A perifériás vér mononukleáris sejtjeinek tartós citotoxikus válaszreakciója a kritikus COVID miatt az intenzív osztályra felvett be nem oltott egyénekből{0}} elengedhetetlen a végzetes kimenetel elkerüléséhez

Absztrakt: Ennek a vizsgálatnak a fő célja a perifériás vér mononukleáris sejtjeinek (PBMC) citotoxikus aktivitásának a hatásának meghatározása volt az intenzív osztályra felvitt, kritikus COVID-ban{0}} szenvedő, be nem oltott egyének kimenetelére. 23 egyén vérmintáját vettük a felvételkor, majd 2 hetente 13 héten keresztül a halálig (Exitus csoport) (n=13) vagy elbocsátásig (túlélési csoport) (n=10). Nem találtunk olyan szignifikáns különbséget a csoportok között a szociodemográfiai, klinikai vagy biokémiai adatokban, amelyek befolyásolhatnák a halálos kimenetelt. Az Exitus csoport egyedeiből származó PBMC-k közvetlen sejtes citotoxicitása azonban a pszeudotipikus SARS-CoV-2-fertőzött Vero E6 sejtekkel szemben szignifikánsan csökkent a felvételkor (-2.{10}}szeres; p=0). 0234) és az intenzív osztályon eltöltött 4 hét után (−5.58-szer; p=0.0290), összehasonlítva a túlélőkkel, és a kórházi kezelés alatt sem javult. In vitro ezeknek a sejteknek az IL-15 kezelése nem állította helyre a hatékony citotoxicitást a halálos kimenetelig, és az immunkimerülési markerek fokozott expresszióját figyelték meg NKT-ban, CD{19}}-ben és CD-ben. 8+ T-sejtek. A túlélési csoportba tartozó egyének PBMC-inek IL-15-kezelése azonban szignifikánsan növelte a citotoxicitást a 4. héten (618-szeres; p=0,0303). Következésképpen az immunmoduláló kezelések, amelyek leküzdhetik az immunkimerültséget és tartós, hatékony citotoxikus aktivitást válthatnak ki, elengedhetetlenek lehetnek a túléléshez a kritikus COVID miatti kórházi kezelés során-19.

Kulcsszavak: SARS-CoV-2; COVID-19; immunválasz; citotoxikus válasz; IL-15

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

1. Bemutatkozás

2019 decemberében számos atipikus vírusos tüdőgyulladásos esetet észleltek Vuhan városában (Hubei tartomány, Kína) egy tengeri élelmiszerpiacon. Gyorsan megjelent egy új koronavírus, amelyet súlyos akut légúti szindróma koronavírus 2-nek (SARS-CoV-2) neveztek el. világszerte elterjedt, és a 2019-es koronavírus-járványt (COVID{5}}) okozza [1]. Azóta körülbelül 626 millió COVID-esetet{8}} és 6,5 millió kapcsolódó halálesetet jelentettek világszerte (frissítve 2022 októberében) [2]. Különböző kockázati tényezők és társbetegségek befolyásolhatják a COVID{13}} előrehaladását az egyének között, ami a járvány kezdete óta befolyásolta az érintett országok klinikai adatainak összehasonlítását [3]. Megállapítást nyert azonban, hogy a COVID{15}} klinikai megnyilvánulásai a tünetmentes fertőzéstől az akut légúti distressz szindrómáig (ARDS) változhatnak [4]. A COVID súlyos formájának-19 kialakulásának nagyobb valószínűségével összefüggésbe hozható különböző kockázati tényezők közé tartozik az idős kor, a férfi nem és a korábbi társbetegségek, például a cukorbetegség, a magas vérnyomás és/vagy az elhízás [5,6]. A súlyos és kritikus COVID{20}} összefüggésbe hozható a főleg CD4+ T-limfociták citopéniájával, valamint a természetes gyilkos (NK) és CD8+ T-sejtek túlzott kimerülésével, immunhiányos állapotot eredményez, amely nem képes megtisztítani a fertőzést, emellett súlyos szövődmények, például citokinvihar és trombózisos események is kialakulnak [7]. A betegség súlyos formájának kialakulását és a COVID-ban szenvedő betegek halálozásának fő okát-19 egy túlzott gyulladásos válaszreakciónak tekintették, amely elősegítheti a sokk és/vagy a többszervi diszfunkcióval járó hipercitokinémia kialakulását [4]. Ez a szindróma citokinviharként ismert [8], és hasonló a hemophagocytic lymphohistiocytosis (sHLH) betegséghez, amely vírusfertőzés által kiváltott hipergyulladásos állapotból áll [9,10]. Ez azzal a ténnyel hozható összefüggésbe, hogy a SARS-CoV{30}} az angiotenzin-konvertáló enzim 2 (ACE2) receptorát használja a célsejtek megfertőzésére. A SARS-CoV-2 kötődése az ACE2 receptorhoz, amelyet széles körben expresszálnak a különböző szövetek sejtjei [11], az angiotenzin II növekedéséhez vezet, amely aktiválja a nukleáris κB-t (NF-κB). Ennek az esszenciális transzkripciós faktornak az aktiválása serkenti a proinflammatorikus citokinek, kemokinek és adhéziós molekulák expresszióját [12]. E túlzott gyulladásos válasz ellenére hatástalannak tűnik a fertőzés megszüntetése, és a T-sejt aktiváció miatt apoptózissal végződhet [13]. Ez a citokinvihar felelős lehet a limfopéniáért [12,14], valamint a kimerült fenotípusú NK és CD{45}} T-sejtek szintjének csökkenéséért, valamint a gátló receptorok, például az NKG2A fokozott expressziójáért az NK sejtekben és a PD{47 }} a CD8+ T-sejtekben [15,16]. Ezenkívül a degranulációs markerek, például a CD107a expressziója általában csökken e sejtek felszínén [15], ami azt bizonyítja, hogy a súlyos és kritikus COVID-ban szenvedő egyénekben a fertőzött sejtek eliminációs képessége megromlik-19 [17] ]. A hatékony vakcinák kifejlesztésére és beadására adott gyors globális válasz ellenére az új változatok megjelenése, amelyek kikerülhetnek a vakcina által kiváltott immunválaszból, a tüneti betegségekkel szembeni védelem gyors csökkenését eredményezték [18]. Következésképpen folytatni kell a kutatást a COVID elleni hatékony terápiák érdekében-19. Számos kezelést teszteltek a súlyos és kritikus betegség miatt kórházba került egyének státuszának javítására, de még egyik sem bizonyította, hogy specifikus lenne a fertőzött sejtek eltávolítására vagy a fertőzési arány csökkentésére [15,19]. Ezért a szupportív kezelés, mint például az oxigén- és folyadékterápia, még mindig az egyik legfontosabb stratégiát alkalmazzák ezen egyének kezelésére [2,4,16,20]. A nem specifikus kezelések, például a kortikoszteroidok szintén jótékony hatással voltak a túlzott gyulladásos válasz szabályozására és csökkentésére [21,22]. Az FDA a közelmúltban számos gyógyszert engedélyezett enyhe-közepes COVID-ban szenvedő betegek kezelésére{68}}, mint például a molnupiravir, a nirmatrelvir és a ritonavir, de csak vészhelyzetben a magas kockázatú egyének számára. súlyos betegséggé fejlődik [23–26]. A molnupiravir széles spektrumú vírusellenes aktivitást mutat, mivel képes RNS-mutagenezist indukálni számos virális RNS-függő RNS-polimeráz (RdRp) interferenciája révén, beleértve a SARS-CoV-2 által replikációjához és transzkripciójához használt RdRp-t. RNS genom [27]. A nirmatrelvir és a ritonavir kombinációjáról állatmodellekben is kimutatták, hogy képes megállítani a fertőzés terjedését azáltal, hogy gátolja a SARS-CoV-2- 2 fő vírusproteázát, a 3CLpro-t [28]. Ezeket a vírusellenes gyógyszereket azonban más intézkedésekkel, például vakcinákkal együtt kell beadni, hogy erős citotoxikus immunválaszt váltsanak ki, amely képes a fertőzött sejteket eliminálni. A legtöbb citotoxikus aktivitású sejt, mint például a CD8+ T-limfociták, valamint az NK- és NKT-sejtek működéséhez és homeosztatikus szabályozásához interleukin-15 (IL-15) jelenlétét igényli [29]. Az IL-15 beindítja a CD8+ T-sejteket specifikus antigének általi aktiválásra, valamint javítja az NK-sejtek citotoxicitását és proliferációját. Ezért az IL-15 fokozhatja mind a veleszületett, mind az adaptív sejtes immunválaszt a fertőzött sejtekkel szemben [22,25]. Az IL-15 emellett megakadályozza az NK- és T-sejtek apoptózisát azáltal, hogy fokozza az anti-apoptotikus faktorokat, mint például a Bcl-2, és csökkenti a pro-apoptotikus faktorokat, mint például a GSK-3 [26], ezáltal elkerüli a citopéniát. Ennek megfelelően az IL-15-t új immunmoduláló citokinként javasolták a rák immunterápiájában, és adjuvánsnak tekintik a vakcinákban [26,30]. A humán bolus iv infúziós IL-15 (rhIL-15) vagy IL-15 szuperagonista N-803 1. fázisú klinikai kísérletei kimutatták, hogy ez a citokin jelentős expanziót és/vagy aktivációt válthat ki. CD4+, CD8+ és NK effektorsejtek in vivo, és ezért rák vagy vírusfertőzések, például HIV kezelésére alkalmazták [31–35]. Ezért az olyan immunmoduláló szerek, mint például az IL{107}} alkalmazása, amelyek visszaállíthatják a citotoxikus aktivitást a kritikus COVID{108}} miatt kórházba került egyénekben, hasznosak lehetnek a vírusnak a szervezetből való eltávolításában. Ebben a megfigyeléses, longitudinális vizsgálatban a SARS-CoV-2 elleni citotoxikus immunválasz alakulását jellemeztük olyan perifériás vér mononukleáris sejtjeiben (PBMC), amelyeket olyan egyénekből izoláltak, akiknél COVID-19 diagnosztizáltak, és akiket intenzív vizsgálatra vettek fel. gondozási egység (ICU) súlyos szövődményei miatt, valamint ennek a válasznak a hatása a végeredményre, összehasonlítva más lényeges kockázati tényezőkkel. Azt is értékeltük, hogy ezek a sejtek képesek-e reagálni az IL-kezelésre{112}} és fokozni a citotoxikus antivirális válaszukat. Az ebben a tanulmányban kapott eredmények hozzájárulhatnak a citotoxikus válasz szerepének jobb megértéséhez a COVID{113}} végzetes kimenetelében, és elősegíthetik a hatékony immunmoduláló kezelések kifejlesztését, amelyek elősegítik a vírus kiürülését.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

