A feniletanoid-glikozidok terápiás hatása a ciklopfoszfamid által kiváltott dyszoospermiára egerekben és annak mechanizmusára

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAO Dong-hail, ZHANG Lei?, ZHANG Yan², QI Ling', ZOU Xiang-ming'

Absztrakt: Célkitűzés Feltárni a feniletanoid glikozidok terápiás hatását a ciklofoszfamid (CTX) által kiváltott dyszoospermiára egerekben, és előzetesen tisztázni a folyamatban részt vevő mechanizmusokat. Módszerek A fenil-etanoid-glikozidot etanolos extrakcióval extraháltuk, negyven hím BALB/C egeret véletlenszerűen osztottak kontrollcsoportra, modellcsoportra, alacsony dózisú fenil-etanol-glikozid csoportra (50 mg·kg-I) és nagy dózisú fenil-etanol-glikozid csoportra (100 mg). ·kg-). A kontrollcsoport kivételével a dyszoospermia egérmodellt 80 mg·kg-i napi dózisú CTX peritoneális injekciójával hoztuk létre, naponta egyszer, egymást követő 5 napon keresztül. A modellezés után a fenil-etanoid-glikozidokat intragasztrikusan adtuk be a megfelelő dózisokban az egyes fenil-etanol-glikozid-csoportoknak. A kontrollcsoport és a modellcsoport egereinek azonos térfogatú normál sóoldatot adtunk gyomorszondával. Az összes gyógyszert naponta egyszer végezték el egymást követő 30 napon keresztül. A hereszövetet az utolsó intragasztrikus beadás után 24 órával vettük fel. A tesztoszteron szintjét a hereszövet homogenizátumában enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal határoztuk meg. Összehasonlították a spermiumok számát, a motilitási arányokat és a teratozoospermia arányait különböző csoportokban. A hereszövet morfológiai változásait HE festéssel figyeltük meg. Eredmények A kontroll csoporthoz képest a spermiumok száma és a motilitási ráta csökkent, a teratozoospermia aránya nőtt, és a tesztoszteron szint a hereszövet homogenizátumában csökkent a modellcsoportban (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Kulcsszavak: fenil-etanol-glikozidok; ciklofoszfamid; spermatogén károsodás; egerek, BALB/C

A Cistanche deserticolának számos hatása van, kattintson ide, ha többet szeretne megtudni

A társadalmi ritmus felgyorsulásának, a rossz életmódnak és a környezetszennyezésnek, valamint más tényezőknek köszönhetően a spermiumok rendellenes minősége, mint például az oligospermia és az asthenospermia vált a férfi meddőség fő okaivá [1]. Jelenleg kevesebb gyógyszer áll rendelkezésre az oligospermia és az asthenospermia kezelésére, és a terápiás hatás nem nyilvánvaló. A hagyományos kínai orvoslás receptjei vagy hatóanyagai jó hatással vannak a férfiak reproduktív funkcióinak javítására [2-6]. A vényköteles gyógyszerek sokfélesége miatt azonban nem egyértelmű a kapcsolat a gyógyszer farmakológiai hatásai és a hatóanyag hatékony összetevői között, ami korlátozza a spermatogén szerek népszerűsítését és alkalmazását. A hagyományos kínai gyógyászat hatékony összetevőinek kutatása és fejlesztése, valamint terápiás hatásainak vizsgálata a reproduktív sérüléseknél jó alkalmazási értékkel bír. Azfeniletanoid glikozidoka Cistanche-ban a cistanche a Cistanche egyik legfontosabb hatóanyaga. Általában természetes glikozidok, amelyek észter- és oxo-glikozid kötéseket tartalmaznak -glükóz atommaggal. Széles körben jelen vannak a kétszikű növényekben 7]. Tanulmányok [8] kimutatták, hogy a Cistanche fenetanol-glikozidok in vitro meg tudják védeni a patkányspermeket az oxidatív károsodástól, de a spermatogeneziséről nincsenek jelentések. Ez a kísérlet a Cistanche terápiás hatásait vizsgáljafeniletanoid glikozidokciklofoszfamid által kiváltott spermatogenezissel rendelkező egerek spermatogeneziséről, és kísérleti és elméleti alapot ad a Cistanche fenetil-alkohol glikozidok spermatogenezis zavarok kezelésében történő alkalmazásához.

