A klasszikus sertéspestis vírusának átvitele különböző immunstátusú, együtt élő malacokban legyengített élő vakcina után

Egyszerű összefoglaló:

A klasszikus sertéspestis a házisertéseket érintő rendkívül veszélyes kórokozó. A módosított élő vakcinával történő vakcinázás kritikus fontosságú a klasszikus sertéspestis megelőzésében és leküzdésében. Számos tényező azonban, például a kolosztrumon keresztül az anyai eredetű antitestek befolyásolhatják az élő vakcina hatékonyságát, ami a kereskedelmi állományokban a védelem hiányához vezethet. Ebben a tanulmányban a klasszikus sertéspestis vírus átvitelét vizsgáltuk különböző vakcinázás utáni immunstátuszú kísérleti malacokon. Egy klasszikus sertéspestis-vírussal fertőzött, specifikus kórokozótól mentes malac szolgált vírusdonorként és elsődleges támadóként, és együtt éltek olyan malacokkal, amelyek anyai eredetű antitestekkel rendelkeztek, és vakcináztak vagy nem. Az eredmények szerint a vakcinázott, anyai eredetű antitestekkel rendelkező malacok többsége teljes mértékben védett volt a vírusdonor kontakt átvitelével szemben, és blokkolta a vírus átvitelét a harmadik félre (azok a malacok, amelyek másodlagosan érintkeztek együttélés során). A sejtek által közvetített immunitás, amelyet specifikus interferon- -kiválasztó sejtek képviselnek, a vírus kiürülésének és felépülésének kulcsaként szolgált. Ezzel szemben az alacsony anyai eredetű antitestekkel rendelkező, be nem oltott malacoknál a vírusinváziót követően felgyorsult a klasszikus sertéspestis vírusfertőzés. Összefoglalva, a vakcinázás továbbra is szilárd immunitást indukál a kereskedelmi állományokban az anyai eredetű ellenanyag-interferencia hatására, és blokkolhatja a vírusátvitelt az állományokban.

cistanche növény-növelő immunrendszer

Absztrakt:

A klasszikus sertéspestis (CSF) egy szisztémás vérzéses betegség, amely házi sertéseket és vaddisznókat érint. A módosított élő vakcina (MLV) gyors és szilárd védelmet indukál a CSF-vírus (CSFV) fertőzés ellen. Az anyai eredetű antitestek (MDA-k) a kolosztrumon keresztül befolyásolhatják az MLV hatékonyságát, ami sertéseknél nem teljes védelmet jelenthet a CSFV-fertőzés ellen. Ez a tanulmány a CSFV átvitelét vizsgálta különböző poszt-MLV immunstátusú kísérleti malacok között. Tizenkilenc malacot, közülük 18 MDA-val és 1 specifikus kórokozótól mentes, CSFV-vel fertőzött malacot, amely CSFV donorként szolgált, együtt éltek olyan malacokkal, amelyek kaptak vagy nem kaptak MLV-t. Az egy adag MLV-vel beadott MDA-s malacok öthatoda teljes mértékben védett volt a CSFV-donor kontakt átvitelével szemben, és nem továbbította a CSFV-t az együttélés során másodlagosan kitett malacokra. A sejt által közvetített immunitás, amelyet az anti-CSFV-specifikus interferon{9}}kiválasztó sejtek képviselnek, kulcsfontosságú volt a vírus kiürülésében és felépülésében. CSFV-donorral való együttélést követően az alacsony MDA-szintű, be nem oltott malacok CSFV-fertőzést mutattak, és érintkezés útján a CSFV-t más malacokra is átterjedték; a magas MDA-szinttel rendelkezők felépültek, de tünetmentes hordozóként működtek. Összefoglalva, az MLV továbbra is szilárd immunitást indukál a kereskedelmi állományokban MDA interferencia hatására, és blokkolja a CSFV átvitelét ezekben az állományokban.

Kulcsszavak:

klasszikus sertéspestis; módosított élő vakcina; anyai eredetű antitest; terjedés

1. Bemutatkozás

A klasszikus sertéspestis (CSF) egy országhatárokon átterjedő, erősen fertőző, vérzéses betegség, amely házi sertéseket és vaddisznókat érint, és a klasszikus sertéspestis vírusa (CSFV) okozza [1,2]. A CSF az Állat-egészségügyi Világszervezet (WOAH) bejelentési kötelezettsége, és a CSF továbbra is endémiás betegség Ázsiában, Dél-Amerikában, Közép-Amerikában és a Karib-térségben. Csak észak-amerikai, óceániai és nyugat-európai országokban sikerült sikeresen felszámolni a CSF-et [3–6].

A CSFV egy burokkal rendelkező egytörzsű RNS-vírus aPestivírusa Flaviviridae családba tartozó nemzetség, amely magában foglalja a szarvasmarha-vírusos hasmenés vírusát és a border betegség vírusát is [1,2]. A vírusgenom körülbelül 12,3 kb méretű és 3898 aminosavat kódol poliproteint, amelyeket később négy szerkezeti (C, Erns, E1 és E2) és nyolc nem szerkezeti (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, és NS5B) fehérjéket vírusos és celluláris proteázok segítségével [7]. Az E2 vagy NS5B szekvenciák alapján a CSFV-t három genotípusba sorolják, három vagy négy altípussal (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. A CSFV virulenciájától és a sertés tényezőktől, köztük az életkortól, fajtától, egészségi állapottól és immunállapottól függően, a CSFV-vel fertőzött sertések akut, szubakut vagy krónikus klinikai tüneteket mutathatnak [9–11]. A nagy virulenciájú CSFV-vel fertőzött sertések akut lázzal és súlyos vérzéses elváltozásokkal járnak, és nagy vírusterhelést választanak ki székletükben, nyálukban és váladékukban rövid túlélési napjaik alatt. Ezzel szemben a közepes és alacsony virulenciájú CSFV-vel fertőzött sertések szubakut és krónikus klinikai tüneteket és enyhébb elváltozásokat mutatnak, és közepesen-alacsony mennyiségű CSFV-t választanak ki székletükben, nyálukban és váladékukban viszonylag hosszabb túlélési napjaik alatt [12,13 ]. A szántóföldön az elsősorban fertőzött sertések kiemelkedő szerepet játszhatnak a CSFV másodlagos átvitelében más sertésekre, amelyek változó immunitású CSFV-vel szemben. A közepes és nagy virulenciájú CSFV átvihetősége magasabb, mint az alacsony virulenciájú CSFV [12,13].

A vakcinázás kulcsfontosságú a CSF megelőzésében és leküzdésében az endémiás országokban. A módosított élő vakcina (MLV) egy nagy hatékonyságú, biztonságos és megfizethető vakcina, amelyet a legszélesebb körben alkalmaznak a kereskedelmi állományok körében. Az MLV gyorsan immunitást válthat ki, hogy részleges védelmet biztosítson az oltás után 3 nappal, és teljes védelmet 5 nappal az oltás után [14–16]. Azonban számos tényező, köztük a vakcinaminőségű sertések egészségi állapota és az anyai eredetű antitestek (MDA-k) szintje csökkentheti az MLV hatékonyságát, ami a vakcinázott sertések hiányos védelméhez vezethet [14–16]. CSF-endémiás állományokban az MLV-oltás időpontja a sertések MDA-szintjétől függ; a magas MDA-szint befolyásolja az MLV hatékonyságát, az alacsony MDA-szint pedig növeli a malacok fertőzésének kockázatát [17,18]. Ezért az állományokban az MLV-oltási programokat az MDA-szintek csökkenésére kell alapozni. Tajvanon egy rendszeresen végrehajtott CSF elleni vakcinázási program magában foglalja a vemhes kocák vakcinázását, hogy a kolosztrumon keresztül MDA-t biztosítsanak az újszülötteknek, majd az első adag MLV-t a malacoknak 3–12 hetes korukban adják be. A tajvani megfigyelés szerint az MDA-k MDA-k átlagos titere az első MLV-oltás időpontjában magasabb, mint 1:32 [19], ami ronthatja az MLV hatékonyságát, és különböző betegségekhez vezethet. immunstátusok az állományokban. Ez a tanulmány egy állatkísérletet ír le annak vizsgálatára, hogy az MLV képes-e megvédeni a különböző MDA-szintű malacokat, miután együtt éltek egy CSFV-vel fertőzött malaccal, amely CSFV-donorként (azaz az „elsődleges támadóként”) működött.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Sejtek és vírusok

