A Cassia Spectabilis DC etanolos levélkivonatának toxikológiai értékelése és védő hatásai a Plasmodium Berghei-vel fertőzött egerek máj- és veseműködésére
Oct 30, 2023
1. Bemutatkozás
A mai napig a problémaPlasmodiuma meglévő maláriaellenes gyógyszerekkel szembeni parazita rezisztencia továbbra is komoly problémát jelent a malária felszámolásában [1–3]. ezért továbbra is folynak kutatások a maláriaellenes gyógyszerek új forrásainak felfedezésére, amelyek közül az egyik gyógynövényekből származik [4].In vivoésin vitromodelleket régóta használnak a malária elleni vizsgálatokban. A 20. század második felébenPlasmodium bergheivagyPlasmodium yoeliirágcsálók megfertőzésére használták. Közben,P. bergheiez lett a leggyakrabban használt faj a májstádiumú vizsgálatok során, különösen a hipnozoit kialakulásában a malária kiújulásának vizsgálatára [5–7].
KATTINTSON IDE A CISTANCHE VESE SZÁMÁRA TÖRTÉNŐ GYÓGYNÖVÉNYI KÉSZÍTMÉNYÉHEZ KAPCSOLATBAN
Indonéziában az egyik hagyományos növényt, a Caesalpiniaceae családba tartozó Cassia spectabilis DC-t kísérletileg igazolták in vitro P. falciparum ellen és malária in vivo kezelésében P. berghei ellen [8, 9], ami azt jelzi, hogy a C. spectabilis DC növény nagyon potenciálisan továbbfejleszthető maláriaellenes gyógyszerek jelöltjeként. Korábbi munkák arról számoltak be, hogy a C. spectabilis DC levél 90%-os etanolos kivonatán végzett in vivo teszt P. berghei ANKA ellen BALB/c egereken azt mutatta, hogy az ED50-érték 131,5 mg/ttkg [9], és a nagyon veszélyes kategóriába sorolható. jó maláriaellenes aktivitás [10].
Ezenkívül a C. spectabilis DC kivonatát, frakcióit, szubfrakcióit és izolált vegyületeit in vitro tesztelték maláriaellenes hatásuk szempontjából. *E növény aktív vegyületét sikeresen azonosították a (–){0}}hidroxi-kaszinnal azonos vegyületként, és in vitro maláriaellenes aktivitási tesztje nagyon alacsony, 0,016 ug/ml-es IC50-et mutatott. 11], amely nagyon erős maláriaellenes hatásnak minősül [12].
A növény malária gyógyszerrezisztenciájának leküzdésére irányuló kutatását a C. spectabilis DC levélkivonat biztonságosságának és a máj- és vesefunkciókra gyakorolt hatásának vizsgálatával folytatták P. berghei ANKA-fertőzött egerekben. Széles körben végeztek kutatásokat a maláriaellenes hatású gyógynövények parazitákkal fertőzött egerek máj- és veseműködésére gyakorolt hatásáról [13–16], valamint akut és szubakut toxicitási teszteket [17–20]. A májnak fontos szerepe van az élettani folyamatok szabályozásában. olyan szerv, amely számos létfontosságú funkcióban vesz részt, mint például az anyagcserében, a szekrécióban és a tárolásban. Emellett a májnak fontos szerepe van az endogén és exogén vegyületek méregtelenítésében és kiválasztásában [21–24].
A maláriás fertőzés akkor kezdődik, amikor a sporozoitákat maláriaparazitával fertőzött nőstény Anopheles szúnyogcsípés fertőzi meg. A véretetés során a fertőzött nőstény Anopheles beadja a parazita sporozoita stádiumát [25, 26]. Körülbelül egy óra emberi testben való utazás után a sporozoiták belépnek a májba, megtámadják a májsejteket, és elindítják az exoerythrocytás skizogónia aszexuális ciklusát. A májsejteken belül a paraziták ivartalanul szaporodnak, amíg el nem érik az érett skizontot, és végül nagyszámú merozoita termelődik és kerül a véráramba, miután megfertőzte a májsejteket. *A fertőzött hepatociták, amelyek májkárosodást okoznak a fertőzött hepatociták és merozoiták felszakadása miatt, bejutnak a véráramba, és elindítják az eritrocita ciklust a vörösvértestekben [27, 28]. A májsejtekben fellépő károsodás megnövelheti a májműködést befolyásoló enzimek, különösen a transzamináz enzimek szintjét, valamint a máj megjelenésében bekövetkező morfológiai változásokat [29, 30], például hepatomegáliát. A hepatosplenomegalia a maláriás fertőzések gyakori jellemzője emberekben [31] és egerekben [32], amelyet a maláriás parazitáknak való krónikus expozíció okoz. Azonban a vese nem megnagyobbodik maláriafertőzés esetén.