Kattintson ide a Cistanche Enhance Immunity termékek megtekintéséhez

【Kérjen többet】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Anyagok és módszerek

2.1. Tantárgyak tanulmányozása

Huszonhárom kritikus COVID-beteg{1}} személyt vettek fel a Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spanyolország) intenzív osztályára 2020 októbere és 2021 áprilisa között. Ez az időszak a spanyolországi COVID-19 második és harmadik pandémiás hullámára is kiterjedt (2020 júniusától decemberig, illetve 2020 decemberétől 2021 márciusáig). A résztvevőket véletlenszerűen vették fel a kórházi kezelés során a következő kritériumok szerint: tájékozott írásbeli vagy szóbeli beleegyezés engedélyezése a vizsgálatban való részvételhez, intenzív osztályon történő kórházi kezelés kritikus COVID miatt{8}}, pozitív SARS-CoV{10}} RT-qPCR vizsgálat nasopharyngealis kenetben, belső validált protokollok szerint a kórházi felvételkor, 18 évesnél idősebbek és a fertőzés időpontjában SARS-CoV-2 elleni vakcinázatlanok. A perifériás vérmintákat és a klinikai adatokat 2 hetente gyűjtöttük, összesen 13 héten keresztül, és a vérmintákat feldolgoztuk és mélyhűtöttük az elemzés pillanatáig. Ezt az időszakot úgy számítottuk ki, hogy a spanyolországi kórházi tartózkodás időtartamát az első pandémiahullámok idején átlagosan 35 napra becsülték [36], így legalább két teljes toborzási és nyomon követési kört tudtunk végrehajtani. 13 hét elteltével a résztvevőket két csoportra osztották a végeredmény szerint: fatális kimenetel (n=13), ezentúl Exitus; vagy kórházi elbocsátás (n=10), innentől túlélés.

2.2. Etikai nyilatkozat

A vizsgálatban részt vevő személyeket a Hospital Universitario Ramón y Cajal-tól (Madrid, Spanyolország) vették fel. Valamennyien tájékozottan írásos beleegyezést adtak a vizsgálatban való részvételhez, vagy tanúként szóbeli beleegyezést adtak képviselőjük írásos beleegyezésével, hogy elkerüljék a szennyezett dokumentumok kezelését. A jelenlegi spanyol és európai adatvédelmi törvények biztosították valamennyi résztvevő bizalmas kezelését és anonimitását. Ennek a vizsgálatnak a protokollját (CEI PI 32_2020-v2) a Helsinki Nyilatkozatnak megfelelően készítették el, és korábban az Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) etikai bizottsága és a részt vevő kórház felülvizsgálta és jóváhagyta.

2.3. Sejtek

Öt milliliter teljes vért gyűjtöttünk EDTA Vacutainer csövekbe (Becton Dickinson, Madrid, Spanyolország), és azonnal feldolgoztuk a PMBC-k és a plazma izolálására Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) sűrűséggradiens centrifugálással, majd az elemzésig mélyhűtött állapotban. A felolvasztás utáni sejtek életképességét optikai mikroszkóppal és áramlási citometriával értékeltük. A Vero E6 (afrikai zöldmajomvese) sejtvonalat (ECACC 85020206) Dr. Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Spanyolország) biztosította, és ezeket a sejteket 10% FCS-sel kiegészített DMEM-ben tenyésztettük, 2 mM L- glutamin, valamint 100 egység/ml penicillin és sztreptomicin (Lonza, Basel, Svájc).

