A Cistanche Tubulosa reaktív oxigénfajok által közvetített apoptózist vált ki az elsődleges és metasztatikus emberi vastagbélráksejtekben

ABSZTRAKT

A vastagbélrák a harmadik leggyakoribb rák világszerte. A hagyományos terápiák mérsékelt hatékonyságot mutattak súlyos mellékhatásokkal, ezért sürgősen szükség van biztonságosabb alternatívákra. Ebben a tanulmányban a Cistanche tubulosa-t, a helyi nevén Thanoon-t potenciális fitoterápiás stratégiának tekintették a hagyományos orvoslásban ismert magas terápiás potenciálja és a közel-keleti régióban való széles körű elterjedése miatt. A bioaktív vegyületeket porított Cistanche tubulosa-ból extraháltuk, és rákellenes tulajdonságaikat négy vastagbélrák sejtvonal ellen tesztelték, köztük kettő az elsődleges daganatból (CaCo2 és HCT116) és kettő a metasztatikus helyről (LoVo és SW620).

Vizsgálták a Cistanche tubulosa hatását az apoptózis és a celluláris redox homeosztázis indukciójára is. A Cistanche tubulosa az összes vizsgált ráksejtvonal koncentráció- és időfüggő proliferációjának több mint 60%-os gátlását mutatta 72 órás kezelés után 1 mg/ml nyers kivonattal. A proliferáció gátlását az apoptózis indukciója, az intracelluláris reaktív oxigénfajták termelése és a mitokondriális szuperoxidok jellemezték. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a Cistanche tubulosa ígéretes jelölt az additív vastagbélrák elleni terápia számára. Ez az első olyan tanulmány, amely a Cistanche tubulosa rákellenes bioaktivitását mutatja a vastagbélráksejtekkel szemben.

Kattintson a gyógyászati ​​terápia a cistanche növényi kivonat termékére

Rövidítések:

7-AAD, 7-Amino-actinomycin D; CTE, Cistanche tubulosa kivonat; EMEM, az Eagle's Minimum Essential Medium; FBS, magzati szarvasmarha-szérum; DCF, 2,7-diklórfluoreszcein; DCFH-DA, 2,7- diklór-dihidrofluoreszcein-diacetát; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle's Medium; DMSO, dimetil-szulfoxid; MTT, 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazólium; PE, Phycoerythrin; RFU, relatív fluoreszcencia egységek; ROS, reaktív oxigénfajták

BEVEZETÉS

A vastag- és végbélrák világszerte az egyik leggyakoribb daganatos megbetegedés (Brenner et al., 2014), előfordulása folyamatosan növekszik, 2035-ben 2,4 millióra becsülik a korszerű étrendnek és életmódnak, valamint a csökkent fizikai aktivitásnak köszönhetően. A jelenlegi erőfeszítések nem elegendőek a vastag- és végbélrák jelenlegi járványa elleni küzdelemhez, ezért új megközelítésekre van szükség a hatékony megelőzéshez és kezeléshez, beleértve az életmód megváltoztatását és biztonságosabb alternatív beavatkozásokat, például a fitoterápiát (Weidner et al., 2015). A fitoterápia, a gyógynövények használata betegségek kezelésére az ókori emberi történelem elkerülhetetlen része. A gyógynövényeket régóta használják alternatív kezelési forrásként a rákos megbetegedések kezelésére, amelyek a hagyományos gyógyászatban használt rákellenes szerek több mint hatvan százalékát teszik ki (Balunas és Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). A legismertebb példák közé tartoznak a Catharanthus roseus G. Don-ból származó kivonatok. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) és Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg és Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Számos gyógynövénykivonat és fitokemikália bizonyítottan daganatellenes hatást fejt ki vastag- és végbélrákban, ami a reaktív oxigénfajták (ROS) termelésének indukciójának és a rákos sejtek ezzel összefüggő apoptózisának tulajdonítható, mint a Melissa officinalis kivonatai esetében (Weidner és mtsai, 2015).

