Tanulmány az immunitás befolyásolásáról egerekben

További információért kérem vegye fel a kapcsolatotdavid.wan@wecistanche.com

Harmincból kettő férfiDBA/2NCrl(D2N) egerek, amelyeket kontroll törzsként használtak a háttéradatok elemzésébenDBA/2N-MDXegerek, fertőzésre utaló kóros leletekkel. 1. eset: Egy 4-hetes hím D2N egér bal vesében fehér plakkos elváltozást észleltek (klinikai tünetek nélkül), és a vese patológiás vizsgálatát végezték el. A bal vese tubulusaiban és interstitiumában gyulladásos sejtbeszűrődést, elsősorban neutrofileket, a bal veseszegmensből Staphylococcus aureust (S.aureus) észleltünk. Ezért ezt a bal vese elváltozást gennyesnek diagnosztizáltáktubulointersticiálisS. aureus fertőzés által okozott nephritis. 2. eset: Egy 9-hetes, hím D2N egérben súlycsökkenéssel járó bal oldali torticollist észleltek. A szövettani értékelés az eustachianus tubusok garatnyílása körül exudatív gyulladást, valamint a középfül és a bal belső fül gennyes gyulladását tályog képződéssel és fürtökkel tárta fel Gram-pozitív mikrokolóniákként. A S. aureust mindkét külső hallójárat tampontenyészetéből azonosították. Ennek eredményeként ezt a torticollis esetet a S. aureus gennyes középfülgyulladás és az internet okozta. A S. aureus jól ismert opportunista kórokozó, amely gyakran okozhat gennyes betegségeket immunkompetens laboratóriumi állatokban. Tudomásunk szerint azonban a torticollis által okozott S. aureus fertőzésről egy D2N egérben nem számoltak be.

Kattintson ide, ha többet szeretne megtudni Cistanche-ról

Egy meticillinrezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) izolátum került elő egy laboratóriumi egérben a Nemzetvédelmi Orvostudományi Főiskola Laboratóriumi Állattudományi Központjában 2018-ban.MRSAAz izolátumokat ezután a többi egérszobában is kinyertük egerekből. Ezeken az MRSA izolátumokon molekuláris tipizálást végeztek, mint például Multi-locus szekvencia tipizálást (MLST), Staphylococcus aureus Protein A(spa) tipizálást, SCCmec tipizálást és koaguláz tipizálást genotípusuk meghatározására. Minden izolátum azonos genotípust mutatott (ST1, spa t1784, SCCmec IV típusú és VII. típusú koaguláz), ami arra utal, hogy az izolátumok azonos klónok. Az MRSA 2018-as megjelenése előtt ebben a létesítményben nem izoláltak ilyen genotípusú izolátumokat, feltételezték, hogy az MRSA klónt emberi vagy laboratóriumi állatokon keresztül vitték be a létesítménybe. Az STl1 az első közösségben szerzett MRSA, amelyet gyermekekből nyernek ki az Egyesült Államokban, azonban az ST1-et jelenleg világszerte emberekből és állatokból nyerik ki. Japánban ST1 és SCCmec IV típusú törzseket izoláltak emberekből és macskákból, ami arra utal, hogy az ST1 ember és állat között terjed. Az ilyen genotípusú, de a spa tl784-et is tartalmazó MRSA törzset emberből kinyertek. Jelenleg a kórházban szerzett MRSA, a közösségben szerzett MRSA és az állattenyésztéssel kapcsolatos MRSA közötti különbség nem egyértelmű. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az egerek az MRSA rezervoárjaiként működhetnek.