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

2.4. Pszeudotipizált SARS-CoV-2 fertőzési vizsgálat

A résztvevők PBMC-inek SARS-CoV-2 elleni citotoxikus aktivitását egyciklusú pszeudotipizált pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S vírussal fertőzött Vero E6 sejtekkel elemeztük. ∆19(G614)_Ren. Ez a vírus a HIV-1 genomon belül a D614G mutációval rendelkező SARS-CoV-2 spike glikoproteint, valamint a korábban leírtak szerint generált Renilla luciferáz gént kódolja [37,38]. A tüske (S) proteinben a D614G mutációt tartalmazó SARS-CoV-2 változatai a pandémia korai szakaszában kezdtek keringeni, és sok régióban gyorsan dominánssá váltak [39,40]. Röviden, a Vero E6 egyrétegű sejtjeit pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren fertőzte meg (100 ng p24 Gag/lyuk ) 48 órán keresztül. Ezután a sejteket mostuk, és 1 órán át együtt tenyésztettük a résztvevők PBMC-jeivel (1:1 arány), amelyeket korábban IL-15-val (13 ng/ml) kezeltek vagy nem kezeltek 48 órán keresztül. A vizsgálathoz használt IL-15 dózisának kiválasztásakor figyelembe vették azt a korábban leírt dózist, amely a legnagyobb hatást gyakorolja az NK proliferációra (10-25 ng/ml) [41], valamint a memória citotoxikus hatásának preferenciális kiterjesztését. CD8+ T-sejtek (5 ng/ml vagy annál kisebb) [42]. A Vero E6 egyrétegű PBMC-k citotoxikus aktivitását a szuszpenzióban lévő sejtekkel együtt a felülúszó eltávolítása és a Vero E6 sejtek tripszin-EDTA oldattal (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Németország) lemezről történő disszociációja után határoztuk meg. a kaszpáz{50}} aktivitás későbbi mennyiségi meghatározása a leszakadt sejtekben lumineszcenciával, Caspase-Glo 3/7 Analysis rendszerrel (Promega, Madison, WI, USA). Annak meghatározására, hogy mely citotoxikus sejtpopulációk felelősek ezért az aktivitásért, PBMC-ket gyűjtöttünk a felülúszóból, majd áramlási citometriával analizáltuk.

2.5. Áramlási citometriai elemzés

A sejtfelszíni fenotipizáló markerek festésére a következő konjugált antitesteket használtuk: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC és CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, a BD Biosciences-től vásárolva (San Jose, CA, USA). A kimerülési markerek festésére a következő konjugált antitesteket használtuk: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC és PD1-BV650, amelyeket a következőtől vásároltunk: A BD Biosciences, valamint a CD{17}}PE az Immunostep SL-től (Salamanca, Spanyolország) és a TIGIT-AlexaFluor700 a Thermo Fishertől (Waltham, MA, USA) vásárolt. A mintákat BD LSRFortessa X-20 áramlási citométerrel, FACS Diva szoftverrel v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) vettük, majd a FlowJo v10.0.7 szoftverrel (Tree Star Inc., Ashland, OR) analizáltuk. , USA).

2.6. SARS-CoV-2 RNAemia kimutatása

A teljes RNS-t a plazmamintákból a QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Madrid, Spanyolország) segítségével extraháltuk egy automata QIAcube extraktorban (Qiagen, Hilden, Németország). A SARS-CoV-2 RNS kimutatását RT-qPCR vizsgálattal végeztük, a burok (E) és a nukleokapszid (N) génekben lévő célpontokkal, a korábban leírtak szerint [43], amely a World Health Interim Guidance of the World Health része. Szervezet (WHO) a SARS-CoV diagnosztikai teszteléséért- 2 [44]. A mintákat akkor tekintettük pozitívnak az elemzés során, ha a kvantifikációs ciklus (Cq) értéke 45 ciklus alatt volt.

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

2.7. Statisztikai analízis

Minden statisztikai elemzést és grafikát a GraphPad Prism szoftver 8.4.3-as verziójával (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) végeztünk. A csoport-összehasonlításokat a Mann–Whitney U-teszt, a Wilcoxon páros előjeles rangteszt, az egyirányú ANOVA és a Tukey-féle többszörös összehasonlítási teszt segítségével végeztük. Fisher-féle egzakt tesztet alkalmaztunk a két csoport klinikai jellemzői közötti különbségek értékelésére. A p < 0.{{10}}5 (kétirányú) értékeit statisztikailag szignifikánsnak tekintettük. Az átlagot és a szórást a Cohen-féle d statisztika kiszámításához egy Excel hatásméret-kalkulátor segítségével [45] használtuk. A 0,2, 0,5, 0,8 vagy nagyobb vagy egyenlő, mint 1,2 hatásméret kicsi, közepes, nagy és nagyon nagy hatásméreteket jelez [46].

3. Eredmények

3.1. A résztvevők jellemzői

Ebben a megfigyeléses, longitudinális vizsgálatban 23 COVID-vel diagnosztizált beteget{1}} vettek részt, akik súlyos szövődmények miatt kerültek az intenzív osztályra. A vérmintákat 2 hetente vették összesen 13 héten keresztül, vagy a végső eredményig. A tanulmány egyik résztvevője sem volt beoltva COVID-19 ellen a fertőzés és a kórházi kezelés idején. Az összes résztvevő fő szociodemográfiai és klinikai jellemzőit az 1. táblázat foglalja össze.

1. táblázat Az Exitus csoportból és a Survival csoportból származó összes résztvevő demográfiai és klinikai adatai, akiket ebbe a vizsgálatba toboroztak.

Az Exitus csoport medián életkora 65.0 év (IQR 62.0–69.0), míg a Survival csoport medián életkora 63.{{7} } év (IQR 59.0–68,5). A legtöbb résztvevő (73,9%) férfi volt, és 65,2%-uknak volt legalább egy társbetegsége. A fő társbetegségek a dyslipidaemia (52,2%), a magas vérnyomás (39,1%) és a diabetes mellitus (26,1%) voltak. A legtöbb beteg kortikoidokat (82,6%), antibiotikumot (82,6%) és véralvadásgátlót (82,6%) kapott standard kezelésként. Más kezeléseket is kaptak, például tocilizumabot (17,4%) és remdesivirt (8,7%). A leggyakoribb jelek és tünetek a tüdőgyulladás (100%), köhögés és köptetés (870%), nehézlégzés (87,0%) és láz (87,0%) voltak. Az intenzív osztályon való tartózkodásuk alatt az Exitus csoportból 12 betegnek (92,3%) és a Survival csoportból 10 betegnek (100%) volt szüksége invazív gépi lélegeztetésre. A szociodemográfiai és klinikai adatokban nem találtunk szignifikáns különbséget a két csoport között. A kiindulási (első minta) vérbiokémiai adatokat is elemeztük mindkét csoport között, és a csoportok között sem találtunk szignifikáns különbséget. Az egyes résztvevők klinikai adatairól, kórházi kezeléséről és vérbiokémiai adatairól részletesebb információ az S1 és S2 kiegészítő táblázatokban található.

3.2. A kórházi és intenzív osztályos tartózkodás időtartama

A kórházi tartózkodás medián időtartama 59.0 (IQR 36.0–100.0) nap volt az Exitus csoportban és 73. 0 (IQR 44,5–90.{{20}}) nap a túlélési csoportban (1A. ábra). Az intenzív osztályon való tartózkodás medián hossza 49,0 (IQR 25,5–82,0) nap volt az Exitus csoportban és 44,0 (IQR 25,0–66,5) nap a túlélési csoportban (1B. ábra). Ezekben a paraméterekben nem találtunk szignifikáns különbséget a két csoport között.

1. ábra: A kórházi és intenzív osztályos tartózkodás időtartama. Kórházi (A) és intenzív osztályon (B) való tartózkodás időtartama (napok) kritikus COVID-ban szenvedő betegeknél-19, akiket a végeredmény szerint két csoportra osztottak: halálos kimenetelű kimenetelű, Exitus csoport (tele pontok); vagy felépülés és kórházi elbocsátás, túlélési csoport (üres pontok). Minden pont egy egyednek felel meg, a függőleges vonalak pedig az átlag ± standard hibáját (SEM) jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával számítottuk ki.

