Szinergetikus bőrgát pigmentációs hatása a cisztanche-feniletanoid glikozidok és a glabridin hatása

Absztrakt a szinergikus vizsgálataA cistanche hatásaFenil -etanol oldal (PHGS) és glabridin (GLA) a bőr pigmentációja ellen, a PHG -k és a GLA tömeg arányát in vitro tirozináz -gátlási kísérlet, 1, 1- difenil -2- trinitrofenil -hidrazin (DPPH) és 2, 2- diazo-bisz (3- etil-benzotiazol -6- szulfonsav-diamonium-kation (ABTS+) szabad gyökös kaszklemezek. A B16F10 UVB-indukált hypopigmentációs modelljét és a Melanin-termelés gátlását kiértékeljük, és a melanin-termelés gátlása volt, és a melanintermelés gátlása volt, és a melanintermelés gátlása volt. indexekként.

AgyulladásosMegállapítottuk a lipopoliszacharid (LPS) által indukált HACAT-sejtek modelljét, és a gyógyszer gyulladásgátló hatását úgy értékelték, hogy gátolják az interleukin -6 (IL -6) és a tumor nekrózis faktor (TNF-) felszabadulását. Az azodiisobuamidin -hidroklorid (AAPH) által indukált oxidatív stresszmodelljét tovább állítottuk elő, és a szuperoxid -diszmutáz (SOD) és a kataláz (CAT) fokozott aktivitását indexekként használtuk a gyógyszer antioxidáns hatásának értékelésére. A PHG -k és a GLA optimális tömegarányát a fenti három sejtmodell határozta meg. Az eredmények azt mutatták, hogy a PHGS/GLA (1∶1), a PHGS/GLA (5∶1) és a PHGS/GLA (10∶1) vizes oldatai M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1, 10∶1, 10∶1 -rel jó inhiber és szinergisztikus hatást mutattak. A PHGS/GLA gátlási sebessége (1∶1),
A PHGS/GLA (5∶1) és a PHGS/GLA (1 0 ∶1) vizes oldatok, amelyek tömegkoncentrációja 0,4 g/L, 94,37%, 92,93%és 88,06%volt. A DPPH szabad gyökök megsemmisülési aránya 89,44%, 88,72,%és 88,10%volt.
Az ABTS+ szabad gyökök megsemmisülési aránya 1 0 0,13%, 100,0,1%és 99,87%volt. Amikor a PHG/GLA tömegkoncentrációja 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) és PHGS/GLA (10∶1) vizes oldatok nem mutattak citotoxicitást a B16F10 és a HACAT sejtek számára. A tirozináz aktivitás gátlása a PHGS/GLA (1 ∶1) vizes oldatban erősebb volt (tirozináz aktivitás 23,80%), és a melanintartalom (30,90%) szignifikánsan csökkent. A PHGS/GLA (1∶1) vizes oldat megmutatta a legjobb gátlási hatást az IL -6 és a TNF-felszabadulásra, valamint az SOD és a CAT aktivitásának fokozására. A PHG -k és a GLA kombinációja jó szinergetikus teljesítményt mutatott, az A jobb A -hoz képest, és magasabb, mint a PHGS/ GLA (5∶1) és a PHGS/ GLA (10∶1) vizes oldat. A PHG-k és a GLA kombinációja szinergetikus szerepet játszott a bőr pigmentációjának javításában a melanintermelés gátlásával, valamint a gyulladásgátló és antioxidáns hatásokkal.

 

Kulcsszavak cistanche feniletanoid glikozidok; glabridin; szinergetikus hatások; bőr elleni pigmentáció; antioxidáció; gyulladásgátló; gyógyszeranyagok

 

 

 

Cistanche fenil -etanol oldal fehérítéshez

Vegye fel velünk a kapcsolatot most

A Wecistanche-a Kína legnagyobb cistanche exportőre támogató szolgáltatása:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

A potenciális kedvezményekkel kapcsolatos további információkért kérjük, ne habozzon kapcsolatba lépni ügyfélszolgálati csapatunkkal. Örömmel segítenek neked!