A máj diszfunkciója kimutatható a plazmában felszabaduló glutamin-oxaloecet-transzamináz (SGOT) és plazma glutaminsav-piruvics-transzamináz (SGPT) hepatocelluláris transzaminázásával, vagy a szövet szövettani vizsgálatával [33]. A leggyakoribb károsodás az apoptotikus sejthalál aktiválódása vagy a hepatocita nekrózis [34–36]. Klinikailag jelentős veseérintettség a P. falciparum és P. malariae fertőzéshez kapcsolódik. *A P. falciparum fertőzés akut megnyilvánulásokat okoz, a tünetmentességtől a vizeletürítési rendellenességekig, valamint az akut veseelégtelenség (ARF) vagy akut vesekárosodás (AKI) enyhe elektrolit-zavaraiig, amelyek dialízis támogatást igényelnek [27, 37]. *A malária szövődményeként előforduló AKI-esetek köztudottan hozzájárulnak a magas halálozási arányhoz, amely az esetek körülbelül 75%-át teszi ki. *A szövettani vizsgálat a glomerulonephritis, az akut tubularis nekrózis és az interstitialis nephritis jelenlétét sugallja, mint a maláriával összefüggő AKI kulcsfontosságú hemodinamikai faktorát [38]. Általában a veseműködési zavar mértéke kimutatható megfelelő mennyiségű fehérje jelenlétével a vizeletben, valamint a plazma karbamid-, kreatinin- és plazma elektrolitszintjének emelkedésével [39].
*A C. spectabilis DC (EECS) leveleinek 90%-os etanolos kivonatának toxicitása BALB/c egerekben, majd ezt követően az enzimvizsgálatok befolyásolhatják a kórszövettani és máj- és vesefunkciókat az EECS beadása után.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Növényi anyag és EECS készítése. *e C. spectabilis
A DC leveleket a LIPI-ben (Indonéziai Kutatóközpont), Botanical Garden, Purwodadi, Kelet-Jáva, Indonézia vásároltuk és határoztuk meg (B-160/IPH.06/KS.02/III/2019). *A mintát herbáriumként helyezték el az Universitas Airlangga Gyógyszerészeti Kar Farmakognóziai és Fitokémiai Tanszékén. *A leveleket alaposan leöblítettük csapvízzel az idegen szennyeződések eltávolítására, 45 fokon szárítottuk, majd darálóval porrá őröltük. *Az extrakciót úgy végeztük, hogy a por növényi anyagokat (500 g) 2500 ml 90%-os etanolt tartalmazó lombikban (25-30 fokon) 3 × 24 órán keresztül maceráltuk. *Az extrakciós oldószert elválasztjuk, szűrőpapíron átszűrjük, és csökkentett nyomáson rotációs bepárlón bepároljuk. *Az etanolos kivonat hozama 1000 g szárított tömegű C. spectabilis DC levélporból 10,20% (w/w), és ebben a kísérletben használtuk.
2.2. Állatok.
A vizsgálatban 6-8 hetes, 25-30 g súlyú hím BALB/c egereket használtunk. Az összes egeret a Farma Veterinary Centertől, a Mezőgazdasági Minisztérium Állattenyésztési és Állategészségügyi Főigazgatóságától (Surabaya, Kelet-Jáva, Indonézia) szereztük be. *Az állatokat standard körülmények között tartottuk, és ad libitum törzselemmel és vízzel etettük. *A vizsgálati protokoll jóváhagyását az Állatkutatási Etikai Bizottságtól szerezték be, Universitas Air langga, Indonézia, 2.KE.181.10.2018.
