Klinikai anyagcsere-elemzés a bioszintetikus út nyomon követhetőségével kombinálva: a kínai Materia Medica minőségjelzőjének új megközelítése

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Kiemelések

"A klinikai aktív összetevők felfedezése útmutatásként, az anyagcsere-transzformációk fordított elemzése mint kapcsolat, és a bioszintézis útvonalak nyomon követhetősége kulcsfontosságú", egy új kutatási stratégia a kínai materia medica (CMM) minőségi markerének felfedezésére, elősegíti a CMM minőségi szabványát.

cistanchetudvesebetegség kezelésérejavítja a veseműködést

Absztrakt

A kínai materia medica (CMM) minőségjelzője (Q-marker) fontos szerepet játszik a minőségellenőrzésben.CMMTermékek. Kutatási stratégiája és technikája azonban továbbra is tisztázatlan. Azon alapul, hogy a minőségi színvonal aCMMösszefüggésbe kell hozni a klinikai hatékonysággal. Vegye Jing1 Jiangtang tabletta kezelés2-es típusú diabéteszmint például. Felfedezték és validálták az aktivitáshoz kapcsolódó Q-markert a klinikai gyógyszer-metabolizmus reverz elemzésével és a botanikai bioszintetikus utak nyomon követhetőségével. Ezért egy új kutatási stratégiát javasoltunk a CMM Q-markerére vonatkozóan, amely „a klinikai aktív összetevők felfedezése iránymutatásként, a metabolikus átalakulások fordított elemzése, mint kapcsolat, és a bioszintézis útvonalak nyomon követhetősége kulcsfontosságú”, a minőség-ellenőrzés javítása érdekében.CMMTermékek.

Kulcsszavak: kínai anyaggyógyászat, minőségjelző, klinikai metabolikus elemzés, bioszintetikus út, Jinqi Jiangtang tabletta,2-es típusú diabétesz

Rövidítések: Q-marker, Quality marker; CMMChinese materia medica; CAS,(S)-kanadin-szintáz; STOXX, (S)-tetrahidro-protoberberin-oxidáz; JOJTT, Jinqi Jiangtang tabletták; UPLC, Ultra-performance folyadékkromatográfia; UPLC-MS/MS, Ultra-performance folyadékkromatográfia-tandem tömegspektrometria; STZ, Streptozocin; HFD, Magas zsírtartalmú étrend; FBG Éhgyomri vércukorszint; PBG étkezés utáni vércukorszint; OGTT, Orális glükóz tolerancia teszt.

akteozidban bencistanchejó hatással vannakvese

Háttér

Minőségellenőrzéskínai materia medica (CMM)fontos alapja a CMM biztonságosságának és hatékonyságának biztosításának, és hosszú ideig kulcsfontosságú és nehéz kérdés a kínai orvoslás szabványosítási kutatásában is. A CMM minőségjelzője (O-marker) forró kérdéssé vált a hagyományosbankínai gyógymóda CMM minőségellenőrzésében betöltött kiemelkedő szerepével [1]. Kutatási ötlete és technikája kulcsfontosságú tudományos kérdésekké vált, amelyek bővítést és javítást igényeltek. Jelenleg az aktív összetevők elválasztási és bioaktivitási tesztje a fő kutatási stratégia a CMM Q-markerének felfedezésére. Ez a megközelítés azonban nagyrészt vak, bizonytalan, időigényes és fáradságos lehet. A CMM Q-marker elméletének, technikai módszereinek és kutatási útjainak gazdagítása és fejlesztése érdekében szükséges a CMM minőségértékelési modell átalakításainak és fejlesztéseinek elősegítése Q-markerrel. A klinikai gyógyszer-anyagcsere fordított elemzésén és a botanikus bioszintetikus utak nyomon követhetőségén alapuló stratégia a CMM Q-markerének felfedezéséig hasznos kiegészítés lesz a jelenlegi kínai orvoslás Q-marker kutatási ötletei és megközelítései kibővítéséhez.