 

A bőr pigmentációja olyan bőrbetegség, amelyet olyan tényezők okoznak, mint a sérülés, a bőrgyulladás és az ultraibolya sugárzás [1-2]. Ezek a tényezők a melanin rendellenes növekedéséhez vezethetnek, ami viszont olyan problémákat okozhat, mint a chloasma, a szeplők és a gyulladás utáni hiperpigmentáció (PIH) [{2}}], befolyásolva az emberek mentális állapotát és életminőségét. Jelenleg a bőr pigmentációjának kezelése elsősorban a tirozináz gátlására összpontosít, amely kulcsfontosságú enzim a melanin képződésében [5-6].
A legfrissebb kutatás [7-8] azt mutatja, hogy a bőr pigmentációja az epidermisz keratinociták és melanociták szoros kapcsolatától függ. Miután a keratinociták által felszabadult szabad gyökök és gyulladásos tényezők érintkeznek a melanocitákkal, akkor a tirozináz aktivitás növekedését indukálják, ami a melanintartalom növekedéséhez vezet. Ezenkívül felgyorsítják a melanin transzportot, és a melanint a bőr felületére helyezik. Ezért a bőr pigmentációjának kezelése számos olyan intézkedést igényel, mint például a melanintermelés, a gyulladásgátló és az antioxidáció gátlása.

Jelenleg, bár a hagyományos gyógyszerkészítmények, mint például a hidrokinon és a hidrokinon, bizonyos hatással vannak a bőr pigmentációjának kezelésére, hatásuk viszonylag egyedülálló, és mellékhatásokkal járhat [9-10]. Összehasonlításképpen: a természetes gyógyszerek természetesek és enyhe hatályosak, és a fogyasztók egyre inkább elismerik és dicsérik őket [11-12]. Különösen a több növényi kivonat [13-14] kombinációja nemcsak gátolhatja a melanin termelését, hanem több hatással is, például gyulladásgátló és antioxidáns hatásokkal is, amelyek új ötleteket és módszereket biztosítanak a bőr pigmentáció kezelésére.
A Cistanche Deserticola Ma egyedi gyógyászati ​​értékkel rendelkezik, és "sivatagi ginzeng" néven ismert. A tanulmányok kimutatták, hogy a Cistanche-ban található feniletanoid-glikozid jellegzetes összetevője jó antioxidáns aktivitással [15] és gyulladásgátló hatásokkal [16], és bizonyos tirozináz-gátló hatással is rendelkezik [17]. A glikirrhizin egy flavonoid komponens a Glycyrrhiza Glabra L. -ben, amelynek erős fehérítő hatása van, és "fehérítő arany" néven ismert [18]. A bőr pigmentációjának hagyományos kínai gyógyszer kezelése általában elkezdi a lép és a vese fbystring hosszabbítását, a hőt tisztítva és a méregtelenítést, valamint a Qi és a vér feltöltését [19].
A cistanche -sivaterticola feniletanolos glikozidjai feltölthetik a vese yangot, és előnyösek az esszencia és a vér, míg a Glycyrrhiza glabra feltöltheti a lép és a Qi -t, tisztítsa meg a hőt és méregtelenítse. A kettő együtt működhet, hogy ellenálljon a pigmenteknek. A cistanche -deserticola és glabridin fpheniletanoidc glikozidjainak kombinációja ellenállhat a bőr pigmentációjának több dimenziós és célpontokból, megvédheti az ultraibolya sugarakat az egész sávban, szinergikusan gátolja a tirozináz aktivitását, és csökkentheti a melanin termelését, és csökkentheti a szabad gyökereket és a gyulladásos tényezőket, és csökkentheti a bőrgyulladást, valamint az oxidációs stresszt, valamint az oxidációs stresszt, valamint az oxidációs stresszet, és csökkentheti a melanin -termelést, és csökkentheti a gyulladást és a gyulladást. Az irodalomban azonban kevés jelentés található a bőr pigmentációjának szinergetikus gátlásáról a cistanche -deserticola és a glabridin feniletanoid glikozidjaival.
Ez a cikk azt kívánja megvizsgálni, hogy van -e szinergetikus hatás a cistanche -deserticola (PHG) és a glabridin (GLA) pfenil -etanoidglikozidjai között in vitro biokémiai kísérletek révén és 3 sejtmodell kialakulásával, és az optimális összetett tömeg arányt kapja meg a szinergikus hatáshoz. Várhatóan elméleti támogatást és gyakorlati útmutatást nyújt a természetes növényi bőrápolási termékek fejlesztéséhez, és elősegíti a bőrápolási ipar előmozdítását a természetes, egészségesebb és hatékonyabb irányban.