A közelmúltban végzett rák immunterápia során az olyan molekulák aktivitását, mint a PD-1, gátolja, hogy fokozza az immunsejtek rákellenes aktivitását. A magas terápiás hatás ellenére vannak esetek, amikor a rák immunterápiájában autoimmun betegség alakul ki. Itt olyan rendszert hoztunk létre, amely időspecifikus módon képes lebontani a PD-1-t tenyésztett sejtekben és egerekben aSMASh degron rendszer. A PD-1-SMASh fúziós fehérje Jurkat sejtekben és CD3 plusz lépsejtekben 1 nappal az Asunaprevir (ASV) vagy Grazoprevir (GRV) beadása után csökkent, amelyek NS3/4A proteáz inhibitorok. Az ASV-val PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) egerekbe beoltott MC-38 adenokarcinóma sejtek növekedése visszaszorult a vad típusú (WT) és a kezeletlen KI egerekhez képest. Ezenkívül a KI csontvelősejtekkel átültetett WT egerek halálos sugárzással történő besugárzásuk után a GRV-vel fertőzött MC-38 sejteket kilökhetik. A KI egerek egészségesnek tűntek, és nem mutatták az autoimmun betegség jeleit. Feltételezzük, hogy a degronrendszer élő szervezetekben való alkalmazása nemcsak a különféle biológiai vizsgálatok, hanem a betegségek kezelésének előrehaladását is várhatóan elősegíti.

A progeszteron (P4) a placentából választódik ki, hogy fenntartsa a terhességet, és immunszabályozóként funkcionál. A glükokortikoid egy másikimmunszabályozószteroid a gyulladás szabályozására. Ebben a vizsgálatban humán perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC) ültettek át NOG egerekbe a graft versus-host-disease (GVHD) indukálására, és a P4 és a kortizol (COR) hatások összehasonlítására használták őket. A PBMC-ket különböző koncentrációjú P4 vagy COR jelenlétében stimuláltuk, és a sejteket áramlási citometriával (FCM) analizáltuk. Alikvot részeiPBMC-kNOG egerekbe ültettük át, és hetente kétszer P4-et vagy COR-t injektáltunk az egerekbe. 28 nap elteltével FCM és immunhisztokémiai elemzéseket végeztünk. Ennek eredményeként a P4 magas koncentrációja gátolta a T-sejt aktivációt in vitro, míg a gátlás az eltávolítás után sem folytatódott. A T-sejt-aktiváció gátlása kevésbé volt COR-kezelésben a P4-hez képest, és a T-sejt-kimerülés hangsúlyosabb volt. A P4-injektált egerek több lépsejteket, különösen CD8 T-sejteket hordoztak, mint a kontrollegerek. Azonban a CD25 alacsonyabb expressziója, kevesebb humán T-sejtek infiltrációja a tüdőbe és a májba, és kevesebbGVHDtüneteket figyeltek meg. Másrészt a COR-injektált egerekben a lépsejtek, különösen a T-sejtek száma szignifikánsan alacsonyabb volt, és az aktivált/kimerült sejtek bőségesek voltak. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a P4 jobban szereti a T-sejtek fenntartását a COR-hoz képest in vitro.

A Helicobacter hepaticus és a Helicobacter bills kórokozókként ismert, amelyek hepatitist és vastagbélgyulladást okoznak egerekben. Számos pozitív eset létezését továbbra is évente megerősítik a japán állatkísérleti létesítményekben. A legjobb, ha vakbél tartalmát vagy friss székletet használunk mintaként a H. hepaticus és a H. bilis PCR-vizsgálatához.

A közelmúltban különböző gyártók gyártanak DNS és RNS szállító és tároló reagenseket. Várhatóan ezek a reagensek a PCR-vizsgálatokhoz használt minták szállításának problémáit meg fogják szüntetni. Ezért ebben a tanulmányban a nukleinsavtároló reagens hasznosságát a Helicobacter PCR-tesztjének elvégzésével vizsgáltuk a nukleinsav-megtartó reagenssel konzervált vakbél tartalmának felhasználásával. Ennek eredményeként a tartósítóoldattal 7 napig tárolt mintákban a friss mintával azonos szinten lehetett kimutatni a Helicobacter-t. A fentiek alapján felmerült, hogy a Helicobacter PCR-tesztjében a nukleinsavtároló reagensbe merített minta hűtött repüléssel történő szállításával még napokig tartó szállítás esetén is lehetséges a vizsgálat nagy pontosságú elvégzése.