Ezért a CMM Q-markerének koncepciójából, elvéből és eredeti szándékából egy új kutatási ötletet javasolunk a Q-marker felfedezésére és validálására, a jelentős klinikai hatékonyságú Jinqi Jiangtang tablettákat (JQJTT) választva modellgyógyszerként. [2,3]. Abból a tényből kiindulva, hogy a CMM minőségi színvonalát összefüggésbe kell hozni a klinikai hatékonysággal, hatékony lenne a klinikai mintákban (pl. vér, vizelet) lévő bioaktív összetevők azonosításával kezdeni, majd ezt követni a botanikai bioszintetikus útvonalakon keresztüli nyomon követhetőség a bioaktív anyag felfedezéséhez. és az inherens kulcsfontosságú másodlagos metabolitok, amelyek a potenciális O-markerek lehetnek. A klasszikus hipoglikémiás értékelési modell által végzett végső validációval a megerősített O-marker továbbítható és nyomon követhető, lehetővé téve annak elérhetőségét a JOJTT teljes gyártási folyamatának minőségellenőrzésében. Ez a stratégia a "REVERSE"-t hangsúlyozza – a klinikai gyógyszer-anyagcsere-profiltól a kulcsfontosságú botanikai intermedierig a bioszintetikus folyamatokban –, ami biztosítja, hogy a felfedezett Q-marker klinikailag és botanikailag rokon, közvetlenül összekapcsolva a CMM természetes tulajdonságát és klinikai jelentőségét. A CMM Q-markerének ez az új koncepciója, amely "a klinikailag aktív összetevők felfedezése iránymutatásként, a metabolikus átalakulások fordított elemzése mint kapcsolat, és a bioszintézis útvonalak nyomon követhetősége kulcsfontosságú" hasznos stratégiát biztosít az elméleti innovációhoz, a technológiai áttöréshez és a kutatáshoz. ötlet a CMM minőségellenőrzésének bővítése.

A JQJTT, egy klasszikus ősi képlet, először a Qianjin Fangban jelent meg, amely i.sz. 652-ben jelent meg (Kínai Tang-dinasztia), és a Kínai Gyógyszerkönyv 2015-ös kiadásában (1. kötet) szerepel, amely Coptis Chinensis, Astragalus membranaceus és Lonicera fajokból áll. japonica). A Kínai Gyógyszerkönyv 2015-ös kiadása (1. kötet) szerint a három főzetdarabból alkaloidkivonatot készítettek,

szaponin kivonat és szerves sav kivonat; és összekeverjük a tabletták elkészítéséhez. Az olyan bioaktivitásokkal, mint a vércukorszint csökkentése, a lipidmetabolizmus javítása és az inzulinérzékenység, a JQJTT határozott terápiás hatást gyakorol a 2-es típusú cukorbetegségre egy kettős-vak, placebo-kontrollos randomizált klinikai vizsgálat [4]. A JQJTT minőségi színvonalát azonban még tovább kell javítani.

A CMN Q-markerének koncepciója és jelenlegi kutatása

A CMM O-markere a nyers gyógyszerben rejlő vagy a feldolgozás során keletkező kémiai összetevők, amelyek szorosan kapcsolódnak a CMM tulajdonsághoz és a CMM biztonságosságát és hatékonyságát tükröző indikátorokhoz a klinikán. A Q-markernek négy alapvető követelménynek kell megfelelnie [1]: (1) A Q-marker létezik nyers gyógyszerekben, kivonatokban és (vagy) készítményekben; (2) az O-markert minőségileg azonosítani és mennyiségileg meg kell határozni, és szorosan össze kell kapcsolódniuk a CMM funkcionális tulajdonságai;(3)A Q-marker összhangban van a hagyományos kínai orvoslás elméletével és gyakorlatával;(4)A Q-marker transzferálhatósági és nyomon követhetőségi jellemzőkkel rendelkezik. A CMM Q-jelölőjének innovatív akadémiai koncepciója fontos tudományos értékkel és gyakorlati jelentőséggel bír a CMM minőségi szabványok tanulmányozása szempontjából. Kutatási ötlete és technikai módszerei kulcsfontosságú tudományos kérdésekké váltak, amelyek fejlesztést igényeltek.

