Sertés-melléktermék kollagén-hidrolizátumok antioxidáns és öregedésgátló hatásai 2. rész

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

2.2. Ultrafiltrációs hatás a kollagén hidrolizátum tulajdonságaira

Az ultraszűrési eljárás hasznos, iparilag előnyös módszer lehet a kívánt molekulaméretű és nagy bioaktivitású kis peptidfrakciók előállítására, a kiindulási hidrolizátum összetételétől és a vizsgált aktivitástól függően [19]. Az oldhatóság, a szabad aminocsoport-tartalom és a CH-k liofilizálás utáni hozama látható (1. táblázat). A kontroll oldhatósága 11,95%, a szabad aminocsoport tartalma pedig 0,79% volt. Enzimes hidrolízis és 3 kDa molekulatömeg-határértékkel végzett ultraszűrés után a legnagyobb oldhatóság (21,17 százalék) és szabad aminocsoport-tartalom (14,17 százalék) a CH-Alcalase-ban volt megfigyelhető.<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

A fehérje-hidrolizátumok átlagos molekulatömege fontos tényező, amely meghatározza biológiai tulajdonságaikat [19]. Általában egy átlagos töredék MW-val<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>A 300 kDa a kollagént jelenti [20,21]. A kontroll (előkezelési minta), CH-Alcalase és CH-Alcalase relatív molekulatömeg-eloszlása<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

További információért kattintson ide

A CH-k aminosav-összetételét mutatjuk be (2. táblázat). A különböző proteázok CHS-ei eltérő aminosav-összetétellel és antioxidáns tulajdonságokkal rendelkeztek [23]. A kollagén aminosav-összetétele gazdag volt glicinben (Gly), prolinban (Pro) és glutaminsavban (Glu). A CH-k aminosavtartalma (CH-Alcalase és CH-Alcalase<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">cistanche szárEzekről az aminosavakról beszámoltak arról, hogy fokozzák az antioxidáns aktivitást a lipidekben való fokozott oldhatóságuk vagy a szabad gyökös reakciók révén [1,24].

2.3. A kollagén-hidrolizátumok antioxidáns és öregedésgátló hatása

A CH-k antioxidáns aktivitását 2,2'- és bisz-(3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav)(ABTS) gyökfogó aktivitási vizsgálattal és redukálóerő-vizsgálattal mértük. A kontroll (kollagén szuszpenzió), CH-Alcalase és CH-Alcalase ABTS gyökfogó aktivitása<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">cistanche salsa kivonatÁltalánosságban elmondható, hogy a peptidek antioxidáns aktivitását aminosavszekvenciájuk, a jelenlévő szabad aminosavak száma, a hidrolízis mértéke és a peptidek molekulatömege befolyásolhatja [26,27]. Különösen a kis molekulatömegű hidrolizátumok erősebb antioxidáns tulajdonságokkal rendelkeztek, mint a nagy molekulatömegű hidrolizátumok [2,26].

5. ábra: Kollagén-hidrolizátumok (CH) antioxidáns hatásai 2,2'- és bisz-(3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsavban) (ABTS) gyökfogó (A) és redukálóképesség (B) vizsgálatok. A különböző betűkkel (ac) jelölt adatok statisztikailag szignifikáns különbségeket mutatnak a különböző kezelések függvényében (p<0.05).>cistanche tubulosa előnyei és mellékhatásaiA különböző betűkkel (AD) jelölt adatok statisztikailag szignifikáns különbségeket mutatnak a koncentráció függvényében (p < 0,05).

A Cistanche öregedésgátló hatású

A vezérlő, CH-Alcalase és CH-Alcalase redukálóképessége<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">cistanche tubulosa kivonatHasonló megfigyelések arra utalnak, hogy a nyers kollagén-hidrolizátum hatékonyabban csökkentheti a teljesítményt, mint az ultraszűrt kollagénpeptidek [30].

A tirozináz, kollagenáz és elasztáz aktivitás gátlását használták az in vitro öregedésgátló hatásuk igazolására [20]. A kontroll CH-Alcalase és CH-Alcalase tirozináz, kollagenáz és elasztáz aktivitásának gátlásának eredményei<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elasztáz (nincs aktivitás). CH-Alcalase<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elasztáz (nincs aktivitás). Egy másik tanulmányban leírt hasonló tendenciák azt mutatták, hogy a kollagén-hidrolizátumok potenciálisan öregedésgátlóként és kollagenáz-inhibitorként hathatnak [20].

