Az első humán klinikai vizsgálat a glicinamid-hidroklorid bőrdepigmentációs hatékonyságáról

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Absztrakt:Egy korábbi tanulmány azonosított bizonyos kis molekulatömegű anti-melanogén peptideket, amelyek közös szekvenciát mutatnak a -melanocit-stimuláló hormonnal (MSH) és glicinamid csoporttal végződnek. Maga a glicinamid szintén anti-melanogén aktivitást mutatott sejtalapú vizsgálatokban, de sem a glicin, sem az acetil-glicinamid nem aktív volt, ami sajátos struktúrára és tevékenységi viszonyra utalt. A vizsgálat célja a glicinamid-hidroklorid bőrdepigmentációs hatékonyságának vizsgálata volt emberekben. A glicinamid-hidroklorid elsődleges bőrirritációs potenciálját tapaszteszttel értékelték 30 emberen. A glicinamid-hidroklorid bőrdepigmentációs hatékonyságát kettős-vak klinikai tesztben értékelték 21 emberen. A tesztterméket és a kontrollterméket naponta kétszer alkalmaztuk az arc jobb vagy bal oldalán a kijelölt helyekre nyolc héten keresztül. A bőrszín paramétereit, azaz a melanin indexet, a bőr világosságát jelző L* értéket, az a* értéket (pirosodást) és a b* értéket (sárgaság) műszerekkel mérték. Az egyéni topológiai szöget (ITAo, a bőrszínt reprezentáló) L* és b értékekből számítottuk. A bőr mértékepigmentációkét tesztelő vizuálisan értékelte. Az elsődleges bőrirritációs teszt azt mutatta, hogy a legfeljebb 10 százalékos glicinamid-hidrokloridot tartalmazó oldat nem váltott ki nemkívánatos bőrreakciókat. A hatékonysági tesztben a teszttermék kéthetes alkalmazás után jelentősen csökkentette a melaninindexet, valamint növelte az L*-értéket és az ITAo-t. az alapérték a vizsgálat elején. A mértékét is jelentősen csökkentettepigmentáció6 hét alkalmazás után, az alapértékhez viszonyítva. Különbségek a melanin indexben, az L* értékben, az ITAo-ban és a mértékébenpigmentációa teszt és a kontrollcsoport között statisztikailag szignifikánssá vált hat hét vagy nyolc hét alkalmazás után. A hatékonysági teszt során nem figyeltek meg bőrirritációra utaló jeleket. A jelen tanulmány azt sugallja, hogy a glicinamid-hidroklorid nagy potenciállal rendelkezik a bőr hiperpigmentációjának szabályozásában.

Kulcsszavak:melanin; glicinamid-hidroklorid; depigmentáció;pigmentáció; bőr halványítása;fehérítés; peptid

a cistanche javítja a fehérítést

1. Bemutatkozás

Az emberi bőr színét elsősorban a különböző pigmentanyagok, például a melanin, a hemoglobin és a karotinoidok tartalma és eloszlása ​​határozza meg [1]. A genetikai tényezők elsősorban a bőrszínt határozzák meg, de erősen befolyásolják a szerzett tényezők is. A melanint olyan folyamat során állítják elő, amelyben az L-tirozin nevű aminosav metabolizálódik egy sor enzimatikus reakció során a melanoszómákban, amelyek a melanociták organellumai. Különböző típusú melaninok léteznek, mint például az aseumelanin és a pheomelanin, amelyek különböző színeket kölcsönöznek [2]. A melanoszómák melanint szállítanak a környező keratinocitákba, és ennek eredményeként a melanin eloszlik a bőrben, és különböző bőrszíneket hoz létre [3]. A bőr vizuális megjelenésére gyakorolt ​​hatásai mellett a melanin fontos szerepet játszik a szervezet védelmében az ultraibolya (UV) sugarak toxicitásával szemben [4]. Ezért a bőr melanin metabolizmusa élettani és esztétikai szempontból is fontos kutatási témává vált [5,6].

Az abnormális melanin-anyagcsere különféle bőrpigment-betegségeket okozhat, amelyek hiperpigmentációra és hipopigmentációra oszthatók [7,8]. Hiperpigmentáció akkor fordul elő, ha a melanin túlzottan vagy egyenlőtlenül halmozódik fel gyulladás, öregedés, UV-sugárzás, fizikai károsodás és egyéb belső/külső stimuláló tényezők következtében [9,10]. Mindeközben az inmelanintermelés genetikai vagy epigenetikai hibái hipopigmentációhoz vezethetnek, például albinizmusban vagy vitiligoban [11,12].

A hiperpigmentáció megelőzési és kezelési stratégiái közé tartozik a fényvédelem, a gyógyszeres kezelés, a sebészeti kezelés (kémiai peeling és a lézeres kezelés), valamint a kozmetikai álcázás [13–15]. Gyakran végeznek kémiai peelinget és lézeres kezelést, de vannak mellékhatásai, például bőrgyulladás és visszatérőpigmentáció[16,17]. A hidrokinont elsősorban farmakoterápiás szerként használják, de potenciálisan bőrirritációt, allergiát, mutációkat és rákot okozhat [18]. A kozmetikai területenbőr halványításaAz arbutint, niacinamidot és C-vitamin származékokat tartalmazó funkcionális kozmetikumok dominálnak, de a fogyasztók elégedettsége ezek biztonságával és bőrvilágosító hatásával alacsony [19]. Ez a kutatócsoport keresettbőr halványításakülönböző természetes forrásokból származó ágensek és számos természetes vegyületet azonosítottak, mint például a p-kumársav, a resveratrol és a luteolin-7-szulfát, amelyek különböző mechanizmusokon keresztül gátolják a celluláris melaninszintézist [20–23].

A peptideket egyre gyakrabban használják hatóanyagként bőrgyógyászati ​​és bőrápoló termékekben [24,25]. Minél kisebb a peptid, annál olcsóbb a gyártása, annál nagyobb a stabilitása, és annál könnyebben szívódik fel a bőrön.