A CMM Q-markerének fő kutatási útja

A Q-marker megtalálásának fő kutatási útja a kémiai összetevő azonosítása, a kizárólagos összetevő felfedezése és bioaktivitásának validálása, amellyel több esetben is sikert értek el [5,6]. Egy ilyen módszernek, mint ezen a területen elterjedt kutatási útnak, vannak azonban elkerülhetetlen hibái. A közönséges CMM kémiai összetevőit már nagyrészt feltárták, és nehéz és munkaigényes új összetevőket találni. Még mindig nem ismert, hogy a kizárólagos összetevő kideríthető-e, vagy összefüggésben állnak-e a bioaktivitással, sőt általában nehéz megerősíteni, hogy a talált összetevő valóban kizárólagos-e, hogy a kizárólagos összetevő a fitokémia fejlődésével nem lenne kizárólagos. . Például a koptizint általában a C. Chinensis kizárólagos alkotórészének tekintik, de beszámoltak arról, hogy a koptizin a Corydalis yanhusuo WT Wang-ból is izolálható[7]. Emellett a kizárólagos alkotórész bioaktivitását nehéz lehet értékelni, ha alacsony vagy nehezen koncentrálható. Ezért a CMM Q-marker elve szerint egy olyan új kutatási megközelítést kutatunk, amely a Q-marker konnotáción alapul, hogy a klinikai hatékonysággal összefüggésbe hozható, és felhasználható legyen a CMM minőségének értékelésére, ami kiemeli az alapvető tulajdonságokat. "kapcsolódó klinikai hatékonyság, botanikailag eredendő, nyomon követhető a feldolgozás során, valamint minőségileg és mennyiségileg kimutatható".

Amint az mindenki számára ismert, miután fitokémiai elválasztással nagyszámú összetevőt (potenciális Q-markert) nyernek, a bioaktivitás értékelését kell követni a megerősítéshez. Mindazonáltal, eltekintve attól a ténytől, hogy lehetetlen értékelni az összes izolált alkotóelem bioaktivitását, a sejtekben vagy állatokban végzett kutatás és a klinikai hatékonyság közötti összefüggés kevéssé tisztázott, ami a „pszeudo-Q-marker” felfedezéséhez vezet, amit nehéz. ellenőrizni a minőséget, és kapcsolatba lépni a [8-11] klinikával. Ezért a terminális-klinikai hatásból ki lehetett deríteni az aktív összetevőket. Valójában az in vivo metabolizmus szabályának tisztázása és az upstream prototípus vagy metabolitok fordítottan elemezhetők, ami alapvető a klinikával kapcsolatos potenciális Q-marker feltárásához.

A másodlagos metabolitok belső tulajdonsága és bioaktivitása fontos támpontot ad a Q-marker feltárásához

A növényi bioszintetikus útvonalakban található másodlagos metabolitok a CMM aktív összetevőinek fő forrásai, amelyeket a talaj, az éghajlat, a szimbiotikus organizmusok, a termesztési módszerek és más tényezők befolyásolnak a növények növekedése és fejlődése során, így saját egyedi bioszintetikus útvonalakat alakítanak ki [12] . Vagyis bár az ugyanabból a forrásból származó növények kémiai összetevői (prekurzorai, köztitermékei és másodlagos metabolitjai) különböző szerkezetűek, többnyire egy bizonyos alapvető szerkezeti egységből állnak, és különböző belső összetevőkké alakulnak. Ezenkívül megfelelő eredményeket értek el a közönséges CMM [13-15] aktív összetevőinek (másodlagos metabolitjainak) bioszintézisében. Például a berberin, a C. Chinensis egyik aktív alkotórészének bioszintézis útja a benzil-izokinolin alkaloid szintézis útjába tartozik. A benzil-izokinolin alkaloidok szintézise az L-tirozinból indul ki, amely két kulcsfontosságú intermediert képez, köztük az (S)-scoreline-t és az (S)-tetrahidrokolumbamint egy többlépcsős enzimes reakció révén. Az (S)-tetrahidrokolumbamin ezután berberinné alakul (1. ábra), valamint szerkezetileg hasonló aktív összetevőkké, mint a koptizin, palmatin, kolumbamin és magnoflorin [16], ami tudományos kérdéshez vezet, hogy vajon a C. Chinensis minőségellenőrzése az (S)-tetrahidrokolumbamin vagy (S)-scoreline, a C. Chinensis ismert aktív összetevőinek közös felfelé irányuló kulcsintermedierének szabályozásával valósítható meg. Ha ez megtörténik, a CMM minőségének értékelése érdekében több, hasonló szerkezetű és hatású, downstream aktív összetevő korrelálható és szabályozható. Ezért az új megközelítési stratégia – „az aktív összetevőket a klinikáról fedezik fel, az aktív összetevők felfelé irányuló prototípusait vagy metabolitjait in vivo metabolikus szabályokkal fordítottan elemezzük, és ezek a belső összetevők potenciális Q-markerként szolgálnak”. a CMM Q-markerének jelenlegi kutatási útjai (2. ábra).