3. Anyagok és módszerek

3.1. Sertésbőr előkezelése

A sertésbőrt egy helyi beszállítótól (Szöul, Korea) vásárolták, és a sertésbőr minden látható zsírját és kötőszövetét borotvapengével eltávolították. Az ebben a vizsgálatban használt sertésbőrt egy sertéstől nyerték a biológiai eltérések minimalizálása érdekében. A levágott sertésbőrt 90 fokos vízben négyszer mostuk 1 percig, hogy eltávolítsuk a zsírt és a maradék anyagokat. A bőrt ezután 1 cm-es négyzet alakú részekre vágtuk, és desztillált vízben 3 percig porítottuk egy négyszárnyú turmixgép (CNHR-26, Bosch, Hong Kong, Kína) segítségével. A porított sertésbőrt nagy sebességgel (25, 000rpm) homogenizáltuk 5 percig Ultra Turrax (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Németország) alkalmazásával. Körülbelül 100 g sertésbőrkeveréket (50 százalékos végső szilárdanyag-tartalom) vákuumcsomagolásba csomagoltunk, és -20 fokon lefagyasztottuk, és 1 hónapon belül felhasználás céljából tároltuk.

3.2. Kereskedelmi proteázok és reagensek

Az Alcalase-t, a Flavorzyme-ot, a Neutrase-t és a Protamex-et a Novozymes-től (Bagsvaerd, Dánia) vásároltuk. A bromelaint és a papaint a Daesong Sangsától (Szöul, Korea) vásárolták. Az antioxidáns és öregedésgátló tesztekhez használt összes vegyszert a Sigma-Aldrich Chemical Company-tól (St. Louis, MS, USA) vásároltuk. A vizsgálatban használt összes többi reagens és oldószer analitikai minőségű volt.

3.3. Enzim hidrolízis

Az enzimes hidrolízist a használt élelmiszer-minőségű kereskedelmi enzimekhez fejlesztették ki (a gyártó ajánlásai alapján; 4. táblázat). Az elkészített sertésbőr keveréket desztillált vízzel 5 százalékos végső szilárdanyag-tartalomig hígítottuk. Ezt a koncentrációt úgy választottuk ki, hogy biztosítsa az áramlási viselkedést alacsony viszkozitása miatt. Az 5 százalékos sertésbőr keveréket kollagénszuszpenziónak (vagy kontrollnak) nevezték el. A kollagén szuszpenziót reaktorokban hidrolizáltuk hat élelmiszer-minőségű kereskedelmi enzim felhasználásával 1:100 enzim:szubsztrát arány mellett. Minta alikvot részeket (5 ml) vettünk 1, 3, 6, 12 és 24 óra hidrolízis után, és azonnal 100 °C-ra melegítettük 10 percig, hogy az enzimet inaktiváljuk, majd jeges vízzel 0 °C-ra hűtjük. A mintavétel ideje alatt a pH-t 1 M NaOH-val szabályoztuk. Lehűlés után a mintákat 4000 × g-vel centrifugáltuk 15 percig, és a felülúszót (kollagén hidrolizátum; CH) összegyűjtöttük. A CH-t tovább koncentráltuk ultraszűréssel, AmiconStirred Cells rendszerrel (katalógusszám: UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) 3 kDa molekulatömeg-határértékkel (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) 60 psi nitrogéngázon, 20 fokon.cistanche tubulosa véleményekAz elkészített CH-t fagyasztva szárítottuk és légmentesen záródó edényekben 20 fokon tartottuk az elemzésig.

3.4. A pH, a fehérje-visszanyerés, az oldhatóságmentes aminocsoport-tartalom és a termelési hozam meghatározása A minták pH-ját (kontroll és CH-k) pH-mérővel (S220 modell, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, USA) határoztuk meg. A fehérje visszanyerését vagy oldhatóságát a fehérjetartalom becslésével határoztuk meg bicinchoninsav (BCA) fehérjevizsgálattal, a gyártó utasításai szerint (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, USA), szérumalbumint használva standardként. A szabad aminocsoport-tartalmat 2,4,6-trinitrobenzolszulfonsav (TNBSA) vizsgálattal határoztuk meg a gyártó utasításai szerint (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), standardként L-leucint használva. A termelési terület kiszámításához nedves és száraz tömeget is mértünk.

3.5. Molekulatömeg-eloszlás

3.5.1. Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS-PAGE)

A minták (kontroll és CH-k) SDS-PAGE mintázatát egy korábban ismertetett módszer szerint mérték [10]. A mintákat 8 M karbamiddal hígítottuk (végső fehérjekoncentráció 4 mg/ml). Minden mintát összekevertünk egy rész KTG 020 mintapufferrel (10% glicerin, 2% SDS, 0,003% brómfenolkék, 5% -merkaptoetanol és 63 mM Tris-HCl, pH 6,8) a KOMA Biotech Inc.-től. ., (Szöul, Korea), és 2 percig forraljuk. A minta keveréket (20 μl) EzWayTM PAG 6 százalékos akrilamid gélekbe (KOMA Biotech Inc., Szöul, Korea) töltöttük. Az elektroforézist követően a gélt fixáltuk, megfestettük, és festésmentesítettük. A molekulatömegeket széles molekulatömeg-standardok segítségével határoztuk meg, 10 és 210 kDa között.