Sertés-circovírus-típusú-1-mentes sertésvese-15 (PK-15) sejteket minimális esszenciális tápközegben (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) tenyésztettük 5% magzati szarvasmarha szérummal. (FBS) és 37 °C-on 5% CO2-ban inkubáltuk. A PK-15 sejtek támogatták a CSFV szaporodását, beleértve a Lapinized Philippines Coronel (LPC) 1.1-es genotípusú vakcinatörzset és a 2.1-es genotípusú TD/96-os törzset. Az LPC és a TD/96 törzs vírustitere 107,71 és 105,87 szövettenyészet fertőző dózis 50% (TCID50) volt.

2.2. Kísérleti terv

Összesen {{0}}hetes malac, amely 1 specifikus kórokozó-mentes (SPF) malacot tartalmaz anti-CSFV NA-k nélkül (1. csoport) és 18 egészséges malacot (2–5. csoport) az LPC-vel beoltva. CSFV-mentes állomány kocáit (1. ábra) használtuk a kísérletben. A 18 egészséges malacot véletlenszerűen négy csoportra osztották (2-5. csoportok); az anti-LPC NA titer (log2) átlaga a 2–5. csoportok között rendre 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 és 4,3 ± 1,3 log2-szoros volt, és nem tért el szignifikánsan 0 nappal a kísérlet után (DPE). Az SPF malacot (1. csoport) ironikus módon az 5 × 105 TCID50 TD/96 törzs használatával oltottuk be 7 DPE-nél, és elsődleges behatolóként vagy CSFV donorként szolgált, amikor a 12-es szobában együtt élt a 2. és 3. csoporttal (1. ábra). Annak tesztelésére, hogy az MDA-k csökkentik-e az MLV hatékonyságát, a 2. csoportot (n=6) egyetlen adag LPC vakcinával (több mint 1 × 104 TCID50/dózis) oltották be 0 DPE mellett. Az MDA védelmi képességének tesztelésére a 3. csoportot (a 2. csoport kontrollja; n=3) nem vakcinázták LPC vakcinával, így ezek a malacok az elsődleges támadóval való első érintkezést követő 7. napon MDA-bomlást mutattak. Az 1. csoport (elsődleges betolakodó) 10 napig együtt élt a 2. és 3. csoporttal (7-től 17-ig DPE). A 2. csoportot ezután áthelyezték a 2. szobába, hogy másodlagos betolakodóként szolgáljanak a 4. csoporttal (n=6) való együttélés révén 17-től 36-ig DPE. A 3. csoportot áthelyezték a 4. szobába, hogy együtt éljenek az 5. csoporttal (n=3). A 4. és 5. csoport tehát malacok voltak, akiknél a másodlagos betolakodókkal való első érintkezést követően 17 napos MDA-bomlás következett be. Az Állategészségügyi Kutatóintézet Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága jóváhagyta ezt az állatkísérletet (engedélyszám: A09007).

1. ábra Kísérleti terv.

Az állatokat naponta ellenőrizték a klinikai tünetek tekintetében, és minden paramétert 0-tól 3-ig pontoztunk, ami a normálistól a súlyosig terjedt, Mittelholzer módszerével [19]. A végbél hőmérsékletét mértük, és hetente kétszer vér-, nyál- és székletmintákat vettünk 35 DPE-ig. A mintákat CSFV-terhelésre és anti-CSFV antitestekre elemeztük. Boncolást végeztek az 1. csoportban 18 DPE-nél, a 2. és 3. csoportnál 36 DPE-nél, a 4. és 5. csoportnál pedig 39 DPE-nél. A környezeti minták (pl. tamponok a kerítésből, széklet a padlón, az etetővályú, és az ivókút) CSFV-re is elemezték.

2.3. A CSFV kvantitatív reverz transzkripciós valós idejű polimeráz láncreakciója (QRRT-PCR)

A minták virális RNS-eit a QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Németország) segítségével extraháltuk, és kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz láncreakcióval (QRRT-PCR) detektáltuk [20]. A QRRT-PCR-t a különböző genotípusok kimutatására és a minták CSFV-terhelésének kvantitatív meghatározására használtuk.

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

Kattintson ide a Cistanche Enhance Immunity termékek megtekintéséhez

【Kérjen többet】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Anti-CSFV NA-k

A malacok szérumának 56 ◦C-ra melegített inaktivált komplementje lehetővé tette az anti-LPC és TD/96 NA-k kimutatását. Röviden: 2-szeres sorozathígítású szérummintákat, 1:4 aránytól kezdődően, azonos térfogatú 100 TCID50 LPC vagy TD/96 törzsgel kevertük össze. A keverékeket 37 ◦C-on 1 órán át inkubáltuk, majd PK-15 sejtekre vittük át 96-lyuklemezeken. 3 napos inkubálás után a sejteket fixáltuk és megfestettük, hogy a CSFV antigén jelenlétét indirekt fluoreszcens vizsgálattal kimutatjuk. Az ellenanyag semlegesítő titere az antitest hígítási tényezőjének log2-je (a hígítás reciprokja), ha a lyukak 50%-a védett a fertőzéstől.

2.5. CSFV-specifikus interferon (IFN)- -Szekretáló sejtek

A malacok anti-CSFV sejt-közvetített immunitásának (CMI) értékelésére a perifériás vér mononukleáris sejtjeinek (PBMC) ex vivo CSFV-specifikus IFN-válasz tesztjét végeztük. Az EDTA-val antikoagulált vérből származó PBMC-ket 400× g-vel centrifugáltuk Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) alkalmazásával. A PBMC-ket RPMI 1640 tápközegben (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) szuszpendáltuk, amely 10 térfogat% hővel inaktivált FBS-t, 100 egység/ml penicillin G-t, 100 µg/ml streptomicint és 0,25 µg/ml streptomicint tartalmazott. ml amfotericin B. A CSFV-specifikus IFN- -szekretáló PBMC-k számát sertés IFN-egyszínű enzimatikus ELISPOT vizsgálattal (CTL, Shaker Heights, OH, USA) detektáltuk. A 96-lyukú lemezeken a PBMC-ket 5 × 106 sejt/ml koncentrációban, 100 µl/lyuk mennyiségben sertés IFN-befogó antitesttel a hamis csoporthoz (RPMI 1640 táptalajjal oltva), a TD/96 csoporthoz (fertőzött 0,1 MOI), és a ConA csoport (5 µg/ml concanavalin A-val kiegészítve; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), amely pozitív kontrollként szolgált. Minden alkalommal duplex stimulációt alkalmaztunk. 48 órás stimuláció után a lyukakat mostuk, az IFN- -detektált antitestet megkötöttük, és a szubsztrátot beoltottuk. Az egyes lyukak foltjait átvizsgáltuk és a CTL Analyzer segítségével vizsgáltuk.