Korábban már kifejlesztettünk olyan E.coli mutáns törzseket, amelyek jelentősen megnövelték az in vitro szilárd felületekhez való tapadását a tápanyag-éhezésre reagáló gének módosításával. Ezen adhéziós E. coli törzsek (AEE-k) és az in vivo bélkörnyezet közötti kölcsönhatás értékeléséhez egerek beoltásával mértük meg kolonizációs képességüket a béltraktusban.

Az értékelési kísérlet előtt az AEE-ket luciferázt expresszáló plazmiddal transzformáltuk az in vivo vizualizáláshoz. mint orálisan beoltották éheztetett egerekbe, és néhány naponként összegyűjtötték az ürüléket. Az élők számaAEEsAz összegyűjtött székletből a CFU mérésével becsülték meg.

Ennek eredményeként a kontroll törzshöz képest az AEE-k több mint egy hétig nagyobb mennyiségben voltak jelen a székletben, ami fokozott kolonizációt jelez a bélrendszerben. A luciferáz lumineszcencia lokalizációját nem invazív képalkotással IVIS segítségével megfigyelve azt is megállapították, hogy az AEE-k hajlamosak voltak kolonizálni a vakbélben és a vastagbélben.

[Cél] Jelenleg [Pasteurella]pneumotropicaúj Rodentibacter nemzetséggé minősítették át. Ezek közül az R.pneumotropicus és az R. Healy a fő célpontjai a rágcsálók mikrobiológiai monitorozásának. Számos Rodentibacter sp. amelyeket nem lehetett rágcsálóktól származó fajként azonosítani. Ebben a tanulmányban a Rodentibacter sp. izolátum, a bakteriális virulenciára összpontosítva. [Módszerek] Rodentibacter sp. patkány légcsövéből izolált anyagokat használtuk a vizsgálathoz. A vázlat genom szekvenálást a következő generációs szekvenátoron végezték el, majd megjósolták a virulenciához kapcsolódó géneket. Állatkísérletekben Rag2 egereket használtunk a Rodentibacter sp. fertőzés.|Eredmények| A vázlatos genom szekvenálás során egy egyedülálló RTX toxint kódoló gént azonosítottak a Rodentibacter sp. Az RTX toxin fehérjeszekvenciája homológabb volt az Enterobacteriaceae, mint a Pasteurellaceae által termelt fehérjeszekvenciával. Egy állatkísérletben majdnem minden fertőzött Rag 2 egér halálos tüdőgyulladást vagy vérmérgezést igazolt. Bár az izolátumot nem lehetett R. pneumotropicusként és R. heyliiként azonosítani, ez a közeli rokon faj virulenciafaktorok, például RTX toxin jelenlétében halálos lehet az immunhiányos állatok számára.

Az NBRP Alapvető Technológiai Fejlesztési Programban (2018-2019) szekvenáltuk az egér opportunista patogén baktériumok genomját, és elvégeztükRNAseqegerekben a protozoonok vizsgálatát, hogy ezekre az organizmusokra PCR-vizsgálatokat dolgozzanak ki. Ezeket az eredményeket használtuk a Rodentibacter spp. és protozoonok patkányokban a Kyoto Egyetemmel (NBRP Rat) együttműködve. Itt közöljük a patkányminták vizsgálati eredményeit. [Módszerek] A körülbelül 1,5 kbp méretű 16S rRNS génszekvenciát PCR-rel olvastuk le hat Rodentibacter spp. patkány izolátumra, és az egyik izolátum (#25) genomvázlat szekvenciáját Illumina HiSeq 2500 segítségével határoztuk meg. A patkány vakbél tartalmának PCR-ét egér protozoonok RNAseq eredményei alapján végeztük. [Eredmények] Az összes izolátum 16S rRNS génszekvenciája azonos volt, és OTU analízissel Rodentibacter Rattiként azonosították őket. A 25. számú izolátum újraszekvenálása azt is feltárta, hogy ez a törzs az R. Ratti. Az egér protozoonokra vonatkozó PCR pozitív eredményeket adott patkány amőbára. A Trichomonas esetében nem kaptunk pozitív eredménytPCRpatkánypéldányokon. [Megbeszélés] A Rodentibacter spp. ebben a jelentésben mind R. Rattit vizsgálták. Fontos, hogy tisztában legyen az R. Ratti jelenlétével, amikor patkányokon Rodentibacter teszteket végeznek. Néhány patkány székletminta pozitívnak mutatkozott az egér amőba PCR-re. Ez az első lépés a PCR kifejlesztésében a protozoonok patkányokban történő kimutatására.