3.5.2. Gélpermeációs kromatográfia (GPC)

A minták molekulatömeg-eloszlását egy korábban ismertetett módszer szerint határoztuk meg [3]. A gélpermeációs kromatográfiát (GPC) egy YL9100 nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) rendszerrel (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Korea) végeztük, amely három Ultrahydrogel TM 120 oszloppal volt felszerelve. 7,8 × 3000 mm) a Waterstől (Milford, MA, USA). A mozgófázis desztillált/ionmentesített víz volt 1,0 ml/perc áramlási sebességgel, és a kollagén peptidek molekulatömeg-eloszlását YL 9100 törésmutató detektorral követtük 40 °C-on. Egy molekulatömeg-standard készlet (106-67,500 Da, Polymer Standards Service, Mainz, Németország) szolgált szabványként.

3.6. Amin0 Savösszetétel

A minták aminosav-összetételét {{0}}fluorenil-etoxi-karbonil- (FMOC)-kloriddal és o-ftál-dialdehiddel (OPA) végzett derivatizálással elemeztük Ultimate 3000 HPLC rendszeren ( Dionex, Idstein, Németország) két detektorral (fluoreszcens detektorral és UV detektorral), valamint VDSpher 100 C18-E (4,6 mm × 150 mm, 3,5 μm részecskeméret, VDS Optilab, Berlin, Németország) felszerelt. Az injektált térfogat 1,0 liter volt, és a mozgófázis két eluensből állt: 40 mM kétbázisú nátrium-foszfát (pH 7) és 45 % (o/v) acetonitril/45 % (v/v) metanol oldat. UV-detektor és fluoreszcencia detektor összekapcsolásával az ultraibolya sugarakat 338 nm-en, az OPA-származékot 450 nm-es emissziós hullámhosszon és 340 nm-es gerjesztési hullámhosszon, az FMOC-származékot 305 nm-en és 26 nm-es emissziós hullámhosszon detektáltuk. nm gerjesztési hullámhossz. A kalibráláshoz aminosavkeveréket (1,0 nmol ml-l minden aminosavhoz) használtunk.

ahol Atotalaminosav volt a tartalom a 6 M HCl-val végzett hidrolízis után (130 fokon 24 órán át), és az Afree aminosav a desztillált vízben való szolubilizálás után.

3.7. Az antioxidáns aktivitás értékelése

3.7.1.2,2'-Azino-bisz-(3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav) (ABTS) gyökfogó aktivitás

A CH ABTS gyökfogó aktivitását egy korábban ismertetett módszer szerint mérték [20]. Az ABTSradikális kationt úgy állítottuk elő, hogy az ABTS törzsoldatot (70 mM) kálium-perszulfáttal (2,45 mM) összekevertük, és a kapott keveréket sötétben, szobahőmérsékleten egy éjszakán át inkubáltuk. Az ABTS gyökös oldatot 50 mM foszfáttal pufferolt sóoldattal (pH7,4) hígítottuk 0,70±0,02 abszorbanciaszintre 734 nm-en. Minden mintából 1 ml hígított ABTS gyökoldatot kevertünk össze. Tíz perccel később a minta (A minta mintával) és a kontroll (A kontroll minta nélkül) abszorbanciáját 734 nm-en mértük. Az ABTS gyökfogó aktivitását ( százalék ) a következőképpen számítottuk ki:

3.7.2. Teljesítménycsökkentés

A CH redukáló erejét egy korábban ismertetett módszer szerint mérték [20]. Mindegyik mintából 1 ml-t összekevertünk 1 ml 0,2 M foszfátpufferrel (pH6,6) és 1 ml 1%-os kálium-ferricianiddal. Az elegyet 5 °C-on 20 percig inkubáltuk, majd 1 ml 10%-os triklór-ecetsavat adtunk hozzá. Ebből az inkubációs elegyből 2 ml-es alikvot részt összekeverünk 2 ml desztillált vízzel és 0,4 ml 0,1%-os vas-kloriddal. 10 perc elteltével a kapott oldat abszorbanciáját 700 nm-en mértük spektrofotométeren (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Korea).