Legutóbbi vizsgálataink bizonyos kis molekulatömegű anti-melanogén peptideket azonosítottak [26,27]. Ezekben a vizsgálatokban egy speciális algoritmust használtak az aktív peptidek szekvenciáinak előrejelzésére egy pozíciós beolvasású szintetikus peptid kombinációs könyvtár segítségével [28,29]. Ezzel a módszerrel anti-melanogén peptideket lehetett azonosítani úgy, hogy 80 tetrapeptid pool aktivitását értékelték, ahelyett, hogy mind a 160,{9}} lehetséges tetrapeptid-típus aktivitását értékelték volna [27]. A peptidek anti-melanogén aktivitását előzetesen -melanocyte-stimuláló hormonnal (MSH) kezelt B16-F10 melanomasejtekben értékelték. Az aktív tetrapeptid szekvenciája az előrejelzés szerint R-(F/L)-(C/W)-(G/R)-NH2. A vizsgált egyedi tetrapeptidek közül az RFWG-NH2 és az RLWG-NH2 mutatott magas anti-melanogén aktivitást. Az FRWG-NH2 tetrapeptid, amelynek szekvenciája megegyezik az -MSH-val (acetil-SYSMEHFRWGKPV-NH2) kívül, szintén hasonló aktivitást mutatott. A tripeptidesítettek közül az FWG-NH2, LWG-NH2 és RWG-NH2 volt viszonylag aktív. A WG-NH2 dipeptid és a G-NH2 (glicinamid) megőrizte anti-melanogén aktivitását, míg sem az acety-G-NH2, sem a G (glicin) nem volt aktív. Úgy gondolják, hogy ezek az alacsony molekulájú anti-melanogén peptidek a themelanocortin 1 receptort (MC1R) célozzák, mivel szekvenciájuk hasonló az -MSH-hoz. Ezek az alacsony molekulatömegű anti-melanogén peptidek nagyon hasznosak lehetnek a melanociták MC1R-függő fiziológiai funkcióinak vizsgálatában [30].

A glicinamidról kimutatták, hogy nagyon hatékonyan gátolja a celluláris melanintermelést azáltal, hogy csökkenti a cAMP-re reagáló elemkötő fehérje (CREB) aktiválását, valamint a mikroftalmiával összefüggő transzkripciós faktor (MITF) és tirozináz (TYR) génexpresszióját az -MSH-ra adott válaszként [27]. Jelen tanulmányban a glicinamid (hidroklorid só formájában) első humán bőrre történő alkalmazásának eredményeit közöljük, amely a legkisebb molekulatömegű anti-melanogén peptid.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Anyagok

A glicinamid-hidrokloridot a Sigma–Aldrich (St. Louis, MO, USA), a HangzhouDayangchem Co., Ltd. (Hangzhou, Kína) és a Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Tokió, Japán) cégtől vásárolták. Teszttermék (Melapep). ) 10 százalék glicinamid-hidrokloridot tartalmazó hatóanyagot a Ruby Crown biztosította. Co., Ltd. (www.rubycrown.com, Daegu, Korea). A kontrolltermék ugyanazt a készítményt tartalmazta glicinamid-hidroklorid nélkül.

2.2. Nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC)

A termékek kromatográfiás elemzését Waters Alliance HPLC rendszerrel (Waters, Milford, MA, USA) végeztük, amely Waters e2695 elválasztó modulból és Waters 2996 Photodiode Array Detectorból állt. Az állófázis egy 5 µm-es, 4,6 mm × 25{{10}} mm-es Hector-M C18 oszlop volt (RS Tech Co., Daejeon, Korea), a mozgó fázis pedig 20 50 mMnátrium-1-oktánszulfonátot tartalmazó mM foszforsav (pH 3,0). A mozgófázis áramlási sebessége 0,6 ml min-1 volt. A detektálási hullámhossz 210 nm volt. A terméket 10-szer hígítottuk a mozgófázissal, és egy fecskendőszűrőn (0,2 µm, katalógusszám: 431219, Corning, Inc. NY, USA) engedtük át az injekció beadása előtt. A befecskendezett minta térfogata 10 µl volt.

2.3. Elsődleges bőrirritációs teszt

Elsődleges bőrirritációs tesztet végeztek a Personal Care Product Council (PCPC) irányelveivel (2014) és a Dermapro Co., Ltd. (www.dermapro.co.KR, Szöul, Korea) szabványos működési eljárásaival (SOP) összhangban annak megállapítására, hogy vajon a teszttermékek irritálták az emberi bőrt. A tesztprojektet (Nr. 1-220777-AN-02-DICN19165) 2019. augusztus 1-jén hagyta jóvá a Dermapro Co., Ltd. bioetikai bizottsága, és az etikai elveken alapuló a helsinki nyilatkozaton.

Az alanyokat az egészséges önkéntesek közül választottuk ki, akik megfelelnek a befogadási és kizárási kritériumoknak. Az alanyoktól írásos beleegyezést kaptunk.

2.3.1. Befogadási kritériumok

(1) Egészséges, 20–60 éves, bőrbetegségben nem szenvedő jelentkezők. (2) Azok a pályázók, akik a vizsgálat előtt önként aláírtak egy írásos beleegyező nyilatkozatot, miután tájékoztatták őket a teszt céljáról és tartalmáról. (3) Azok a pályázók, akik hajlandóak voltak együttműködni a teszt követelményeivel, és azonnal jelenteni, ha bármilyen váratlan hatás jelentkezik. (4) Azok a pályázók, akiket a teljes vizsgálati időszak alatt nyomon követni lehet.

2.3.2. Kizárási kritériumok

(1) Olyan nők, akik terhesek, szoptattak vagy várhatóan teherbe esnek. (2) Olyan kérelmezők, akiknek a kórelőzményében nem fordult elő bőrbetegség, beleértve az atópiás dermatitist, a pikkelysömört, az ekcémát és a szezonális allergiákat a vizsgálatot megelőző utolsó hónapban. (3) Rendellenespigmentáció, zavarhatja a pontozást a vizsgálati helyen. (4) Gyulladáscsökkentő, antihisztamin vagy immunszuppresszív gyógyszert szedő kérelmezők. (5) Azok a kérelmezők, akik a vizsgálat előtti utolsó két hétben helyi gyulladáscsökkentő szereket használtak a vizsgálati helyen. (6) Olyan bőrbetegségben szenvedő pályázók, akik megzavarhatták a vizsgálat célját. (7) Olyan kérelmezők, akiknek kórtörténetében autoimmun betegség vagy immunhiányos rendellenesség szerepel. (8) Azon kérelmezők, akik a vizsgálatot megelőző utolsó héten immunterápiában részesültek, vagy a vizsgálati időszak alatti kezelést tervezték. (9) Olyan kérelmezők, akik krónikus betegségek, például asztma és cukorbetegség miatt részesültek kezelésben. (10) Olyan pályázók, akik részt vettek más teszteken, vagy akik hasonló teszten vettek részt a tesztet megelőző utolsó négy hétben. (11) Olyan kérelmezők, akik bőrirritációt vagy allergiát tapasztaltak a ragasztószalag hatására.

2.3.3. Részvételi feltételek

(1) Az alanyok a tapasz felhelyezése közben nem tartózkodhattak a tesztterületen. (2) Ha az alanynak gyógyszert kellett szednie vagy szednie, a vizsgálatot végzőt értesíteni kell. (3) A tárgy az ellenőrzési ütemterv betartása volt. (4) Az alanyoknak tájékoztatniuk kellett a tesztelőt a tesztidőszak alatt fellépő összes rendellenes bőrtünetről.