A fitoterápiás jelöltek közül a Cistanche tubulosa, egy Orobanchaceae parazita sivatagi növény (Jiang et al., 2009), amely Afrika, Ázsia és a mediterrán régió száraz és félszáraz vidékein széles körben elterjedt, értékes gyógyászati ​​tulajdonságokkal rendelkezik. A Cistanche tubulosa széles körben használatos a hagyományos gyógyászatban, és azt feltételezik, hogy gyógyító hatása van veseelégtelenség, kóros leucorrhoea, metrorrhagia, női meddőség és időskori székrekedés esetén (Jiang et al., 2009). Hagyományos gyógyászati ​​felhasználása mellett fontos gyógyászati ​​​​felhasználás A Cistanche Tubulosa tulajdonságait intenzíven tanulmányozták az elmúlt évtizedben, beleértve az érrelaxáns (Yoshikawa és mtsai, 2006), a májvédő (Morikawa és mtsai, 2010), az antihiperglikémiás és hipolipidémiás hatásokat (Xiong et al., 2013). A Cistanche Tubulosa-t az immunrendszer erős erősítőjeként, a csontképződés elősegítőjeként, valamint öregedés- és fáradtsággátló szerként is javasolták (Xu et al., 2014). Ezenkívül kimutatták, hogy a Cistanche tubulosa kivonat blokkolja az amiloid lerakódását az Alzheimer-kór modelljében (Wu et al., 2015). Különféle terápiás alkalmazásai ellenére a Cistanche Tubulosa potenciális rákellenes szer hatását még nem vizsgálták.

Jelen munkában a Cistanche Tubulosa rákellenes hatását vizsgáltuk két primer és két metasztatikus vastagbélrák sejtvonalon, valamint a hatás mögött meghúzódó lehetséges mechanizmusokat.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Növényi kivonat gyűjtése és elkészítése, a Cistanche tubulosa mintáit egy katari sivatagi területről gyűjtöttük 2014-ben, és a növény eredetiségét egy herbológus igazolta. Az utalványminták az ADLQ Toxikológiai és Többcélú Osztályán vannak archiválva. A napon szárított növénymintákat Retsch Knife Mill Grindomix GM300-zal finom porrá őröltük. 20 gramm port extraháltunk 200 ml ultratiszta vízzel egy éjszakán át 37 fokos forgó rázógépen 200 fordulat/perc sebességgel. A nyers Cistanche tubulosa kivonatokat (CTE) 30 percig centrifugáltuk 8000 fordulat/perc sebességgel, hogy az oldhatatlan vegyületeket ülepítsük, a felülúszót összegyűjtjük, és fagyasztva szárítjuk Labconco Freezone 6 plus Freeze dryer alkalmazásával. A szárított kivonatot Dulbecco's Modified Eagle's Mediumban (DMEM, SIGMA, Németország) 20 mg/ml koncentrációra oldottuk fel, majd sterilen szűrtük egy 0{12}} mikronos membránszűrőn.

Sejtvonalak és sejtkarbantartás

A CaCo2, SW620 és LoVo humán vastagbélkarcinóma sejtvonalakat a Cell Lines Service-től (CLS, Eppelheim, Németország) szereztük be, míg a HCT 116 sejtvonalat a Katari Egyetem Biológiai és Környezettudományi Tanszékének ajándéka kapta. A CaCo2 és a HCT11 a vastagbél karcinóma elsődleges helyéről, míg az SW620 és a LoVo a metasztatikus helyről származtak. Az SW620, HCT116 és LoVo sejteket DME tápközegben, míg a CaCo2 sejteket Eagle's Minimum Essential Mediumban (EMEM, SIGMA, Németország) tenyésztettük és tartottuk fenn. A sejteket egyrétegű tenyésztéssel tenyésztettük 37 fokon 10% magzati szarvasmarha-szérummal (FBS, SIGMA, Németország) és 1% penicillin/sztreptomicinnel (SIGMA, Németország) kiegészített tápközegben 5% szén-dioxidot tartalmazó párásított atmoszférában.

Sejtéletképességi vizsgálat

A {{0}}[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazólium (MTT) tesztet használtuk a citotoxikus aktivitás értékelésére. CTE a korábban leírtakhoz hasonlóan (Jaganjac et al., 2010). A CaCo2, HCT116, SW620 és LoVo sejtek oltási sűrűsége 96-lyuklemezeken tenyésztett 104 sejt/lyuk volt. A sejteket 24 órával a kezelés előtt 10% FBS-sel kiegészített tápközegbe szélesztettük. 24 óra elteltével a tápközeget eltávolítottuk, és a sejteket 0, 0,25, 0,5, 1 és 2 mg/ml CTE-vel kezeltük 24, 48 és 72 órán keresztül 37 °C-on, 5% CO2-ot tartalmazó párásított atmoszférában. A CTE-kezelés után a tápközeget eltávolítottuk, és 40 µl MTT-oldatot (0,5 mg/ml) adtunk minden egyes lyukba.