2.3. Akut toxicitási teszt.
Az EECS-t lemértük és újraszuszpendáltuk 0,5% nátrium-karboxi-metil-cellulózzal (Na CMC), hogy megkapjuk a kívánt dózisokat. A BALB/c egereket 24 órán át éheztettük, mielőtt kivonattal etettük volna őket. *Az állatokat három csoportra osztották, mindegyik csoport öt egeret tartalmazott. *a dózisok mindegyik csoportban 1250; 2500; és 5,000 mg/ttkg. Az egyes egerek általános viselkedését folyamatosan figyelték meg minden adag után egy órán keresztül, szakaszosan négyóránként, majd ezt követően 24 órán keresztül [40–42].
2.4. Szubakut toxicitási teszt.
A szubakut toxicitási tesztben az egereket három csoportba csoportosították, és mindegyik csoportot egyszerre, ötször és tízszer 150 mg/ttkg napi orális adaggal kezelték EECS-sel 28 napon keresztül; a normál kontrollcsoport csak ad libitum kapott ételt és italt [43]. *Az állatokat 28 napig figyelték meg a toxicitás bármely jele miatt. A megfigyelési periódus végén az összes állatot éteres érzéstelenítésben leöltük, és a létfontosságú szerveket, például a májat és a vesét eltávolítottuk az összes állatból átfogó és kórszövettani vizsgálatok céljából.
2.5. Rágcsáló parazita.
A Plasmodium berghei ANKA klorokin érzékenységét az Institute of Biomolecular Eijkman-tól (Jakarta, Indonézia) szereztük be, és sorozatos passzázssal tartották fenn, amelyet ebben a vizsgálatban használtunk.
2.6. Az EECS hatása az SGOT és az SGPT plazmaszintjére.
*is kísérlet egy elnyomó teszt volt Peters [44] alapján. *szuppresszív tesztet végeztek az SGOT és SGPT plazmaszintjének EECS értékelése előtt. *E állatokat megfertőztük P. berghei ANKA-val, és öt csoportra osztották: A, B, C, D és E. *E állatokat röviddel a fertőzés után kezeltük a(z) 0 napon (D{2}}) és naponta folytatódott három napig (D1–D3). Az A csoport negatív kontrollként szájon át 0,5% Na CMC-t kapott. A B és C csoportok, mint a kezelt csoportok EECS-t kaptak egyszeri, 150, illetve 200 mg/ttkg orális dózisban. A D csoport pozitív kontrollként klorokint kapott egyszeri, 100 mg/ttkg orális dózisban. Ezenkívül az E csoport, mint egészséges kontroll, nem volt fertőzött parazitákkal, és csak ad libitum kaptak ételt és italt. A negyedik napon (D4) minden egerről vérkenetet készítettünk és mikroszkóposan megvizsgáltuk. Továbbá plazmát gyűjtöttünk az SGOT és SGPT szintek mérése előtt.
2.7. Az EECS hatása a máj és a vese hisztopatológiájára.
A megfigyelési időszak végén az összes állatot éteres érzéstelenítésben leöltük a máj és a vese eltávolítása előtt. A szervek lemérése után a szöveteket 10%-os formaldehid oldatban fixáltuk, és hematoxilin-eozin (H&E) festésre tovább dolgoztuk. *Az EECS szövetek degeneratív és nekrotikus sejtjeire kifejtett toxikológiai hatásának kiderítésére kórszövettani megfigyelést végeztünk. *a károkat Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Statisztikai analízis.
*e adatokat átlag ± standard eltérésként (SD) adtuk meg. Egytényezős varianciaanalízist (ANOVA) alkalmaztunk a kezelések közötti normális eloszlású adatok összehasonlítására, majd egy post hoc többszörös összehasonlító tesztet alkalmaztunk, amikor eltérő szignifikancia értékét kaptuk. Ha az adatok nem oszlottak meg normálisan, Kruskal–Wallis és Mann–Whitney U-próbát alkalmaztak a kezelések közötti különbségek felmérésére.
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszterna exportőre:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950
Vásároljon további specifikációkért:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