2.3.4. Az alanyok vizsgálati időszak alatti eldobásának kritériumai

(1) Ha az alany önként lemondott a vizsgálatról hirtelen bekövetkezett baleset, betegség, terhesség stb. miatt. (2) Ha a vizsgálati anyag súlyos bőrreakciót okozott. (3) Ha az alany nem követte a vizsgálati protokollt. (4) Ha a tesztet különleges körülmények miatt nem lehetett megfelelően elvégezni, pl. ha nem lehetett kapcsolatba lépni az alanyal.

2.3.5. Patch tesztelése

A vizsgálati anyagokat (15{7}} µL) a Finn Chambers®-re (Smart Practice, Hillerød, Dánia) vittük fel Microman M250 pipettával (Gilson, Villiers le bel, Franciaország). A kamrákat az alanyok hátuljához erősítették, és Micropore szalaggal (3M, St. Paul, MN, USA) védték 24 órán keresztül. A tesztelők két alkalommal értékelték az alanyok bőrreakcióit, először 20 percben. a tapasz eltávolítása után, majd 24 órával később, a Frosch és Kligman [31] által leírt bőrreakció-besorolási rendszert használva, kis módosításokkal a következők szerint: 0, nincs látható reakció; 1, enyhe foltos vagy diffúz erythema; 2, közepesen egyenletes bőrpír;3, intenzív bőrpír ödémával; és 4, intenzív erythema ödémával és hólyagokkal. A válaszpontszámot (R százalékban) a következőképpen számítottuk ki: R=(Σ (megfigyelt reakció fokozata × válasz gyakorisága)/(összesen négy fokozat × összesen kétszeri megfigyelés × az alanyok teljes száma)) × 100 ( százalék ). A vizsgált anyagok elsődleges bőrirritációs potenciálját az R alapján írtuk le, a következőképpen: R < 0,87="" százalék,="" nem="" irritáló/enyhén="" irritáló;="" 0,87="" százalék="" r="">< 2,42="" százalék="" vagy="" azzal="" egyenlő,="" enyhén="" irritáló;="" 2,42="" százalék="" r="">< 3,44="" százalék="" vagy="" azzal="" egyenlő,="" mérsékelten="" irritáló;="" és="" r="" több="" vagy="" egyenlő,="" mint="" 3,44%,="" erősen="">

2.4. A bőr depigmentációjának hatékonysági tesztje

Egy tesztet végeztünk a vizsgált termék bőrdepigmentációs hatékonyságának értékelésére. A tesztprojektet (szám: 1-220777-AN-02-DICN19168) 2019. augusztus 16-án hagyta jóvá a Dermapro Co., Ltd. bioetikai bizottsága, és a Helsinki nyilatkozaton alapuló etikai elvek szerint hajtották végre. A vizsgálati alanyokat egészséges önkéntesek közül választották ki, akik megfelelnek a beválasztási és kizárási kritériumoknak. A pácienstől (a kísérleti alanyoktól) írásos beleegyezést kaptunk.

2.4.1. Befogadási kritériumok

(1) 20–60 éves férfiak vagy nők hiperpigmentációval, például melasmával vagy lentigo-val az arcon. (2) Egészséges emberek, akiknek nincs akut vagy krónikus testi betegségük, beleértve a bőrbetegségeket is. (3) Azok, akik a Fitzpatrick bőrtípus-besorolás II., III. és IV. típusa alá tartoznak. (4) Azok a jelentkezők, akiket tájékoztattak a teszt céljáról, tartalmáról stb., és önként aláírták a tesztmegállapodást. (5) A teszt során nyomon követhető jelentkezők.

2.4.2. Kizárási kritériumok

(1) Azok, akik terhesek, szoptattak vagy várhatóan teherbe esnek. (2) Azok, akiknek kórtörténetében fotóallergia vagy fényérzékenység szerepel. (3) Akik bőrbetegségek kezelésére egy hónapnál régebben szteroid tartalmú külsőleges készítményeket használtak. (4) Azok, akik a vizsgálatot megelőző 6 hónapon belül hasonló teszteken vettek részt. (5) Érzékeny és irritábilis bőrűek. (6) Azok, akiknél bőrelváltozások, például foltok, pattanások, bőrpír, hajszálér-tágulás stb. vannak a vizsgálati helyen. (7) Aki a vizsgálat megkezdésétől számított három hónapon belül ugyanazt vagy hasonló kozmetikumot vagy gyógyszert használt a vizsgálati helyszínen. (8) Azok, akik gyógyszert vagy élelmiszert fogyasztottakbőr halványításahatások. (9) Atópiás dermatitiszben vagy más fertőző bőrbetegségben szenvedők. (10) Azok, akik a vizsgálatot megelőző 6 hónapon belül gyógyszeres kezelésben (bőrhámlasztás, Botox, egyéb bőrápolás stb.) részesültek a vizsgálati helyszínen. (11) Azok, akik a vizsgálatot megelőző három hónapon belül immunizálást, antihisztaminokat, gyulladáscsökkentő szereket stb. kaptak. (12) Azok, akik a vizsgálatot megelőző egy hónapon belül szisztémás szteroidot, hormonterápiát vagy sugárterápiát kaptak. (13) Krónikus fogyasztási betegségekben (asztma, cukorbetegség, magas vérnyomás stb.) szenvedők. (14) Azok, akik hosszú ideig napfénynek vannak kitéve. (15) Azok, akik fényérzékenységet kiváltó gyógyszereket szedtek. (16) Azok, akiket a tesztelő alkalmatlannak ítélt a teszten való részvételre.

2.4.3. Részvételi feltételek

(1) Az alanyok nem használhattak olyan kozmetikumokat vagy gyógyszereket, amelyeknek funkcionalitásuk van a tesztidőszak alatt. (2) Az alanyoknak a mindennapi életük során kerülniük kellett a normálnál nagyobb mennyiségű napfényt, és napvédő krémet kellett használniuk, amikor kimentek az utcára. (3) Az alanyoknak nem szabad összekeverniük a teszttermékeket, és az előírásoknak megfelelően kellett alkalmazniuk azokat. (4) A vizsgálati termékeken kívül az alanyok nem cserélhették le a tesztidőszakban használt kozmetikai termékeket. (5) Az alanyoknak minden kóros tünetet jelenteniük kellett a tesztelőnek. (6) Az alanyoknak hűségesen követniük kellett a termékek használatával és korlátozásaival kapcsolatos utasításokat. (7) Az alanyoknak be kellett tartaniuk az ellenőrzési ütemtervet, és meg kellett erősíteniük a termék használatát a tesztelőnek.