3.8. Az öregedésgátló hatás értékelése

3.8.1. A tirozináz aktivitás gátlása

A tirozináz gátlást egy korábban leírt módszerrel határoztuk meg [20]. Előkeverék oldat, amely 70 μl 0,1 M foszfát puffert (pH 6,8), 30 ul gomba tirozinázt (167 U/ml) tartalmaz; Sigma-Aldrich, USA), és 20 liter mintát 5 percig 30 °C-on inkubáltunk. Ezután körülbelül 100 μl 3,{14}}dihidroxi-fenil-L-alanint (L-DOPA) adtunk hozzá az enzimatikus reakció elindításához. Az abszorbanciát 492 nm-en 20 percig mértük az L-DOPA képződés nyomon követésére. Pozitív kontrollként aszkorbinsav (1 mg/ml) szolgált, amelyet összehasonlításra használtunk. A gátlási arányt a következőképpen számítottuk ki:

ahol A jelentése tirozinázzal alkotott keverék minta nélkül; B egy minta és tirozináz nélküli keverék; C minta és tirozináz keveréke, D pedig minta keveréke, de tirozináz nélkül.

3.8.2. A kollagenáz aktivitás gátlása

A kollagenáz gátlást egy korábban leírt módszerrel határoztuk meg [20]. Röviden, 50 mM tricin puffert (pH 7,5), amely 10 mM kalcium-kloridot és 400 mM nátrium-kloridot tartalmazott. Ezután 50 ml 1,0 mM N-[3-(2-furil)akriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala oldatot és 0,2 mg/ml kollagenázt (Clostridium histolyticum, IA típusú, 0. {19}} FALGPA U/mg szilárd; Sigma-Aldrich, USA) adtunk hozzá minták jelenlétében és hiányában. A reakciót 6%-os citromsav hozzáadásával állítottuk le. A reakcióelegyet etil-acetát hozzáadásával elválasztjuk. A felülúszó abszorbanciáját 345 nm-en mértük. Pozitív kontrollként aszkorbinsav (1 mg/ml) szolgált, és összehasonlításra használtuk. A gátlás százalékát a következőképpen számítottuk ki:

ahol A keverék kollagenázzal minta nélkül; B minta és kollagenáz nélküli keverék; C minta és kollagenáz keveréke, D pedig minta keveréke, de kollagenáz nélkül.

3.8.3.Az elasztáz aktivitás gátlása

Az elasztáz gátlást egy korábban leírt módszerrel határoztuk meg [20]. N-szukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) szolgált szubsztrátként, és a p-nitroanilin felszabadulását figyelték 2{{20}} perc 25 fokon. A IV-es típusú sertés hasnyálmirigy elasztáz (PPE) egy részét (1 ug) feloldottuk 1 ml 0,2 M Tris-HCl pufferben (pH 8.{27}}). A reakcióelegy 0,2 M Tris-HCl puffert (pH 8,0), 1 ppm PPE-t, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA-t, a mintát és a fent említett szubsztrátot tartalmazott. Az abszorbanciát 214 nm-en mértük. Az aszkorbinsav (1 mg/ml) az összehasonlításhoz használt pozitív kontrollként szolgált. A gátlási arányt a következőképpen számítottuk ki:

ahol A keverék elasztázzal és minta nélkül; B minta és elasztáz nélküli keverék; A C minta és elasztáz keveréke, D pedig elasztáz nélküli minta keveréke.

3.9. Statisztikai elemzés

Az adatok átlag±szórásként (SD) vannak megadva. A csoportok közötti különbségek szignifikanciáját többszörös összehasonlítással és varianciaanalízissel (ANOVA), majd a Tukey becsületes szignifikáns különbség (HSD) teszttel értékeltük. A 0,05-nél kisebb p-értékkel rendelkező különbségeket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.

4. Konklúziók

Ebben a vizsgálatban a kollagén hidrolizátumokat, egy funkcionális élelmiszer-összetevőt, sikeresen állítottak elő enzimatikus hidrolízissel, amelyet ultraszűrés és tisztítás követett. Különféle kereskedelmi forgalomban kapható proteázokat teszteltek potenciális hasznosságuk szempontjából a megfelelő kollagén-hidrolizátumok előállításában. Az Alcalase által hidrolizált CHS volt a leghatékonyabban hidrolizált CH, és az ultraszűrés, majd a tisztítás hatékony volt az alacsony molekulatömegű aktív peptidek előállításában. Az eredmények azt mutatták, hogy a CH-k kiváló antioxidáns és kollagenáz gátló aktivitást mutattak. Ezért az ezzel a vizsgálattal kapott CH-k felhasználhatók az élelmiszer-, kozmetikai- vagy gyógyszeriparban természetes adalékanyagként, amely antioxidáns és öregedésgátló tulajdonságokkal rendelkezik. Hasznosnak bizonyulhatnak további vizsgálatok, amelyek az emberi bőrben lévő aktív peptidek öregedési aktivitásának in vivo értékelését foglalják magukban.

Ez a cikk a Molecules 2019, 24, 1104; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules