A formononetin enyhíti az autoimmun prosztatagyulladást JAK/STAT moduláción és az immunrendszer kiegyensúlyozásán keresztül: A CP/CPPS és a TCM Cistanche kivonat kiegészítők hatásai
Dec 10, 2025
Célkitűzés:Annak vizsgálata, hogy a formononetin (FN) hogyan szabályozza az 1-es típusú T helper (Th1) sejtek differenciálódását és a makrofág polarizációt JAK/STAT jelátviteli útvonalakon keresztül kísérleti autoimmun prosztatagyulladás (EAP) egérmodelljében.
Mód:Negyven hím, nem elhízott diabéteszes (NOD) egeret véletlenszerűen négy csoportba osztottak: normál kontroll, EAP modell kontroll, alacsony dózisú FN (LFN, 50 mg/kg) és nagy dózisú FN (HFN, 100 mg/kg). Az EAP-t az utóbbi három csoportban komplett Freund-adjuvánsban (CFA) emulgeált prosztata antigének (PAg) szubkután injekciójával indukáltuk. A modellezés után az LFN és a HFN csoportok intragasztrikus FN-t kaptak 50, illetve 100 mg/kg/nap dózisban; normál és modell kontrollok karboxi-metil-cellulóz-nátriumot (CMC-Na) kaptak. A kezelés megkezdése utáni 42. napon az egereket elaltattuk, és a szöveteket összegyűjtöttük. A prosztata patológiáját HE-festéssel értékeltük; A prosztatában a Th1 sejtek differenciálódását és makrofág polarizációját immunfluoreszcens kettős festéssel (CD4 interferonnal [IFN- ]; indukálható nitrogén-monoxid szintáz [iNOS] és CD206) vizsgáltuk. A lépben a Th1 sejtek és a makrofágok arányát áramlási citometriával, a szérum IFN- és tumor nekrózis faktor (TNF-) szintjét ELISA-val mértük. A prosztataszövetben a foszforilált (p)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 és STAT1 fehérjét Western blot segítségével határoztuk meg.
Eredmények: A modellkontrollokhoz képest mindkét FN dózis a mirigyhámsejtek rendezettebb elrendezését eredményezte, szignifikánsan csökkentette a prosztatagyulladás pontszámát (P < 0,05), csökkentette a Th1 sejtek és az M1 makrofág markerek arányát (P < 0,05), és növelte az M2 makrofág markereket a prosztata és a lép szöveteiben.0 (P <0). A szérum IFN- és TNF-szintek jelentősen csökkentek az LFN és HFN csoportokban (P < 0,05). Molekuláris szinten a prosztataszövetben a p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2 és p-STAT1/STAT1 arányok mind szignifikánsan csökkentek (P < 0,05), ami azt jelzi, hogy az FN terápiás hatást fejt ki az EAP-ban a JAK/STAT jelátvitel modulálásával, a gyulladás oldódásának elősegítésével és az immunegyensúly helyreállításával.
Következtetés:Az FN enyhíti az EAP-t azáltal, hogy gátolja a JAK/STAT jelátviteli útvonalakat, és szabályozza a Th1 differenciálódását és a makrofág polarizációt. Ezek az eredmények, valamint a hagyományos kínai orvoslás (TCM) kiegészítői iránti növekvő érdeklődés, mint például az immunmoduláló és a kismedencei fájdalom támogatására szolgáló Cistanche kivonat-kiegészítők, egy többcélú stratégiát sugallnak, amelyet szigorú, szakértői felülvizsgált körülmények között érdemes tovább validálni.