2.4.4. Az alanyok vizsgálati időszak alatti eldobásának kritériumai

(1) Ha az alany önként lemondott a vizsgálatról hirtelen bekövetkezett baleset, betegség, terhesség stb. miatt. (2) Ha a vizsgálati anyag súlyos mellékhatást okozott. (3) Ha az alany nem felelt meg a vizsgálati protokollnak. (4) Ha a tesztet különleges körülmények hátráltatták, pl. ha nem lehetett követni az alanyot. (5) Ha az alany túlzottan ivott vagy dohányzott, vagy túlzott UV-sugárzásnak volt kitéve.

2.4.5. Teszttermékek alkalmazása

A teszt- és kontrolltermékeket (0,6 ml) 4 × 3 cm2-es nem szőtt szövetlapokba áztattuk (terméknév, bőrszövet típusa pamut), amelyeket a Blue and Pink-től (Gimpo-si, Korea) vásároltunk. amelyeket azután egyenként csomagoltak az alanyok általi használatra.

A teszt kettős vak volt; sem a tesztelőknek, sem az alanyoknak nem mondták el, hogy melyik termék melyik. Miután a teszttermékeket ugyanabban a csomagolásban átvette a szolgáltatótól, egy teszttermék-menedzser a csomagokat tesztkóddal jelölte meg egy külön, a tesztelők vagy az alanyok számára nem hozzáférhető helyiségben. A tesztelők vak állapotban kapták meg a teszttermékeket a teszttermék menedzsertől, és az alanyok is vak állapotban kapták meg a termékeket a tesztelőtől.

A blokk randomizációs módszert alkalmaztuk a teszttermékek kiosztására az alanyokhoz. Egy blokk véletlenszerű elosztási táblázatot (SSPP, SPSP, SPPS, PPSS, PSPS és PSSP) biztosítottak az alanynak, hogy meghatározhassa a teszttermékek sorrendjét, S vagy P, amelyeket ő és három másik alany használ a sorrendben.

Az alanyok a teszttermékeket az arcmosás után és bármely más kozmetikum használata előtt használták naponta kétszer, reggel és este nyolc héten keresztül. Az alanyok a tesztet és a kontrolltermékeket az arc bal és jobb oldalán (vagy fordítva) a kijelölt helyekre rögzítették 30 percre, a szolgáltató javaslatának megfelelően.

2.4.6. Bőrszín értékelések

Az alanyok kéthetente felkeresték a kutatóközpontot bőrük állapotának felmérésére. Az arcmosás után az alanyok 20 percig pihentek. bőrfelmérés előtt 22 ± 2◦ és 50 ± 5 százalék relatív páratartalom mellett tartott laboratóriumban.

A melanin indexet és az erythema indexet Mexameter® MX18 (Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Németország) segítségével mérték. A mexaméter szonda három meghatározott hullámhosszú fényt bocsát ki (zöld, λ=568 nm; vörös, λ=660 nm; és infravörös, λ=880 nm), és egy vevő méri a bőrről visszavert fényt. . A méréseket háromszor megismételtük és átlagoltuk.

A bőrszínt a Commission Internationale de l'Eclairage Lab színtér segítségével fejezzük ki, amely a világosság fokán (L*), a zöldtől a vörösig terjedő fokon (a*) és a kéktől a sárgáig terjedő fokon (b*) alapul [32]. Az L*, a* és b* bőrszín paramétereket Spectrophotometer® CM-2500d (Minolta, Tokió, Japán) [32] segítségével mérték. A bőrszínt reprezentáló egyedi tipológiai szöget (ITA◦) a következő egyenlet felhasználásával számítottuk ki: ITA◦=(ív érintő [(L*−50)/b*])(180/3,14159) [33].

A vizuális értékelést két tesztelő végezte. Függetlenül értékelték a bőr pigmentációjának mértékét egy {{0}}-tól 9-ig terjedő skálán (0, világos; 9, sötét; növekmény, 0,5). Ha az osztályon belüli korrelációs együttható értéke két tesztelő között nagyobb volt, mint 0,8, akkor az adatokat elfogadtuk, és átlagértékeket használtunk. A bőrről fényképeket a VISIA® (Canfield Scientific, Inc., Fairfield, New Jersey, USA) használatával készítettünk. A bőrbiztonság értékeléséhez a tesztelők megvizsgálták a bőrirritációt, és az alanyok minden értékelési időpontban elvégezték a bőrirritáció önértékelését.

2.4.7. A bőr nemkívánatos reakcióinak értékelése

A nyolchetes próbaidőszak alatt az alanyok kéthetente jártak az intézetben. A tesztelők minden látogatás alkalmával értékelték a szubjektív tüneteket úgy, hogy megkérdőjelezték, hogy az alanyok tapasztaltak-e nemkívánatos bőrreakciókat, például viszketést, szúrást, csiklandozást, égő érzést, szúrást, merevséget és feszülést az elmúlt két hét során. Az alanyokat arra kérték, hogy azonnal jelentsék, ha nemkívánatos bőrreakciók léptek fel a látogatások között. A tesztelők megvizsgálták a nemkívánatos bőrreakciókat is, mint például az aserythema, az ödéma, a méret és a papulák, hogy értékeljék az objektív tüneteket.

2.5. Statisztikai analízis

Az adatokat az SPSS szoftvercsomag (IBM, Chicago, IL, USA) segítségével elemeztük. Az adatok átlag ± standard deviáció (SD) formájában vannak kifejezve. Az adatok normál eloszlását Shapiro-Wilks teszttel igazoltuk, és a normalitást akkor fogadtuk el, ha a Kurtosis és a Skewness a teszt és a kontrollcsoport prehomogenitásán belül van a teszt előtt, páros teszttel igazoltuk. Az időfüggő változásokat a kiindulási értékhez képest, valamint a teszt- és kontrollcsoportok közötti különbségeket minden időpontban a paraméteres értékek ismételt mérési ANOVA-ja, valamint a nem paraméteres értékek Post-hoc Wilcoxon előjeles rangú tesztje segítségével elemeztük. Az alapértékhez viszonyított változási rátát ( százalék ) a következőképpen számítottuk ki; változási arány=[kezelés utáni érték – kezelés előtti alapérték)/kezelés előtti alapérték] × 100 (százalék).

3. Eredmények

3.1. Teszttermékek

Ebben a vizsgálatban egy 10% glicinamid-hidrokloridot tartalmazó tesztterméket és egy ugyanilyen összetételű, glicinamid-hidroklorid nélküli kontrollterméket használtunk. A termékek a fő összetevőn kívül glicerint, 1,2-hexándiolt és vizet tartalmaztak. Az 1. táblázat a teszttermék és a kontrolltermék összetételét mutatja.

A teszt- és kontrolltermékek tipikus HPLC-kromatogramja az 1. ábrán látható. A teszttermék glicinamid-hidrokloridot tartalmazott, de a kontrolltermék nem. A glicinamid-hidroklorid csúcsot a HPLC kromatogramon nyíl jelzi. Ezenkívül az 1. ábra a kémiai szerkezetet mutatja.

