 fokon. A sejteket 2,6×10* sejt/lyuk arányban oltottuk be egy 96-lyukú lemezre. 48 óra elteltével a sejtek összefolytak, a tápközeget kicseréltük. A sejteket ezután különböző 0.25-10 mg/ml R. rothschildianus levélfrakció-koncentrációkkal inkubáltuk 24 órán át. A sejtek életképességét értékeltük

CellTilter 96 fokos Aqueous One Solution Cell Proliferation (MTS) Assay-vel a gyártó utasításai szerint (Promega Corporation, Madison, WI). Röviden, a kezelés végén 100 ul tápközegenként 20 ul MTS-oldatot adtunk minden egyes lyukba, és 37 °C-on 2 órán át inkubáltuk. Az abszorbanciákat 490 nm-en mértük [27,28].

További információért kattintson ide

Statisztikai analízis

A négy vizsgált növényi frakció összes kapott eredménye (antioxidáns, antilipáz,anti-amiláz, anti-glikozidáz, éscitotoxicitásaktivitások) átlag±SD szórásként fejeztük ki; az eredményt akkor tekintettük szignifikánsnak, ha a p-érték az volt<0.05. data="" were="" compared="" using="" unpaired="">

Eredmények

Fitokémiai szűrés

A R. rothschildianus vizes frakcióin végzett előzetes fitokémiai vizsgálatok eredményei szaponin, fenolok, fehérje, keményítő és flavonoidok jelenlétét mutatták ki. A metanolos kivonat komplex poliszacharidok, fenolok, fehérjék és flavonoidok jelenlétét mutatta, míg az acetonfrakcióban fenolokat, tanninokat és flavonoidokat, a hexánfrakcióban fenolokat, tanninokat és flavonoidokat, glikozidokat, terpenoidokat és szteroidokat azonosítottak. Amint az 1. táblázatban látható. Az extrakciós eljárás során azonban a metanol mutatta a legmagasabb százalékos kitermelést 29,4%-kal, ezt követte az acetonfrakció 16,5%-kal. A vizes extrakció 10,6%-ot eredményezett, míg a legalacsonyabb hozam (7,3%) a hexános frakcióban volt (2. táblázat).

TPC, TFC és TTC kvantitatív analízise A TPC, TFC és TTC értékeléséhez a galluszsav, rutinsav és katechin standardok (STD) több koncentrációjának abszorpciós (Abs) értékét kaptuk, és ezekre a pontokra vonatkozóan. , három egyenletet kaptunk minden STD-re a koncentrációk függvényében a hexán, aceton, metanol és vizes R teljes fenol-, flavonoid- és tannintartalmának kiszámításához. A Rothschild-diagnózisos frakciókat a 3. táblázat mutatja be.

A Cistanche javíthatja az immunitást

Antioxidáns aktivitás

A R. rothschildianus levelekből származó négy frakció szabad gyökfogó aktivitásának értékelését, Troloxot mint erős antioxidáns standard referenciaértéket használva, a DPPH gátlás százalékában fejeztük ki (1. ábra és 4. táblázat). Ezért a R. rothschildianus levelei az antioxidánsok és az acetonfrakció gyógynövényi forrásának tekinthetők, amelyek ICso értéke 6,3±0.4 ug/ml. Hasonló eredményeket kaptunk a hexán frakcióra is, amelynek ICso értéke 7,9±1,3 ug/ml (4. táblázat). Az eredményeket a Trolox-szal, egy erős antioxidáns vegyülettel hasonlították össze, amelynek értéke szintén 3,1±0,9 ug/ml. Ezzel szemben a vizes frakció csak mérsékelt antioxidáns aktivitást mutatott, magasabb, 19,9±0,7 ug/ml ICso értékkel, míg a metanolos kivonat inaktív volt ebben a vizsgálatban.

Lipáz gátló aktivitás

Ebben a vizsgálatban az R. rothschildianus levelek kivonatából származó frakciók elhízás elleni aktivitását hasonlították össze

orlisztát, egy erős lipázgátló szer (2. ábra és 4. táblázat).R. A rothschildianus levelei a lipázgátló szerek kiváló alternatív természetes forrásai voltak. Az acetonfrakció ICso értéke 26,3±0,6 ug/ml, ami nagyon közel volt a referenciavegyület orlisztát értékéhez (12,3±0,3 ug/ml). A hexán- és metanolfrakciók csak mérsékelt ICso-értékeket regisztráltak, amelyek 39,8±0,3 ug/ml, illetve 60,3±0,4 ug/ml; míg a vizes frakció inaktív volt.

a-amiláz gátló aktivitás

Ebben a vizsgálatban a R. rothschildianus levelek kivonatából származó frakciók amiláz-ellenes aktivitását összehasonlították az akarbózéval, amely egy erős a-amiláz gátló szer (3. ábra). Az acetonfrakció volt az -amiláz legerősebb inhibitora, ICso-értéke 19.0±0,7 ug/ml, szemben az akarbóz, a referenciavegyület 28,8±1,2 ug/ml értékével. Ez arra utalt, hogy a R. rothschildianus hatékony gyógynövény-gyógyszer lehet a cukorbetegség kezelésére. A vizes frakció ebben a vizsgálatban csak mérsékelt aktivitást mutatott, 45,7±0,3 ug/ml ICso értékkel, míg a hexán ICso értéke 354,8±1,2 ug/ml. A metanol frakció inaktív volt az -amiláz enzimmel szemben. a négy frakcióra is kiszámítottuk az értékeket (4. táblázat).