3 órás inkubálás után az MTT oldatot eltávolítottuk, a formazán terméket dimetil-szulfoxidban (DMSO, SIGMA, Németország) oldottuk, és az abszorbanciát 590 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Svájc). .

Apoptózis vizsgálat

A CaCo2, HCT116, SW620 és LoVo sejtekben az apoptózist PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I segítségével detektáltuk, 7-Amino-Actinomycin D-vel (7-AAD) létfontosságú festékként (Becton). Dickinson International, Belgium) a gyártó utasítása szerint. Röviden, a sejteket 24-lyukú lemezekre oltottuk 5×104 sejt/lyuk sűrűséggel 10 százalékos FBS-sel kiegészített megfelelő tápközegben 24 órán keresztül a CTE hozzáadása előtt (0, 0,5). vagy 1 mg/ml). 24 CTE inkubációt követően a sejteket összegyűjtöttük, kétszer mostuk hideg foszfáttal pufferolt sóoldattal, és phycoerythrin (PE) Annexin V-vel és 7-AAD-vel festették 15 percig szobahőmérsékleten, sötétben. A megfestett sejteket 1 órán belül elemeztük áramlási citometriával FACS alkalmazásával. Aria III áramlási citométer és FACSDiva szoftver (Becton Dickinson) alacsony áramlási sebességgel, minimum 104 sejttel. A sejtek 4 órás kezelését 6 µM kamptotecinnel (SIGMA) alkalmaztuk pozitív kontrollként a vizsgálathoz.

Intracelluláris ROS termelés

Az intracelluláris ROS termelést 2,7- diklór-dihidrofluoreszcein-diacetáttal (DCFH-DA, SIGMA, Németország) vizsgáltuk. A DCFH-DA egy nem fluoreszcens próba, amelyet intracelluláris ROS-sel fluoreszcens 2,7- diklorofluoreszcein (DCF) vegyületté oxidálnak (Poljak-Blazi et al., 2011). A DCFHDA vizsgálatot az előzőekben leírtakhoz hasonlóan végeztük (Cindric és mtsai, 2013; Poljak-Blazi et al., 2011). Röviden, a CaCo2, HCT116, SW620 és LoVo sejtek oltási sűrűsége 96-lyuk fekete lemezeken tenyésztett 104 sejt/lyuk volt. A sejteket 10% FBS-sel kiegészített tápközegbe szélesztettük 24 órán át.

A kezelés előtt a sejteket 10 µM DCFH-DA-val inkubáltuk 37 °C-on 30 percig 5% CO2/95% levegő mellett. Ezután a sejteket mostuk és{{0}}, 0,5 és 1 mg/ml CTE-vel kezelve fenolvörös nélküli tápközegben. Az intracelluláris ROS képződést 25 órán keresztül folyamatosan figyeltük 37 fokos hőmérsékleten és 5 százalékos CO2-tartalom mellett felső fluoreszcenciával és gázvezérlő modullal ellátott mikrolemez-leolvasóval (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Svájc). A fluoreszcencia intenzitását 500 nm-es gerjesztési hullámhosszon és 529 nm-es emissziódetektálással mértük. A tetszőleges egységek, a relatív fluoreszcencia egységek (RFU) közvetlenül a fluoreszcencia intenzitásán alapultak

Mitokondriális szuperoxid képződés

A CTE azon képességét, hogy a mitokondriumok szuperoxidot termeljenek, sejtpermeábilis, mitokondriumokra célzott MitoSOX Red szondával (Life Technologies) és Hoechst 33342-vel a nukleáris festéshez (Life Technologies) becsülték meg. CaCo2, HCT116, SW620 és LoVo sejteket 96-lyuklemezekre oltottunk 104 sejt/lyuk sűrűségben 10 százalékos FBS-sel kiegészített táptalajban 24 órán keresztül. . A sejteket ezután 4 µM MitoSOX-szal és 2 µM Hoechst 33342-vel töltöttük 20 percre, a felesleges festéket mostuk, és a lyukakat 0, 0,5 és 1 mg/ml CTE-vel kezeltük 24 órán át 37 fokos hőmérsékleten és 5 százalékos CO2-tartalom mellett. A fluoreszcencia intenzitását 510 nm-es gerjesztési hullámhosszon és 580 nm-es emissziós detektálással mértük MitoSOX esetén, 350 nm-es gerjesztési hullámhosszon és 461 nm-es emissziós detektálással Hoechst 33342-vel, PROfinite fluoreszcencia Tecan00 olvasóval. AG, Svájc)