A HPLC-ben nátrium-{0}}oktánszulfonátot vettek a mozgófázisba ionpárosító szerként, hogy fokozzák a glicinamid protonált formájának megtartását, amely egyébként nagyon gyorsan eluálódott a fordított fázisú oktadecil-szilika oszlopról. A glicinamid-hidrokloridban UV-elnyelő amidkötés jelenléte lehetővé tette a detektálást 210 nm-en.

3.2. Elsődleges bőrirritációs teszt

ebben a tesztben 31 olyan nő vett részt a vizsgálat kezdeti szakaszában, akik megfeleltek a felvételi és kizárási kritériumoknak; azonban egy alany kiesett (DSA-19046-10; önkéntes visszalépés), így összesen 30 alany teljesítette a teljes tesztet. Az alanyok átlagéletkora 40,43 ± 7,13 év volt, a legidősebb résztvevő 50 éves, a legfiatalabb 21 éves volt.

A termékek bőrbiztonságának értékelése céljából okkluzív tapasz-tesztet végeztünk. Amint a 2. táblázatban látható, a teszttel, kontrolltermékkel és referenciaanyaggal kezelt alanyok két különböző megfigyelési időpontban nem mutattak káros bőrreakciókat. A válaszpontszám ezért minden esetben nulla volt, ami azt jelzi, hogy ezeknek a termékeknek az elsődleges bőrirritációs potenciálja nagyon alacsony, és a „nem irritáló/enyhén irritáló” kategóriába sorolhatók.

3.3. A bőr depigmentációjának hatékonysági tesztje

A teszt 23 női alanyal kezdődött, bár kettőt később kizártak (#16, önkéntes visszalépés; #18, protokoll be nem tartása), így a résztvevők végső száma 21 volt. Az alanyokról kérdőíves felmérésben gyűjtöttek információkat. Az alanyok átlagéletkora 48,43 ± 4,14 év volt; a legidősebb résztvevő 55 éves volt; a legfiatalabb pedig 41 éves volt.A 3. táblázat a vizsgált alanyok bőrjellemzőit mutatja be.

Kettős vak tesztet végeztünk a vizsgált termék depigmentációs hatékonyságának értékelésére. Sem a tesztelő, sem az alany nem tudott különbséget tenni a teszttermék és a kontrolltermék között, a klinikai vizsgálatot az előírt módszer szerint végezték. Az alanyok nyolc héten keresztül naponta kétszer alkalmazták a tesztterméket és a kontrollterméket az arc bal vagy jobb oldalára, és kéthetente ellátogattak az intézetbe bőrfelmérés céljából.

A bőrszín paramétereinek műszeres értékelésére kétféle eszközt használtunk. Először a melanin indexet és az erythema indexet mértük hexaméterrel. Amint a 4. táblázat és a 2a. ábra mutatja, a melaninindex szignifikáns csökkenése volt megfigyelhető két, négy, hat és nyolc héten belül mind a teszt-, mind a kontrollcsoportban a vizsgálat megkezdése előtti alapértékekhez képest. két, négy, hat és nyolc héttel a melanin index szignifikáns csökkenést mutatott az alapértékhez képest. A melaninindex csökkenési aránya két hét után 1,48 százalék, négy hét után 2,87 százalék, hat hét után 3,92 százalék, nyolc hét után 5,88 százalék volt. A teszt kezdete után hat és nyolc héttel szignifikáns különbségeket találtak a teszt- és a kontrollcsoport között. Másrészt sem a tesztcsoportban, sem a kontrollcsoportban nem volt változás az erythema indexben a vizsgálat előtt mért alapértékekhez képest. a teszt kezdete (5. táblázat és 2b. ábra).

Spektrofotométert is használtunk az L*, a* és b* értékek mérésére, amelyek a bőr világosságát, vörösségét és sárgáját jellemezték. Amint a 6. táblázat és a 2c. ábra mutatja, a bőr világosságának szignifikáns növekedését (L*-érték) figyelték meg két, négy, hat és nyolc héten belül mind a teszt-, mind a kontrollcsoportban a vizsgálat megkezdése előtti alapértékekhez képest. Az alapértékekhez képest a teszttermék két hét után 0,88 százalékkal, négy hét után 0,85 százalékkal, hat hét után 1,16 százalékkal, nyolc hét után 1,40 százalékkal növelte az L* értéket. . Szignifikáns különbségeket találtunk a teszttermék és a kontrolltermék között hat és nyolc héttel a teszt megkezdése után. Másrészt, bár mind a tesztcsoportban, mind a kontrollcsoportban volt némi változás a* és b* értékekben a teszt megkezdése előtti állapothoz képest, ezek a változások nem voltak konzisztensek (7. és 8. táblázat, 2d, e ábra). A*érték átmenetileg csökkent a második héten a kontrollcsoportban, valamint a második és a nyolcadik héten a tesztcsoportban. A tesztcsoport* értéke alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoporté a nyolcadik héten. A b* érték a nyolcadik héten csak a kontrollcsoportban csökkent, a b* értékben nem volt különbség a kontroll és a tesztcsoport között.

Az L* és b* értékekből számított ITA◦ használtuk a bőrszín kifejezésére. Minél magasabb az ITA◦, annál világosabb a bőrszín. Amint a 9. táblázat és a 2f. ábra mutatja, a bőrszín jelentős változásait figyelték meg két héten, négy héten, hat héten és nyolc héten belül mind a tesztcsoportban, mind a kontrollcsoportban a vizsgálat megkezdése előtti alapértékekhez képest. Az alapértékekhez képest a teszttermék két hét után 3,28 százalékkal, négy hét után 4,43 százalékkal, hat hét után 6,48 százalékkal, nyolc hét után 8,07 százalékkal növelte az ITA◦-t. Szignifikáns különbséget találtak az ITA◦-ban is a teszttermék és a kontrolltermék között nyolc héttel a teszt megkezdése után.

Amint a 10. táblázat és a 3a. ábra mutatja, az a bőrfelület, amelyen a kontrollterméket alkalmazták, nem változott szignifikánsan apigmentációnyolc hétig, de a pigmentáció mértéke azon a bőrterületen, ahol a tesztterméket felvitték, hat hét és nyolc hét után jelentősen csökkent. Ha a tesztterméket hat és nyolc hétig alkalmazták, a pigmentáció mértéke 1,42 százalékkal, illetve 3,45 százalékkal csökkent a vizsgálat megkezdése előtti alapértékhez képest. A teszt kezdete utáni nyolcadik héten szintén szignifikáns különbség mutatkozott a mértékébenpigmentációa teszttermék és a kontrolltermék között. A 3b. ábra két reprezentatív emberi alany képét mutatja.