2.6. Immunhisztokémia

A limfoid szöveteket immunhisztokémiai vizsgálattal vizsgáltuk Super Sensitive Polymer HRP IHC detektáló rendszerrel (BioGenex, Hága, Hollandia) és a 2.1 genotípusú CSFV törzsek elleni 1C7A1 monoklonális antitesttel [21]. A barna szín kialakulása a CSFV jelenlétét jelzi.

2.7. Statisztika

A csoportok közötti statisztikailag szignifikáns különbségek meghatározására varianciaanalízist és Duncan többszörös tartományú tesztjét alkalmaztuk. Az adatok elemzését SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA) segítségével végeztük. A 0,05-nél kisebb p-érték statisztikai szignifikanciát jelez.

3. Eredmények

3.1. Klinikai jelek

A kísérlet előtt minden malac egészséges volt (1. táblázat). Az 1. csoportba tartozó malac volt a CSFV donor (elsődleges behatoló), és TD/96 törzzsel oltották be. Az 1. csoportban a lázzal és a CSFV-vel összefüggő klinikai tüneteket 12 DPE-nél, illetve 13 DPE-nél észlelték, folyamatosan növekvő pontszámokkal 13-18 DPE-nél, és 18 DPE-nél érte el a 20-as pontszámot. A 2. és 3. csoportba tartozó malacok esetében, amelyek együtt éltek a CSFV donorral, a 2. csoport, amely az LPC vakcinával beoltott MDA-s malacokból állt, egészségesek voltak, és nem mutattak lázat vagy CSFV-vel kapcsolatos klinikai tüneteket a kísérlet során. . Azonban a 3. csoportba tartozó malacok, amelyek MDA-s malacokat tartalmaztak, és nem estek át LPC-oltáson, 23 DPE-nél (16 nappal az első érintkezés után, DP1C) lázat mutattak, és a lázas sertések száma 23-36 DPE-ről nőtt. A láz korrelált a CSFV-vel összefüggő klinikai tünetekkel, amelyek 24 DPE-nél jelentkeztek (17 DP1C). Bár az egyik malac (8138) enyhe klinikai tüneteket mutatott (5 alatti pontszám), a másik két malac klinikai állapota 24-36 DPE-ről romlott, pontszámuk 12 és 16 között volt. A 4. csoportba tartozó malacok, amelyek érintkezésben voltak (együtt éltek) a 2. csoport malacaival, szintén egészségesek voltak, és nem voltak lázas vagy CSFV-vel összefüggő klinikai tünetek a kísérleti időszakban. Az 5. csoportba tartozó malacok, amelyek érintkezésbe kerültek a 3. csoport malacaival, lázat mutattak 27 DPE-nél (10 nappal a második érintkezés után, DP2C), és CSFV-vel kapcsolatos klinikai tüneteket 30 DPE-nél (13 DP2C). A lázas malacok száma és a klinikai pontszámok az 5. csoportban idővel növekedtek; a pontszám 39 DPE-nél 21 ± 1,4 volt, 19 és 22 között mozog.

1. táblázat A lázas malacok százalékos aránya az egyes csoportokban a kísérleti időszakban.

A klinikai paraméterek szerint csak az MDA-k jelenléte (3. csoport) nem tudta megvédeni a malacokat az elsődleges támadó (1. csoport) által kiváltott kontakt átviteltől. Az LPC vakcina egyszeri adagja az MDA-kon kívül (2. csoport, azaz a széles körben alkalmazott gyakorlat) védelmet nyújtott az elsődleges támadó által kiváltott kontaktátvitel ellen (1. csoport; 1. táblázat). A széles körben alkalmazott vakcinázási gyakorlat a másodlagosan inváziós malacok számára is előnyös volt (azaz a 4. csoportban, ahol csak MDA-k voltak, de láztól és klinikai tünetektől mentesek). Klinikailag az 5. csoport helyzete (a másodlagos betolakodók által kiváltott kontakt átvitellel rendelkező malacok) összefoglalta a 3. csoport helyzetét (az elsődleges betolakodó által kiváltott kontakt átvitel).

3.2. CSFV virémia

A CSFV TD/96 törzs a kísérlet előtt egyik malac vérében sem volt kimutatható (2A. és 3A. ábra). A TD/96 oltás után az 1. csoportba tartozó malacban a TD/96 virémiát először 10 DPE-nél (3 nappal az oltás után, POI) mutattuk ki, és folyamatosan detektáltuk 17 DPE-ig. A CSFV-terhelések 101,2 TCID50/ml-ről 10 DPE-nél 106,4 TCID50/ml-re 17 DPE-nél nőttek. A 2. csoportban, amely a primer invaderrel együtt élt LPC-oltásban részesült malacokat tartalmazza, a TD/96 virémiát csak egy malacban (8134) mutatták ki 21-35 DPE között. A Piglet 8134 vérében a CSFV-terhelés 24 DPE-nél érte el a csúcsot (104,9 TCID50/ml), majd 35 DPE-nél 101,7 TCID50/ml-re csökkent. A 3. csoportban, amely LPC-oltás nélküli malacokat tartalmazott, akik együtt éltek az elsődleges támadóval, a TD/96 virémiát először a malacok 66,7%-ánál (2/3) mutatták ki 21 DPE-nél (14 DP1C), és mindegyik pozitív volt 24-re. DPE. A 8138-as malac azonban negatív volt a TD/96 virémiára 28–35 DPI között (2A. ábra). A 4. csoportban, amely a 2. csoporttal együtt élt malacokból állt a 2. szobában, TD/96 virémiát nem mutattak ki a kísérleti időszakban. Az 5. csoportba tartozó összes malac, amely a 3. csoporttal érintkezett malacokból állt, 31-35 DPE között pozitív volt TD/96 virémiára. A CSFV-terhelések 105,1 és 106,7 TCID50/ml között változtak 35 DPE mellett (3A. ábra). A 2. és 3. csoportban az MDA-k jelenléte 10 DP1C-ig késleltette a virémia első kimutatását (azaz a malacok 17 DPE-ig tünetmentesek maradtak; 1. táblázat) az elsődleges támadóval, összehasonlítva a 3. napi POI-val az 1. csoportban az akut betegségben. fázis. Az LPC vakcina (2. csoport) további egyszeri dózisa 83%-kal csökkentette a virémiás sertések százalékos arányát (2A. ábra). Hasonlóképpen, az LPC vakcina további egyszeri adagja 28-35 DPE-ről csökkentette a vér vírusterhelését (3A. ábra). A 2. csoport LPC-oltása a 4. csoportba tartozó malacok számára is előnyös volt, akikkel később együtt éltek (másodlagosan megtámadtak), annak ellenére, hogy a 2. csoportba tartozó malacok egyikének átmeneti virémiája (2A. ábra) és nyál (2B. ábra) és székletürítés (2C. ábra) volt. /96. A virémiás állapot változása korrelált a klinikai paraméterek alapján meghatározott értékkel (3.2. pont), bár a laboratóriumi kimutatás érzékenyebb volt.

2. ábra. A TD/96-ra pozitív malacok száma (százalékos) QRRT-PCR-rel [20] kimutatva a malacok (A) véréből, (B) nyálából és (C) ürülékéből. csoport a kísérleti időszakban. Az 1. csoportba tartozó malacokat ironikus módon TD/96-tal oltották be 7 DPE-nél, és CSFV donorként (azaz elsődleges behatolóként) szolgált a 2. és 3. csoportban. A 2. csoport malacai, amelyek 0 DPE-nél estek át LPC-oltáson, és a 3. csoportba tartozó malacok nem esett át LPC oltáson, együtt élt a 7-17 DPE 1. csoportba tartozó malaccal. A 4. és 5. csoport malacai együtt éltek a 2. és 3. csoport malacaival (azaz másodlagos betolakodók), 17-36 DPE között.