A JQJTT Q-markere feltárható integrációs stratégiával – „Klinikai aktív összetevők felfedezése, metabolikus átalakulások fordított elemzése és bioszintézis utak nyomon követhetősége”

Jelenleg a JQJTT minőségét a részösszetevők minőségi és mennyiségi meghatározása, valamint a készítményekre vonatkozó általános követelmények szabályozzák, amelyek nem elégségesek a tápszer integrált minőségének tükrözéséhez, és nehezen kapcsolhatók össze a nyers drogok, főzetdarabok, ill. előkészületek. Viszonylag egyszerű összetételével, a bioaktív összetevők in vivo nagymértékben feltárt metabolizmusával és botanikai bioszintetikus útvonalaival a JQJTT modell lehet a CMM Q-markerének felfedezésével és validálásával kapcsolatos kutatások elősegítésében.

A JQJTT reprezentatív mintájának előállítása és minőségellenőrzése, valamint a JQJTT-vel kezelt betegek szérumgyűjtése

A JQJTT készítményt minősített Coptis Chinensis, Astragalus membranaceus és Lonicera japonica felhasználásával állítják elő a Kínai Gyógyszerkönyv 2015-ös kiadásában (1. kötet) leírt technikát követve. A több összetevős meghatározás és a kémiai ujjlenyomat a nemzeti törvényi szabványok alapján a nyers drogok, főzetdarabok, készítmények minőségének integráltabb értékelésére alkalmazható, amely biztosítja a későbbi kutatási eredmények összehasonlíthatóságát és nyomon követhetőségét. Ezen túlmenően az orvosi etika és a be- és kizárási kritériumok betartásával a betegek a2-es típusú diabéteszJQJTT-t kapnak, és szérummintáikat összegyűjtik.

A JQJTT felszívódott alkotórészeinek és anyagcseretermékeinek azonosítása és reverz elemzése transzformációk szerint

A kialakult módszertan alapján a JQJTT felszívódott összetevőit és metabolikus termékeit UPLC-QTOF/MSE vagy UPLC-Q-Orbitrap MS/MS módszerrel határozzuk meg, és feltételezhető az ismeretlen vegyületszerkezet és az eltérő összetevők. Ezt követően, a fordított analízis stratégiáját követve, a JOJTT vérben felszívódó összetevői és átalakulási szabályai spekulálhatók és tisztázhatók az összetevők és termékeik szerkezeti metabolikus jellemzői alapján (3. ábra).

A JQJTT összetevőinek átalakulási szabálya nyomon követhető "nyers drogok, főzetdarabok és készítmények" után.

A vérben felszívódó összetevők és metabolitjaik tisztázásával a nyers drogokban, főzetdarabokban és a JQJTT-vel kapcsolatos készítményekben ezeket az összetevőket UPLC vagy UPLC-MS/MS detektálja, hogy fordítottan nyomon követhesse és elemezze, és végül megbizonyosodjon arról, hogy milyen másodlagos metabolitoknak kell lenniük. nyers drogokra vagy növényekre összpontosít.

A vérben felszívódó összetevők és metabolitjaik tisztázásával a nyers drogokban, főzetdarabokban és a JQJTT-vel kapcsolatos készítményekben ezeket az összetevőket UPLC vagy UPLC-MS/MS detektálja, hogy fordítottan nyomon követhesse és elemezze, és végül megbizonyosodjon arról, hogy milyen másodlagos metabolitoknak kell lenniük. nyers drogokra vagy növényekre összpontosít.

A JQJTT potenciális Q-markerének felfedezése botanikai bioszintetikus utakon

A tisztázott bioszintetikus utak segítségével a minőségi átviteli képességgel és nyomon követhető jellemzőkkel rendelkező felszívódott összetevők kiválasztásra kerülnek, hogy elemezzék felfelé irányuló másodlagos metabolitjaikat vagy kulcsfontosságú intermediereiket, amelyek potenciális Q-markerként határozhatók meg, ha bioaktívak, inherensek és minőségi átvitelre képes, nyomon követhető és kimutatható.