A nyolc hét alatt a tesztelők által észlelt alanyok nem jelentettek nemkívánatos reakciókat a teszt- és kontrolltermékekkel kapcsolatban.

4. Megbeszélés

Ez a tanulmány az első, amely beszámol az emberi arcbőrre alkalmazott glicinamid-hidroklorid biztonságosságáról és depigmentációs hatékonyságáról. Az elsődleges bőrirritációs tesztben egy 10% glicinamid-hidrokloridot tartalmazó teszttermék 30 embernél nem váltott ki mellékhatásokat. A kettős-vak hatékonysági tesztben a tesztterméket és a kontrollterméket az arc bal és jobb oldalán használták 21 alanynál, akiket véletlenszerűen soroltak be különböző csoportokba. A nyolchetes tesztperiódus alatt a bőrfelületek, ahol a tesztterméket felvitték, világosabbak lettek, mint azok a helyek, ahol a kontrollterméket alkalmazták. Mind a vizuális értékelés mértékepigmentáció, valamint a melanin index, a bőr feszességének és a bőr színének műszeres értékelése alátámasztotta a glicinamid-hidrokloridot tartalmazó tesztkészítmény depigmentációs hatékonyságát.

Egy termék emberi bőr depigmentációs hatékonyságát mesterséges barnítás és természetes hiperpigmentációs modellek alkalmazásával lehet értékelni [34–36]. Jelen tanulmányban egy természetespigmentációmodellben a bőrszín paramétereinek változásait a teszt és a kontroll csoportban a teszt nyolc hete alatt kéthetes időközönként követték nyomon. A glicinamid-hidrokloridot nem tartalmazó kontroll termék a melanin indexben, az L*-értékben és az ITA-ban is szignifikáns változást produkált két héttel a teszt megkezdése után. Ennek pontos oka jelenleg nem tisztázott, és több tényező is közrejátszhatott a változásokban. A kontrolltermékben található összetevők, például a glicerin és az 1,2-hexándiol megváltoztathatták a bőrfelület állapotát, javítva a tisztaságot, a csillogást és a fényességet. Ennek ellenére a fent említett paraméterek további változásai két hét után nem voltak szignifikánsak a kontrollcsoportban. Ezen kívül a mértékepigmentáció(vizuálisan értékelve) nem csökkentette szignifikánsan a kontrollterméket a vizsgálat megkezdése előtti állapothoz képest. Ezért úgy tekintjük, hogy a kontrolltermék nagyon gyengebőr halványításahatás, ha van.

A teszttermék esetében a melanin index, az L* érték és az ITAo szignifikáns változása mellett két héttel a vizsgálat megkezdése után a változás fokozatosan növekedni kezdett.pigmentációszignifikánsan alacsonyabb szintet ért el, mint az alapérték. Ez arra utal, hogy a teszttermék használata javíthatja a bőrszínt a termék nélküli használathoz képest.

A teszt kezdetének hatodik hetétől kezdve szignifikáns különbség volt a melaninindex és az L* értékben a tesztcsoport és a kontrollcsoport között, valamint nyolc héten belül az ITAo és apigmentáció. Ezek az eredmények alátámasztják azt a következtetést, hogy a teszt- és a kontrolltermékek közötti hatékonyságbeli különbség a glicinamid-hidroklorid jelenlétének vagy hiányának tudható be; ezért a teszttermék bőrdepigmentációs hatékonyságát fő komponensének, a glicinamid-hidrokloridnak köszönhetjük.

Ebben a vizsgálatban nem szőtt szövetlapokba átitatott glicinamid-hidroklorid oldatot vittünk fel az arcra, és pozitív eredményeket kaptunk a bőr depigmentációs hatékonyságát illetően. Ez az alkalmazási mód hatékonynak bizonyult, de érdemes megvizsgálni, hogy a készítmény és az alkalmazási mód megváltoztatása. javítaná a termék hatékonyságát. A bőrre történő helyi alkalmazás mellett az orális adagolási és injekciós módszereket is meg kell vizsgálni annak érdekében, hogy a jövőbeni vizsgálatok során meghatározzuk klinikai hatékonyságukat.

A teszt- és kontrollcsoportok közötti különbségek statisztikai analízisét az ismételt mérések ANOVA-val, páros összehasonlításokkal végeztük. Ezen kívül a csoportok közötti különbségek a melanin index, L* érték, ITAo, éspigmentációmértéke mind statisztikailag szignifikáns volt 8-hetes kezelések után. A jelenlegi vizsgálatban a 10% glicinamid-hidrokloridot tartalmazó teszttermék melaninindex-csökkentési aránya 5,88% volt (kiindulási érték 184,03 ± 22,70; nyolcadik hét 173,30 ± 20,79). Watanabe et al. jelentettékbőrfehérítésa helyi oxidált glutation hatásai egy kettős vak és placebo-kontrollos klinikai vizsgálatban harminc egészséges nő részvételével [36]. A 2% oxidált glutationt tartalmazó teszttermék 10 hétig tartó helyi kezelése 10,7 százalékkal csökkentette a melanin indexet (kiindulási érték 272,77 ± 26,17; 10. hét 243,47 ± 26,31) [36]. Annak ellenére, hogy a vizsgálati körülmények, például a kiindulási melaninindex, a teszt dózisa és a teszt időtartama eltérnek egymástól, e két vizsgálat közvetett összehasonlítása azt sugallja, hogy a glicinamid-hidroklorid potenciálisan hipopigmentált szerként használható. dózisának, összetételének és alkalmazási módjának optimalizálásához szükséges a bőr depigmentációjának jobb teljesítménye érdekében.

Az egyensúlyi állapotú bőrszín a melanocitákból szállított melanin mennyiségének és a bőr keratinjának hámlása miatt elvesztett melanin mennyiségének relatív arányát tükrözi. Ezért a melaninszintézis gátlása vagy a melaninvesztés fokozása a hiperpigmentációs terápia két lehetséges stratégiája. A glicinamid-hidroklorid hasznos anyag az előbbi stratégiához, mert gátolja a melaninszintézist azáltal, hogy csökkenti a TYR és más, a melanociták melaninszintézisében részt vevő enzimek szintjét [27]. Ha igen, a glicinamid-hidroklorid bőrhámlasztó szerekkel, például glikolsavval [37,38] kombinálva tovább fokozhatja a depigmentációs hatékonyságot a különböző hatásmechanizmusú anyagok közötti szinergizmus miatt.