 

 

Hol: A reakció a mintaoldat, az L-tirozin oldat, a PBS és a tirozináz oldat abszorbanciája; A reakcióvezérlés a mintaoldat, L-tirozin oldat, N és PBS oldat abszorbanciája; Üres az L-tirozin oldat, a PBS oldat és a tirozináz oldat abszorbanciája; Üres kontroll az L-tirozin és a PBS oldatok abszorbanciája.

'

1.3.2 A DPPH szabad radikális megsemmisítő képességének meghatározása

Először pontosan súlyozza a {{0}}. 0 197 g (0. mmol/l. Ezután a PHG -ket és a GLA -t PHGS etanol oldatba és GLA -etanol oldatba állítottuk be 0 tömegkoncentrációval. Ezután a PHGS etanol -oldatot és a GLA -etanol oldatot egyenletesen keverjük össze M (PHGS oldat) ∶ M (GLA oldat)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40, amely a PHGS/GLA etanol -oldatokat, amelyek különböző tömegrendszerrel, 1∶20, 1∶20, 1∶40 -re nyilvántartásba vehetők voltak (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanol oldatok. Végül adjon hozzá 100 μl különböző mintavételi oldatokat és 100 μl DPPH munkaoldatot a 96- kútlemezhez, keverje össze alaposan, és tartsa távol a fénytől szobahőmérsékleten 30 percig. Mérje meg az abszorbanciát 517 nm -en egy enzim markerrel. A VC -t használtuk pozitív kontrollként, és mindegyik kísérletet háromszor megismételjük. Számítsa ki a DPPH szabad radikális megsemmisülési sebességét (%) a (2) képlet szerint.
DPPH szabad radikális megsemmisülési sebesség/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2), ahol: A1 a mintaoldat abszorbanciája + DPPH munkaerő -megoldás; Az A2 az 50% -os etanol abszorbanciája térfogat + DPPH működő oldat segítségével; A3 a + 50% etanol minta oldat abszorbanciája.

1.3.3 Az ABTS+ szabad gyökök megsemmisítő képességének meghatározása

Először súlya 1 g (1,82 mmol) ABTS -t, és oldja fel azt ionmentesített vízben, hogy elkészítse az ABTS munkaoldatát, amelynek végső koncentrációja 7,4 mmol/L; Mérje meg a 0. 5 g kálium -persulfátot, és oldja fel ionmentesített vízben, hogy elkészítse a kálium -perzulfát munkamenetet, amelynek végső koncentrációja 2,6 mmol/L; Keverje össze az ABTS működő oldatot és a kálium -perzulfát munkaoldatot egyenlő térfogatban, és reagáljon 12 órán át sötétben, hogy elkészítse az ABTS+ működő megoldást. Ezután az 1.3.2. Szakasz módszere szerint készítsen PHGS etanol -oldatot, GLA -etanol -oldatot, N és VC etanol -oldatot, valamint PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanololdatot.
Végül adjunk hozzá 40 μl különböző mintaoldatokat és 160 μl ABTS+ működő oldatot a 96- kútlemezhez, keverjük össze, szobahőmérsékleten 6 percig reagáljanak, és mérje meg az oldat abszorbanciáját 734 nm -en egy ELISA olvasó segítségével. Számítsa ki az ABTS+ szabad gyökös megsemmisülési sebességet (%) a (3) képlet szerint.