Statisztikai analízis

A leíró statisztikát az átlag plusz /− SD formájában mutattuk be. A csoportok közötti különbségek jelentőségét Student t-próbával és Chi-négyzet próbával értékeltük. Ha kettőnél több csoportot hasonlítottunk össze, egyoldalú ANOVA-t alkalmaztunk megfelelő post hoc teszteléssel. A Mircosoft Windows rendszerhez készült SPSS 11.{5}}1-et használták. A 0,05-nél kisebb P értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.

EREDMÉNYEK

A CTE humán vastagbélrák sejtvonalak proliferációjára gyakorolt ​​hatását az 1. ábra mutatja be. Minden vizsgált CTE koncentráció erős gátló hatást mutatott a CaCo2 sejtvonalra koncentrációtól és időtől függő módon (1A. ábra). A hetvenkét órás CTE kezelés több mint 60 százalékkal gátolta a CaCo2 sejtek növekedését a kontrollhoz képest (p < 0,05 minden koncentrációra). A CTE-kezelésnek a HCT116 sejtek növekedésére gyakorolt ​​szignifikáns hatását minden időkben a két legmagasabb koncentrációnál (1 mg/ml és 2 mg/ml) is kimutatták, amely utóbbi koncentrációnál több mint 70 százalékos csökkenést ért el (1B ábra, p. < 0,05).

Bár a két alacsonyabb CTE-koncentráció ({{0}},25 és 0,5 mg/ml) jelentősen csökkentette a sejtek HCT116 növekedését 24 óra elteltével (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{{10}}5). A proliferáció időtől és koncentrációtól függő CTE-gátlását a LoVo sejtekben a legmagasabb koncentrációnál is több mint 60 százalékkal igazolták (p < 0.05) (1C. ábra) , és mind a négy vizsgált CTE-koncentráció csökkentette az SW620 sejtek növekedését 48 óra elteltével (1D ábra, p < 0,05 az összesre). 72 órás kezelés után ugyanez a hatás csak a két legmagasabb koncentrációnál volt megfigyelhető (p < 0,05), míg a 0,25 és 0,5 mg/ml koncentrációk nem mutattak szignifikáns hatást a kontrollhoz képest (p > 0,05). A 0,5 és 1 mg/ml CTE-kezelés hatását az apoptózis indukálására tovább vizsgáltuk mind a négy sejtvonalon (2. ábra). A korai apoptózisban lévő sejtek megnövekedett számát mutatták ki HCT116-ban és LoVo-ban 24 órás 0,5 mg/ml-es kezelést követően (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

A CTE intracelluláris ROS-termelést indukáló képességét a 3. ábra szemlélteti. Három órával a CTE-kezelés után az intracelluláris ROS-termelés erős növekedést mutatott minden sejtvonalban (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

1. ábra:

A Cistanche tubulosa hatása a vastagbélrák sejtvonalak életképességére. A (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo és (D) SW620 sejtek MTT-vizsgálatával mért sejtek életképességét a kontroll, kezeletlen vastagbélrák sejtvonal százalékában mutatjuk be. Az átlagértékek (±SD) a reprezentatív kísérlet 5 ismétlésére vonatkoznak: (*) szignifikancia p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

2. ábra:

A Cistanche tubulosa vízkivonat apoptózist indukál az emberi vastagbélrák sejtjeiben. Az (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo és (D) SW620 sejtek Annexin-V-FITC áramlási citometriás analízisét a kezeletlen vastagbélrák sejtvonal százalékában mutatjuk be. A reprezentatív kísérlet 3 ismétlésére vonatkozó átlagértékek (±SD) a következők: (*) szignifikancia p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

3. ábra:

A Cistanche tubulosa vízkivonat idő- és dózisfüggően indukálja az intracelluláris ROS termelést. Az (A) CaCo2-, (B) HCT116-, (C) LoVo- és (D) SW620-sejtekben DCFH-DA vizsgálattal mért ROS-termelés átlagos RFU-értékként (±SD) jelenik meg a megfelelő 5-replikátumokra. reprezentatív kísérlet. (*) Jelentőség p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