3.3. A perifériás vér limfocitáinak szintje

Az Exitus csoport egyedei limfopéniát mutattak (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

2. ábra: Perifériás vér limfocitaszáma a kritikus COVID miatti kórházi kezelés során-19. A limfocitaszámot (sejt/mm3) 2 hetente, összesen 13 héten keresztül, vagy a végső eredményig határoztuk meg az Exitus (töltött pontok) és a Survival (üres pontok) csoportok résztvevőinek vérmintáiból. A limfopenia küszöbértéke szaggatott vonallal 1000 sejt/mm3. Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül pedig a Wilcoxon U-próbát alkalmaztuk.

3.4. PBMC citotoxikus aktivitása a pszeudotipizált SARS-CoV-vel fertőzött Vero E6 sejtekkel szemben-2

A longitudinális mintákban kórházba került betegek PBMC-inek citotoxikus aktivitását úgy értékeltük ki, hogy számszerűsítettük a kaszpáz-3 aktivációt pszeudotipikus SARS-CoV-2-vel fertőzött Vero E6 sejtek egyrétegű sejtjeiben 1 órás együtttenyésztés után ( arány 1:1). Az Exitus csoport egyedeiből izolált PBMC-k citotoxikus kapacitása nem változott szignifikánsan a kórházi kezelés során, és a halálos kimenetelig folyamatosan alacsony maradt (3. ábra). Ez a citotoxikus aktivitás nem nőtt szignifikánsan, amikor ezeket a sejteket IL-15-val stimuláltuk 48 órán keresztül. A túlélési csoportban a PBMC-k citotoxikus aktivitása 2.{12}}szeresére nőtt (p=0.0234; Cohen d=1.12) az alapmintában (t {{17} }) az Exitus csoporthoz képest, és folyamatosan nőtt a kórházi kezelés 6. hetéig. Ez a növekedés statisztikai szignifikanciát mutatott a csoportok közötti összehasonlításban a 4. héten (5.58-szer; p=0.0290; Cohen d=1.28). A 6. héttől a túlélési csoportban a citotoxikus aktivitás csökkent a kórházi elbocsátásig, ami összhangban volt a limfocitaszám csökkenésével a kórházi kezelés ugyanazon hetében (lásd 2. ábra). Az IL-15-kezelés átlagosan 230-szeresére növelte a túlélési csoportba tartozó egyének PBMC-k citotoxikus aktivitását az összes mintában a követés során. 4 hét kórházi kezelés után az IL-15-indukált citotoxikus aktivitás 618-szeresére nőtt (p=0.0303; Cohen d=1.05) a PBMC-kben. a túlélési csoport egyedei.

3. ábra: Kritikus COVID-ban szenvedő betegekből izolált PBMC-k közvetlen sejtes citotoxicitása-19. Az Exitus (töltött pontok) és a túlélés (üres pontok) csoportba tartozó egyedekből származó PBMC-k citotoxikus kapacitását a kaszpáz-3 aktivitásának mennyiségi meghatározásával mérték Vero E6 sejtekben, amelyek pszeudotipizált SARS-CoV-2-vel fertőzöttek. ko-kultúra (1:1) után 1 órán át alapkörülmények között (szürke vonalak) vagy IL{10}} 48 órás kezelés után (fekete vonalak). Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül pedig a Wilcoxon U-próbát alkalmaztuk.

3.5. Az NK és NKT sejtek szintjei

A citotoxikus fenotípusú sejtek szintjét a PBMC-kben elemezték, amelyeket pszeudotipizált SARS-CoV-2-vel fertőzött Vero E6 sejtekkel együtt tenyésztettek. Nem találtunk szignifikáns különbséget az NK fenotípusú (CD3-CD56+) sejtek szintje között a két egyedcsoport között, még az IL-15 kezelés után sem (4A. ábra). A CD107a degranulációs marker expressziója ezen sejtek felszínén változatlan maradt az Exitus csoportba tartozó egyedekben. Bár ez a kifejezés folyamatosan nőtt a 4. héttől a kórházi elbocsátásig a túlélési csoportban, ez a különbség nem ért el statisztikai szignifikanciát az Exitus csoporttal való összehasonlításban (4B. ábra). Az IL-15-kezelés nem módosította szignifikánsan a CD107a expresszióját ezekben a sejtekben. A 4. héttől kezdve mindkét csoport egyedeinek PBMC-jei az NKT fenotípusú (CD3+CD56+) sejtek szintjének növekedését mutatták, ami 4.{17}}szer magasabb volt a PBMC-kben az Exitus csoport egyedei a 6. héten, bár ez a különbség nem érte el a szignifikanciát (p=0.0571; Cohen d=3.15) (5A. ábra). Ez a növekedés valamivel magasabb volt, amikor a sejteket IL-15-val kezelték mindkét csoportban, bár az adatok sem értek el statisztikai szignifikanciát (5A. ábra). A CD107a expressziója nem változott szignifikánsan a két csoport között vagy az IL-15-kezelés után (5B. ábra).

4. ábra: Az NK-sejtek szintje a kritikus COVID-betegséggel kórházba került egyének PBMC-jében-19. (A) Az NK-sejtek összszintjét (CD3-CD56+) és (B) a CD107a degranulációs marker expresszióját ezekben a sejtekben PBMC-kben értékelték ki alapkörülmények között (szürke vonalak) vagy kezelés után. IL-15 48 órán át (fekete vonalak) pszeudotipizált SARS-CoV-2-vel fertőzött Vero E6 sejtekkel (1:1) 1 órán át tartó együtttenyésztés után. Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül Wilcoxon U-próbával számítottuk ki.

5. ábra: Az NKT-sejtek szintje a kritikus COVID-betegségben kórházba került egyének PBMC-jében-19. Az NKT-sejtek teljes szintjét (CD3+CD56+) (A) és a CD107a degranulációs marker expresszióját ezekben a sejtekben (B) alapkörülmények között (szürke vonalak) vagy IL-kezelés után értékeltük. {5}} 48 órán keresztül (fekete vonalak), miután pszeudotipizált SARS-CoV-vel fertőzött Vero E6 sejtekkel (1:1) 1 órán keresztül tenyésztettük őket-2. Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül pedig a Wilcoxon U-próbát alkalmaztuk.

3.6. A CD8+ T-sejtek szintje

Az Exitus csoport alapmintájában (t=0) a CD8-szám 2.07-szeresére nőtt (p=0.0409; Cohen-d=0.94) összehasonlítva a túlélési csoporttal, és ezek a szintek a végzetes kimenetelig változatlanok maradtak (6A. ábra). Az IL-15 nem gyakorolt ​​jelentős jótékony hatást ennek a sejtpopulációnak a szintjére. A túlélési csoportban a CD8+ T-sejtek átlagosan 151-szeresére csökkentek az Exitus csoporthoz képest (6A. ábra). A CD107a expressziója 1.{16}}szeresére csökkent (p=0.0313) a 4. héten az Exitus csoport egyedeinek CD8+ T-sejtjeiben, és változatlan maradt a halálos kimenetelig eredmény. Az IL-15-kezelés enyhe javulást mutatott ennek a degranulációs markernek a kifejeződésében, de ez a különbség nem volt szignifikáns (6B. ábra). A túlélési csoportban szintén csökkent a CD107a expressziója a CD8+ T-sejtekben a 4. héten, majd ezt követően nőtt, de nem értek el szignifikanciát az IL-kezelés előtt vagy után. }} (6B. ábra).