a-glükozidáz gátló aktivitás

Az a-glükozidáz eredményeit összehasonlítottuk az akarbózra, egy erős enzimgátló szerre vonatkozó eredményekkel, és a négy frakcióra is kiszámítottuk az értékeket (4. táblázat és 4. ábra). Az acetonfrakció fejtette ki a legnagyobb gátló hatást a -glükozidázra, ICso-értéke 54,9±0,3 ug/ml, szemben az akarbózéval, a referenciavegyület 37,1±{{10} értékével. },3 ug/ml. Ezzel szemben a metanolos kivonat frakciója csak mérsékelten gátolta a -glükozidázt, ICso értéke 251,2±0,4 ug/ml, míg a hexános és a vizes frakció inaktív volt ebben a vizsgálatban.

Antiproliferatív aktivitás

A HeLa és MCF7 rákos sejtek öt különböző, mg/ml-ben kifejezett koncentrációval végzett kezelésének eredményei a különböző kivonatokhoz azt mutatták, hogy a HeLa rákos sejtvonallal szembeni aktivitás jobb volt, mint az MCF7 rákos sejtvonallal szemben. Azonban a hexán kivonat volt a leghatásosabb

4 mg/ml koncentrációjú kivonat 98,9 és 97,4 százalékos gátlási százalékos HeLa és MCF7 rákos sejtvonalak ellen, míg a metanolos kivonat azonos koncentrációban 97,2 és 95,6 százalékos gátlási százalékos hatást mutatott a HeLa és MCF7 rákos sejtvonalakkal szemben. Dokumentáltuk a HeLa-sejtek százalékos gátlását az R. rothschildianus levelekből származó frakciókkal szemben, összehasonlítva a pozitív kontroll doxorubicinnel (5a. ábra). Az MCF7 sejtek százalékos gátlását hasonló módon határoztuk meg a R. rothschildianus levelekből származó négy frakciónál, összehasonlítva a kontrollal (5b. ábra).

Vita

A DPPH gyökfogó assay jól ismert egyszerű módszer a vegyületek antioxidáns kapacitásának kimutatására. A DPPH egy stabil szabad gyök, amely lila színt ad az alkoholos oldatokban, és a hidrogént adományozó antioxidánsok jelenlétének redukálásakor az oldat színtelenné válik [29]. Ezért a R. rothschildianus levelei az antioxidánsok természetes forrásának tekinthetők, különösen az acetonfrakció esetében, amely 6,3±0,4 ug/ml ICso-értéket mutatott. Hasonló eredményeket kaptunk a hexánfrakcióra is, amelynek ICso értéke 7,9±1,3 ug/ml (4. táblázat). Az eredményeket a Trolox-szal, egy erős antioxidáns vegyülettel hasonlították össze, amelynek értéke szintén 3,1±0,9 ug/ml. Ezzel szemben a vizes frakció csak mérsékelt antioxidáns aktivitást mutatott, magasabb, 19,9±0,7 ug/ml ICso értékkel, míg a metanolos kivonat inaktív volt ebben a vizsgálatban. Ezek az eredmények összhangban vannak a fenolok és flavonoidok növényben való jelenlétével, amely a szabad gyökök erőteljes megkötő forrása, amint az ebben a tanulmányban a DPPH esetében is látható. Ezek az eredmények összhangban voltak a növényekben található fenolos vegyületek, az egyszerű fenolok, például a galluszsav és a kifinomultabb fenolsavak, például az antocianinok, a hidroxil-fahéjsav-származékok és a flavonoidok sokféleségével. A vegyületcsoportok mindegyike nagy figyelmet kapott számos fiziológiai funkciójuk miatt, különösen szabad gyökfogó, mutagén, gyulladásgátló és karcinogén hatásuk miatt [30]. A 3. táblázat szerint az acetonos kivonat a legmagasabb fenolos vegyületek és flavonoidok tartalmát, 28,2±0,8mg GAE/g-ot és 107,3±4,6mg RU/g-ot regisztrált. Egy korábbi jelentés néhány Rumex fajról fenolos vegyületeket talált a Rumex vicarious L. leveleiből származó etanolos kivonatban, amelyek valószínűleg részt vettek a szabad gyökös reakciókban, így a stabilan használt DPPH gyök sárgás színű difenil-pikrilhidrazin származékká redukálódott az eredeti ibolyából. szín [31].