Számos létező depigmentáló szer csökkenti a melanin szintézisét azáltal, hogy gátolja a TYR génexpresszióért felelős intracelluláris jelátviteli folyamatot, vagy közvetlenül gátolja a TYR aktivitását [39,40]. A glicinamid-hidroklorid azonban megakadályozhatja egy hormon kötődését a receptorokhoz, és blokkolhatja az intracelluláris jelátviteli folyamatok beindulását, ezáltal gátolja a TYR expresszióját [27]. Ennek megfelelően a glicinamid-hidroklorid sok meglévő depigmentáló szertől eltérő mechanizmuson keresztül hathat, és szinergetikus hatások várhatók, ha más depigmentáló szerekkel együtt alkalmazzák.

A proopiomelanocortin eredetű peptid hormonok, mint például az -MSH, -MSH és az adrenokortikotrofikormon (ACTH) szabályozzák a bőrtpigmentáció, gyulladás és fibrózis [8,30,41]. Ezen agonisták MC1R-hez való kötődése, valamint az adenilát-cikláz (AC) és a protein kinázA (PKA) egymást követő aktiválása során a CREB transzkripciós faktor foszforilálódik, ami viszont indukálja a MITF expresszióját [42]. A MITF expresszióját más jelátviteli útvonalak is indukálják, amelyek magában foglalja a Wnt/Frizzled/glikogénszintáz kináz 3/-catenin kaszkádot és az őssejtfaktor/c-Kit/mitogén által aktivált protein kinázkaszkádot [43,44]. A MITF nemcsak a melanogén enzimek génexpresszióját irányítja, hanem a melanoszómák biogenezisét is [2,45].

Az előző vizsgálatban azonosított kis molekulatömegű anti-melanogén peptidek közé tartozik az FRWG-NH2,RWG-NH2, WG-NH2 és a G-NH2 (glicinamid), amelyek közös szekvenciát mutatnak az -MSH-val (acetil-SYSMEHFRWGKPV-NH2) [27]. . Feltételezték, hogy ezek az alacsony molekulájú anti-melanogén peptidek kompetitív módon zavarhatják az -MSH receptorkötődését, ezáltal blokkolva az intracelluláris jelátviteli folyamatok beindulását (4. ábra). Ha az alacsony molekuláris anti-melanogén peptidek MC1R antagonistaként működnek, akkor gátolhatják az MC1R aktiválását más agonisták, például -MSH és ACTH által is, és befolyásolhatnak más fiziológiás eseményeket, amelyek gyulladással és fibrózissal társulnak.pigmentáció [30].

Noha közvetlenebb bizonyítékokra van szükség a hatásmechanizmushoz, a jelen tanulmány azt bizonyítja, hogy a glicinamid hidroklorid-só formája, az anti-melanogén peptidek legkisebb esszenciális része, bőrdepigmentációs hatást fejtett ki anélkül, hogy embertelen bőrirritációt okozott volna. További vizsgálatokra van szükség a fent említett egyéb anti-melanogén tetrapeptidek, tripeptidek és egy dipeptid depigmentációs hatékonyságának vizsgálatához.

Összefoglalva, a jelen tanulmány azt sugallja, hogy a glicinamid-hidroklorid nagy potenciállal rendelkezik a bőr hiperpigmentációjának szabályozásában.

Hivatkozások

1. Costin, GE; Hallás, VJ Az emberi bőr pigmentációja: A melanociták a stressz hatására módosítják a bőr színét.FASEB J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef] [PubMed]

2. Schiaffino, MV Jelátviteli útvonalak a melanoszóma biogenezisében és patológiájában. Int. J. Biochem. Cell Biol. 2010,42, 1094–1104. [CrossRef] [PubMed]

3. Cardinali, G.; Ceccarelli, S.; Kovács, D.; Aspite, N.; Lotti, LV; Torrisi, MR; Picardo, M. A keratinocita növekedési faktor elősegíti a melanoszóma átvitelét a keratinocitákba. J. Investig. Bőr. 2005, 125, 1190–1199. [CrossRef] [PubMed]

4. Epstein, JH Fotokarcinogenezis, bőrrák és öregedés. J. Am. Acad. Bőr. 1983, 9, 487–502. [CrossRef]

5. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetovic, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.; Seagroves, TN. A melanogenezis szerepe a melanoma viselkedésének szabályozásában: A melanogenezis a HIF-1alfa expresszió és a HIF-függő kísérő útvonalak stimulálásához vezet. Boltív. Biochem. Biophys. 2014,563, 79–93. [CrossRef]

6. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT A melanin pigment szerepe a melanomában. Exp. Derm.2015, 24, 258–259. [CrossRef]

7. Fistarol, SK; Lin, PH Pigmentációs zavarok. J. Dtsch. Dermatol. Ges. 2010, 8, 187–201. [CrossRef]

8. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Melanin pigmentáció emlősök bőrében és hormonális szabályozása. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef]

9. Rose, PT Pigmentáris rendellenességek. Med. Clin. N. Am. 2009, 93, 1225–1239. [CrossRef]

10. Callender, VD; St Surin-Lord, S.; Davis, EK; Maclin, M. Posztinflammatorikus hiperpigmentáció: Etiológiai és terápiás megfontolások. Am. J. Clin. Bőr. 2011, 12, 87–99. [CrossRef]

11. Ganju, P.; Nagpal, S.; Mohammed, MH; Nishal Kumar, P.; Pandey, R.; Natarajan, VT; Mande, SS;Gokhale, RS A mikrobiális közösség profilalkotása diszbiózist mutat a vitiligo alanyok léziós bőrében. Sci. Rep.2016, 6, 18761. [CrossRef] [PubMed]

12. Spritz, RA; Andersen, GH A vitiligo genetikája. Bőr. Clin. 2017, 35, 245–255. [CrossRef] [PubMed]

13. Pavlic, V.; Brkic, Z.; Marin, S.; Cicmil, S.; Gojkov-Vukelic, M.; Aoki, A. Gingival melanin depigmentation byEr: YAG laser: A irodalmi áttekintés. J. Cosmet. Laser Ther. 2018, 20, 85–90. [CrossRef] [PubMed]

14. Saxena, S.; Andersen, RM; Maibach, HI A klinikai vizsgálatok buktatói rávilágítanak arra, hogy jól tolerálható, hatékonyabb depigmentáló szerekre van szükség. J. Dermatol. Csemege. 2015, 26, 440–450. [CrossRef] [PubMed]

15. Levy, LL; Emer, JJ A kozmetikai álcázás érzelmi előnyei az arcbőrbetegségek kezelésében: Személyes tapasztalat és áttekintés. Clin. Kozmetika. Investig. Bőr. 2012, 5, 173–182.