A JQJTT Q-markerének validálása a terápiás hatásra vonatkozó klasszikus értékelési modellel

A JQJTT potenciális Q-markereit UPLC vagy UPLC-MSMS segítségével minőségileg és kvantitatívan elemzik. A Kínai Gyógyszerkönyvet követően a JQJTT különböző tételeinek biológiai vizsgálatát a bevezetett hipoglikémiás modellben végzik sejtekben (HepG2 sejtekkel létrehozott inzulinrezisztencia-sejtmodell)[17] és állatokban (dús zsírtartalmú étrenddel táplált patkányok, amelyeket intraperitoneális injekcióval tápláltak). streptozocin)[18]. Többváltozós statisztikai analízis segítségével értékeljük az O-marker és a hipoglikémiás aktivitás közötti integrált relevanciát, és végül megerősítjük a JQJTT Q-markerét. Szükség esetén retrospektív klinikai megfigyelés alkalmazható.

A fentiek mindegyikéhez kombináljuk a közös ötleteket és technikákat, hogy új megközelítést alkossunk a CMM Q-markerével kapcsolatban,

amely a "Klinikai aktív összetevők felfedezése, a metabolikus átalakulások fordított elemzése és a bioszintézis útvonalak nyomon követhetősége" elvén alapul, hogy gazdagítsa és javítsa a CMM'Q-marker elméletét és technikai módszereit (4. ábra).

Vita

Az innovatív koncepció, a Q-marker javaslata pótolja a jelenlegi minőség-ellenőrzés hiányosságát, amelynek fontos tudományos értékei és gyakorlati jelentősége is van. A CMM minőségellenőrzésének forradalmának és fejlesztésének előmozdítása érdekében pedig az O-markerrel, mint maggal, a kutatási ötletet és technikát bővíteni és javítani kell.

Ebben a cikkben abból a szempontból, hogy a CMM minőségi szabványt összefüggésbe kell hozni a klinikai terápiás hatással, egy újszerű ideológiát javasolunk, amely szerint az O-marker felfedezése a bioaktív összetevők klinikai megfigyelésből történő azonosításából indulhat ki, majd ezt követi a fordított elemzés. az in vivo gyógyszeranyagcseréről. Ez a stratégia kiküszöböli azt a hibát, hogy a minőség-ellenőrzéssel kapcsolatos hagyományos kutatásokat nehéz összefüggésbe hozni a klinikai biztonsággal és hatékonysággal, és megakadályozza, hogy a hagyományos kutatás vak és véletlenszerű legyen. Javaslatunk elősegíti, hogy a CMM jelenlegi minőségellenőrzése ideálisan újszerű legyen, ennek előfeltétele a határozott terápiás hatás és a tisztázott bioszintézis út. Emellett le kell szögeznünk, hogy az új stratégia egy új feltárás, nem pedig a jelenlegi CMM Q-marker kutatási módszerének megtagadása. Természetesen a CMM Q-markerének kutatási módszereinknek elkerülhetetlen korlátai vannak. Ez a kutatási stratégia például botanikai, nem pedig állati vagy ásványi eredetű gyógyszerekre alkalmazható. Az alanyok botanikai bioszintetikus útjait és kémiai anyagait pedig részben tisztázni kell. Ezenkívül a klinikai minták beszerzése kényelmetlen lehet egyes laboratóriumok számára. Ennek ellenére a CMM O-marker koncepciójának, elvének és eredeti szándékának megfelelően a kutatási útnak sokrétűnek kell lennie. Minden kutatási stratégiának van egy bizonyos alkalmazási köre. Különböző kutatási objektumok szerint kell kiválasztani és módosítani, hogy közösen elősegítsük a CMM Q-marker elméletének és technikai módszereinek innovációját és fejlesztését.

Hivatkozások

1. Liu CX, Cheng YY, Guo DA és mtsai. Új koncepció a kínai gyógyszerek minőségértékelésére és folyamatszabályozására szolgáló minőségjelzőről. Chin Herb Med, 2017. 9: 3−13.

2. Yue SJ, Liu J, Feng WW és mtsai. A Huangqi és a Huanglian szinergikus mechanizmusának rendszerfarmakológiai alapú boncolása diabetes mellitusban. Front Pharmacol 2017. 8: 694.