Kulcsszavak:formononetin;autoimmun prosztatagyulladás; gyulladásos válasz; JAK/STAT jelzési útvonalak; egerek;TCM gyógynövény Cistanche kivonat kiegészítő; immunmoduláció
TCM gyógynövény Cistanche kivonat kiegészítő
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb cisztanche exportőre:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Bevezetés
A krónikus prosztatagyulladás/krónikus kismedencei fájdalom szindróma (CP/CPPS) a férfiak 5–10%-át érinti, és az összes prosztatagyulladás körülbelül 90%-át teszi ki. Különösen elterjedt a fiatal és középkorú férfiak körében, elsősorban az alsó hasban, a perineumban és a kismedencei régióban jelentkező fájdalommal, gyakran alsó húgyúti tünetekkel és néha merevedési zavarokkal kísérve. A jelenlegi első vonalbeli terápiák közé tartoznak a nem szteroid gyulladáscsökkentők (NSAID-ok), az antibiotikumok és az -adrenerg receptor blokkolók, önmagukban vagy kombinációban. Azonban a magas kiújulási arány miatt sok beteg elégedetlen ezekkel a kezelési rendekkel. Ezért sürgősen új terápiás beavatkozásokra és a CP/CPPS patogenezisébe való mélyebb betekintésre van szükség.
CM gyógynövény Cistanche kivonat kiegészítő Előnyök
Egyre több bizonyíték utal arra, hogy az immunrendszer diszregulációja kritikus szerepet játszik a CP/CPPS kialakulásában. A betegek általában kiterjedt T-limfociták és monociták infiltrációját mutatják a prosztataszövetben, és emelkedett leukociták az expresszált prosztata szekrécióban, amelyet a CD4+ T-limfociták és makrofágok dominálnak. A preklinikai adatok továbbá arra utalnak, hogy az immunszuppresszív stratégiák enyhíthetik a gyulladást és a fájdalmat CP/CPPS-ben. Így a leukocita infiltráció és a gyulladásos válasz megcélzása hatékony lehet a tünetek enyhítésére. A formononetin (FN), amely számos TCM gyógynövényben található fő bioaktív izoflavon, antioxidáns és gyulladásgátló tulajdonságokkal rendelkezik. Továbbra sem világos, hogy az FN képes-e javítani a CP/CPPS-t. Itt értékeltük az FN terápiás hatását egér EAP modellben. Az integratív megközelítések iránti növekvő klinikai érdeklődéssel párhuzamosan megjegyezzük, hogy a TCM gyógynövény Cistanche kivonat-kiegészítőit vizsgálják kismedencei fájdalom szindrómák immunmoduláló és gyulladáscsökkentő támogatására; Noha ez a tanulmány nem áll a középpontjában, az FN-t egy szélesebb, TCM-alapú terápiás környezetben kontextualizálják.
Anyagok és módszerek
Állatok
A 6–7 hetes hím NOD egereket a Sanghaji Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem Kísérleti Állatközpontjától (SUTCM) szereztük be (SYXK [Hu] 2020-0009 engedély; SCXK [Jing] 2021-0006 tanúsítvány). Az állatokat 12 órás fény/12 órás sötét ciklus alatt tartottuk, ad libitum hozzáférve élelemhez és vízhez. Minden eljárást jóváhagyott a SUTCM intézményi állatgondozási és felhasználási bizottsága (jóváhagyási szám: PZSHUTCM2301040003).
Reagensek és gyógyszerek
Formononetin (MedChemExpress, HY-N0183); komplett Freund-adjuváns (CFA; Sigma-Aldrich, F5881); foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS); szarvasmarha szérum albumin (BSA); ultra-érzékeny ECL készletek (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH és DAPI (Cell Signaling Technology, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #5174, #8) elleni antitestek; RIPA puffer és BCA fehérje vizsgálat (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); HE festőkészlet (Servicebio, GP1031); iNOS és CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC egér elleni CD3, FITC egér elleni CD4, PE anti-egér IFN- (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Hangszerek
Elektroforézis készülékek (E11001, Bio-Rad); lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp (LSM 780, Zeiss); CytoFLEX áramlási citométer (Beckman Coulter).