6. ábra: A CD8+ T-sejtek szintje a kritikus COVID-ban kórházba került személyek PBMC-iben-19. (A) A CD8+ T-sejtek teljes szintjét (CD3+CD8+) és (B) a CD107a degranulációs marker expresszióját ezekben a sejtekben PBMC-kben értékelték ki alap körülmények között (szürke). vonalak) vagy 48 órás IL-15 kezelést követően (fekete vonalak), miután pszeudotípusos SARS-CoV-2-vel fertőzött Vero E6 sejtekkel (1:1) 1 órán át tenyésztettük. Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül pedig a Wilcoxon U-próbát alkalmaztuk.

3.7. A kimerülésjelzők szintjei

A PD-1 (programozott sejthalál fehérje) és a TIGIT (T-sejt immunreceptor Ig és ITIM doménekkel) expressziós szintjét áramlási citometriával elemeztük CD4+ T-sejtekben és citotoxikus sejtekben. minden résztvevő. A kórházi felvételkor (t=0) a kórházi kezelés 6. hetéig vett mintákat elemeztük, mivel ezen időpont után nem álltak rendelkezésre minták. Az Exitus csoportba tartozó egyének CD4+ és CD8+ T-sejtjei PD-1 szintet mutattak, amely szignifikánsan, 1,72-vel emelkedett (p=0.0095; Cohen d {{ 11}},87)- és 2.{15}}szeres (p=0.0317; Cohen d=2.07) 4 hét kórházi kezelés után, összehasonlítva a Túlélési csoport (7A, B ábra, bal oldali grafikonok). Az NKT sejtekben a TIGIT szintje szignifikánsan megemelkedett a kórházi felvételtől a 6 hetes kórházi kezelésig az Exitus csoportba tartozó egyénekben, és ezek a szintek 1.{24}}szeresére emelkedtek (p=0.0357). Cohen d=0,33) 2 hét kórházi kezelés után, összehasonlítva a túlélési csoporttal (7C. ábra, jobb oldali grafikon).

Nem figyeltek meg szignifikáns különbséget a csoportok között ezen kimerülési markerek expressziós szintjében NK-sejtekben (7D. ábra).

7. ábra: Kritikus COVID-betegségben kórházba került személyek kimerültségi markereinek kifejeződési szintjei PBMC-ben-19. A PD-1 és a TIGIT expressziós szintjei CD4+ T-sejtekben (A), CD8+ T-sejtekben (B), NKT-sejtekben (C) és NK-sejtekben (D). Minden pont az adatok átlagának felel meg, a függőleges vonalak pedig a SEM-et jelentik. A csoportok közötti statisztikai szignifikanciát Mann–Whitney U-próbával, a csoportokon belül pedig ANOVA-t alkalmaztunk.

3.8. A SARS-CoV-2 RNAemia mennyiségi meghatározása plazmában

A SARS-CoV-2-ból származó RNS jelenlétét az alapmintában (t=0) szereplő összes egyed plazmájában elemezték, és egyetlen résztvevőnél sem kaptunk pozitív eredményt, a Cq-értékek a határérték alatt voltak. 45 ciklus pozitív kimutatása.

4. Megbeszélés

A SARS-CoV-2 fertőzés a COVID-19 számos klinikai megnyilvánulását okozhatja, amelyek a tünetmentes fertőzéstől a súlyos, kritikus vagy akár halálos betegségig terjednek [4]. Bár a lakosság általános védőoltása nagymértékben csökkentette a betegség súlyos formáit, a SARS-CoV új változatainak megjelenése-2 növeli azon egyének számát, akiknél kritikus COVID-19 alakul ki, és ezért áttöréses fertőzések miatt kórházba került [47,48]. Ezért továbbra is prioritást élvez olyan megelőző és terápiás stratégiák kidolgozása, amelyek elkerülhetik a COVID kritikus formáinak-19 kialakulását és a kórházi betegek halálos kimenetelét. Leírták, hogy a társbetegségben szenvedő idősek nagyobb kockázatot jelentenek a súlyos és kritikus COVID-betegség kialakulásában{{1{{30}}}} [49]. Spanyolországban a COVID{12}} okozta halálozás legjelentősebb független előrejelzői az 50 év feletti férfiak, akikhez társuló betegségek, például magas vérnyomás és cukorbetegség társulnak [36]. Vizsgálatunkban mindkét csoport résztvevőinek többsége bemutatta ezeket a jellemzőket, anélkül, hogy a szociodemográfiai, klinikai vagy biokémiai adatokban jelentős különbségek mutatkoztak volna közöttük, amelyek befolyásolhatják a betegség súlyosságát vagy a halálos kimenetelt. Valójában mindkét csoport magasabb szintű biokémiai paramétereket mutatott, amelyek összefüggésbe hozhatók a COVID rossz kimenetelének nagyobb kockázatával,{15}} ilyenek például a C-reaktív fehérje (CRP) és a laktát-dehidrogenáz (LDH) [50–56 ]. Másrészről, bár arról számoltak be, hogy a súlyos COVID{19}}-ben szenvedő egyéneknél kimutatható SARS-CoV-2 RNS-vérszegénység [54], ami összefüggésbe hozható a megnövekedett halálozási kockázattal [55], vizsgálatunk egyik résztvevője sem mutatott kimutatható RNS-t a szérumban, így nem tudtunk összefüggést megállapítani a kimutatható virémia és a halálos kimenetel között. Végül a COVID{24}} magasabb kórházi tartózkodási időt és halálozási arányt mutat más intenzív osztályos kezelést igénylő fertőző betegségekhez képest, mint például a közösségben szerzett tüdőgyulladás (CAP) vagy szepszis [56], és 35-ben becsülték meg. átlagosan nap azoknál az egyéneknél, akik Spanyolországban kerültek kórházba az első pandémiahullámok idején [36]. Vizsgálatunkban a kórházi tartózkodás medián hossza hasonló volt mind az Exitus, mind a Survival csoportban (59,0 és 73,0 nap), és az összes résztvevő 50%-a 40 napnál tovább tartózkodott az intenzív osztályon. Ezért más eltérő tényezőket is figyelembe kell venni, hogy megmagyarázzák a végzetes kimenetelt az Exitus csoportban és a felépülést a túlélési csoportban.