4. ábra:

A Cistanche tubulosa vízkivonat mitokondriális szuperoxid termelést indukál az emberi vastagbélrák sejtekben. Az A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo és (D) SW620 sejtekben a mitokondriumra célzott MitoSOX Red próba fluoreszcencia intenzitása a kontroll, kezeletlen vastagbélrák sejtvonal százalékában van megadva. Az átlagértékek (±SD) a reprezentatív kísérlet 5 ismétlésére vonatkoznak: (*) szignifikancia p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

VITA

Bár a korábbi tanulmányok a Cistanche tubulosa számos gyógyászati ​​tulajdonságáról számoltak be, ez az első jelentés a rosszindulatú sejtekben lévő antiproliferatív hatásáról. A vízzel, egy erősen poláros oldószerrel extrahált Cistanche tubulosa bioaktív vegyületek erős rákellenes bioaktivitást mutattak. Korábban összehasonlítottuk a vízben oldott Cistanche tubulosa hatékonyságát más oldószerekkel, például metanollal és etil-acetáttal, de a vizes kivonatok mutatták a legígéretesebb rákellenes hatást (az adatokat nem mutatjuk be).

Kimutattuk, hogy a CTE 1 mg/ml és 2 mg/ml koncentrációban képes gátolni mind az elsődleges, mind a metasztatikus vastagbélrák sejtvonalak növekedésének 60 százalékát, ami feltárja a Cistanche tubulosa potenciálisan fontos szerepét a vastagbélrák kezelésében. A normál sejtekhez képest a rákos sejteket általában a redox homeosztázis zavara jellemzi, és a jelenlegi rákellenes terápiák általános stratégiája a sejt oxidatív stresszének növelése (Yang et al, 2013). Bár a fiziológiásan alacsony ROS-szintek fontos szerepet játszanak jelzőmolekulákként, a túlzott ROS-termelés hozzájárulhat a rák instabilitásához és rosszindulatú daganataihoz (Liou és Storz, 2010). Paradox módon a sejt redox homeosztázisának ez az egyensúlyhiánya sebezhetőbbé teszi a rákos sejteket a ROS által kiváltott sejthalálra (Jaganjac et al., 2008; Nogueira és Hay, 2013). A CTE ebben a tanulmányban ismertetett antiproliferatív hatását a kivonatban lévő ismert és ismeretlen vegyületek különböző extracelluláris és intracelluláris mechanizmusai közvetíthetik, amelyek több útvonalat céloznak meg, amelyek alapvető szerepet játszanak az apoptózisban. A sejthalál különböző módjai közötti különbségtétel érdekében megvizsgáltuk a megfigyelt CTE által kiváltott citotoxicitásért felelős lehetséges mechanizmust.

Adataink azt mutatják, hogy a CTE növeli az intracelluláris ROS termelést és ennek következtében a ROS által kiváltott sejthalált. A sejt redox állapota az apoptózis szabályozásában is döntő szerepet játszik, és a mitokondriális elektrontranszport lánc a sejtes ROS képződés egyik fő helye (Trachootham és mtsai, 2008). Ezenkívül az intracelluláris ROS sejtes apoptózist okozhat mitokondrium-függő és független útvonalakon keresztül (Sinha et al., 2013). Valójában adataink azt is jelzik, hogy a CTE által kiváltott foszfatidilszerin-externalizáció gyakori hatás az apoptózisban, mind az elsődleges, mind a metasztatikus rákos sejtvonalakban, ami arra utal, hogy a CTE által kiváltott halál mechanizmusát apoptózis, nem pedig nekrózis közvetíti. Az apoptózis aktiválása a rákos sejtekben korrekciós stratégia, és számos rákellenes gyógyszer apoptotikus hatást fejthet ki a rákos sejtekben.

A rákos sejtekben pro-apoptotikus hatással rendelkező vegyületek vagy kivonatok ezért potenciálisan hasznosak lehetnek a rákellenes gyógyszerkutatásban (Wong, 2011). Annak megállapítására, hogy a CTE által kiváltott pro-apoptotikus hatást a mitokondriumok által kiváltott ROS mechanizmus közvetíti-e, CTE-kezelt sejtekben mértük a szuperoxid termelést mitokondriumra célzott fluoreszcens szondával. Adataink egyértelműen azt mutatják, hogy a CTE serkenti a mitokondriális szuperoxid termelést, ami arra utal, hogy a Cistanche tubulosa rákellenes aktivitását legalább részben a mitokondriumok által kiváltott ROS mechanizmus közvetíti.