EAP modell létrehozása
Egy hét akklimatizáció után az egereket véletlenszerűen négy csoportba osztották (n=10): kontroll, modell, FN alacsony dózis (50 mg/kg) és FN nagy dózis (100 mg/kg). Az EAP-t korábbi módszerek szerint indukáltuk. A prosztata antigéneket (PAg) tartalmazó felülúszót Sprague-Dawley patkány prosztata homogenizátumból készítettük, és 1:1 arányban összekevertük CFA-val. A 0. és 28. napon az egerek szubkután injekciókat kaptak mindkét hátsó lábpárnába, a hát alsó részébe és a farok tövébe vagy PAg-t (300 ug/egér; EAP csoportok), vagy PBS-t (kontroll), CFA-val emulgeálva (150 µl/egér). Az FN csoportok naponta kaptak intragasztrikus FN-t (50 vagy 100 mg/kg); a kontroll- és modellcsoportok térfogathoz illő CMC-Na-t kaptak. A kísérlet a 42. napon ért véget, majd humánus eutanázia következett.
HE A prosztataszövet festése
A prosztatát 4%-os paraformaldehidben fixáltuk, dehidratáltuk, paraffinba ágyaztuk, és 5 μm-es metszeteket vágtunk. A metszeteket HE kit segítségével megfestettük, és konfokális mikroszkóppal leképeztük. A gyulladást a megállapított kritériumok alapján 0–3-ra értékelték, ahol a 0 azt jelzi, hogy nincs gyulladás, a 3 pedig a kifejezett gyulladásos sejt infiltrációt.
Áramlási citometria Th1 sejtekhez és makrofágokhoz
Egysejtű szuszpenziókat állítottunk elő, és 0,5% BSA-t tartalmazó PBS-ben tartottuk. A felületi és intracelluláris festés a standard protokollokat követte APC anti-CD3, FITC anti-CD4 és PE anti-IFN- használatával. A sejteket 50 ng/ml PMA-val, 1 ug/ml ionomicinnel és 5 ug/ml brefeldin A-val stimuláltuk 37 fokon 4 órán át, majd intracellulárisan festettük 4 fokon 30 percig. Az adatokat CytoFLEX-en gyűjtöttük, és FlowJo-val elemeztük.
Immunfluoreszcens festés makrofágokra
A rögzített prosztata metszeteket paraffinmentesítettük, antigénlevételen esett át, és 10%-os kecskeszérummal blokkoltuk 30 percig. Az elsődleges antitesteket (iNOS, CD206) egy éjszakán át 4 °C-on alkalmaztuk. PBS-mosás után fluoroforral jelölt másodlagos antitesteket alkalmaztunk 1 órán át 37 fokos hőmérsékleten, sötétben. A sejtmagokat DAPI-val ellenfestettük 5 percig szobahőmérsékleten, majd PBS-mosással és fluoreszcens mikroszkóppal történő felszereléssel végeztük.
Citokin mérés
A szérum IFN- és TNF-értékét ELISA-készlettel határozták meg a gyártó utasításai szerint.
Western Blot
A prosztata szöveteit RIPA pufferben lizáltuk (proteáz és foszfatáz inhibitorokkal). A fehérjekoncentrációt BCA-teszttel mértük. Megfelelő százalékos géleket készítettünk; azonos mennyiségű fehérjét elektroforetizáltunk, és PVDF membránokra vittük át. Az elsődleges antitesteket (p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH; mindegyik 1:1000) egy éjszakán át 4 fokon inkubáltuk, majd mosás és HRP-konjugált másodlagos antitestekkel (1:5000) 1 órán át inkubáltuk. A sávokat fokozott kemilumineszcenciával tettük láthatóvá és leképeztük. A relatív fehérje expressziót denzitometriás analízissel számítottuk ki.
Statisztikai elemzés
Az adatokat GraphPad Prism 9.0 segítségével elemeztük. Egyutas ANOVA-t használtak több csoportos összehasonlításhoz. Az adatok átlag ± SD; A P kisebb vagy egyenlő, mint 0,05, statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.
