Absztrakt

Célkitűzés:Annak a molekuláris mechanizmusnak a vizsgálatára, amellyel aCistanche-alapú Bushen Kaixuan Tongluo Formulavesevédő hatást fejt ki diabéteszes vesebetegségben (DKD) szenvedő egerekben azáltal, hogy szabályozza a ciklikus adenozin-monofoszfát (cAMP) jelátviteli útvonalat.

Mód:Harminc specifikus patogénmentes (SPF) hím db/db egeret alkalmaztunk adaptív módon 3 hétig. Azokat az egereket, amelyeknél a véletlenszerű farokvénás vércukorszint 11,1 mmol·L-1 vagy annál nagyobb, és a vizelet mikroalbumin/kreatinin aránya 30 mg·g-1 vagy annál nagyobb, sikeresen modellezettnek tekinthető. A modellezett egereket véletlenszerűen öt csoportba osztották (csoportonként n=6): modellcsoport, alacsony, közepes és nagy dózisú Bushen Kaixuan Tongluo Formula csoport (7, 14 és 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) és egy irbezartán csoport (20 mg·kg⁻½). Hat db/m egeret használtunk vakcsoportként.

A kezelés 12 hétig tartott intragasztrikus adagolással. Az általános állapotokat, a testsúlyt és a vesefunkció mutatóit figyelték. A beavatkozást követően éhomi vércukorszintet (FBG) mértek. A szérum kreatinin (SCr), vér karbamid-nitrogén (BUN), vizelet mikroalbumin (uALB), albumin-kreatinin arány (ACR), aszpartát-aminotranszferáz (AST), alanin-aminotranszferáz (ALT), összkoleszterin (TC), trigliceridek (TG), inzulin-glikozil-szérum (LEP), inzulinglikozil-szérum (LEP) meghatározására egy automatikus biokémiai analizátort használtak.

A veseszövet hisztopatológiáját HE, PAS és Masson-féle trikróm festéssel értékeltük. Az immunhisztokémia (IHC) a protein kináz A (PKA) és a cAMP válaszelem-kötő fehérje (CREB) expresszióját detektálta. Western blot a PKA, a foszforilált PKA (p-PKA), a CREB, a foszforilált CREB (p-CREB) és a Bcl-2 szintjét elemezte. Valós idejű PCR-t használtunk a PKA, CREB és Bcl-2 mRNS expressziójának értékelésére.

Eredmények:Az üres csoporthoz képest a modellcsoport letargiát, csökkent aktivitást és szignifikánsan megnövekedett testsúlyt mutatott (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

A modellcsoporttal összehasonlítva a tápszerrel kezelt csoportok általános állapota javult, és a testsúly csökkenő tendenciát mutatott. A BUN, uALB, ACR, TC, GSP és INS jelentősen csökkent (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

A kórszövettani elemzés kimutatta, hogy a modellcsoport klasszikus DKD-jellemzőket mutatott, mint például a glomeruláris alapmembrán megvastagodása, a mezangiális mátrix expanziója és a kollagén lerakódása a tubulointerstitiumban. Ezek a kóros elváltozások minden kezelési csoportban enyhültek.

Az IHC eredmények szignifikánsan csökkent p-PKA és p-CREB expressziót mutattak a modellcsoportban (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

A Western blot azt mutatta, hogy a p-PKA/PKA, p-CREB/CREB és Bcl-2 szintek szignifikánsan csökkentek a modellcsoportban (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

A valós idejű PCR megerősítette a PKA, CREB és Bcl-2 mRNS csökkenését a modellcsoportban (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Következtetések:ACistanche-alapú Bushen Kaixuan Tongluo Formulajavítja a máj és a vese működését, korrigálja a lipid és glükóz anyagcsere zavarait db/db egerekben. Vesevédő hatása összefügg a felszabályozással acAMP/PKA/CREB jelátviteli útvonal, amely csökkenti a vesefibrózist és az oxidatív stresszt, ezáltal védi a veseműködést.

 

 

 

 

Cistanche-alapú Bushen Kaixuan Tongluo Formula aa máj és a vese működésének javítása

További részletekért kattintson a képre

Kulcsszavak

Diabéteszes vesebetegség (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formula;
Cistanche;
cAMP jelátviteli útvonal;
Hagyományos Kínai Orvoslás (TCM)

 

Cistanche alapú gyógymód

 

Háttér

A diabéteszes vesebetegség (DKD), a cukorbetegség egyik legsúlyosabb mikrovaszkuláris szövődménye, világszerte a végstádiumú vesebetegség (ESRD) vezető oka. Növekvő elterjedtsége jelentős kihívás elé állítja a közegészségügyi rendszereket. A DKD jellemzői közé tartozik a progresszív glomeruláris mezangiális mátrix expanzió, a tubulointerstitialis fibrózis és a perzisztáló proteinuria. A patogenezis magában foglalja a glükóz- és lipidanyagcsere-zavarok, az oxidatív stressz és a különböző jelátviteli útvonalak rendellenes aktiválódásának komplex kölcsönhatásait.