3. ábra. A CSFV-terhelés minden csoportban megtalálható a malacok (A) vérében, (B) nyálában és (C) ürülékében.

3.3. CSFV ürítés a nyálban

A CSFV TD/96 törzs a kísérlet előtt egyik malac nyálában sem volt kimutatható (2B. és 3B. ábra). Az 1. csoportba tartozó malac nyála először 14 DPE-nél volt pozitív TD/96-ra (7 DP1C), ami 17 DPE-ig folytatódott. A CSFV-terhelés 105,8 TCID50/ml-ről 14 DPE-nél 107,6 TCID50/ml-re 17 DPE-nél nőtt. Figyelemre méltó, hogy az LPC-vel vakcinázott és a CSFV donorral együtt élt 2. csoport malacaiban a TD/96-ot először a nyálminták 66,7%-ában (4/6) mutatták ki 14 DPE-nél (7 DP1C), ami negatívvá vált. ezután. Később egy másik malac (1/6, Piglet 8134 TD/96 virémiával; 2A ábra) a nyálában 21-24 DPE-ről 101,2 és 102,7 TCID50/ml értéknél ürítette ki a TD/96-ot, ami alacsonyabb szint, mint a fent említett malacoké. . A 3. csoportban a csak MDA-val és LPC-oltás nélküli malacokkal, amelyek együtt éltek a CSFV donorral, a TD/96 kezdetben a nyálminták 66,7%-ában (2/3) volt kimutatható 21 DPE-nél, és minden nyálminta pozitív volt 24 DPE. A 2. csoportba tartozó malacokkal együtt élő malacokat tartalmazó 4. csoportban a TD/96 nem volt kimutatható a kísérlet során a nyálmintákban, míg az 5. csoportban, amely a 3. csoportba tartozó malacokkal együtt élt, minden nyálminta pozitív volt TD/96 24-35 DPE. A CSFV-terhelések az idő múlásával nőttek, és 105,9 és 107,3 ​​TCID50/ml között változtak 35 DPE-vel. A 2. csoportban (egyadagos LPC-oltással) a malacok összesen négyhatodának volt TD/96-pozitív nyála 14 DPE-vel a virémia előtt. A CSFV-t korábban kimutatták a 2. csoportba tartozó malacokban, amelyek érintkezésbe kerültek az 1. csoportba tartozó malacokkal a TD/96 irtás során. A 2. csoportba tartozó egyik malac (Piglet 8134) később átmeneti leválást mutatott a 21-24 DPE-ről, ami valószínűbb a CSFV nyálmirigyekben történő replikációjára utal a virémia után. A 2. és 3. csoport összehasonlítása szerint az LPC-oltás csökkentette a CSFV ürítését.

3.4. CSFV ürítés székletben

A CSFV TD/96 törzs a kísérlet előtt egyik malac ürülékében sem volt kimutatható (2C. és 3C. ábra). Az 1. csoportba tartozó malac ürüléke először 14 DPE-nél (7 DPIC) volt TD/96 pozitív, ami 17 DPE-ig folytatódott. A CSFV-terhelések 14 DPE-nél 105,1 TCID50/g-ről 17 DPE-nél 108,8 TCID50/ml-re nőttek. A 2. csoportban, amely az 1. csoport CSFV-donorával együtt élő, LPC-oltással ellátott malacokat tartalmazza, csak a 8134-es malac hullott el átmenetileg 24 DPE-nél (17 DPIC), míg a 2. csoport összes többi malaca negatív volt. A 3. csoportban, amely a CSFV-donorral együtt élő, LPC-oltás nélküli malacokat tartalmazza, a malacok kétharmada (mind a 8138-as malac kivételével) 21 (14 DP1C) és 35 DPE között volt pozitív, ezalatt a CSFV-terhelés 105,1-ről nőtt. TCID50/g 21 DPE-nél 107,5 TCID50/ml-ig 31 DPE-nél. A tranziens TD/96 virémiával rendelkező Piglet 8138 székletmintái azonban nem voltak pozitívak TD/96-ra. A 4. csoportban, amely a 2. csoportba tartozó malacokkal együtt élt, az összes székletminta TD/96-ra negatív volt a kísérleti időszakban. Az 5. csoportban, amely a 3. csoporttal együtt élő malacokból állt, a TD/96-pozitív székletminták száma idővel 24-35 DPE-ről nőtt, a terhelés pedig 105,7 és 107,2 TCID50/g között változott 35 DPE mellett. . Az 5. csoportban az első kimutatás 24 DPE-nél (7 DP2C) történt, ami hasonló volt az 1. csoportéhoz (14 DPE), és a teljes profil párhuzamos volt a virémiával (2A ábra), ami arra utal, hogy a CSFV lokálisan replikálódott a virémiát követően. . A 3.3. és 3.4. szakaszban részletezettek szerint a széklet és a nyál volt a CSFV kontaktátvitelének elsődleges hordozója.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

3.5. CSFV-terhelések a boncolás során nyert szövetekben

Az 1. csoportba tartozó CSFV donor malac, valamint a 3. és 5. csoportba tartozó malacok szövetei, amelyekkel együtt éltek, TD/96 pozitívak voltak (2. táblázat). Az 1. csoportba tartozó malac szöveteiben a TD/96 terhelés 103,76 és 109,37 TCID50/g között volt. Az 5. csoportban, amely a 3. csoportba tartozó malacokkal érintkezett, a TD/96-ot minden malacban kimutatták, és az összes szövetben eloszlott, nagyobb terhelést okozva a hematolimfoid szervekben (mandulák, nyirokcsomók és lép) és ezekben a szervekben. bőségesebb vérellátással (máj, tüdő, szív és vesék), amint azt a 2A, C ábra mutatja. A legnagyobb TD/96 terhelés a limfoid szövetekben volt (109,0 TCID50/g felett). Ezzel szemben a 2. és 4. csoport együttélt malacainak nem hematolymphoid szövetei, kivéve a 2. csoport 8134-es malacát, amely átmeneti TD/96 virémiában szenvedett, csak a vérben, a mandulákban és a lágyéki nyirokcsomókban volt alacsony szintű TD/96 pozitív. és submaxilláris nyirokcsomók, ezek a szintek 101,65 és 103,78 TCID50/g között mozognak. A 3. csoportban, amely az 1. csoportba tartozó CSFV-donorral érintkezett LPC-vakcináció nélküli malacokat tartalmazza, a három malac közül kettőnél (kivéve a 8138-as malacot) a TD/96-ot minden szövetben kimutatták. A 3. csoport 8138-as malacának, amelynek átmeneti TD/96 virémiája volt, TD/96 volt a mandulákban, a submaxilláris nyirokcsomókban és a bronchiális nyirokcsomókban, bár a vírusterhelés az átlagosnál alacsonyabb volt, 103,08 és 104,69 TCID50/ml között mozog.