A cistanche tubulosa előnyei- erősíti az immunrendszert

A limfopéniát a betegség súlyosságának kockázati tényezőjének is tekintik, amely összefüggésben áll a hosszabb kórházi tartózkodással [57]. Vizsgálatunkban mind az Exitus, mind a Survival csoport résztvevőinek 73,9%-a alacsony limfocitaszámot mutatott. Az összes limfocita szint azonban átlagosan magasabb volt a Survival csoportban, mint az Exitus csoportban. Ez összhangban van azzal a korábbi megfigyeléssel, miszerint a COVID-ban{3}} elhunyt személyeknél idővel súlyosabb lymphopenia alakul ki, mint a túlélőknél [58], és ezek a limfociták általában kimerült fenotípust mutatnak, ami fokozatos immunhiány [15,16]. Mivel a hatékony citotoxikus antivirális válasz elengedhetetlen a vírusfertőzések, köztük a SARS-CoV-2 [17] leküzdéséhez, az immunrendszer helyreállítása kulcsfontosságú a COVID-ból való felépüléshez-19. Az immunrendszer helyreállításának felgyorsulása nagymértékben függ a limfociták homeosztatikus perifériás expanziójától, ami jó stratégia lehet a súlyos COVID miatt kórházba került egyének kimenetelének javítására-19 [58]. Az IL-15 egy citokin, amely a CD8+ T-sejtek, NK- és NKT-sejtek működéséhez és homeosztázisához szükséges [29], és számos betegség, például a rák új immunmoduláló kezelésének javasolták. és HIV-fertőzés [26,30,35,59]. Ezért ebben a tanulmányban azt értékeltük, hogy az IL-15 in vitro kezelés javíthatja-e a citotoxikus választ a súlyos és kritikus COVID-ban szenvedő betegek PBMC-jében{21}} a fertőzés előrehaladtával, annak érvényességének megállapítása érdekében. mint jelölt az immunrendszer helyreállításának serkentésére a COVID során-19. A vizsgált dózissal a pszeudotípusú SARS-CoV-vel{24}} fertőzött célsejtekkel szembeni citotoxikus válasz általános növekedését figyeltük meg azon egyének PBMC-jében, akik túlélték a COVID-ot{25}} átlagosan 44 napos kórházi kezelés után az intenzív osztályt. Ez a citotoxikus válasz átlagosan 23-szeresére nőtt az IL-kezelés során-15 az utánkövetés során gyűjtött összes mintában, és a kórházi kezelés 6. hete volt a fordulópont, amelytől kezdve mindkét limfocitaszám és a citotoxikus aktivitás csökkenni kezdett a kórházi elbocsátásig. Annak ellenére, hogy hasonló szociodemográfiai, klinikai és biokémiai jellemzőkkel rendelkeznek, és közel ugyanannyi ideig feküdtek kórházban (összesen 59 napot, ebből 49 napot az intenzív osztályon), azon személyek csoportja, akik nem élték túl a COVID-ot{34} } olyan PBMC-ket mutatott ki, amelyek nem reagáltak a fertőzött célsejtek jelenlétére, még akkor sem, ha IL-vel stimulálták őket-15. Az ebbe a csoportba tartozó egyénekben a limfociták összszintje a kórházi kezelés 2. hete óta meghaladta a limfopenia küszöbértékét. Ezek a szintek azonban nem emelkedtek szignifikánsan a kórházi kezelés ideje alatt, és nem észleltek hatékony vírusellenes választ, még IL-15 jelenlétében sem a vizsgált dózisban. Az IL-re adott válasz hiányát más krónikus fertőzések, például a humán immundeficiencia vírus (HIV), a hepatitis C vírus (HCV), a hepatitis B vírus (HBV) és a humán T-limfotrop vírus (HTLV) esetében írták le, amelyekben az immunkimerülés befolyásolhatja az IL-15, a CD122 specifikus receptorának expresszióját a CD8+ T-sejtekben [60], így ezek nem reagálnak erre a homeosztatikus ingerre. A COVID-19-ra jellemző immunkimerülést nemcsak a CD8+ T-sejtekben figyelték meg, hanem más citotoxikus sejttípusokban is, például NK- és NKT-sejtekben [15,16]. Ezért az IL-15-re adott válasz hiánya az Exitus csoportból származó PBMC-kben a fokozott immunkimerültséggel hozható összefüggésbe, amelyet nem lehetett leküzdeni önmagában az IL-15-kezeléssel a vizsgált dózis mellett. Ezt figyelték meg az I. fázisú klinikai vizsgálatok során is, amelyekben az IL-15 monoterápia hatástalan volt a citotoxikus sejtek hatalmas növekedése ellenére [31,32]. Következésképpen más kostimuláló kezelésekre lenne szükség ahhoz, hogy ezekben az egyénekben hatékony választ kiváltsunk, például immunológiai ellenőrzőpont-inhibitorokra vagy a fertőzött sejteket megcélzó monoklonális antitestekre, hogy fokozzuk az antitest-függő sejtes citotoxicitást (ADCC).

Meghatároztuk azokat a sejttípusokat is, amelyek főként részt vettek ennek a fokozott citotoxikus válasznak a kialakulásában azon egyének csoportjában, akik túlélték a COVID-ot{0}}. Bebizonyosodott, hogy a funkcionális CD8+ T-sejtek jelenléte elengedhetetlen az állatmodellek védelméhez a súlyos COVID-19 kialakulásától [61,62]. Ezenkívül a hatékony CD8-mediált citotoxikus válasz hiányát alapvető tényezőnek nevezték ki az idős emberek súlyos vagy kritikus COVID-re való fokozott hajlamában-19 [63]. Meglepő módon a CD8+ T-sejtek szintje 207-szer (p=0.0409) magasabb volt az Exitus csoportban a kórházi kezelés idején (t=0) , és a túlélési csoporttal összehasonlítva a végzetes kimenetelig erősödtek. Bár az Exitus csoportba tartozó egyének limfocitaszáma valamivel meghaladta a limfopenia küszöbértékét, ezek a szintek szinte változatlanok maradtak a kórházi kezelésük ideje alatt. Ezenkívül leírták, hogy a limfopenia egyidejűleg fennálló szuppresszió és aktiváció mintázatához vezethet, amelyben a T-sejtek perifériás elvesztése a CD8+ T-sejtkészlet intenzív proliferációjával egyidejűleg [64,65]. Ez magyarázza a CD8+ T-sejtek enyhén megnövekedett szintjét, amelyet az Exitus csoportból származó résztvevők PBMC-jében figyeltek meg a kórházi kezelés 6. hete óta, annak ellenére, hogy a limfociták összszintje változatlan maradt, és meghaladja a limfopenia küszöbértékét, ami a CD4+ T-sejtek potenciális csökkenését is jelzi. Azonban ezek a CD8+ T-sejtek alacsony citotoxikus aktivitást mutattak, amit a CD107a degranulációs marker sejtfelszínen való alacsony expressziója határoz meg, míg e marker expressziója nőtt a CD8+ T-sejtekben a Survival csoport résztvevői a 4. héttől. A CD107a expresszióját biomarkernek tekintik a citotoxikus kapacitás értékelésében [66], és leírták, hogy a COVID-fertőzött egyedekből izolált sejtek felszínén csökken{26}}, összehasonlítva a nem fertőzött, egészséges donorokkal [15] ].

Ezért a CD107a fokozott expressziója a CD8+ T-sejtek felszínén legalább részben megmagyarázhatja e sejtek hozzájárulását a túlélési csoportból származó résztvevők PBMC-iben megfigyelt fokozott citotoxikus aktivitáshoz. Ezenkívül megfigyeltük a PD-1 kimerülési marker fokozott expresszióját mind a CD4+, mind a CD8+ T-sejtekben az Exitus csoportba tartozó egyedekből, ami szintén hozzájárulhat a citotoxikus szint csökkenéséhez. ezeknek a sejteknek az IL-15 aktivitását és válaszát. Más sejtpopulációk is részt vehetnek a pszeudotipizált SARS-CoV{7}}fertőzött sejtekkel szembeni citotoxikus aktivitásban, mint például az NK- és NKT-sejtek. Más súlyos akut fertőzésekhez hasonlóan, az NK-sejtek a SARS-CoV-fertőzés helyére toborozhatnak-2 [67], ami megmagyarázza a keringő NK-sejtek számának csökkenését, amelyet minden résztvevőnél megfigyeltek. Ezenkívül a súlyos és kritikus COVID{11}} során kialakuló citokinvihar az NK-sejtek diszfunkcionális státuszát eredményezheti, amely magas szintű gátló ellenőrzőpont-receptorokat, például NKG2A-t vagy PD-t{13}} expresszál [68]. Vizsgálatunkban az NK-sejtek szintje hasonló volt mindkét csoportban a 6. hétig, amelyben a Survival csoport résztvevői progresszív növekedést mutattak a kórházi elbocsátásig. Ez korrelált a CD107a fokozott expressziójával, amelyet NK-sejtekben fokozott citokin-szekrécióval és a célsejtek jobb lízisével társítottak [7,69], bár az aktivációs markereket, például a CD107a-t expresszáló NK-sejtek százalékos aránya alacsonyabb a COVID-betegeknél{20}} az egészséges kontrollokhoz képest [70]. Ezzel szemben, bár az NKT sejtek szintje nagymértékben megemelkedett a túlélési csoportban a 6. héttől kezdődően, a CD107a expressziója szinte változatlan maradt, miközben a TIGIT kimerülési marker fokozott szintjét mutatták a sejtfelszínen, amely folyamatosan emelkedett a kórházi kezelés 6. hetéig. . Vizsgálatunk egyik legfontosabb korlátja a csökkentett mintaszám volt. Ennek ellenére számos lényeges paraméterben sikerült statisztikai szignifikanciát elérni a csoportok között, amelyek szintén nagy vagy nagyon nagy hatást mutattak a csoportok közötti összesített különbségek kiszámításakor.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