 

Hol: A1 a mintaoldat + ABTS + működő oldat abszorbanciája; Az A2 az ionmentesített víz abszorbanciája + ABTS + működő oldat; Az A3 a mintaoldat + ionmentes víz abszorbanciája.

 

1.4 Sejt kísérlet

1.4.1 sejttenyészet

A B16F10 és a HaCAT sejtek újjáélesztése után azokat DMEM nagy glükóz-tápközegbe oltják be (10% magzati szarvasmarha-szérum és 1% penicillin-streptomicin keverékét tartalmazzák tömegfrakcióval), és inkubátorban tenyésztettük 37 fokos, 5% CO2 térfogat-frakció és 70% nedvességtartalom. A sejtnövekedés állapotát mikroszkóp alatt figyelik meg, és a tápközeget a sejtnövekedés állapota szerint cseréljük vagy szubkultálják.

 

1.4.2 Kísérleti csoportosítás

A logaritmikus növekedési fázisban a B16F10 és a hacat sejteket 96- kútlemezekbe oltják be, megfelelő sejtszámmal, és 24 órán át tenyésztjük, hogy a sejtek ragaszkodjanak a falhoz. A különböző tömegkoncentrációból álló mintavételi oldatokat DMEM tápközeg alkalmazásával készítjük el. A normál csoport, a modellcsoport, az alacsony dózisú PHG-k (125 ug/ml) csoport, a közepes dózisú PHG-k (250 ug/ml) csoport, nagy dózisú PHG-k (500 ug/ml) csoport, alacsony dózisú GLA (6,25 ug/ml) csoport, közepes dózisú GLA (12,5 ug/ml) csoport, magas dózisú GLA (25 ug/ml) csoport, és PHG) (1∶1) csoportot, PHGS/GLA (5∶1) csoportot és PHGS/GLA (10∶1) TUDIKUS MEDIKOS csoportot állítottak fel.

Az UVB-indukált B16F10 pigmentációs modellben a modellcsoportos sejteket 30 μl PBS-sel (pH =7. A kísérleti csoportot 100 μl különböző tömegkoncentrációjú mintavételi oldatokkal előkezeltük 1 órán át, majd 30 μl PBS -sel adtuk hozzá, és 3 cm -t közvetlenül az UVB besugárzó alá helyeztük 110 másodpercig; A normál csoport mindig magas glükóz-DMEM tápközeget használt; Az üres csoportot nem a sejtekkel oltottuk be, hanem azonos mennyiségű tápközeggel.

Az LPS-indukált HACAT-sejtgyulladás modellben a modellcsoportot az LPS PBS-oldattal tenyésztettük 20 ug/ml koncentrációban 24 órán át; A kísérleti csoportot 100 μl különböző tömegkoncentrációjú mintavételi oldatokkal előkezeltük 24 órán át, majd 20 ug/ml LPS oldattal hozzáadjuk 24 órán át; A normál csoport mindig magas glükóz-DMEM tápközeget használt; Az üres csoportot nem a sejtekkel oltottuk be, hanem azonos mennyiségű tápközeggel.

Az AAPH-indukált HaCAT-sejt-oxidatív stresszmodellben a modellcsoportot 100 ml AAPH (2,5 mmol) oldattal tenyésztettük, 25 mmol/L koncentrációban 24 órán át; A kísérleti csoportot 100 μl különböző tömegkoncentrációjú mintavételi oldatokkal előkezeltük 24 órán át, majd AAPH oldattal hozzáadtuk 25 mmol/L koncentrációban 24 órán át; A normál csoport mindig magas glükóz-DMEM tápközeget használt; Az üres csoportot nem a sejtekkel oltottuk be, hanem azonos mennyiségű tápközeggel.

Mindegyik csoportot 3 replikációs kutakkal állítottuk fel, és inkubátorban tenyésztettük 37 fokos, 5% CO2 térfogat -frakció és 70% páratartalom mellett.