A „Pasteurella pneumotropica” rágcsálóbaktériumok opportunista patogén baktériumok, amelyek légúti betegségeket okoznak egerekben és patkányokban. Korábban a Pasteurella nemzetségbe sorolták őket, és több törzset kísérletileg biotípusként javasoltak. 2017-ben kollektíven átszervezték őket a Rodentibacter nemzetségbe. A MaM és a MaR törzseket egerekből, illetve patkányokból izolálták az 1980-as évek környékén. Ebben a vizsgálatban mindkét törzs genomszekvenciáját meghatároztuk, és összehasonlítottuk a Rodentibacter nemzetségéhez tartozókkal, anyagok és módszerekA MaM és a MaR törzseket a National Institute of Infectious Diseases-től (NIAID) szereztük be.

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Mindkét törzset folyékony tenyészetben növesztettük a genomiális DNS kinyerésére, és a genomi szekvenciákat Illumina Hiseq 2500 és PacBio Sequel segítségével határoztuk meg.[Eredmények]A 16S rRNS génszekvencia alapján a MaM törzset R. pneumotropicusként és MaR törzsként azonosították. mint R. Ratti. Továbbá meghatároztuk a MaR törzs teljes genomszekvenciáját (2 213 961 bp) (az rRNS operonok száma 6, a gének száma pedig 2 063-ra becsülhető). [Megbeszélés A MaM és MaR törzseket standardként használták a Pasteurella pneumotropica azonosítására Japánban. Ebből az elemzésből mindkét törzs faját a következőképpen határoztuk meg: a MaM törzs R.pneumotropicus, a MaR törzs pedig R.ratti. Figyelemre méltó, hogy ezek az eredmények azt mutatják, hogy R. Ratti izolálható patkányokból Japánban.

A Clostridium pili for me(CP) különböző laboratóriumi állatokban, köztük patkányokban és egerekben fogékony a fertőzésekre, és tünetmentes fertőzést mutat, kivéve az immunhiányos állatokat. Fő differenciáldiagnózisnak tekintik az állatlétesítmények fenntartását, és köztudott, hogy hatással van az állatkísérletek eredményeire. A serodiagnosist (ELISA, IFA) és a PCR-t gyakran használják a CP diagnosztizálására, mivel a mesterséges tápközegben történő izolálás a CP számára nehéz. Mindazonáltal a szerodiagnózist alkalmazó CP-vel keresztreaktivitást jelző nem specifikus antitest létezéséről számoltak be, és gyakran hasonló esetekben felismerik intézményeinkben. Sőt, a PCR módszer megbízható diagnosztikai módszerként periodikus monitorozással rendelkezik határaival, mivel a székletben a CP nem mutatható ki a növekvő antitesttiter után. Nemrég egy másik megközelítést vizsgáltunk, havonta megőriztük az állatok ürülékét. A folyamatosan konzervált ürülék felhasználásával megbízhatóbb diagnosztikaként az antitestek hatásától nem érintett CP PCR tesztjét alkalmaztuk. Ebben a jelentésben egy közelmúltbeli esetet mutatunk be. (nem specifikus antitest), amely a cégünkben kialakuló áramlás vizsgálatához vezet.