5. Következtetések

Összefoglalva, ennek a tanulmánynak a legfontosabb hozzájárulása a SARS-CoV-2 fertőzés által okozott immunpatológia elleni küzdelemhez az a megerősítés, hogy a PBMC-k csökkent vírusellenes kapacitása kritikus tényezőnek tűnt a halálos COVID-ba való előrehaladásban. {2}}, még más szociodemográfiai, klinikai és biokémiai tényezők felett is. Ezért a citotoxicitást fokozó immunmoduláns kezelések hozzájárulhatnak a kritikus COVID miatti kórházi kezelés pozitív kimeneteléhez-19. Az IL-15 által közvetített megnövekedett citotoxikus aktivitás a túlélési csoportba tartozó egyénekben valószínűleg nem a citotoxikus sejtek megnövekedett szintjén alapult, hanem ezen sejtek immunkompetenciáján, hogy reagáljanak az ilyen ingerekre. Ezért a kimerülési markerek expressziójának monitorozása, valamint ezen sejtpopulációk homeosztatikus ingerekre, például IL-15-re adott válaszkészsége kórházi kezelés alatt álló egyénekben hasznos lehet a halálos kimenetel előrejelző markereként a megelőzés érdekében. azt. Következésképpen ez a megfigyeléses tanulmány bizonyítja azt az elképzelést, hogy az IL-15 alkalmazása COVID-fertőzésben-19 kórházba került egyénekben javíthatja a vírusellenes immunválaszt, bár ez az inger önmagában nem lenne hatékony azoknál az egyéneknél, akik nem reagálnak. sejtek immunkimerülése vagy károsodott IL-15R jelátviteli útvonala miatt, ami elengedhetetlen a kimerültség megelőzésében [71], még akkor is, ha limfocitaszámuk meghaladja a lymphopenia küszöbét. Nagyobb populációval több vizsgálatra van szükség annak érdekében, hogy értékeljük a növekvő dózisú IL-15 kombinációit más immunmoduláló szerekkel, például immunkontroll-gátlókkal vagy a fertőzött sejteket megcélzó monoklonális antitestekkel, hogy segítsenek helyreállítani és fokozni a vírusellenes választ a COVID kritikus formáiban. -19.

Hivatkozások

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, HE; Clements, TP Útmutató a COVID-hoz-19: Az új koronavírus SARS-CoV-2 által okozott globális járvány. FEBS J. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]

2. A WHO Coronavirus (COVID-19) irányítópultja. Elérhető online: https://covid19.who.int/ (Hozzáférés: 2022. október 18.).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Rocco, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Rocco, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; et al. A COVID{1}} világjárvány exponenciális szakasza Közép-Olaszországban: integrált ellátási útvonal. Int. J. Environ. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Agyar.; Xu, J.; Gu, X.; et al. A 2019-es új koronavírussal fertőzött betegek klinikai jellemzői a kínai Vuhanban. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Krónikus háttérbetegség és COVID{1}} fertőzés: A legkorszerűbb áttekintés. Jundishapur J. Chronic Dis. Gondozás 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM A SARS-CoV{10}} kládok globális dinamikája és kapcsolatuk a COVID{11}} epidemiológiájával. Sci. Rep. 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. A COVID hematológiai megnyilvánulásai és szövődményei-19. Adv. Clin. Exp. Med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. A citokinvihar és a COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Felnőtt haemophagocyticus szindróma. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Brown, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; a HLH Across Specialty Collaboration, Egyesült Királyság nevében. A specialitáson át. COVID-19: Fontolja meg a citokinvihar szindrómákat és az immunszuppressziót. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. A SARS-CoV-2 sejtreceptor gén ACE2 expressziója sokféle emberi szövetben. Megfertőzni. Dis. Szegénység, 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Citokinvihar a COVID-ban-19: A vírusfertőzéstől az immunválaszig, diagnózisig és terápiáig. Int. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Az aktivált T-sejtek élete és halála: miben különböznek a naiv T-sejtektől? Elülső. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Lymphopenia súlyos koronavírus-betegségben-2019 (COVID-19): Szisztematikus áttekintés és metaanalízis. J. Intensive Care 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Song, G.; Liu, S.; Sun, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Az antivirális limfociták funkcionális kimerülése COVID-19 betegekben. Sejt. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; et al. A PD-1-SARS-CoV-2-specifikus CD8+ T-sejtek nem kimerültek, de működnek a COVID-betegeknél-19. Immunity 2021, 54, 44–52. [CrossRef]

17. Vigón, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Corona, M.; Saez-Marín, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; et al. Csökkent citotoxikus válasz PBMC-ben COVID-ban szenvedő betegektől-19, akiket intenzív osztályon vettek fel: Biomarkerek a betegség súlyosságának előrejelzésére. Elülső. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. KI. Időközi nyilatkozat a frissített COVID-19-változatú vakcinák használatával kapcsolatos döntéshozatali szempontokról. Elérhető online: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{15} }vaccines (letöltve 2022. augusztus 15-én).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Egy éves frissítés a COVID{1}} világjárványról: Hol tartunk most? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. A COVID molekuláris immunpatogenezise és diagnózisa-19. J. Pharm. Anális. 2020, 10, 102–108. [CrossRef]

21. TRC csoport. Dexametazon COVID-ban szenvedő kórházi betegeknél-19. N. Engl. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Ajak.; Wang, J.; Sun, S.-C. Az Otub1 deubiquitináz szabályozza a CD8+ T-sejtek és NK-sejtek aktiválását az IL-15-közvetített priming szabályozásával. Nat. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]

23. Parums, DV A SARS-CoV-2 fertőzés orális antivirális gyógyszeres kezelésének jelenlegi állása nem kórházi kezelésben. Med. Sci. Monit. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. A vírusellenes tabletták megváltoztathatják a pandémia lefolyását. Am. Assoc. Adv. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Targeting NK-cell checkpoints for cancer immunotherapy. Curr. Opin. Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interleukin 15: Kulcsfontosságú citokin az immunterápia számára. Cytokin Growth Factor Rev. 2016, 31, 49–59. [CrossRef]

27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokic, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. A molnupiravir által kiváltott SARS-CoV-2 mutagenezis mechanizmusa. Nat. Struktúra. Mol. Biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]

28. Hung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Orális nirmatrelvir/ritonavir terápia COVID-re{8}}: Hajnal a sötétben? Antibiotikumok 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Az IL-15/IL-15R komplex, mint daganatellenes és vírusellenes szer immunbiológiája. Cytokin Growth Factor Rev. 2017, 38, 10–21. [CrossRef]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Az IL-15 biológiai hatásai az immunsejtekre és lehetőségei a rák kezelésében. Int. Immunopharmacol. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 a rák kombinált immunterápiájában. Elülső. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]