1.4.3 Citotoxicitási vizsgálat

A CCK8 módszert használtuk a citotoxicitás meghatározására. A logaritmikus növekedési fázisban a B16F1 0 és a HACAT sejteket 0,25% tripszinnel emésztettük 3 percig. Az emésztés megszüntetése után a tápközeget többször felrobbantottuk, hogy 1 × 104 sejt/ml sűrűségű sejtszuszpenzióval készítsük. A sejteket egyenletesen oltottuk be egy 96- kútlemezbe, 100 μl / kút, és PBS -t adtunk a sejtek körüli kutakhoz. Miután a sejtek ragaszkodtak a falhoz, különféle minta oldat -koncentrációit adtunk, csoportonként 3 replikációs kútot, és inkubátorban tenyésztettük 37 fokos, 5% CO2 térfogat -frakció és 70% páratartalom 24, 48 és 72 órán át, majd az oldatot eldobták. Az összes csoportot hozzáadtuk 100 μl teljes tápközeggel, amely 10% CCK8 térfogat -frakciót tartalmaz, és 60 percig inkubáltuk. Az oldat abszorbanciáját 450 nm hullámhosszon egy ELISA olvasóval mértük. A sejtek életképességét (%) a (4) képlet szerint számítottuk ki.

 

 

Hol: Kísérleti csoport a sejteket tartalmazó kútok abszorbanciája és a minta oldat UVB besugárzása alatt; A normál csoport a sejteket tartalmazó kútok abszorbanciája és a minta oldat UVB besugárzás nélkül; Egy üres csoport a tenyésztő táptalajok abszorbanciája, de nincs cella.

 

1.4.5 A melanintartalom meghatározása

A melanintartalmat a NaOH lízis módszerrel határoztuk meg. Miután a sejteket 72 órán át kezeltük az 1.4.2. Szakasz módszere szerint, a felülúszót eldobjuk, és kétszer mossuk PBS -sel, és 100 μl NaOH vizes oldatot adunk, amely 10% DMSO -t tartalmazott térfogatra (1 mol/L koncentráció). Miután egy 90 fokos sütőbe 1 órán át elhelyezték, az oldat abszorbanciáját 490 nm -en egy enzimmark -jelöléssel határoztuk meg. A kísérletet háromszor megismételjük. A melanintartalmat (%) az (5) képlet szerint számítottuk.

 

1.5 A gyulladásos faktor tartalom és az oxidatív stresszindex meghatározása

Miután a sejteket 48 órán át kezeltük az 1.4.2. Szakaszban szereplő módszer szerint, az egyes csoportok HACAT -sejtjeit centrifugáltuk, és a felülúszót összegyűjtöttük. Az IL -6 és a TNF- tartalmat az ELISA készlet utasításai szerint határoztuk meg.
Miután a sejteket 48 órán át kezeltük az 1.4.2. Szakasz módszere szerint, az egyes csoportok HACAT -sejtjeit sejtkaparóval összegyűjtöttük, és a sejteket ismételt fagyasztással és kiolvadással bontottuk. A sejteket 12000 r/perc sebességgel 4 fokon 10 percig centrifugáltuk, és a felülúszót összegyűjtöttük. Az SOD aktivitást és a macskatartalmat az ELISA készlet utasításainak megfelelően határoztuk meg.

1.6 A kombinált index meghatározása
A kombinált index (CI) módszert [20] alkalmaztuk annak meghatározására, hogy a PHG-k és a GLA különböző tömegtarányokban szinergetikus hatással volt-e a tirozináz aktivitás gátlására és az antioxidációra. A kombinált indexet a (6) képlet szerint számítottuk:

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>Az 1 antagonista hatást jelez, a ci =1 additív hatást jelez, a ci pedig<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 Adatelemzés

Az összes adatot "aritmetikai átlag ± szórás (𝑥̅ ± 𝑠)" kifejezésként fejezzük ki. Graph Prism 9.5. 0 szoftvert használtunk a statisztikai elemzéshez. A variancia egyirányú elemzését használtuk több csoport összehasonlításához. P<0.05 was considered statistically significant.