KÖVETKEZTETÉSEK

Összefoglalva, adataink azt sugallják, hogy a sivatagi Cistanche tubulosa növény vízkivonata ígéretes jelölt lehet a rákellenes megközelítéshez, más hagyományos terápiákkal kombinálva a vastagbélrák megelőzésére és kezelésére. Azt is kimutattuk, hogy a növényi kivonat rákos sejtekkel szembeni toxicitását a fokozott intracelluláris ROS termelés és legalább részben a mitokondriális függő apoptózis közvetíti. További vizsgálatok folynak a rákellenes hatásért felelős egyes biológiailag aktív összetevők izolálására és jellemzésére.

További kutatásokra van szükség ahhoz, hogy felmérjük ennek a kivonatnak, mint hatékony kemopreventív szernek a lehetséges felhasználását, és megértsük a vastagbélráksejtekre kifejtett hatásmechanizmusokat molekuláris szinten. További preklinikai és klinikai vizsgálatokra is szükség van a Cistanche tubulosa megfigyelt jótékony egészségügyi hatásainak megerősítéséhez a rák megelőzésében.

KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS

Pénzügyi támogatás és szponzoráció: Ezt a tanulmányt a katari Doppingellenes Laboratórium támogatta.

Összeférhetetlenség: A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.

IRODALOM

Balunas MJ, Kinghorn, Kr. u. Gyógyszer felfedezése gyógynövényekből. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Colorectalis rák. Lancet 2014;383, 1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. A stobadin enyhíti a 4-hydroxynonenal által okozott intestinalis barrier modell károsodását. Toxicol In Vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newman DJ. A növények, mint a rákellenes szerek forrása.JEthnopharmacol. 2005;100:72-9.

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Természetes termékek a rákellenes terápiában. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9. Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. CMV-1 promoter induction by 4-hydroxy-2- nominal in human embrionális vesesejtek. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. A granulociták részvétele a Walker 256 carcinoma spontán regressziójában. Cancer Lett. 2008;260:180-6

Jiang Y, Tu PF. A Cistanche fajok kémiai összetevőinek elemzése. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.

Liou GY, Storz P. Reaktív oxigénfajok rákban. Free Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Hepatoprotective aktivitású acilezett feniletanoid aminoglikozidok a Cistanche tubulosa sivatagi növényből. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Molekuláris útvonalak: reaktív oxigénfajták homeosztázis rákos sejtekben és következményei a rákterápiában. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. Vas-ionok hatása a reaktív oxigénfajták kialakulására, méhnyakrák sejtvonalak növekedésére és E6/E7 onkogén expressziójára. Toxicol Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. Tulbaghia violacea levelek és hagymák vizes kivonatainak in vitro citotoxikus és pro-apoptotikus hatásai. J Ethnopharmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oxidatív stressz: az apoptózis mitokondrium-függő és mitokondrium-független útja. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. A sejttúlélés redox szabályozása. Antioxid redox jel. 2008;10:1343- 74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Melissa officinalis kivonat apoptózist indukál és gátolja a proliferációt vastagbélrák sejtekben reaktív oxigénfajták képződésén keresztül. Fitogyógyászat. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptózis a rákban: a patogenezistől a kezelésig. J ExpClin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. A Wasabia japonica kivonat rákellenes hatásai Hep3B májráksejtekben a ROS-felhalmozódás, a DNS-károsodás és a p73-mediált apoptózis révén. J Funct Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. A Cistanche tubulosa antihiperglikémiás és hipolipidémiás hatásai 2-es típusú diabéteszes db/db egerekben. J Ethnopharmacol. 2013;150:935-45.

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Többlépcsős infravörös makro-ujjlenyomat jellemzői a különböző Cistanche fajtákból származó etanolos kivonatoknak Kínában kombinálva HPLC ujjlenyomattal. J Mol Struct. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Reaktív oxigénfajták a rákbiológiában és a rákellenes terápiában. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Phenylethanoid aminoglikozidok és acilált oligocukrok érrelaxáns hatással a Cistanche tubulosa-ból. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com