16. Chu, CH; Chou, CY; Cheng, YP Azonnali pigmentáció lézeres kezelés után. JAMA Derm. 2015, 151,1021–1022. [CrossRef]

17. Borelli, C.; Ursin, F.; Steger, F. A kémiai hámlasztás térhódítása a 19. századi európai bőrgyógyászatban: szerek, készítmények és kezelések megjelenése. J. Eur. Acad. Bőr. Venereol. 2020. [CrossRef]

18. Jow, T.; Hantash, BM Hidrokinon által kiváltott depigmentáció: Esettanulmány és szakirodalmi áttekintés. Dermatitis 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

19. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. A bőrfehérítő szerek áttekintése, betekintéssel az európai illegális kozmetikai piacba. J. Eur. Acad. Bőr. Venereol.2016, 30, 943–950. [CrossRef]

20. Kim, M.; Park, J.; Song, K.; Kim, HG; Koh, JS; Boo, YC Növényi kivonatok szűrése humán tirozináz gátló hatások szempontjából. Int. J. Cosmet. Sci. 2012, 34, 202–208. [CrossRef]

21. Park, J.; Boo, YC Resveratrol izolálása Viti vinifera caulis-ból és a humán tirozináz erős gátlása. Evid. alapú kiegészítés. Altern. Med. 2013, 2013, 645257. [CrossRef] [PubMed]

22. Kwak, JY; Seok, JK; Suh, HJ; Choi, YH; Hong, SS; Kim, DS; Boo, YC A phyllospadix iwatensis makino-ból izolált luteolin7--szulfát antimelanogén hatásai. Br. J. Derm. 2016, 175, 501–511. [CrossRef] [PubMed]

23. Lee, SW; Kim, JH; Song, H.; Seok, JK; Hong, SS; Boo, YC Luteolin 7-A szulfát a CREB és MITF által közvetített tirozináz expresszió gátlása révén gyengíti a melanin szintézist. Antioxidánsok 2019, 8, 87. [CrossRef] [PubMed]

24. Malerich, S.; Berson, D. Következő generációs kozmetikai termékek: A legújabb peptidek, növekedési faktorok, citokinek és őssejtek. Bőr. Clin. 2014, 32, 13–21. [CrossRef]

25. Zhang, L.; Falla, TJ Cosmeceuticals és peptidek. Clin. Bőr. 2009, 27, 485–494. [CrossRef]

26. Seok, JK; Lee, SW; Choi, J.; Kim, YM; Boo, YC Új antimelanogén hexapeptidek azonosítása szintetikus peptid kombinatorikus könyvtár pozicionális szkennelésével. Exp. Bőr. 2017, 26, 742–744. [CrossRef]

27. Kim, JH; Seok, JK; Kim, YM; Boo, YC Kis peptidek és glicinamid azonosítása, amelyek gátolják a melanin szintézist, pozicionális pásztázó szintetikus peptid kombinatorikus könyvtár segítségével. Br. J. Derm. 2019, 181,128–137. [CrossRef]

28. Pinilla, C.; Appel, JR; Blanc, P.; Houghten, RA Nagy affinitású peptid ligandumok gyors azonosítása szintetikus peptid kombinatorikus könyvtárak segítségével. Biotechniques 1992, 13, 901–905.

29. Rano, TA; Timkey, T.; Peterson, EP; Rotonda, J.; Nicholson, DW; Becker, JW; Chapman, KT; Thornberry, NAA kombinatorikus megközelítés proteázspecifitások meghatározására: Alkalmazás interleukin-1béta konvertáló enzimre (ICE). Chem. Biol. 1997, 4, 149–155. [CrossRef]

30. Slominski, AT; Slominski, RM; Zmijewski, MA Az 1-es típusú melanocortin receptor célzása kis peptidekkel.Br. J. Derm. 2019, 181, 17–18. [CrossRef]

31. Frosch, PJ; Kligman, AM A szappankamra teszt. Új módszer a szappanok irritáló hatásának felmérésére. J. Am. Acad. Bőr. 1979, 1, 35–41. [CrossRef]

32. Pierard, GE EEMCO útmutató a bőrszín értékeléséhez. J. Eur. Acad. Bőr. Venereol. 1998, 10, 1–11.[CrossRef]

33. Wilkes, M.; Wright, CY; du Plessis, JL; Reeder, A. Fitzpatrick bőrtípus, egyéni tipológiai szög és melanin index egy afrikai populációban: Lépések az univerzálisan alkalmazható bőr fényérzékenységi értékelése felé. JAMA Derm. 2015, 151, 902–903. [CrossRef] [PubMed]

34. Boo, YC p-kumarsav, mint hatóanyag a kozmetikumokban: A melanogén hatásokra összpontosító áttekintés. Antioxidánsok 2019, 8, 275. [CrossRef] [PubMed]

35. Boo, YC A resveratrol és analógjainak emberi bőrvilágosító hatékonysága: az in vitro vizsgálatoktól a kozmetikai alkalmazásokig. Antioxidánsok 2019, 8, 332. [CrossRef] [PubMed]

36. Watanabe, F.; Hashizume, E.; Chan, háziorvos; Kamimura, A. A helyi oxidált glutation bőrfehérítő és bőrállapot-javító hatásai: Kettős vak és placebo-kontrollos klinikai vizsgálat egészséges nőkön. Clin. Kozmetika. Investig. Bőr. 2014, 7, 267–274. [CrossRef]

37. de Villiers, MM; Narsai, K.; van der Watt, JG A-hidroxisavakat tartalmazó összetett krémek fizikai-kémiai stabilitása. Int. J. Pharm. Compd. 2000, 4, 72–75.

38. Sharad, J. Glikolsavas peeling terápia – aktuális áttekintés. Clin. Kozmetika. Investig. Bőr. 2013, 6, 281–288. [CrossRef]

39. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Bőrfehérítő szerek: A tirozináz inhibitorok gyógyszerkémiai perspektívája. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

40. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AAA átfogó áttekintése a tirozináz inhibitorokról. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]

41. Steinhoff, M.; Stander, S.; Seeliger, S.; Ansel, JC; Schmelz, M.; Luger, T. A cutaneousneurogenic gyulladás modern aspektusai. Boltív. Bőr. 2003, 139, 1479–1488. [CrossRef] [PubMed]

42. Busca, R.; Ballotti, R. A ciklikus AMP kulcsfontosságú hírvivő a bőr pigmentációjának szabályozásában. Pigment Cell Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]

43. Tachibana, M. MITF: A pigmentsejtekért folyó patak. Pigment Cell Res. 2000, 13, 230–240. [CrossRef][PubMed]44. Ebanks, JP; Wickett, RR; Boissy, RE A bőr pigmentációját szabályozó mechanizmusok: Az arcszín elszíneződésének emelkedése és csökkenése. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 4066–4087. [CrossRef]

45. Simon, JD; Peles, D.; Wakamatsu, K.; Ito, S. A melanogenezis megértésének jelenlegi kihívásai: áthidaló kémia, biológiai kontroll, morfológia és funkció. Pigment Cell Melanoma Res. 2009, 22, 563–579. [CrossRef]