32. Dubois, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Müller, JR; Shih, JH; et al. A folyamatos infúzióban adott rövid lefolyású IL-15 a hatékony NK-sejtek tömeges elterjedéséhez vezetett: A daganatellenes antitestekkel végzett kombinációs terápia következményei. J. Immunother. Rák 2021, 9, e002193. [CrossRef]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; et al. IL15 folyamatos intravénás infúzióval szilárd daganatos felnőtt betegeknek egy fázis I. vizsgálatban, drámai NK-sejt-alcsoportban. Clin. Cancer Res. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; et al. Az IL-15 szuperagonista komplex ALT-803 első humán fázisú klinikai vizsgálata a transzplantáció utáni relapszus kezelésére. Blood Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; et al. Az IL-15 szuperagonista N-803 biztonsága és virológiai hatása HIV-fertőzött emberekben: 1. fázisú vizsgálat. Nat. Med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; et al. A halálozás jellemzői és előrejelzői 4035, egymást követően kórházba került COVID-beteg-19 között Spanyolországban. Clin. Microbiol. Megfertőzni. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. A rekombináns vírusokon alapuló új stratégia mint eszköz az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus gyógyszerérzékenységének felmérésére. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Ajak.; Mi, D.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; et al. A SARS-CoV-2 tüskés glikoproteinjének jellemzése a vírus bejutásakor és immun-keresztreakciója a SARS-CoV-val. Nat. Commun. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

39. Volz E.; Hill, V.; McCrone, JT; Price, A.; Jorgensen, D.; O'Toole, Á.; Southgate, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; et al. A SARS-CoV-2 D614G tüskemutáció átviteli képességre és patogenitásra gyakorolt ​​hatásának értékelése. Cell 2021, 184, 64–75. [CrossRef]

40. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; et al. A SARS-CoV-2 kiugrásában bekövetkezett változások nyomon követése: Bizonyíték arra, hogy a D614G növeli a COVID-19 vírus fertőzőképességét. Cell 2020, 182, 812–827. [CrossRef]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Az IL-15–PI3K–mTOR útvonal kritikus szerepe a természetes ölősejtek effektor funkcióiban. Elülső. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Bracci, L.; Adamina, M.; Feder-Megus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; et al. Az IL-2, IL-7 és IL-15 közös receptorlánc citokinekre adott differenciált válaszreakciója egészséges donoroktól származó antigén-specifikus perifériás vér naiv vagy memória citotoxikus CD8+ T-sejtek által Melanómás betegek. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; et al. A 2019-es új koronavírus (2019-nCoV) kimutatása valós idejű RT-PCR-rel. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. KI. A SARS-CoV diagnosztikai tesztelése-2: Ideiglenes útmutató, 2020. szeptember 11.; Egészségügyi Világszervezet: Genf, Svájc, 2020.

45. Becker, LA Effect Size (ES); Colorado Egyetem Colorado Springs: Colorado Springs, CO, USA, 2000.

46. ​​Cohen, J. Statisztikai erőelemzés a viselkedéstudományokhoz; Routledge: Abingdon, Egyesült Királyság, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Ribes, I.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Kórházba került betegek áttörést jelentő COVID-ban-19: Klinikai jellemzők és rossz kimenetelű előrejelzők. Int. J. Infect. Dis. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Park, WB; Choe, PG; Song, K.-H.; Kim, ES; Park, S.-W. Áttörést jelentő COVID-19 fertőzés a Delta-változat domináns időszakában: az oltás állapotán alapuló, személyre szabott ellátásra van szükség. J. Korean Med. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdalla, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 és társbetegségek: Káros hatás a fertőzött betegekre. J. Infect. Közegészségügy 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID{1}} és a szív- és érrendszer: átfogó áttekintés. J. Hum. Hipertónia. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]

51. Zhang, JJ; Lee, KS; Ang, LW; Leo, YS; Young, BE A súlyos betegségek kockázati tényezői és a kezelés hatékonysága COVID-fertőzött betegeknél-19: Szisztematikus áttekintés, metaanalízis és meta-regressziós elemzés. Clin. Megfertőzni. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]

52. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. A biomarkerek szerepe a COVID diagnosztizálásában-19 – Szisztematikus áttekintés. Life Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrielove, JL; Sacks, H. A COVID-19 kórházi kezelések biomarkerei és eredményei: Szisztematikus áttekintés és metaanalízis. BMJ Evid. Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]

54. Li, Y.; Schneider, AM; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Gentili, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gushterova, I.; Khanna, HK; et al. A SARS-CoV-2 virémia különböző proteomikus útvonalakkal jár, és előrejelzi a COVID-19 kimenetelét. J. Clin. Investig. 2021, 131, e148635. [CrossRef]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; et al. A SARS-CoV-2 RNS kimutatása a szérumban a kórházi COVID{10}} betegek megnövekedett halálozási kockázatával jár. Sci. Rep. 2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI COVID-19 fertőzésben szenvedő, kritikus állapotú betegek klinikai lefolyása és eredményei: szisztematikus áttekintés. Clin. Microbiol. Megfertőzni. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; et al. A betegség súlyosságával és a kórházi tartózkodás időtartamával kapcsolatos kockázati tényezők a COVID{1}}-betegeknél. J. Infect. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, RC T sejt immunbiológia és a COVID citokinvihara-19. Scand. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Az IL-15 és N-803 terápiás potenciálja HIV/SIV fertőzésben. Vírusok 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, EJ CD8 T-sejt diszfunkció krónikus vírusfertőzés során. Curr. Opin. Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Péter, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; et al. A SARS-CoV-2 elleni védelem összefüggései rhesus makákókban. Természet 2021, 590, 630–634. [CrossRef]

62. Zhuang, Z.; Lai, X.; Sun, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; et al. A T-sejtes válasz feltérképezése és szerepe SARS-CoV-2-fertőzött egerekben. J. Exp. Med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; et al. Csökkent citotoxikus CD8+ T-sejtes válasz idős COVID-19 betegeknél. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Fish, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; et al. A dinamikus COVID-19 immunrendszer rossz prognózisú összefüggéseket tartalmaz. Nat. Med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Mathew, D.; Baxter, AE; Vella, LA; et al. A súlyos COVID-hoz kapcsolódó immunzavarok átfogó feltérképezése-19. Sci. Immunol. 2020, 5, eabd7114. [CrossRef]

66. Aktas, E.; Kucuksezer, UC; Bilgic, S.; Erten, G.; Deniz, G. A CD107a expressziója és a citotoxikus aktivitás közötti kapcsolat. Sejt. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]

67. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Természetes gyilkos sejtek az antivirális immunitásban. Nat. Rev. Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]

68. Bi, J. NK-sejtek diszfunkciója COVID-ban szenvedő betegeknél-19. Sejt. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]

69. Alter, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. A CD107a funkcionális markerként a természetes ölősejtek aktivitásának azonosítására. J. Immunol. Methods 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]

70. Gustine, JN; Jones, D. A hiperinflammáció immunpatológiája COVID-ban-19. Am. J. Clin. Pathol. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]

71. Ő, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, I.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; et al. Az IL-7 együttes expressziója javítja a prosztatarák NKG2D-alapú CAR T-sejt-terápiáját azáltal, hogy fokozza a kiterjedését, valamint gátolja az apoptózist és a kimerültséget. Cancers, 2020, 1969, 12. [CrossRef]