Vita
Ez a tanulmány azt bizonyítja, hogy a formononetin enyhíti a kórszövettani gyulladást, elnyomja a Th1 polarizációt, a makrofág fenotípusokat a pro-inflammatorikus M1-ről a pro-rezolváló M2-re tolja el, és csökkenti a JAK1/2–STAT1 foszforilációt a prosztataszövetben EAP egérmodellben. A csökkent szisztémás IFN- és TNF-szint tovább erősíti az FN gyulladásgátló és immunszabályozó hatásait. Ezek az eredmények összhangban vannak az FN-t moduláló JAK/STAT útvonalakat érintő korábbi jelentésekkel az ischaemia-reperfúziós és atherosclerosis modellekben, hangsúlyozva a konzervált gyulladásgátló mechanizmusokat. A TCM tágabb kontextusában az integratív ellátási utak néha olyan növényi anyagokat is tartalmaznak, mint a Cistanche (Rou Cong Rong) kivonat-kiegészítők, amelyeket immunmoduláció, fáradtság és urogenitális támogatás szempontjából vizsgáltak. Bár a Cistanche kivonatot itt nem tesztelték, a jövőbeni ellenőrzött vizsgálatok összehasonlíthatják vagy kombinálhatják az FN-t szabványosított TCM gyógynövény-kivonat-kivonatokkal, hogy feltárják a JAK/STAT-hoz kapcsolódó gyulladások és kismedencei fájdalom kimenetelének lehetséges szinergiáját. Minden klinikai fordításnak meg kell felelnie a bizonyítékokon alapuló szabványoknak, a minőség-ellenőrzött beszerzésnek és a biztonsági ellenőrzésnek.
Következtetések
A formononetin enyhíti a kísérleti autoimmun prosztatagyulladást azáltal, hogy gátolja a JAK/STAT jelátvitelt és szabályozza a Th1 differenciálódást és a makrofág polarizációt. Ezek az eredmények mechanisztikus indoklást adnak az FN- és a potenciálisan kiegészítő TCM-stratégiák, például a Cistanche-kivonat-kiegészítők további fejlesztésére, mint a CP/CPPS immunmoduláló beavatkozásaira, szigorú, szakértői értékelésű preklinikai és klinikai vizsgálatokban történő validálásig.
Hivatkozások
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH és mások. Az erekciós diszfunkció hatása a CP/CPPS-ben szenvedő betegek pszichológiai tüneteire. Journal of Hunan Normal University (Medical Sciences), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Krónikus prosztatagyulladás / krónikus kismedencei fájdalom szindróma: az értékelés és a terápia áttekintése. Prosztatarák és prosztatabetegségek, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B és mások. Az akupunktúra hatékonysága a CP/CPPS-ben: randomizált vizsgálat. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH és társai. Nem gyógyszeres beavatkozások a CP/CPPS kezelésére. Cochrane Database of Systematic Reviews, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abraham M, Doble A, et al. A krónikus bakteriális prosztatagyulladás és a CP/CPPS diagnózisa és kezelése: konszenzusos iránymutatás. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT, et al. Diagnosztikai és kezelési stratégiák a CP/CPPS-hez. Drugs & Aging, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: Egy másik autoimmun betegség? Archives of Immunology and Therapy Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. A krónikus kismedencei fájdalom szindróma immunközvetítői. Nature Reviews Urology, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M et al. Beavatkozások a CP/CPPS-hez: Hol tartunk és mi a következő lépés? European Journal of Pharmacology, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q és mtsai. A formononetin védelmet nyújt az agyi ischaemia-reperfúzióval kapcsolatos gyulladás ellen a JAK2/STAT3 segítségével. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: A neuronok védelmének útja. Frontiers in Integrative Neuroscience, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S et al. A formononetin a KLF4-SRA kölcsönhatáson keresztül gyengíti az érelmeszesedést ApoE-/- egerekben. Theranostics, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D és mások. A bél mikroflóra a propionáton keresztül modulálja a Th17/Treg differenciálódást az EAP-ban. Frontiers in Immunology, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L és mtsai. Az EAP tanulási-memória-károsodást és neuroplasztikus változásokat idéz elő egerekben. Cellular and Molecular Neurobiology, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S és mtsai. A CXCR7 okozó hatása az EAP sérülésére és fibrózisára. International Immunopharmacology, 2025, 144: 113368.