1 Anyag és módszer

1.1 Kísérleti állatok, fő reagensek és műszerek

40 SPF felnőtt BALB/C egér, 6-8 hetes, súlya 20-22 g, a Jilin Egyetem Orvostudományi Alapiskola Állatkísérleti Központjától vásárolva, állatbizonyítvány száma: SCXK (Kirgizisztán) {{3} }. Az egereket a kísérlet előtt 5 napig adaptívan neveltük. Etetési feltételek: 22 fok -25 fok, cirkadián ritmus (12 óra/12 óra), ingyenes ivóvíz és étel. A Cistanche a Xinjiang Dakang Trading Company terméke, az injekcióhoz való ciklofoszfamidot a Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd.-től vásárolták (tételszám: 11061921), a hereszövet homogenizált tesztoszteron enzimhez kötött immunoassay készletét a Tianjin Jiuding Co., Ltd. Medical Bioengineering (20120812 tételszám), az egyéb reagensek mind hazai gyártású analitikai minőségűek. PLUS384 mikrolemez-olvasó (MDC, USA), TE2000U fordított mikroszkóp (Nikon, Japán), J-26XP centrifuga (Nanodrop, USA).

1.2 Cisztanche elkészítésefeniletanoid glikozidok

10 gCistanche tubulosaA port 70%-os etanollal visszafolyató hűtő alatt forraljuk kétszer, minden alkalommal 2 órán keresztül, hogy megkapjukfeniletanoid glikozidsűrítmény. A tömény oldatot D101 makroporózus gyanta oszlopkromatográfiának vetjük alá, és 70%-os etanollal eluáljuk.Cistanche feniletanoid glikozidalkohol. Az UV spektrofotométer a kivonatot 333 nm hullámhosszon azonosította.

1.3 Állatmodell készítése és beadási módszerek

40 hím BALB/C egeret adaptív módon tápláltunk 5 napig, és az egereket véletlenszerűen 4 csoportra osztották (minden csoportban 10 egér): kontrollcsoport, modellcsoport, Cistanche cistanche alacsony fenil-etanol-glikozid dózisú és nagy dózisú Cistanche fenetil-alkohol. glikozid csoport. A kontrollcsoport kivételével a másik három egércsoport intraperitoneálisan 80 mg·kg-1 ciklofoszfamid injekciót kapott egérenként 5 egymást követő napon keresztül, hogy elkészítsék a spermatogenezis rendellenességének állatmodelljét. A modell elkészítése után az egerek az alacsony és nagy dózisú csoportokbanCistanche feniletanoid50, illetve 100 mg·kg-'·d-'. , napi 1 alkalommal 30 egymást követő napon keresztül. Az utolsó adagolás után 24 órával minden egeret leöltünk, és kétoldali teszteket végeztünk. A jobb herét formaldehidben rögzítettük. A mellékherét és a herét a bal oldalról vettük. A herét homogenizáltuk, és 3, 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig. A felülúszót kivettük és hűtőszekrényben 20 fokon tároltuk tesztelés céljából. A bal oldali mellékhere megvizsgálta a spermiumok sűrűségét, motilitását és deformitási arányát.

1.4 A spermiumok sűrűségének, motilitásának és deformitási arányának meghatározása

Helyezzen egy 10 ml spermium-tápoldatot tartalmazó kémcsövet állandó hőmérsékletű vízfürdőbe, hogy 37 fokra melegítse elő, távolítsa el a kötőszövetet és a zsírt a mellékhere egyik oldaláról, vágja le a szövetet, és tegye a kémcsőbe 37 fokon. 10 percig. Miután a spermium teljesen felszabadult, cseppentsen 1 cseppet a vérsejtszámláló lemezre, és számítsa ki a spermium sűrűségét a sejtszámlálási módszer szerint. Az eredményt a spermiumok milliliterenkénti számában fejezzük ki; ezen kívül vegyünk ki a kémcsőből 5 μL spermiumszuszpenziót és keverjük el ugyanannyi Eozin-Y-vel egyenletesen, tegyük szobahőmérsékletre 10 percre, adjunk hozzá egy fedőüveget, és fénymikroszkóppal figyeljük meg. Az elhalt spermiumok rózsaszínre festődnek, az élő spermiumok nem festődnek, de a citoplazma átlátszó. Számoljon meg 200 spermiumot mintánként, számítsa ki a spermiumok életképességét, és az eredményt százalékban fejezzük ki: spermiumok életképessége=élő spermiumok száma/a spermiumok teljes száma × 100 százalék . További 5 μl sperma szuszpenziót fixáltunk metanolban 5 percig, szárítottuk, és 2 százalékos eozin vizes oldattal festettük 1 órán át, öblítettük, majd szárítjuk. Keressen olyan részeket, amelyekben kisebb a spermiumok átfedése egy kis teljesítményű mikroszkóp alatt, és nagy teljesítményű mikroszkóp segítségével ellenőrizze egymás után a spermiumok morfológiáját. Minden egér 1000 teljes spermát vizsgált meg. A spermiumfejeket kiakasztották, deformitásnak ítélték banán alakú, amorf, kövér fejű, kétfejű stb. Kiszámoltuk a spermium deformitási arányát, és az eredményeket százalékban fejeztük ki. A spermiumok deformitási aránya=deformált spermiumok száma/a spermiumok teljes száma × 100 százalék.