R. rothschildianus leaves were an excellent alternative natural source of lipase inhibitory agents. The acetone fraction showed an ICso value of 26.3±0.6μg/ml, which was very close to that of the reference compound orlistat （12.3±0.3μg/ml）. Hexane and methanol fractions only re-corded moderate ICso values, equal to 39.8±0.3 μg/ml and 60.3±0.4μg/ml, respectively; while the aqueous fraction was inactive. Pancreatic lipase is a major enzyme involved in enterocyte triglyceride absorption. Therefore, its inhibition represents an important strategy in the management of obesity [32]. Plants rich in phenolic compounds have been screened in several reports for anti-lipase activity. Lipase inhibitory activity ranging from 40 to >70 százalékát in vitro tesztekkel számos különböző családban találták meg, beleértve a Solanaceae (Solanum tuberosum), Brassicaceae (Brassica nigra és Raphanus sativus), Rosaceae (Malus Domestica Borkh. és Filipendula ulmaria (L.) Maxim.),

(Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. és Ericaceae Vaccinium myrtillus L.), valamint Fabaceae (Pisum sativum L. és Phaseolus vulgaris L.)[33].

Az acetonfrakció volt az -amiláz legerősebb inhibitora, ICso-értéke 190±0,7 ug/ml, szemben az akarbóz, a referenciavegyület 28,8±1,2 ug/ml értékével. Ez arra utalt, hogy a R. rothschildianus hatékony gyógynövény-gyógyszer lehet a cukorbetegség kezelésére. A vizes frakció ebben a vizsgálatban csak mérsékelt aktivitást mutatott, 45,7±0,3 ug/ml ICso értékkel, míg a hexán ICso értéke 354,8±1,2 ug/ml volt. A metanol-frakció inaktív volt -amilázzal szemben. A vizes frakció jó enziminhibitornak a lehetséges magyarázata a szaponinok jelenléte volt. Korábbi tudományos vizsgálatok kimutatták, hogy a szaponinok biológiailag aktívak a cukorbetegség ellen [34]. Az acetonos kivonat frakció amiláz elleni erős hatását mind a fenolos vegyületek, mind a flavonoidok magas tartalma okozhatja. A Corchorus olitorius szakértői - amiláz és -glükozidáz gátló hatások az összetevők, különösen a fenolos vegyületek, például a kávésav miatt [35].

Az acetonfrakció fejtette ki a legnagyobb gátló hatást az a-glükozidázra 54,9±0,3 ug/ml ICso-értékkel, szemben az akarbózéval, a referenciavegyület 37,1±0,3 ug/ml-es értékével. . Ezzel szemben a metanol-extrakt frakció csak mérsékelten gátolta az a-glükozidázt, ICso értéke 251,2±0,4 ug/ml, míg a hexános és a vizes frakció inaktív volt ebben a vizsgálatban. Az orális hipoglikémiás szerek harmadik kategóriájába tartoznak a -glükozidáz inhibitorok. Különféle -glükozidáz inhibitorok léteznek, mint például az akarbóz és a voglibóz, amelyek általában növényi forrásokban találhatók. A vércukorszint értékes stabilizálását mutatják étkezés után, és klinikailag is alkalmazták a diabetes mellitus kezelésében [36, 37].

Mindkét rákos sejt (HeLa és MCF7) kezelésének eredményei különböző mg/ml-ben, különböző kivonatoknál azt mutatták, hogy a HeLa rákos sejtvonallal szembeni általános aktivitás jobb volt, mint az MCF7 ráksejtvonalé. A hexános kivonat 4 mg/ml koncentrációban erős rákellenes hatást mutatott 98,9 és 97,4 százalékos gátlási arány mellett a HeLa és MCF7 rákos sejtvonalakkal szemben, míg a metanolos kivonat ugyanilyen koncentrációban erős hatást mutatott a HeLa és MCF7 rákos sejtvonalakkal szemben 97,2 és 95,6 százalékos gátlási százalék. A korábbi eredmények alapján a hexánfrakció szignifikáns citotoxikus hatást fejtett ki mind a HeLa, mind az MCF7 sejteken, a gátlási százalékok 4 mg/ml hexánfrakciókoncentrációnál 99, illetve 92,4 százalékot értek el. Ez összhangban volt mind a terpenoidok, mind a szteroidok citotoxikus hatásaival, amelyeket a hexánfrakcióban találtak. A dioszgeninről, egy bizonyos növényekben előforduló, természetesen előforduló szteroidról és triterpenoidról kimutatták, hogy gátolja a mellrák kialakulását [38, 39].

Következtetés

A R. rothschildianus leveleken végzett vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy az aceton-kivonat-frakció jelentős potenciállal rendelkezik a cukorbetegség és az elhízás fitoterápiájában, a lipáz, a-amiláz és a-glükozidáz erős gátlása alapján. Ezenkívül az acetonfrakció jelentős szabad gyökfogó aktivitást is mutatott. Másrészt a hexán frakció mind a HeLa, mind az MCF7 sejtvonalak jelentős gátlását mutatta, ami összefüggésben állhat a magas terpének és szteroidok tartalmával. A tanulmányban szereplő megfigyelések további in vivo vizsgálatokhoz vezethetnek az elhízás, a diabetes mellitus és egyes rákbetegségek kezelésében hatékony új természetes gyógyszerkészítmények kifejlesztésére.

Ez a cikk Jaradat et al. BMC Complementary Medicine and Therapies (2021) 21:107