3. Gao LH, Liu Q, Liu SN és mások. A finomított JinQi-JiangTang tabletta javítja a prediabeteset azáltal, hogy csökkenti az inzulinrezisztenciát és javítja a béta-sejtek működését egerekben. J Ethnopharmacol 2014. 151: 675−685.

4. Chao M, Zou D, Zhang Y és mtsai. Az inzulinrezisztencia javítása a hagyományos kínai orvoslás segítségével 2-es típusú cukorbetegeknél. Endocr, 2009. 36(2): 268.

5. Zhong Y, Zhu J, Yang Z és mtsai. Q-marker alapú stratégia a kínai orvoslás CMC-kutatásához: A Panax Notoginseng szaponinok esettanulmánya. Fitomedicina, 2018. 44: 129-137.

6. Liao M, Shang H, Li Y és mtsai. Integrált megközelítés az Alisma Orientale lipidmetabolizmusra gyakorolt ​​hatásai mögött meghúzódó minőségi markerek feltárására kémiai elemzés és hálózati farmakológia segítségével. Fitomedicina, 2018. 45: 93−104.

7. Shi JM, Han WL, Ye WC, et al. Tanulmány a Corydalis yanhusuo WTWang kémiai összetevőiről. Nat Prod Res Dev (Chin), 2011. 23: 647-651.

8. Feng WW, Zhang Y, Tang JF és mtsai. A kémiai ujjlenyomatvétel és a bioassay kombinációja, a pórsáfrány injekció minőség-ellenőrzésének előnyös megközelítése. Anal Chim Acta, 2018. 1003:56−63.

9. Yan D, Xiong Y, Ma LN, et al. Javaslat a kínai materia medica minőségértékelési mintájának és megfelelő módozatának kialakítására a klinikai hatékonyság alapján. Chin Tradit Herbal Drugs (Chin), 2013. 44(1): 1−5.

10. Reardon S. Egy egérház tönkreteheti a kísérleteket: A környezeti tényezők sok reprodukálhatatlan rágcsálókísérlet mögött állnak. Természet, 2016. 530: 264.

11. Yan D, Liu J, Wang AT és mtsai. Kutatási elképzelések feltárása a domináns betegségek mechanizmusáról a hagyományos kínai orvoslásban bizonyítékokon alapuló orvoslás alapján. Chin J Chin Mater Med (Chin), 2018. 13: 2633−2638.

12. Zi J, Mafu S, Peters RJ. Gibberellinek és tovább! A (Di) terpenoid anyagcsere evolúciójának felmérése. Annu Rev Plant Biol, 2014. 65(1): 259-286.

13. He SM, Liang YL, Cong K et al. A benzil-izokinolin alkaloidok bioszintézisében részt vevő gének azonosítása és jellemzése Coptis fajokban. Front Plant Sci, 2018. 9: 731.

14. Kojima M, Uritani I. Tanulmányok a klorogénsav bioszintéziséről édesburgonya gyökérszövetben, különös tekintettel egy klorogénsav intermedier izolálására. Plant Physiol, 1973. 51: 768-771.

15. Moses T, Papadopoulou KK, Osbourn A. A szaponinok, bioszintetikus intermedierek és félszintetikus származékok metabolikus és funkcionális sokfélesége. Crit Rev Biochem Mol Biol, 2014. 49: 439-462.

16. Ma Y, Guo J, Mao YP és munkatársai. A gyógynövényekben lévő aktív összetevők bioszintetikus útvonalainak elemzése és elérhetősége. Chin J Tradit Chin Med Pharm, 2017. 32: 2079−2083.

17. Song JJ, Wang Q, Du M és társai. A kazein glikomakropeptidből származó IPPKKNQDKTE peptid az AMPK jelátvitel aktiválásával javítja a magas glükóz által kiváltott inzulinrezisztenciát a HepG2 sejtekben. Mol Nutr Food Res, 2017. 61: 1600301.

18. Mansor LS, Gonzalez ER, Cole MA, et al. Szív anyagcsere a 2-es típusú cukorbetegség új patkánymodelljében, magas zsírtartalmú étrend mellett alacsony dózisú sztreptozotocinnal. Cardiovasc Diabetol, 2013. 12:136-136.