1.5 A reproduktív hormonok meghatározása

A herét lefejtjük, fiola edénybe helyezzük, majd az előhűtött homogenizáló táptalajt (0.01 mol·L-szacharóz, 0,01 mol·L{{ 6}}Tris-HCl, 0,1 mmol· L-1EDTA-Naz oldatok, pH 7,4), vágja le a hereszövetet szemészeti ollóval, öntse egy üveg homogenizáló csőbe és homogenizálja, centrifugálja 4 000 ×g 10 percig alacsony hőmérsékleten, vegye ki a felülúszót, és használjon enzimhez kötött immunszorbens reagenst. A tesztoszteronszintet a hereszövet homogenizátumában a doboz határozta meg, és minden mintához 3 párhuzamos mintát vizsgáltunk. A kísérleti lépéseket és módszereket a kit utasításai szerint végeztük.

1.6 A hereszövet morfológiai megfigyelése

Vegyünk paraffinos metszeteket az egér heréjéből, HE-festéseket, és fénymikroszkóp alatt figyeljük meg a spermatogónia és a spermatogén sejtek eloszlását a hereszövetben.

1.7 Statisztikai elemzés

A statisztikai elemzést az SPSS 17.{1}} statisztikai szoftverrel végeztük. A spermium sűrűségét, a spermiumok motilitási arányát, a spermium deformitási arányát és az egerek here tesztoszteron szintjét minden csoportban z±s-ben fejeztük ki, és a csoportok összehasonlítását egyirányú varianciaanalízissel végeztük.

2. eredmények

2.1 A spermiumok sűrűsége, a spermiumok életképessége és a spermiumok deformitási aránya az egyes egércsoportokban

A kontrollcsoporthoz képest a modellcsoport spermiumsűrűsége és motilitási rátája csökkent (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Cistanche fenetil-alkohol glikozidcsoportban nőtt a spermiumok sűrűsége és mozgékonysága (P<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Tesztoszteronszintek az egerek hereszövetében az egyes csoportokban

A tesztoszteron szint a kontrollcsoport hereszöveti homogenizátumában (10,26±0,57) és (5,33±0,84) nmol·L-' volt. A modellcsoport tesztoszteronszintje szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoporté (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Cistanche feniletanoid glikozidcsoport (7,55±1,21) és (10,35±0,94) nmol·L-1 volt. Az alacsony és nagy dózisú Cistanche tesztoszteronszintjefeniletanoid glikozidcsoportok szignifikánsan magasabbak voltak, mint a modellcsoportoké (P<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Az egér heréjének morfológiája minden csoportban

Fénymikroszkóppal megfigyelve; a normál csoport herében a spermatogén tubulusok sűrűn helyezkednek el, a csírasejt-szint és -szám sok, a maghám szépen elrendeződött, a sperma tubulusokat pedig mind spermiumok alkotják. A modellcsoportban az egerek heréiben lévő ondótubulusok sorvadtak, degeneráltak, a maghám jelentősen elvékonyodott, a hámrétegek száma csökkent, az elrendeződés rendezetlen volt, az üregben lévő spermiumok száma csökkent. A modellcsoporttal összehasonlítva az ondótubulusok és a ondóhámrétegek száma az alacsony dózisbanCistanche feniletanoid glikozidcsoport nőtt, a hám elrendeződése szabályosabb volt, és a tubulusok károsodása szignifikánsan javult; a nagy dózisúCistanche feniletanoid glikozidcsoport jelentősen javította a ondótubulusok szerkezetét, Jelentősen megnőtt a ondóhámok száma és száma, szépen elrendeződnek, érett spermiumok vannak a tubulusokban, és a szerkezet alapvetően normalizálódott. Lásd az 1. ábrát (6. betét).