2. táblázat: CSFV QRRT-PCR segítségével kimutatott CSFV terhelés a malacok különböző szöveteiben

3.6. CSFV a kísérleti környezetben

Minden kísérleti helyiség kerítését, a padlón lévő ürüléket, az etetővályút és az ivókútot QRRT-PCR-rel tesztelték TD/96-ra (3. táblázat). A TD/96-ot a 14. és 17. DPE-nél mutatták ki a 12-es szoba ürülékében, ahol az 1. csoportba tartozó CSFV-donor együtt élt a 2. és 3. csoport malacaival. A kerítés, az etetővályú és az itatókút mind negatívnak bizonyult. A 2. szoba mintái, ahol a 2. és 4. csoport együtt élt, mind negatívak voltak 21-35 DPE között. A TD/96-ot először a 4. szoba emeletén (3. és 5. csoport) 24 DPE-nél mutatták ki a székletben. Ezt követően a TD/96-ot észlelték a 4-es szoba kerítésén, etetővályúján és ivókútján 28–35 DPE között. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az ürülék (amely potenciálisan minden típusú környezeti mintában jelen lehet) és a nyál (amely nagy valószínűséggel jelen lenne az etetővályúban és az ivókútban mintákban) volt a kontaktátvitel elsődleges hordozója. A 2. csoportba tartozó malacok átmeneti vírusürítése (2. és 3. ábra) nem került be a 2. szobába, ahol együtt éltek a 4. csoport malacaival.

3. táblázat Környezeti minták CSFV-terhelése a kísérleti helyiségekből.

3.7. CSFV-specifikus IFN- -PBMC-k titkosítása

A CSFV-specifikus IFN- -szekretáló sejteket a 2–5. csoportba tartozó malacok PBMC-jében vizsgáltuk 7–35 DPE között (4. ábra). A 2. csoportba tartozó malacokban az IFN- --kiválasztó sejtek száma, bár a PBMC-k 0,1%-ánál kisebb gyakorisággal, szignifikánsan magasabb volt, mint a 3., 4. és 5. csoportban. 7 és 35 DPE között. Az IFN- -szekretáló sejtek száma a 2. csoport 8134-es malacában, amely hasonló időn belül átmeneti TD/96-os virémiát mutatott (2A. ábra), a szignifikánsan alacsonyabb 56 (21 DPE) és 62 (28) számmal korrelált. DPE; csoport átlaga 116-nál nagyobb vagy egyenlő); ezek a számok azonban 35 DPE-vel elérték a csoportátlagot. A 3., 4. és 5. csoportban a CSFV-specifikus IFN- -szekretáló sejtek száma nem különbözött szignifikánsan.

4. ábra. A CSFV-specifikus IFN- -szekretáló sejteket a 2-5. csoportba tartozó malacok PBMC-jében vizsgáltuk 7 és 35 DPE között. A 2. csoportba tartozó, LPC vakcinázással rendelkező malacok 0 DPE-vel és a 3. csoportba tartozó malacok, akik nem kaptak LPC-oltást, együtt éltek az 1. csoport CSFV donor malacával, 7-17 DPE-vel. A 4. és 5. csoport malacai együtt éltek a 2. és 3. csoport malacaival, 17-35 DPE között. A különböző felső indexű a és b értékek statisztikailag szignifikáns különbséget jeleznek (p < 0,05) egymáshoz képest. Az azonos betűt tartalmazó értékek között nincs jelentős különbség

3.8. Anti-CSFV NA-k

A malacszérumban lévő anti-CSFV NA-k vagy az LPC-törzsre (5A. ábra), vagy a TD/96-törzsre (5B. ábra) reagálva keletkeztek. Az 1. csoportba tartozó CSFV donorban 7 és 17 DPE között nem volt kimutatható anti-CSFV NA. A 2-5. csoportba tartozó malacok szérumai a {{10}} DPE-nél 5 és 7 log2 közötti titert mutattak (32- és 128-szeres között). Miután a 2. csoportba tartozó malacokat beoltották LPC vakcinával, és együtt éltek a CSFV donorral, az átlagos titer nem csökkent 0 és 28 DPE között. A Piglet 8134 anti-LPC NA-k 31-35 DPE-ről való növekedése miatt a 2. csoport átlagos titere jelentősen megnőtt. A 3. csoportba tartozó, LPC-oltás nélküli malacoknál, amelyek együtt éltek a CSFV-donorral, az átlagos titer fokozatosan csökkent 0 és 28 DPE között. Ahogy a Piglet 8138 titere fokozatosan nőtt 21 és 35 DPE között, a 3. csoport átlagos titere megfordítva nőtt 31 és 35 DPE között. A 4. és 5. csoport átlagos titere idővel csökkent. Általánosságban elmondható, hogy az egyes csoportok anti-TD/96 NA profilja párhuzamos volt az anti-LPC NA profilokéval, bár az anti-TD/96 NA átlag 1,3 és 3,7 log2 között volt (körülbelül 2-12--szeres; 5B. ábra), ami alacsonyabb volt, mint az anti-LPC NA átlag.

5. ábra: Az anti-LPC (A) vagy TD/96 (B) NA-k a malacok szérumában minden csoportban a kísérleti időszakban. Az 1. csoportba tartozó malacot ironikus módon TD/96-tal oltottuk be 7 DPE-nél, és CSFV donorként (azaz elsődleges behatolóként) szolgált, majd együtt élt a 2. és 3. csoport malacaival 7-től 17-ig. A 2. csoportba tartozó malacokat LPC-vel vakcinázták 0 DPE-vel, a 3. csoportba tartozó malacokat pedig nem vakcinázták LPC-vel. A 4. és 5. csoport malacai együtt éltek a 2. és 3. csoport malacaival, 17-35 DPE között.

Az LPC-vel vakcinázott kocák kolosztrumán keresztül átvitt 4. csoportba tartozó malacok antitest-titereiből származó MDA-k becsült felezési ideje 10,7 nap volt (5A. ábra). Ezt a becslést alátámasztják a negatív láz és klinikai tünetek (1. táblázat), a negatív virémia, nyál és széklet vírusterhelés (2. és 3. ábra), valamint a szövetek (2. táblázat; lásd 3.9. szakasz) és környezeti minták (3. táblázat). ) a 4. csoportba tartozó malacok esetében, amely azt jelezte, hogy a kísérleti időszakban nem fertőződtek meg TD/96 vírussal.

3.9. Immunhisztokémia CSFV-antigén jelek kimutatása boncolási szövetmintákban

A CSFV TD/96 jeleit az 1. csoportba tartozó CSFV donor (6I. ábra) nyirokszövetében mutatták ki, egy 2. csoportba tartozó malac (8134. malac, amelynek CSFV terhelése a vérben a legmagasabb, 104,9 TCID50 volt) limfoid szöveteiben. /mL 24 DPE-nél, majd ezt követően 101,7 TCID50/ml-re csökkent 35 DPE-nél), három malacnál a 3. csoportban és három malacnál az 5. csoportban. A 4. csoport malacai nem voltak pozitívak a TD/96-ra (6J. ábra). Az erős CSFV TD/96 jelek széles körben elterjedtek a malacok mandulájában, lépében és nyirokcsomóiban az 1., 3. (kivéve a 8138-as malacot) és az 5. csoportban. A 8134-es malac esetében (2. csoport) tranziens TD/96 virémiával. , a szórt TD/96-pozitív jelek leginkább a mandulák parenchymalis régióiban, a lágyéki nyirokcsomók velőjében és a szubmaxilláris nyirokcsomókban találhatók (6A–D ábra), ami összhangban van a vírusterhelés eredményeivel ezeknek a szöveteknek a mennyiségi meghatározása (2. táblázat). A TD/96-pozitív sejtek morfológiája és eloszlása ​​erősen makrofág volt. A tranziens TD/96 virémiával járó 8138-as malacban (3. csoport) a TD/96-pozitív jelek száma és eloszlása ​​(6E-H ábra) hasonló volt a 8134-es malachoz.