A jelenlegi első vonalbeli kezelések elsősorban a renin-angiotenzin rendszer (RAS) gátlókat tartalmazzák, amelyek segítenek csökkenteni a glomeruláris hipertóniát és késleltetni a korai proteinuriát. Mindazonáltal kevésbé hatékonyak a megállapított tubulointerstitialis fibrózisban szenvedő betegeknél, 30-40%-uknál ESRD-vé fejlődnek.

Ezért az új DKD mechanizmusok feltárása és a hatékony, biztonságos terápiás célpontok megtalálása sürgős klinikai és tudományos érdeklődésre tart számot. A hagyományos orvoslás többcélú szabályozást kínál kevesebb mellékhatással, így alkalmasabb a krónikus vesebetegségek hosszú távú alkalmazására. ACistanche-alapú Bushen Kaixuan Tongluo Formulaegy empirikusan validált gyógynövénykeverék a DKD kezelésére, amely korábbi klinikai vizsgálatokban kimutatta, hogy javítja a tüneteket és késlelteti a betegség progresszióját.

Molekuláris mechanizmusa, különösen a kulcsfontosságú jelátviteli útvonalakkal való kölcsönhatása azonban továbbra is kevéssé ismert. A bizonyítékok arra utalnak, hogy acAMP/PKA/CREBvesefibrózist mérsékelheti, de a kapcsolódó vizsgálatok korlátozottak. Ez a tanulmány erre az útra összpontosít, hogy megvilágítsa, hogyanCisztanche alapú formulajavítja a DKD-t.

 

Anyagok és módszerek

1. Állatok

30 db db/db hím egér (7 hetes, SPF fokozatú, testtömeg: 37,58±0,62 g)

6 db/m-es korú egér (testsúly: 24,38±0,35 g)

Beszállító: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licenc: SCXK (Su) 2020-0009 és SYXK (Jing) 2020-0033

Etikai jóváhagyás: BUCM2024041506-2090

2. Gyógynövény-összetétel

A Bushen Kaixuan Tongluo formula a következőket tartalmazza (grammban):
Cistanche(a nyers Astragalus helyett) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officina 20, laegax0, Rosta Eurvi20 (sütve) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Valamennyi gyógynövényt engedéllyel rendelkező gyógyszerész hitelesített, és vizes főzet segítségével készítették elő, vákuumban redukálták, és porlasztva porrá szárították. A végső koncentráció 1,43 g · ml–1 nyers gyógynövény volt.

3. Reagensek és műszerek

(A részletes listát lásd az eredeti szövegben.)

 

Kísérleti tervezés

Modell értékelése

3 hét adaptív táplálás után a 11,1 mmol·L⁻1 vagy annál nagyobb véletlenszerű vércukorszinttel és 30 mg·g⁻1-nél nagyobb vagy annál nagyobb ACR-értékkel rendelkező egereket sikeres DKD-modelleknek tekintettük.

Csoportosítás és adagolás

Üres csoport (db/m): víz

Modellcsoport: víz

Alacsony dózis: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Közepes dózis: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Nagy dózis: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbezartán csoport: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Időtartam: 12 hét ingyenes etetés és ivás mellett.

---

Mintagyűjtés és -elemzés

Vizelet:24 óra alatt összegyűjtjük, centrifugáljuk és –20 fokon tároljuk

Vér:Orbitális extrakcióval gyűjtik össze, centrifugálják és –80 fokon tárolják

Vese:Patológiára (formalin fixált), fehérjére (folyékony nitrogén) és génexpresszióra (fagyasztott) osztva.

---

Kimutatási módszerek

Biokémiai elemzés:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP és uALB

Szövettan:HE, PAS, Masson festés

IHC:p-PKA és p-CREB fehérje expressziója

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktin

Valós idejű PCR:A PKA, CREB és Bcl-2 mRNS expressziója

---

1. táblázat: Primer szekvenciák

Gén	Forward Primer (5′–3′)	Fordított alapozó (5′–3′)	Hossz (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95