6. ábra: A limfoid szövetekben lévő CSFV antigéneket az 1C7A1 monoklonális antitest jelölte meg. A tranziens TD/96 virémiában szenvedő Piglet 8134 (2. csoport) nyirokcsomója (A, B) és mandulája (C, D) barna TD/96-pozitív jelet mutatott. A tranziens TD/96 virémiával rendelkező Piglet 8138 (3. csoport) nyirokcsomója (E, F) és mandulája (G, H) barna TD/96-pozitív jelet mutat. A Piglet 8150 (1. csoport) nyirokcsomója (I) diffúz barna TD/96-pozitív jelet mutat a paracortexben. A 8146-os malac (4. csoport) nyirokcsomója (J) negatív volt a TD/96-ra

A 8134-es malacban (2. csoport) és a 8138-as malacban (3. csoport), mindkettő átmeneti, alacsony szintű virémiával (2A. és 3A. ábra; 2. táblázat), a CSFV antigének továbbra is kimutathatók voltak a mandulák szöveti makrofágjaiban (6A–H. ábra). , amely ismét bebizonyította, hogy a mandulák ideális szövetek a CSFV diagnózisához.

4. Megbeszélés

A vakcinázás kulcsfontosságú a CSF megelőzésében és leküzdésében a CSF-endémiás területeken. Széles körben alkalmazott gyakorlat az újszülöttek MDA-val való ellátása a beoltott kocák kolosztrumán keresztül, majd egyszeri adag MLV (például LPC) beadása, amikor a malacok 3-6 hetesek; ezt az eljárást alkalmaztuk jelen vizsgálatban a 2. csoport esetében (1. ábra). Számos tényező, beleértve a vakcina minőségét, az oltási program eljárásait (pl. ütemtervek, típusok és útvonalak), valamint a sertések MDA-szintjét és egészségi állapotát (beleértve az egyéni eltéréseket is), befolyásolhatja a CSFV-oltás hatékonyságát, csökkentve a fertőzés elleni védelmet [14– 16]. A jelen vizsgálatban, bár a 2. és 3. csoportba tartozó malacok MDA-szintje magas volt 1:32–128--szeresnél 7 DPE-nél (5A. ábra; azaz 0 DP1C az 1. csoportba tartozó CSFV donorral); 1. ábra), az MDA-k késleltették a fertőzés előrehaladását, amit a virémia késői megjelenése jelez 10 DP1C-nél (2. és 3. csoport; 2A. ábra). Emiatt a malacok tünetmentesek lettek (1. táblázat), bár néhány malac még mindig nyálában és székletében ürítette ki a vírust (2B, C ábra). A 2. csoportban ezek az alkalmi vírusleadások egyéni eltéréseket mutattak a csoport egészségi állapotában vagy az ebben a vizsgálatban elemzett immunválaszokban. Az MDA-k önmagukban csak részleges védelmet nyújtanak a vírus replikációja előtt a vérben és a szövetben. Az anti-CSFV TD/96 NA szint nem alakult át pozitívan az LPC-oltást követően (5B. ábra), még azután sem, hogy a malacok együtt éltek az 1. csoportba tartozó elsődleges támadóval. Ez valószínűleg azért történt, mert az MDA szint valóban befolyásolta az MLV hatékonyságát, és a behatoló CSFV TD/96 immunszuppresszív természete miatt.

cistanche tubulosa – erősíti az immunrendszert

Az anti-CSFV NA-k és CMI titerek, amelyeket a CSFV-specifikus IFN- -szekréciós sejtek száma képvisel, szorosan összefügg a sertések CSFV-fertőzés elleni védelmével [17,22–24]. A 8134-es malac (2. csoport) alacsony anti-CSFV NA-szinttel és alacsony számú CSFV-specifikus IFN{10}}szekretáló sejttel MLV-oltás után (4. és 5. ábra), átmeneti CSFV-virémiát és leválást mutatott a CSFV-vel való érintkezést követően. donor (2. és 3. ábra). Ezzel szemben a 2. csoport többi malacai, amelyek alacsony anti-CSFV NA-értékkel, de viszonylag magas CSFV-specifikus IFN{18}}szekréciós sejtekkel rendelkeznek MLV-oltást követően, nem fertőződtek meg CSFV-vel, még azután sem, hogy 10 napig együtt éltek a CSFV donorral. . Ezen túlmenően, bár a Piglet 8138 (3. csoport) magas anti-LPC NA titerrel (több mint 128--szeresével) rendelkezett MLV-oltás nélkül és minimális CSFV-specifikus IFN{25}}szekréciós sejtekkel, tranziens CSFV-t is mutatott. virémia a TD/96 donorral való együttélés után, de a kísérleti időszak végére CSFV-mentes volt. A 3. csoport többi malacai alacsony anti-LPC NA-szinttel (64--szeresnél kisebb) és MLV-oltás nélkül, súlyos CSFV-vel összefüggő klinikai tüneteket, elváltozásokat és magas CSFV-szövetterhelést mutattak, ami elhullást eredményezett. A 2. és 3. csoport eredményeinek összehasonlítása, amelyek hasonló anti-CSFV titerekkel és profilokkal rendelkeztek (5. ábra), azt jelzi, hogy a CMI a kulcstényező a vírus kiürülésében és felépülésében. A 2. csoportba tartozó malacoknál több volt a CMI (4. ábra), ami összhangban van a szabad klinikai pontszámokkal (1. táblázat) és az összes vizsgált paraméterrel (2. ábra, 3. ábra és 6. ábra).

Nevezetesen, a 2. csoportban és a többi csoportban a CMI-szintek nem emelkedtek jelentősen (és csak a PBMC-k 0,1%-ánál kisebb gyakorisággal) a kísérleti időszak során (4. ábra), a malacok ellenére az 1. csoportba tartozó CSFV donor és a 3. csoportba tartozó malacok vírusürítésének állandó kitettsége 7–17 DPE-ből (2. és 3. ábra). Az IFN{10}}szekretáló sejtek alacsony gyakorisága valószínűleg a következőket tükrözi: (1) a CSFV immunszuppresszív természete, (2) MDA interferencia és (3) az általunk végzett vizsgálat technikai korlátai. Ezért az állományok immunitásának javításához elengedhetetlen egy megfelelő ablak meghatározása, amelyben az MDA-szint kellően alacsony az interferencia elkerüléséhez, de elég magas ahhoz, hogy kezdeti védelmet biztosítson és fokozza az anti-CSFV CMI-t.

A széles körben alkalmazott vakcinázási eljárással kezelt 2. csoportba tartozó malacoknál a CSFV esetenkénti nyálban és székletben történő ürítése rövid ideig (2. ábra) alacsony CSFV terhelés mellett (3. ábra); így a 4. csoport malacai (csak MDA-val) blokkolták a CSFV átvitelét a 4. csoportba, amint azt a 2. helyiségből vett környezeti minták CSFV-negatív eredményei (3. táblázat), a láz hiánya és a klinikai tünetek jelzik (1. táblázat). ), valamint a nyál- és székletürítés, valamint a virémia hiánya (2. és 3. ábra) az együttélés során. A 2. csoportba tartozó tünetmentes CSFV-hordozók azonban felderíthetetlen károkat okozhattak a területen.

Az immunválasz gyorsan és folyamatosan indukálható az MLV-vel vakcinázott SPF malacokban. Az MLV-vel beoltott malacok celluláris és humorális immunválasza legkorábban az oltás után 5, illetve 12 nappal derül ki [14–16,22]. Ha az MLV-t kereskedelmi állományokban használják, az MDA-k csökkentik az MLV hatékonyságát. Jelen vizsgálatban a 2. csoportba tartozó, jelentős MDA-szintű malacok CMI-értéke gyorsan nőtt a 0 DP1C-nél (7 DPE; 4. ábra; azaz sokkal gyorsabban, mint az MDA-t nem tartalmazó SPF-malacoknál), bár sem az antitest, sem a CMI nem a profilok drámaian megváltoztak (4. és 5. ábra). Az LPC-oltás utáni 7 DPE ilyen gyors növekedése (4. ábra) arra utal, hogy a kolosztrum az MDA-kon kívül más immunológiai komponenseket is biztosíthat, amelyek anamnesztikus-szerű választ indukálnak.

Az anti-CSFV NA-kat általában a vakcina hatékonyságának értékelésére és a CSFV-fertőzés felmérésére használják az állományokban. A CSFV-törzs szerint az anti-CSFV NA-k titere homológ törzsekkel (pl. az 1.1-es genotípusú LPC-vel) szemben magasabb, mint a heterogén törzsekkel szemben (pl. a 2.1-es genotípus TD/96-ja), és ebben a vizsgálatban log2 1.3-3,7 (5A. ábra) volt magasabb, mint a TD/96 törzzsel szemben (5B. ábra) [14]. Hasonló NA-titer különbséget figyeltek meg a sertés szaporodási és légúti szindróma vírus (PRRSV) és a SARS-CoV-2 különböző törzseiben is [25,26]. Mivel az MDA-k létfontosságú interferenciatényezők az MLV hatékonyságában, a malacok MLV-oltására az optimális vakcinázási ütemterv az, ha a malacok MDA-ja az anti-LPC NA titer 1:{20}}-szerese alatt van. Ezért a jelen vizsgálatban az optimális MLV vakcinázási idő 28 DPE volt, ami összhangban van azzal a becslésünkkel, hogy az MDA-k felezési ideje 10,7 nap volt (2. csoport; 5A ábra), és hasonló az anti- A 4. és 5. csoport LPC NA titerei. Paradox módon az anti-CSFV NA titer 32-szeresét (körülbelül az anti-LPC NA 1:128--szeresét) tekintik a védőindexnek. CSFV fertőzés [17]. A 4. és 5. csoportba tartozó malacok többségének 1:{40}}szerese volt az anti-TD/96 NA titer 7 DPE-től kezdődően. Így szűk az az ablakperiódus, amikor az MDA-szintek megfelelően alacsonyak ahhoz, hogy ne zavarják az MLV-oltást, de elég magasak ahhoz, hogy védelmet nyújtsanak, míg a CSFV-fertőzés kockázatának ablaka széles. Az MLV-oltás megfelelő időtartama csak akkor hosszabbítható meg, ha az MLV-t homológ törzsekből állítják elő, amelyek általában nem állnak rendelkezésre a legtöbb CSFV-endémiás területen.

Az állomány immunitása negatívan korrelál a kórokozó terjedésével a betegségek megelőzésében és leküzdésében. Az állomány fokozott immunitása csökkentheti mind a fertőzésekre való hajlamot, mind a kórokozó állományban való elszaporodásának mértékét [27,28]. A vakcinázást gyakran használják közvetlen és gyors eszközként az állomány immunitásának növelésére. Az állomány immunitásának javítása vakcina immunizálással a kórokozók terjedésének csökkentése érdekében hatékonynak bizonyult a PRRSV, a sertés cirkovírus 2-es típusú, a CSFV, a pszeudorabies vírus és a SARS-CoV-2 elleni védekezésben [29–36]. A CSFV-vizsgálatokban az MLV és az E2 alegység vakcinák beadása is csökkentette a CSFV átvitelét az állományokban [14–16, 22, 32]. A jelen vizsgálatban, bár néhány MLV-vel beoltott malac átmeneti CSFV-virémiát és leválást mutatott (2. és 3. csoport; 2. és 3. ábra), az MLV-oltás nemcsak teljes védelmet nyújtott a beoltott sertéseknek, hanem azt is biztosította, hogy a TD/96 törzs nem került át az elsődleges támadóról (1. csoport) a másodlagosan megszállt csoportra (4. csoport). Ezzel szemben a TD/96 átterjedt az 1. csoportba tartozó CSFV donortól a 3. csoportba (MLV oltás nélkül) és átterjedt az 5. csoportba, bizonyítva, hogy a CSFV elleni MLV oltás blokkolhatja a CSFV átvitelét, így növelve a CSFV felszámolásának valószínűségét azáltal, hogy csökkenti a CSFV értékét. a kórokozó alapvető szaporodási száma (R0) [28]. Kiterjedtebb vakcina-lefedettségre van szükség a magas R0 kórokozókat tartalmazó betegségek felszámolásához. A CSFV R0 a törzs virulenciájával és a CSFV oltási dózisával függ össze. Egy közepesen virulens törzs mérsékelten beoltott és nagy beoltott dózisú R0 kórokozó szintje, valamint egy erősen virulens törzs alacsony oltási dózisa lényegesen magasabb, mint egy alacsony virulenciájú törzs magas beoltott dózisa esetén. törzs [13]. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy nagyobb állomány-immunitási lefedettségre van szükség a mérsékelten vagy erősen virulens CSFV törzsekkel rendelkező CSF-endémiás területeken.

A monocita-makrofág vonalú sejtek CSFV tropizmus sejtek, amelyek szerepet játszanak a CSFV átvitelében [37–39]. A jelen vizsgálatban a felépült malacok egészségesek és tünetmentesek voltak; a CSFV azonban tartósan fertőzhet és elrejtőzhet a limfoid szövetekben (6. ábra), így elkerülhető az immuntisztulás; ez is támogatja a limfoid szövetek ideális mintaként történő alkalmazását a diagnózishoz. Perzisztens vírusfertőzést figyeltek meg CSFV-vel, 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal és légúti syncytia vírussal is [40–42]. A CSFV képes megváltoztatni a citokinek, citokinreceptorok, kemokinek, interferonok és a toll-szerű receptorok expresszióját a makrofágokban, ami tükrözi immunszuppresszív természetét, valamint az antitest (5. ábra) és a CMI (4. ábra) profiljának szinte inaktivitását. kísérleti sertéseket, annak ellenére, hogy az elsődleges (1. csoport) és másodlagos (3. csoport) betolakodók nyálában és ürülékében folyamatosan ki vannak téve a CSFV-nek. A sertések CSFV-fertőzés utáni immunregulációja a proinflammatorikus (IL-1, IL-6, IL-8 és MCF) és az antivirális faktorok (IFN- és ) növekedését jelentette [43]. A CSFV kialakult mechanizmusai és tartós fertőzése azonban továbbra sem tisztázott.

A cistanche előnyei a férfiak számára – erősítik az immunrendszert

5. Következtetések

Az MDA-k, amelyeket MLV-oltás követ, elegendő immunitást válthatnak ki, különösen a CMI-t, ami lehetővé teszi a vírus kiürülését és felépülését. Bár néhány MLV-vel beoltott malac átmeneti, alacsony szintű virémiát és vírusürítést mutatott a nyálában és székletében, a CSFV átvitele a harmadik félre (4. csoport) blokkolható volt MLV-oltással, így csökkentve a CSFV R0-át. valamint a CSF felszámolásának lehetőségének növelése.

Hivatkozások

1. Ó. 15.2. fejezet: A klasszikus sertéspestis vírusával való fertőzés. A szárazföldi állatok egészségügyi törvénykönyvében; WOAH: Párizs, Franciaország, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, HR; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Klasszikus sertéspestis vírus: Múlt, jelen és jövő. Virus Res. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Klasszikus sertéspestis: hivatalos betegségi állapot. Elérhető online: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (Hozzáférés: 2022. szeptember 1.).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Egy klasszikus sertéspestis-vírus-járvány filogenetikai és filodinamikai elemzése Japánban (2018–2020). Transzbound. Emerg. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY A klasszikus sertéspestis felszámolásának eredményei és kihívásai Brazíliában. Vírusok 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Ma, W.; Zhao, X. Kínából származó klasszikus sertéspestis vírusizolátumok filogenetikai elemzése. Boltív. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: A vírusok és replikációjuk. In Fields Virology, 5. kiadás; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, szerk.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, USA, 2007; 1101–1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parchariyanon, S.; Song, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Bjorklund, H.; Belak, S. A klasszikus sertéspestis vírus genetikai tipizálása. Állatorvos. Microbiol. 2000, 73, 137–157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Fajtafüggő tényezők hatása a klasszikus sertéspestis vírusfertőzés lefolyására. Állatorvos. Rec. 1997, 140, 506–507. [CrossRef]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. A legújabb és korábbi klasszikus sertéspestis vírusizolátumok virulenciája klinikai és patológiás tüneteik alapján értékelve. J. Vet. Med. Ser. B 2003, 50, 214–220. [CrossRef]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. A klasszikus sertéspestis klinikai tünetei és epidemiológiája: Az új ismeretek áttekintése. Állatorvos. J. 2003, 165, 11–20. [CrossRef]

12. Durand, B.; Davila, S.; Cariolet, R.; Mesplède, A.; Le Potier, MF A klasszikus sertéspestis vírusának karámon belüli és között történő átvitelének virémiás és klinikai alapú becsléseinek összehasonlítása három átviteli kísérletből. Állatorvos. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [CrossRef]

13. Weesendorp, E.; Backer, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. A klasszikus sertéspestis vírus törzsének és oltási dózisának hatása a karámon belüli átvitelre. Állatorvos. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY A klasszikus sertéspestis elleni védekezés kihívásai: Módosított élet és E2 alegység vakcinák. Virus Res. 2014, 179, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. A klasszikus sertéspestis elleni sikeres vakcinázáshoz kritikus tényezők endémiás területeken. Állatorvos. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Klasszikus sertéspestis vakcinázása: Laboratóriumtól szántóföldig. Állatorvos. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [CrossRef]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. The Protective value of vakcina-induced neutralizing antibody titers in sertéspestis. Állatorvos. Microbiol. 1988, 16, 123–128. [CrossRef]

18. Vandeputte, J.; Túl, HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Klasszikus sertéspestis elleni kolosztrális antitestek adszorpciója, az anyai antitestek fennmaradása és a vakcinázási reakcióra gyakorolt ​​hatás kismalacoknál. Am. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805–1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Az antitestek teljesítményének és a vírus RNS jelenlétének vizsgálata a klasszikus sertéspestis vakcinatörzs vakcinázása előtt és után tajvani sertéstelepeken. Tajvan Vet. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA A klasszikus sertéspestis vírus replikációs kinetikájának elemzése lehetővé teszi a nagyon virulens és avirulens törzsek megkülönböztetését. Állatorvos. Microbiol. 2000, 74, 293–308. [CrossRef]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Reverz transzkripciós multiplex valós idejű PCR kifejlesztése a klasszikus sertéspestis vírus kimutatására és genotipizálására. J. Virol. Methods 2009, 160, 111–118. [CrossRef]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Egy közös konformációs epitóp azonosítása a klasszikus sertéspestis vírus és a határbetegség vírusának E2 glikoproteinjén. Vírusok 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. A sertések klasszikus sertéspestis-vírussal való megfertőződése C-törzs elleni vakcináció után feltűnően gyors védelmet és betekintést nyújt a korai immunitásba. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [CrossRef]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Lámpa, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. A vakcina által kiváltott, széles körben keresztreaktív IFN-t szekretáló T-sejt-válaszok jellemzése, amelyek korrelálnak a klasszikus sertéspestis vírus elleni gyors védelemmel. Vaccine 2012, 30, 2742–2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. A vírusspecifikus interferon-gamma termelés és a klasszikus sertéspestis vírusfertőzés elleni védelem összefüggése. Állatorvos. Immunol. Immunopathol. 2001, 83, 177–189. [CrossRef] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. A SARS-CoV-2 delta variáns csökkentett érzékenysége az antitestek semlegesítésére. Természet 2021, 596, 276–280. [CrossRef]

27. Zhang, C.; Hu, J. Sertés reproduktív és légúti szindróma vírus elleni vakcinák: Current status and strategies to a universal Vaccine. Transzbound. Emerg. Dis. 2014, 61, 109–120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. A vakcinázás világszerte nagymértékben csökkenti a betegségeket, a rokkantságot, a halálozást és az egyenlőtlenséget. Bika. Egészségügyi Világszerv. 2008, 86, 140–146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rose, N.; Andraud, M. A vakcinák alkalmazása a kórokozók terjedésének megakadályozására sertéspopulációkban. Sertés egészségügyi menedzser. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Grasland, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. A sertés cirkovírus 2-es típusú (PCV-2) mennyiségi meghatározása a karámon belül és a karám között sertésekben. Állatorvos. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. Egy kereskedelmi forgalomban kapható PCV2a-alapú vakcina jelentősen csökkenti a PCV2b átvitelét kísérleti körülmények között. Vaccine 2016, 34, 3738–3745. [CrossRef]

32. Rose, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. Sertés szaporodási és légúti szindróma vírus (PRRSv) módosított élő vakcina csökkenti a vírus terjedését kísérleti körülmények között. Vaccine 2015, 33, 2493–2499. [CrossRef]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM A klasszikus sertéspestis vírus elleni E2 alegység vakcina által kiváltott állomány-immunitás kialakulásának meghatározása. Vaccine 2000, 18, 1374–1381. [CrossRef]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM A kiméra (marker) C-törzs vírusai klinikai védelmet indukálnak a virulens klasszikus sertéspestis vírus (CSFV) ellen, és csökkentik a CSFV átvitelét a vakcinázott sertések között. Vaccine 2001, 19, 1467–1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM Nem fordult elő jelentősebb pszeudorabies-vírus járvány a jól immunizált kocaállományokban. Vaccine 1996, 14, 1042–1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, PC; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM A 2019-es koronavírus-betegség (COVID{2}}) elleni védőoltás szükségessége olyan személyeknél, akik már átestek a COVID-ban-19. Clin. Megfertőzni. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Klasszikus sertéspestissel fertőzött sertés lépmakrofágjainak morfológiai és immunhisztokémiai változásai. J. Comp. Pathol. 2001, 125, 98–109. [CrossRef]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC A belek kórszövettani, immunhisztokémiai és ultrastrukturális vizsgálata klasszikus sertéspestis vírussal beoltott sertésekben. Állatorvos. Pathol. 2003, 40, 254–262. [CrossRef]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, AK; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Az egész genomra kiterjedő génexpresszió aláírása a klasszikus sertéspestis-vírussal fertőzött makrofágokban és az őshonos keresztezett sertések PBMC-jeiben. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Perez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Krónikus és perzisztens klasszikus sertéspestis-fertőzések vizsgálata szántóföldi körülmények között és hatásuk a vakcina hatékonyságára. BMC Vet. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. A respiratory syncytialis vírus perzisztenciája makrofágokban megváltoztatja a celluláris génexpresszió profilját. Vírusok 2012, 4, 3270–3280. [CrossRef]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA A makrofágok szerepe a HIV-1 perzisztenciában és patogenezisében. Elülső. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, I.; Fernandez-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR A celluláris génexpresszió mintái rendkívül virulens, Brescia klasszikus sertéspestis vírustörzzsel fertőzött sertésmakrofágokban. Virus Res. 2008, 138, 89–96. [CrossRef]